J.F. Alcindo1
G.I. Braga1
T.S. Poló1
M. Deschk1
L.G. Narciso1
J.R. Peiró2
M. Marinho2
L.C.N. Mendes2
F.L.F. Feitosa2
1Aluno de pós-graduação - Faculdade de Medicina Veterinária de Araçatuba - Unesp - Araçatuba, SP
2Faculdade de Medicina Veterinária - Araçatuba - Unesp - Araçatuba, SP
Palavras-Chave: imunoglobulinas; lactocultura; Staphylococcus coagulase negativa; transferência de imunidade passiva
Key words: Immunoglobulins; lactocultura; Staphylococcus coagulase negative; passive transfer
A fase de recém-nascido compreende o período que se estende desde o nascimento até o 28º dia pós-nascimento para bezerros, cabritos, cordeiros e potros. É nesse período que o animal depende da proteção imune colostral para a manutenção de sua saúde, antes que haja produção endógena de imunoglobulinas (Feitosa, 2014).
Alguns métodos têm sido usados para o diagnóstico da falha de transferência de imunidade passiva (FTIP) em ruminantes. De acordo com Feitosa et al. (2001), as determinações das concentrações séricas de proteína total, das frações beta e gamaglobulinas e das imunoglobulinas G e M, bem como da atividade enzimática da gamaglutamiltransferase (GGT), mostram-se eficientes para o reconhecimento de animais que apresentam falha na transferência de imunidade passiva. Proteínas como haptoglobina, glicoproteína ácida, amiloide sérica A e albumina podem ser utilizadas como indicadores valiosos de inflamação nessa espécie (Ceciliani et al., 2012).
Em animais recém-nascidos, a elevação de enzimas como fosfatase alcalina (FA) e GGT nem sempre é de origem hepática, sendo mais provável que seja oriunda da ingestão colostral (Thompson e Pauli, 1981). Portanto, devido ao baixo custo e a sua rápida execução, a determinação da atividade sérica da GGT pode ser boa indicadora na identificação de caprinos com falha de transferência de imunidade passiva (FTIP) (Silva et al., 2007).
Há indícios de que a microbiota intestinal possa influenciar a absorção de macromoléculas, tais como as gamaglobulinas. Esse fato foi evidenciado por James et al. (1981), que relataram diminuição na absorção de IgG em bezerros que tiveram inoculação bacteriana em seus segmentos intestinais. Entretanto, há poucos estudos sobre a contaminação bacteriana no colostro e seu impacto potencial na transferência de imunidade passiva e saúde neonatal (Fecteau et al., 2002).
As leituras foram realizadas diariamente, após 24, 48 e 72 horas de incubação, quando se observavam as características macromorfológicas das colônias. Consideraram-se como positivas as culturas que apresentaram crescimento de pelo menos três colônias idênticas em um mesmo repique da amostra em meio de cultura. Posteriormente, usando amostras provenientes das colônias, foram realizados esfregaços corados ao Gram, para análise das características micromorfológicas dos microrganismos, prosseguindo-se com os testes bioquímicos para identificação do agente de acordo com o protocolo preconizado por Quinn et al. (1994).
Assim como feita na CCS, a avaliação do CMT foi realizada até às 48 horas pós-parição, entretanto o procedimento foi efetuado nas metades mamárias, individualmente. Para tanto, adicionou-se detergente aniônico neutro (Reagente CMT, Fatec Indústria de Nutrição e Saúde Animal Ltda., Brasil). De acordo com a intensidade, a reação foi classificada em: negativa (0), leve (1), moderada (2) e intensa (3) (Fonseca e Santos, 2000). O resultado foi considerado como positivo quando as secreções lácteas apresentassem reações acima do escore um (1).
