Konkurrens- och marknadsmyndigheten (CMA) sade att vissa punters inte fick den affär de förväntade sig från sign-up kampanjer som erbjuder kontant bonusar för att locka dem till spel webbplatser.
CMA sade också att företagen "orättvist håller fast vid folks pengar".
Online spelföretag bör "spela rättvist", sade CMA.
Nisha Arora, CMA:s chef för konsumentskyddet, sade: " Nya kunder lockas av frestande kampanjer bara för att hitta tärningarna är laddade mot dem.
"Och spelare kan hitta en hel mängd hinder i sin väg när de vill dra tillbaka sina pengar."
Onlinespel: Vad är haken?
CMA inledde sin undersökning av spelsektorn i oktober 2016. Det har sedan dess hört från cirka 800 "olyckliga" kunder och har "efterfrågade företag svarar på frågor om hur de fungerar, och noggrant undersökt pjäsen på en rad webbplatser".
Som ett resultat av detta har kommissionen identifierat "ett antal aktörer som ägnar sig åt metoder som sannolikt bryter mot konsumentlagstiftningen", vilket är skälet till att den vidtar tillsynsåtgärder.
De kontroversiella kampanjerna innebär villkor som hindrar punters från att gå iväg från att spela med sina vinster vid en punkt av deras val.
Till exempel, någon kan satsa £ 10 av sina egna pengar som sedan matchas med £ 10 från online vadslagning företaget.
I villkoren för spel kan det dock stå att kunden måste spela flera hundra gånger inom en viss tid innan de kan lösa in sina vinster.
I vissa fall, under dessa "lönekrav" människor har samlat vinster på flera tusen pund men de har varit tvungna att fortsätta att satsa, sade CMA, vilket innebär att deras chanser att förlora pengar ökar.
"De har inte möjlighet att sluta medan de är före och gå iväg med sina vinster när de vill," CMA sade.
Den Remote Gambling Association (RGA), vars medlemmar inkluderar många onlinespel företag, sade att det skulle ta "en del tid att smälta och överväga korrekt" CMA tillkännagivande.
"Men när brister identifieras företag individuellt kommer att rätta till dem", tillade den.
"Om det finns allmänna lärdomar att dra då, som alltid, kommer vi att arbeta med Gambling Commission för att uppmärksamma dem i den bredare branschen i syfte att höja standarder över hela linjen."
Till att börja med talar CMA med de berörda företagen, som man inte kan nämna, och kräver att de ändrar sin praxis.
Om de inte uppfyller kraven kan CMA föra dem till domstol. Domstolen skulle kunna bötfälla företagen eller i slutändan återkalla deras licenser.
Gambling Commission har arbetat tillsammans med CMA på undersökningen.
Det sade identitetskontroller var en "viktig skyldighet" för spelindustrin att "förhindra penningtvätt och säkerställa ansvarsfullt spelande".
Man har dock tillagt att det har uttryckts farhågor om att vissa operatörer "kan tänkas tillämpa dessa krav på ett restriktivt sätt, vilket hindrar konsumenterna från att på ett legitimt sätt ta ut pengar från sina spelkonton".
Online spelsektorn har vuxit med cirka 150% sedan 2009 och är värd £4,5 miljarder. CMA sade mer än 6,5 miljoner människor använder regelbundet platserna.
CMA:s George Lusty ledde utredningen. "Om du är skyldig att placera hundratusentals satsningar innan du kan göra ett uttag, då kommer att kräva att du investerar mycket tid i dessa kampanjer," sade han BBC.
"Vårt främsta intresse är dessa casino-typ produkter, men vi har också vissa problem i samband med gratis sportspel kampanjer också."
CMA ber också andra människor som har haft problem med att dra tillbaka sina pengar att träda fram senast den 31 augusti att hjälpa den "förutse denna fråga ännu mer".
Chris Sattin från Gloucester spelade roulette på en webbplats som heter Maria Casino och vann £ 35,000, men han fick inte ta ut sina vinster.
Han sade till Radio 4s Du och Ditt: " Jag skakade, mitt adrenalin pumpade. Jag tryckte på iPhonen för att dra sig tillbaka, men ingenting hände. Eftersom jag aldrig hade vunnit dessa summor pengar innan, tänkte jag att det kanske bara händer eftersom det är en stor summa pengar och jag behöver kontakta kundservice. "
Maria Casino berättade för Chris att han hade ett konto hos sitt systerföretag Unibet, och han hade använt en självuteslutningsfunktion på webbplatsen - något som infördes av Gambling Commission för att hjälpa spelberoende spelare.
Chris sa till företaget att han själv hade uteslutit bara för att avsluta sitt konto. Men Maria Casino sa att detta bröt mot företagets villkor.
Du och Yours kontaktade Maria Casino om Chris fall och de bestämde sig för att betala honom 35.000 pund.
Konkurrensmyndigheten ska vidta åtgärder mot vissa onlinespelföretag som den misstänker bryter mot konsumentlagstiftningen.