Título do Projeto: desenvolvimento e avaliação de três vacinas experimentais contra a toxina épsilon de clostridium perfringens tipo d.
Resumo: Dentre as diversas espécies de clostrídios, C. perfringens tipo D, produtor da toxina épsilon, destaca-se como importante causador da enterotoxemia em ovinos, caprinos e bovinos, enfermidade vulgarmente conhecida como doença da superalimentação. Além dos prejuízos diretos associados aos quadros entéricos em animais, a toxina épsilon é ainda reconhecida como um potencial agente de bioterrorismo e guerra biológica, graças a sua grande potência e toxicidade também em seres humanos. Como C. perfringens tipo D pode ser encontrado como comensal do trato gastrointestinal dos ruminantes, a erradicação desse agente torna-se impraticável e o controle da doença baseia-se principalmente vacinação sistemática dos rebanhos de ruminantes. Apesar do reconhecido impacto da enterotoxemia por C. perfringens tipo D em ruminantes, sabe-se pouco com relação ao comportamento da curva de anticorpos contra a toxina épsilon nesses animais ao longo do tempo. Até o presente momento, todos estudos focaram apenas na avaliação do título de anticorpos vacinais no pico de produção desses, não havendo na literatura trabalhos avaliando a manutenção de títulos até o momento da revacinação, que ocorre, por recomendação de bula, anualmente. Com isso, veterinários de campo e pesquisadores têm questionado a capacidade das vacinas presentes no mercado brasileiro, mesmo quando aprovadas nos testes oficiais, em manter os títulos de anticorpos protetores contra a toxina épsilon sobretudo nos últimos meses antes da revacinação anual. Em adição ao desconhecimento da potência das vacinas clostridiais ao longo de um ano, há ainda uma forte demanda comercial pelo desenvolvimento de imunógenos de dose única em bovinos e ovinos, o que facilitaria o manejo sobretudo em animais criados extensivamente ou em bovinos confinados. Em caprinos, a situação torna-se ainda mais crítica já que estudos demonstram que os títulos de anticorpos contra toxina épsilon nessa espécie são mais baixos e de menor duração do que em ovinos e bovinos. Diante disso, tem-se preconizado a revacinação a cada três ou quatro meses durante toda a vida do animal. Dessa forma, faz-se necessária a busca por uma nova vacina que permita a redução do número de imunizações nessa espécie, facilitando o manejo. Deve-se ressaltar ainda que, apesar da importância da enterotoxemia por C. perfringens tipo D em pequenos ruminantes, não existem, no mercado brasileiro, vacinas a base de toxóides clostridiais para uso exclusivo em ovinos e caprinos. Com isso, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a potência vacinal de diferentes formulações de toxóide épsilon bruto ou purificado em combinação com diferentes adjuvantes. Para tal, estirpes de C. perfringens pertencentes as bacterioteca da EV-UFMG serão avaliadas quanto a produção de toxina épsilon. Após a seleção da estirpe mais adequada, a toxina épsilon será produzida e purificada. Vacinas contendo toxoíde épsilon (purificado ou não) e diferentes adjuvantes serão formuladas e testadas inicialmente em coelhos, modelo atualmente utilizado para o teste de potência desse antígeno. Após a seleção das candidatas de melhor desempenho em coelhos, grupos de bovinos e caprinos serão vacinados com uma ou duas doses e acompanhados por um período mínimo de um ano. Uma vacina comercial previamente aprovada pelo Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento será incluída no trabalho. Por meio da coleta mensal de soro dos animais, o presente estudo revelará o comportamento da curva de anticorpos da vacina comercial e das vacinais experimentais previamente triadas em coelhos. Com isso, o presente projeto poderá elucidar três problemas práticos de extrema relevância na vacinação de ruminantes domésticos contra essa clostridiose. Primeiro, o trabalho elucidará se uma vacina comercial, aprovada pelos testes oficiais, é capaz de induzir títulos protetores de anticorpos ao longo de um ano em ruminantes. Segundo, buscará formulações vacinais com toxóide épsilon que não necessitem de duas doses em bovinos e ovinos, facilitando o manejo das propriedades. Por último, o presente estudo poderá elucidar uma combinação de toxóide-adjuvante que permita um menor intervalo de vacinações em caprinos, hoje praticado idealmente quatro vezes por ano.