A determinação da imunoglobulina G e das proteínas de fase aguda foi realizada no soro sanguíneo de cabritos neonatos pela técnica SDS-PAGE, proposta por Laemmli (1970). As frações foram mensuradas por meio de um programa computadorizado (Image Quant TL GE healthcare, versão 7, Buckinghamshire, UK). Como referência, foi utilizada uma solução marcadora (Sigma, St. Louis, MO, USA ) com diferentes pesos moleculares de amplo e estreito espectro e foram avaliadas cinco frações proteicas: imunoglobulina A, transferrina, albumina, imunoglobulina G e haptoglobina.
As análises bioquímicas foram realizadas em analisador bioquímico semiautomatizado (Celm, SB-190, Barueri, São Paulo, Brasil). A proteína total dos soros sanguíneos foi determinada pelo método do biureto, utilizando-se reagentes comerciais (Labtest, Diagnóstica, Lagoa Santa, Minas Gerais, Brasil ) (Strufaldi, 1987) em comprimento de onda adequado para o teste.
Determinou-se a atividade da gamaglutamiltransferase (GGT) de acordo com o método cinético colorimétrico recomendado pela "International Federation of Clinical Chemistry" (IFCC), usando kit comercial para GGT (Labtest, Diagnóstica, Lagoa Santa, Minas Gerais, Brasil), segundo técnica modificada de Szasz (1969).
Os valores observados na CCS neste estudo não corroboram os relatados por Moreno-India et al. (2012), que encontraram valores superiores na primeira hora pós-parto (3.703 x 10³ células/mL) em animais sem infecções intramamárias. Romero et al. (2013) também encontraram valores altos na CCS realizada no período pós-parto. A análise dos resultados obtidos demonstrou que houve diferença entre os grupos apenas no momento 48 horas (Tab. 1). Na comparação entre os momentos de um mesmo grupo não foi observada diferença significativa.
Em estudo recente, McDougall et al. (2010) encontraram valores médios de 6.000 x 10³ células/mL na CCS de cabras com mastite no período logo após o parto; entretanto, a análise feita em glândulas livres de infecções revelou resultados semelhantes ao presente estudo, com valores menores que 1.000 células x 10³/mL.
Os resultados reportados pela literatura demostram valores bem mais elevados do que os do atual trabalho. A maioria desses trabalhos utilizou o método fluro-óptico para a contagem de células somáticas, diferentemente do que foi usado no presente experimento. Berry e Broughan (2007), em pesquisa comparando o uso do DCC com a microscopia direta (MD), que é o método de referência para contagem celular de leite de cabra, obtiveram correlação positiva entre esses métodos.
Não houve diferença significativa entre a IgA do GI quando comparada com a do GII em todos os momentos avaliados (Tab. 2). Da mesma forma, também não houve diferença entre os valores obtidos ao longo do tempo em ambos os grupos. Esses resultados são justificados pela baixa concentração de IgA no colostro de ruminantes, representando, aproximadamente, 5% do total de imunoglobulinas presentes (Tizard, 2009). Essa proteína, do ponto de vista clínico, é de pequena relevância para os ruminantes (Johnson et al., 2007).
A transferrina é considerada uma proteína de fase aguda negativa, ou seja, em processos infecciosos os teores dessa proteína tendem a diminuir para minimizar a oferta de ferro para o crescimento bacteriano (Gruys et al., 2005). Não houve diferença significativa entre os valores obtidos de transferrina ao longo dos momentos avaliados tanto no GI quanto no GII, assim como na comparação desses momentos entre os grupos (Tab. 2).
Estudos realizados em bezerros por outros autores mostraram que os valores mais baixos de transferrina são encontrados ao nascimento e tendem a se elevar após a ingestão do colostro; entretanto, os mesmos achados não foram observados neste trabalho (Rocha et al., 2013; Santos, et al., 2013). É possível que, na espécie caprina, essa dinâmica possa ser diferente ou sofrer influência de outros fatores.
A atividade da GGT pode servir como indicadora qualitativa da ingestão de colostro pelo recém-nascido. O aumento da atividade sérica dessa enzima está associado à sua ingestão pelo colostro durante as primeiras horas de vida, e não a distúrbios hepáticos (Braun et al., 1982).
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