Enligt välgörenhetsproven hade alla katter i närheten av Victor Avenue, i Melton Mowbray i Leicestershire, tagit det giftiga ämnet.
I det senaste fallet dog sju månader gamla Meereen på måndag.
En talesman för RSPCA sa att det var oklart om förgiftningarna var oavsiktliga eller avsiktliga.
Uppdateringar om denna berättelse och mer från Leicestershire
Tre andra katter i området har dött under de senaste sju dagarna, medan en annan katt dog för två veckor sedan.
Meereens "devastated" ägare, Adria Pearce, sa att katten kom hem på fredag kväll och "sågs vara skakande lite".
"Jag har inte kunnat sluta gråta sedan hon dog", sa hon.
"Vi hittade henne bakom soffan, där hon skummade ur munnen och försökte vara sjuk."
Meereen fördes till veterinärerna - där det bekräftades att hon hade ätit frostskydd - och dog tre dagar senare.
RSPCA inspektör, Andy Bostock, är tilltalande för alla i området för att säkerställa att bekämpningsmedel och kemikalier förvarades säkert.
"Vi är mycket oroliga", sade han.
"Det är den tid på året där människor använder frostskydd i sina bilar, så om du gör det, se till att det inte finns några läckor och eventuella spill städas upp ordentligt."
Fem katter har dött av frostskyddsförgiftning på eller nära samma gata i loppet av två veckor, har RSPCA sagt.