Bara några dagar efter att ha avbrutit åtalet väckte tvillingarna en ny stämning mot företaget.
Den hävdar att Facebook "avsiktligt eller oavsiktligt undanträngda bevis" under deras tidigare tvister.
Tyler och Cameron anklagade mr Zuckerberg för att ha stulit deras idé att skapa sajten.
Berättelsen om fejden utgjorde kärnan i 2010 års film "The Social Network".
Raden är från 2003 då Winklevosses anställde Mr Zuckerberg för att skriva kod för deras ConnectU webbplats medan på Harvard.
Det gjorde han aldrig, utan satte istället upp Facebook, som snabbt blev en succé runt om i världen.
Ett domstolsmål om vem som gjorde vad som löstes 2008 när parterna kom överens om en ekonomisk uppgörelse, enligt uppgift värt runt $ 65m (Â £ 41m).
I januari 2011 försökte Winklevosses att öppna fallet igen och söka mer pengar. En domstol i USA beslutade emellertid i april att de skulle bli tvungna att godta uppgörelsen.
Tvillingarna sade till en början att de skulle överklaga uppgörelsen, men beslutade den här veckan att inte fullfölja denna lagliga väg.
I den senaste ansökan på torsdag med den amerikanska distriktsdomstolen Massachusetts, Winklevosses och deras affärspartner Divya Narendra sade att Facebook gömde några avgörande information från dem under förlikningsförfarandet.
Tvillingarna sade att Zuckerberg inte avslöjade några viktiga dokument om förhållandet mellan honom och bröderna när de var på Harvard.
Facebooks externa advokat Neel Chatterjee sade i ett uttalande: "Dessa är gamla och grundlösa påståenden som har övervägts och avvisats tidigare av domstolarna."
Bröderna Winklevoss har startat om sin långvariga rättstvist med Facebook och dess chef Mark Zuckerberg.