Bolsa 04/05675-7 - Vacinas de DNA, Gene hsp65 - BV FAPESP
Avaliação de resposta autoimune durante a imunoterapia com DNAhsp65 da tuberculose.
Avaliacao das caracteristicas e da eficacia da resposta imune induzida pela vacin...
Protecao contra tuberculose experimental induzida por fragmentos ou mutacoes pontuais da vacina dna-hsp65.
Processo: 04/05675-7
Vinculado ao auxílio: 00/09663-2 - Estudos de novas vacinas e terapia gênica contra tuberculose, AP.TEM
Assunto(s): Vacinas de DNA Gene hsp65 Mycobacterium tuberculosis
A vacina DNAhsp65 é constituída pelo gene hsp65 de Mycobacterium leprae (1820 pb) e um fragmento genômico dowsntream do gene, não codificante, com 1324 pares de bases. Além da atividade protetora dessa vacina, foi demonstrado pelo CPT (Centro de Pesquisas em Tuberculose), que a proteína hsp65 apresenta atividade proteolítica com um possível papel na atividade de apresentação de antígenos. Mutações pontuais e específicas no gene hsp65 levou à produção de proteínas com perda total ou parcial da atividade proteolítica (Portaro et al., 2002). Diversas construções gênicas derivadas da vacina original pcDA3-hsp65 foram feitos pelo grupo: pcDN3-hsp65G (vacina original sem o fragmento downstream); pcDNA3-N (fragmento N-terminal da vacina original); pcDNA3-DS (vetor plasmidial com o fragmento downstream, sem o gene); pcDNA3-N59 (fragmento de 59 nucleotídeos da região N-terminal); pcDNA3- 168/A (gne hsp65 mutado na posição 168, com perda de 25% da atividade proteolítica); pcDNA-R407/A (gene hsp65 mutado na posição 407, com perda de 62% da atividade proteolítica) e pcDNA3-K409/A (gene hsp65 mutado na posição 409, com perda total da atividade proteolítica). No presente projeto pretendemos reestudar em detalhes, a imunogenicidade, bem como avaliar a proteção exercida por cada uma dessas construções em modelo experimental de tuberculose em camundongos. Esses estudos são de importância fundamental para entender os possíveis mecanismos pela qual a vacina DNAhsp65 exerce sua ação, assim como de grande importância para o desenvolvimento tecnológico e início dos ensaios clínicos em humanos. (AU)