Tecnal - O que é Challenge Test e qual sua importância para fármacos e cosméticos?
O que é Challenge Test e qual sua importância para fármacos e cosméticos?
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O teste do desafio "Challenge test" também conhecido como teste de eficácia antimicrobiana, teste de desafio microbiológico ou teste de eficácia do sistema conservante é um teste que visa assegurar a eficácia dos conservantes adicionados aos produtos farmacêuticos e cosméticos.
O teste tem como objetivo determinar a resistência do produto à contaminação microbiana, através da contaminação proposital da amostra com microrganismos específicos, seguido de avaliação da amostra em intervalos de tempo definidos, avaliando assim a eficácia do sistema conservante necessário à proteção do produto.
O teste é realizado para definir a substância química e a concentração mínima efetiva para garantir que o produto se mantenha sem contaminação, conforme a legislação especifica, durante sua fabricação, na embalagem e distribuição, além de resistir as possíveis contaminações introduzidas pelo usuário em função do mau uso.
Por meio deste teste é possível verificar se a dosagem de conservante está adequada ao produto final, e se o produto está apto a resistir às intempéries na qual será submetido durante o período de validade. A dosagem insuficiente do conservante pode resultar em crescimento microbiano, comprometendo a estabilidade do produto, enquanto uma quantidade excessiva, pode causar reações indesejáveis nos consumidores.
O teste é realizado durante a fase de desenvolvimento galênico (processo que transforma uma substância ativa em medicamento), durante o escalonamento da produção e no final do prazo de validade do produto. O teste também é realizado caso ocorra a alteração da fórmula ou no sistema conservante, porém, na maioria das vezes, não é realizado no controle microbiológico de rotina.
O challenge test apresenta diferentes abordagens de acordo com o tipo de produto que se pretende analisar ou referência adotada, sendo que estas se aplicam ao produto na forma como ele é encontrado no mercado, ou seja, como a produto é destinado ao consumidor final.
Os testes apresentam diferença em relação aos microrganismos padrão, na preparação do inóculo e meios de cultura, solventes e neutralizantes utilizados, utilização de culturas puras ou mistas, amostragens após a inoculação e nos critérios de aceitação.
Os métodos de análise estão descritos nos compêndios oficiais e guias de orientação para análise microbiológica de fármacos e cosméticos. As metodologias descritas pelas diferentes farmacopeias (americana, brasileira, europeia e japonesa) é direcionada para produtos farmacêuticos.
A norma ISO 11930:2019 "Cosmetics — Microbiology — Evaluation of the antimicrobial protection of a cosmetic product" e as diretrizes do CFTA (Cosmetic, Toiletry and Fragrance Association) são especificas para produtos de HPPC (Higiene Pessoal, Perfumaria e Cosméticos).
Os marcadores microbiológicos ou cepas padrões utilizados pela Farmacopéia Brasileira (2010) e ISO 11930:2019 são as bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e os fungos Candida albicans e Aspergilus niger.
Independentemente das metodologias, o teste compreende as etapas de inoculação da amostra com uma determinada população de microrganismos, seguida da incubação e avaliações periódicas até 28 dias para contagem microbiana dos sobreviventes.
Os critérios de aceitação do teste estão diretamente relacionados à categoria do produto e são descritos nas normativas, mas em geral, não pode existir aumento do número de unidades formadoras de colônias e em alguns casos, este número deve ser reduzido. Para realizar o challenge test são utilizados os equipamentos básicos para ensaios microbiológicos, como por exemplo:
Cabine de segurança biológica – CLASSE II A1, modelo PA-040-ECO: proteção ao usuário e amostra durante a inoculação e evitando riscos de contaminação.
Autoclave vertical, modelo AV-100: esterilização do meio de cultura e no descarte de amostra.
Estufa de Secagem e Esterilização, modelo TE-393/80L ou TE-393/180L: secagem de vidrarias e materiais.
Estufa bacteriológica, modelo TE-392/93L ou TE-392/170L: crescimento e multiplicação dos microrganismos.
Espectrofotômetro digital UV/VIS, modelo ESPEC-UV-5100: padronização do inóculo.
Bomba Dosadora de Líquido, modelo INT-FLEXIPUMP: preenchimento das placas de petri com meios de cultura. Pode ser realizado de maneira automática através de um Dosador de Meio de Cultura, modelo BIOTOOL-PETRISWISS.
Incubadora, modelo TE-3911 ou TE-371/240L para incubação de amostras após inoculação dos microrganismos.
Contador de colônias (CP-600/1): aumento do tamanho, permitindo assim maior nitidez e realce para contagem microbiana. Também pode ser utilizado o Contadores de colônia automático.
Os testes de eficácia do sistema conservante são importantes para o sucesso de uma formulação cosmética ou farmacêutica, uma vez que em quantidade de conservante superior ou inferior aos necessários podem alterar o desempenho da formulação.
Para execução do teste são necessários equipamentos similares aos utilizados em análises microbiológicas, entretanto, o procedimento do teste pode variar de acordo com a metodologia a ser seguida. De maneira geral, o teste consiste em inocular microrganismos específicos na amostra do produto e verificar se o sistema conservante irá proteger a formulação até o prazo de validade final, garantindo segurança ao consumidor.
Para mais informações sobre a determinação de parâmetros importantes do controle de qualidade de fármacos, confira nosso E-book.
International organization for standardization Cosmetics – Microbiology – Evaluation of the antimicrobial protection of a cosmetic product. ISO 11930:2019.
Programa de Desenvolvimento Setorial de Higiene Pessoal, Perfumaria e Cosméticos. Guia de microbiologia: Controle microbiológico na indústria de higiene pessoal, perfumaria e cosméticos, Procedimentos, parâmetros, orientações e metodologias analíticas. 1 ed. 2015. Disponível em: https://superaparque.com.br/upload/20160516-100554-GuiaMicrobiologia.pdf