Resumo: O propósito básico da pesquisa é compreender as atitudes e comportamentos da mídia impressa tradicional diante dos Estados autoritários, considerando uma escala variando entre adesão, acomodação e resistência. Outro objetivo essencial é estudar os efeitos políticos das representações jornalísticas, notadamente o seu impacto na formação da opinião pública e na legitimação de intervenções autoritárias na América Latina, particularmente no Brasil e na Argentina, tendo como base o estudo dos diários O Estado de São Paulo e Clarín. A intenção é construir um olhar historiográfico que transcenda o enfoque nacional, estabelecendo um quadro analítico mais amplo sobre ditaduras e imprensa na região do Cone Sul. Nesse sentido, construiremos uma abordagem comparativa que leve em conta as semelhanças entre os objetos em foco, porém, igualmente atenta às especificidades locais.
Título do Projeto: leishmania (mundinia) enriettii: mecanismos imunopatológicos, visceralização e busca de um reservatório silvestre
Resumo: Leishmania enriettii foi descrita em 1948 pelos pesquisadores Muniz e Medina da Universidade Federal do Paraná. Estes pesquisadores encontraram porquinhos da índia (Cavia porcellus) com lesões na orelha de onde eles isolaram este parasito. Recentemente, esta espécie foi incluída por Espinoza et al. (2016) em um novo subgênero, o Mundinia em homenagem a estes dois pesquisadores. Esta espécie foi utilizada muitos anos como modelo de estudo para a leishmaniose cutânea, na quimioterapia e biologia molecular. Após décadas do descobrimento de L. enriettii, um parasito semelhante foi encontrado infectando oportunisticamente cangurus na Australia, a Leishmania macropodum (Dougall et al. 2011). Seguido a estes parasitos, outras espécies que foram molecularmente agrupadas no complexo L. enriettii, agora englobadas dentro do subgênero Mundinia foram descritas incluindo Leishmania martiniquensis e L. orientalis (em substituição a L. siamensis). Uma característica marcante das espécies deste subgênero é sua plasticidade fenotípica sendo capazes de infectar vários hospedeiros incluindo: homem, bovinos, equinos e causar desde formas cutâneas até formas viscerais em pacientes HIV positivos. Além disso, L. macropodum foi capaz de infectar outro díptero não flebotomíneo, um ceratopogonídeo, que seria seu provável vetor na Austrália. Com base nestes resultados nosso grupo iniciou em 2012 uma linha de pesquisa neste parasito que é um modelo muito interessante e é umas das novidades mais recentes na Parasitologia a ponto de ser descrito um novo subgênero só pra estas 4 espécies. Sendo L. enriettii um parasito específico de cobaias, implantamos com sucesso este modelo no Instituto René Rachou/FIOCRUZ. Produzimos com sucesso uma dissertação de mestrado (2012-2014) e uma de Doutorado (2014-2018) que geraram duas publicações em revistas Qualis A1 e A2 (Paranaíba et al., 2015, Parasites & Vectors; Pinheiro et al., 2018, Frontiers in Microbiology). Além disso, escrevemos duas revisões que foram muito bem recebidas pela comunidade em dois periódicos de impacto na Parasitologia (Paranaíba et al., 2017a, 2017b, Plos Pathogens e Parasitology). Todos estes projetos e artigos foram publicados sem financiamento direto e serviram para implantar com sucesso esta linha de pesquisa no René Rachou/FIOCRUZ. Descrevemos a glicobiologia de L. enriettii e seu papel na interação com macrófagos, histopatologia, liberação de vesículas extracelulares e ausência de LRV1/2, um vírus relacionado à virulência em Leishmania. Entretanto, sendo um parasito que ficou muitos anos apenas sendo utilizado como modelo de biologia molecular, muitos aspectos ainda se encontram desconhecidos. Dentre os aspectos epidemiológicos não sabemos qual é o hospedeiro silvestre e pretendemos investigador o papel de Cavia aperea, o preá, neste processo. Além disso, a L. enriettii provoca uma lesão cutânea que se cura espontaneamente após três meses. Não sabemos se ocorre visceralização nesta espécie, mas dados preliminares de nosso grupo detectaram a presença do parasito na traqueia e no pulmão. Dispomos de todos os órgãos já emblocados de C. porcellus infectados com L. enriettii para prospectarmos a presença do parasito. Isto abrirá caminho para entendermos