Forskarna fann en engångsdos av proteinet Hi1a som användes på labbråttor.
De sa att det visade "bra löfte som en framtida stroke behandling" men hade ännu inte testats i mänskliga prövningar.
Stroke Association sade att forskningen var i sitt tidiga skede men det skulle "välkomna alla behandlingar som har potential att minska skador orsakade av stroke".
Forskarna från University of Queensland och Monash University reste till Fraser Island i Australien för att jaga och fånga tre potentiellt dödliga australiska trattnätsspindlar.
– Vi samlar regelbundet spindlar från Fraser Island utanför Queenslands sydkust, förklarar professor Glenn King.
– Anledningen till detta är att trattspindlar gräver hålor som kan vara så djupa som 20-30 cm. Det är därför mycket svårt att gräva upp dem från hård lerjord. Fraser Island är en sandö som gör det enkelt för oss att utvinna spindlarna från deras hålor."
Teamet tog sedan spindlarna tillbaka till deras laboratorium "för mjölkning".
Detta innebar att spindeln fördes samman för att frigöra sitt gift, som sedan kunde sugas upp med hjälp av pipetter.
Därefter dissekerade forskarna giftkörtlarna hos spindlarna och finslipade in på ett protein i giftet för att återskapa en version av det i deras labb.
De injicerade Hi1a i labbråttorna.
En stroke är en hjärnattack som inträffar när blodtillförseln till en del av hjärnan skärs av eller det blöder på hjärnan
Källa: Stroke Association
De fann att proteinet blockerade syrakänsliga jonkanaler i hjärnan - något som forskarna säger är viktiga drivkrafter för hjärnskador efter stroke.
Prof King sa att proteinet visade "bra löfte som en framtida strokebehandling".
– Vi tror att vi för första gången har hittat ett sätt att minimera effekterna av hjärnskador efter en stroke.
"Hi1a ger till och med ett visst skydd till den centrala hjärnregion som är mest drabbad av syrebrist, som i allmänhet anses oåtervinnbar på grund av den snabba celldöden orsakad av stroke."
Forskningen publicerades i Proceedings of the National Academy of Sciences.
– Mitt labb är intresserat av att utveckla läkemedel mot störningar i det mänskliga nervsystemet. Många av dessa störningar involverar antingen dysfunktionella jonkanaler (t.ex. epilepsi) eller överaktiva jonkanaler (kronisk smärta och stroke).
Därför letar vi vanligtvis efter molekyler som modulerar jonkanalernas aktivitet. Gifterna från små giftiga ryggradslösa djur som spindlar, centipeder och skorpioner har utvecklats för att rikta in sig på insekternas nervsystem, och följaktligen är de helt fulla av jonkanalmodulerare.
Eftersom det mänskliga nervsystemet är mer komplext och på ett annat sätt knutet till insekter, kan jonkanalmoduler som dödar eller förlamar insekter i själva verket vara till nytta för människor. Att leta i gifter efter jonkanalsdroger är alltså inte så konstigt som det verkar."
Doktor Kate Holmes, biträdande chef för forskning vid Stroke Association, sade: " Vi har inte en exakt bild av vad som händer i människans hjärnor från denna forskning, därför är det för närvarande okänt om detta skulle kunna vara ett framgångsrikt behandlingsalternativ för människor i framtiden.
"Vi välkomnar alla behandlingar som har potential att minska skador orsakade av stroke, särskilt om detta kan gynna människor som inte kan komma till sjukhus snabbt.
– Nuvarande behandlingar måste ges under halva denna tidsperiod, och det är för tidigt för oss att veta om denna forskning kan erbjuda ett alternativ för strokepatienter.
"Vi uppmanar till att stroke ska behandlas som en nödsituation - ju förr en person kan komma till sjukhus efter en stroke, desto snabbare kan rätt behandling tas emot, vilket kan förbättra överlevnaden och hjälpa till att återhämta sig."
Ett protein i spindelgift kan hjälpa till att skydda hjärnan från skador efter en stroke, enligt forskning.