Winstone, som kommer att spela EastEnders och Carry On skådespelerska i 20-årsåldern, sa: "Jag... är så glad att få kliva in i hennes nationella skattskor!"
Den biopic kommer också att innehålla två barn skådespelare som den yngre Dame Barbara.
Efter att ha skildrat Windsor i 1998 års scenspel Cleo, Camping, Emmanuelle och Dick och i TV: s Cor Blimey!, Spiro återbestår rollen som Babs i hennes 50-tal.
Spiro sade: " Det är helt spännande att spela Barbara igen. Tony Jordan har skrivit ett vackert firande av sitt liv, men det är inte din vanliga biopic, massor av överraskningar. Hon är så dyrkad, så jag hoppas att vi får det rätt och att Barbara själv älskar det."
Babs följer East End-stjärnan under en 50-årsperiod från 1943 till 1993, som täcker hennes ensamma barndom och andra världskrigets evakuering, hennes komplicerade förhållande till hennes far, hennes äktenskap och hennes framgångsrika karriär.
Dame Barbara, som kommer att göra en cameo i dramat, tillade: " Jag är verkligen glad över att veta att BBC har säkrat två sådana begåvade och etablerade skådespelerskor att porträttera mig i deras nya biopic av mitt liv. Sam Spiro har redan visat sig spela mig på scen och TV för stort erkännande, samt att ha sin egen otroliga karriär.
"Sam kommer nu att spela mig vid en senare tidpunkt i mitt liv vilket kommer att bli en ny utmaning för henne och en som hon utan tvekan kommer att uppnå. Och sedan ha turen att ha en av dagens dynamiska skådespelerskor som spelar den yngre jag fyller mig med sådan spänning, särskilt att veta att det är Jaime Winstone. Pojke, jag är en lycklig dam!"
Den ena 90-minuters dramat kommer att sändas någon gång nästa år.
Jaime Winstone och Samantha Spiro är båda gjutna som Dame Barbara Windsor i BBC One dramat Babs.