ReP USP - Detalhe do registro: Clonagem e expressão de proteína antiviral presente na hemolinfa de Lonomia obliqua por tecnologia de DNA recombinante em Escherichia coli
Silva, Dalton Giovanni Nogueira da
Mendonça, Ronaldo Zucatelli (Orientador)
Autor USP: SILVA, DALTON GIOVANNI NOGUEIRA DA - BIOTECNOLOGIA
Subjects: ANTIVIRAIS; PROTEINAS; DNA RECOMBINANTE; CLONAGEM; ESCHERICHIA COLI
Keywords: Escherichia coli; Escherichia coli; Lonomia obliqua; Lonomia obliqua; Antiviral protein; Clonagem; Cloning; Expressão; Expression; Proteína antiviral
Abstract: Em 2009, foi demonstrado um potente antiviral na hemolinfa de L. obliqua. Esta proteína purificada reduziu o título viral (TCID50 ml-1) do sarampo, pólio e H1N1 em 157, 61 e 64 vezes. Recentemente, expressamos a proteína antiviral em sistema baculovírus, que reduziu o título de vírus do herpes em 106 vezes, da rubéola e EMC em 105 vezes. No entanto, este sistema de expressão é muito caro e trabalhoso. Com isso, clonamos e expressamos esta proteína com atividade antiviral em sistema bacteriano. A sequência antiviral foi clonada em vetor de expressão pET28a. As construções resultantes foram expressas em E. coli Bl21 DE3 pLysS induzidas com IPTG 1,0 mM. Após expressão, o pellet bacteriano foi sonicado e o material foi purificado por afinidade e gel filtração. Testou-se contra o vírus EMC mostrando uma proteção de 104 vezes em relação ao controle. E utilizando qPCR para determinar os níveis de transcrição de RNA do vírus do herpes e da rubéola em células infectadas mostrou uma inibição respectivamente de 106 e 105 vezes, em relação ao controle