Auxílio à pesquisa 04/07636-9 - Bioquímica orgânica, Produtos naturais - BV FAPESP
Bioprospecção Dentre compostos de origem natural de inibidores específicos do prot...
Estabelecimento de modelos em cultura celular para o estudo de moduladores do prot...
Bioprospecção e desenho racional para a descoberta de novas gerações de inibidores...
Síntese de inibidores e preparação e análise de inibição do proteassomo
Rastreamento de inibidores específicos de proteassoma seguidos da determinação de propriedades pró-apoptóticas e antitumorais em cultura celular
Processo: 04/07636-9
Bolsa(s) vinculada(s): 05/01372-2 - Bioprospecção Dentre compostos de origem natural de inibidores específicos do proteassoma 20s seguida da determinação de atividade pró-apoptótica e anti-tumoral em cultura de células tumorais, BP.TT
Assunto(s): Bioquímica orgânica Produtos naturais Antineoplásicos Complexo endopeptidase proteassoma Apoptose
Os inibidores do proteassoma promovem morte celular em células de mamíferos por processo descrito, em muitos casos (dependendo de linhagem celular e dose), como apoptose. Esta atividade por parte de inibidores específicos da protease tem sido explorada como potencialmente benéfica na quimioterapia de diversos tumores incluindo-se os sólidos e hematológicos. Com destaque na literatura científica recente está o inibidor sintético denominado de bortezomibe prestes a ser introduzido na clínica médica. Outra evidência do potencial terapêutico desses inibidores são os trabalhos que vêm sendo publicados em anos recentes sobre a busca por esses compostos dentre produtos de origem natural, além da pesquisa química de inúmeros novos compostos sintéticos. A presente proposta de trabalho tem por objetivo identificar dentre os produtos naturais disponibilizados pelo programa BIOTA, compostos que sejam inibidores específicos do proteassoma. A metodologia a ser utilizada implica em microensaios e prevê o screening mensal de centenas de extratos e/ou derivados isolados. Consistirá na medida da atividade do proteassoma na presença desses produtos por intermédio de ensaios em microplacas, sendo que o proteassoma será isolado de uma linhagem de S. cerevisiae onde uma das subunidades do complexo catalítico 20S é modificada com uma cauda de poli-histidina o que permite a purificação do complexo 20S em poucas horas. A segunda fase do projeto prevê o estudo da especificidade dos inibidores potenciais encontrados na primeira etapa. A especificidade dos inibidores será avaliada por meio de ensaios de imunoprecipitação e de cinética enzimática. Após a identificação e seleção dos inibi dores específicos do proteassoma, será feita avaliação da atividade pró-apoptótica desses compostos. Os ensaios nessa fase do projeto serão realizados em cultura de células tumorais de diversas linhagens onde será avaliada a viabilidade celular e feita a caracterização do processo apoptótico por meio de ensaios já consolidados na literatura... (AU)