Несмотря на десятилетия изучения регуляции трансляции у бактерий, остаётся актуальным вопрос о том, что именно позволяет конкретной мРНК обеспечить быструю инициацию и эффективную трансляцию. Данная работа посвящена изучению особенностей синтетических и природных 5'-нетранслируемых областей (5’-UTR) бактериальных мРНК, влияющих на эффективность трансляции, с помощью библиотек репортёрных конструкций. Применение метода Flow-seq, сочетающего проточную цитометрию с последующим секвенированием нового поколения, позволило провести анализ in vivo для библиотек репортёрных конструкций из более 24,5 тысяч различных вариантов 5’-UTR и определить функциональную значимость отдельных их участков. В итоге помимо всех известных детерминант, обеспечивающих увеличение уровня синтезируемого белка, определили ранее не описанные особенности 5’-UTR, способствующие увеличению эффективности трансляции: низкая доля остатков цитидина, AG-повторы, как новый энхансер трансляции, аддитивный эффект нескольких SD-мотивов, дополнительного старт-кодона. Результаты представляют интерес с фундаментальной точки зрения, более подробно раскрывая особенности сложного процесса трансляции, и проливают новый свет на возможности регуляции уровня биосинтеза белка с практической точки зрения при решении задач биотехнологии.