como este parasito circula na natureza uma vez que a lesão cutânea se cura mas o mesmo ainda consegue se manter. Finalmente, temos estudados duas cepas de L. enriettii (L88 e Cobaia) isoladas em dois momentos distintos (1945 e 1948), respectivamente. Estas cepas constituem um material biológico valioso por apresentarem características completamente diferentes. A cepa L88 é mais virulenta e capaz de causar lesões ulcerativas enquanto a cepa Cobaia é capaz de causar lesões nodulares não ulceradas. Recentemente publicamos que estas diferenças macroscópicas também ocorrem histopatologicamente, no qual a cepa L88 causa uma lesão com maior infiltrado pró-inflamatório e maior carga parasitária do que aquela causada pela cepa Cobaia (Pinheiro et al., 2018). Entretanto, um aspecto ainda desconhecido de como estas diferenças ocorreriam seria qual citocinas estariam envolvidas nos dois modelos. Pretendemos estudar estes mecanismos utilizando PCR em tempo real com primers específicos para C. porcellus, uma vez que anticorpos específicos ainda não estão disponíveis. Em conclusão este projeto pretende abordar mecanismos ainda desconhecidos da imunopatologia de L. enriettii assim como acessar o seu provável reservatório silvestre no estado de Minas Gerais. Estes mecanismos poderão ajudar entender como esta espécie e suas correlatas conseguem ter uma ampla plasticidade fenotípica e infectar diferentes hospedeiros no mundo inteiro causando formas cutâneas e viscerais dependendo do estado imunológico dos pacientes. Vale salientar que atualmente somos o único grupo que possui este modelo implantado no biotério. O sucesso e receptividade de nossos pares que resultaram em quatro publicações no último quadriênio nos encorajaram a submeter este projeto para o Edital Universal para podermos agora continuar esta linha promissora que tem rendido ótimos frutos além de ser extremamente original. Publicações: 1) Paranaíba LF et al. Soares RP (2015). Leishmania enriettii: biochemical characterisation of lipophosphoglycans (LPGs) and glycoinositolphospholipids (GIPLs) and infectivity to Cavia porcellus. Parasites & Vectors 8:31. 2) Paranaiba LF et al. (2017a). Leishmania enriettii, Muniz & Medina (1948) a highly diverse parasite is here to stay. Plos Pathogens 13(5): e1006303. 3) Paranaiba LF et al. (2017b). An overview on Leishmania enriettii: biology, immunopathology, LRV and extracellular vesicles during the host-parasite interaction. Parasitology 10:1-9. 4) Pinheiro LJ, Paranaiba LF, Alves A, Parreiras PM, Gontijo NF, Soares RP, Tafuri WL (2018). Differential immunopathological mechanisms in Leishmania enriettii strains: role of CD163 and L1 positive macrophages during infection in Cavia porcellus. Frontiers in Microbiology 9:969.
Resumo: Ultrassom vem sendo utilizado com bastante sucesso na fabricação de biodiesel já há bastante tempo. Mais recentemente, técnicas de análise de componentes de misturas ou de qualidade de líquidos e gases que utilizam parâmetros ultrassônicos vêm sendo desenvolvidas e apresentam resultados relevantes. Os parâmetros tipicamente empregados são velocidade de propagação e atenuação ultrassônicas por meio de métodos pulso/eco ou transmissão/recepção. Normalmente, a excitação se dá com frequências discretas dada sua facilidade de geração, captação e processamento matemático. Entretanto, técnicas avançadas de geração e processamento do sinal ultrassônico estão disponíveis, tais como geração de sinais modulados em frequência e deconvolução no domínio da frequência. Por outro lado, variação de frequência do sinal aplicado em um meio reacional poderá induzir vibrações nas moléculas dos reagentes de forma significativamente distinta dos sinais monotônicos. Ambas abordagens da aplicação do ultrassom de banda larga, tanto para análise de meios fluídos em repouso ou quanto em processo de transformação (reação) química, não estão descritas na literatura. Este projeto tem como propósito estabelecer métodos para a aplicação de ultrassom de banda larga na fabricação de biodiesel e na análise de combustíveis e misturas de líquidos. As entregas do projeto serão novos métodos de análise de combustíveis líquidos e novos processos de fabricação de biodiesel utilizando ultrassom como princípio físico.