Den tre veckor långa studien på den 23,4 meter långa rulltrappan på Holborn station pågår under rusningstid.
Transport till London sade flytten kommer att "öka kapaciteten" och förhindra "kväde på botten" som människor står på båda sidor av rulltrappan.
Mer än 56 miljoner passagerare använder stationen varje år.
Vanligtvis står passagerarna till höger och lämnar vänster sida fri för människor att gå upp eller nerför rulltrappan.
Holborn Tube station, en av de mest trafikerade på nätet, är inställd på att få en ny ingång och en utökad biljetthall för att öka sin kapacitet med 80% till 2022.
Peter McNaught, verksamhetschef för den centrala linjen, sade: "Under tiden, som en del av en tre veckor lång rättegång för att minska köer och hålla människor i rörelse genom stationen, uppmuntrar vi kunderna att stå på båda sidor av 'upp' rulltrappan under hektiska perioder.
"Vi tror att detta kommer att öka kapaciteten hos rulltrappan eftersom fler människor kommer att kunna gå ombord, förhindra köer längst ner i rulltrappan."
Kommunister uppmanas att stå istället för att gå på vänster sida av rulltrappor vid en central London Tube station för att se om det kan skära köer.