Bolsa 16/24884-3 - Maturação in vitro, Receptores de AMP cíclico - BV FAPESP
Processo: 16/24884-3
Bolsa(s) vinculada(s): 18/19852-0 - O papel antioxidante da melatonina em complexos cumulus-oócito e embriões produzidos in vitro, BE.EP.DR
Assunto(s): Maturação in vitro Receptores de AMP cíclico Bos taurus
A melatonina (MEL) é uma indolamina que pode atuar na competência reprodutiva, ter atividade antioxidante e antiapoptótica, assim como influenciar diferentes vias de sinalização celular. Estudos in vitro têm apontado efeitos benéficos da utilização de MEL na maturação e cultivo in vitro(CIV) de oócitos e embriões bovinos, respectivamente. Além disso, a MEL é capaz de induzir a retomada da meiose, porém o mecanismo pelo qual este estímulo ocorreainda é desconhecido. Neste estudo, propomos investigar o envolvimento do fator promotor da maturação (MPF) e da adenosina monofosfato cíclica (AMPc) na retomada da meiose estimulada pela MEL, assim como seu efeito no desenvolvimento, qualidade e criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro. No experimento 1, complexos cumulus-oócito (CCOs) serão cultivados por 9 h de maturação in vitro (MIV) com MEL (10-11M, 10-9M e 10-7M) ou FSH (controle) e será avaliada a taxa de retomada da meiose.A melhor concentração (maior % de retomada da meiose) será selecionada para os experimentos seguintes. No segundo experimento, CCOs submetidos a 0, 3, 6, 9 e 12 h de MIV na presença de MEL serão avaliados quanto à presença da proteína CDK1fosforilada (unidade catalítica do MPF) por western blotting. No experimento 3, os níveis de AMPc oocitários serão mensurados nos tempos de 0, 1, 2, 3, 6 e 9 h de MIV na presença ou ausência de MEL.No experimento 4, a MEL será suplementada ao meio de MIV por 24h em associações com gonadotrofinas: 1) FSH; 2) FSH+LH; 3) MEL; 4) FSH+MEL e 5) FSH+LH+MEL. Os oócitos serão avaliados quanto à progressão da meiose. A melhor combinação de MEL e gonadotrofinas (maior % de MII) será utilizada no experimento 5em que CCOs maturados serão submetidos à fertilização in vitro (FIV), seguidade CIV com MEL (0, 10-11, 10-9e 10-7M). Os embriões serão avaliados quanto à taxa de clivagem e de blastocistos, e análise da qualidade por TUNEL. No experimento 6, os embriões com melhores taxas de desenvolvimento do experimento 5 serão vitrificados, aquecidos e submetidos à CIV por até 72 h para determinar a taxa de reexpansão e eclosão embrionária.