Tekniken prövas på New York Red Bulls stadion, med en videoassistent domare tar 30 sekunder att granska en utmaning i en Red Bulls II match mot Orlando City.
En skärm vid sidan av planen hjälpte tjänstemän besluta att avfärda Orlandos Conor Donovan för att förneka en målsättning möjlighet precis utanför straffområdet.
Video replays kommer att användas för att ge råd om "spel-förändrande" beslut i United Soccer League matcher - den tredje nivån av amerikansk fotboll. Det inkluderar mål, röda kort, felaktiga identiteter och straff.
De kommer också att testas i sex andra länder under de kommande två åren, däribland Tyskland och Italien.
Spelets lagstiftare, International Football Association Board (IFAB), vill senast 2019 besluta om huruvida videorespel ska införas i hela sporten.
Video replays användes för första gången för att skicka ut en spelare för en professionell foul i en Major League Soccer reservmatch.