Fågeln, officiellt känd som LF15, och hennes partner LM12 födde upp tre kycklingar både 2015 och 2016 i Dunkeldreservatet.
Lassie kom tillbaka till Skottland den 23 mars, sex dagar efter sin äktenskapspartner.
Tittare från hela världen har sett parets framsteg på Loch of the Lowes live webbkamera.
Charlotte Fleming, Perthshire Ranger for the Scottish Wildlife Trust, sade: "LF15 har bestämt sig för att börja ruva, och vi skulle förvänta oss att ägget kläcks om omkring sex veckor.
"Det står nu klart att parets försök till avel har varit en framgång och de är på rätt spår för att upprepa hatttrick av kycklingar som kläcktes både 2015 och 2016."
En hona som kallas Lassie har lagt sitt första ägg för säsongen på Scottish Wildlife Trusts Loch i Lowes naturreservat.