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  彼得·帕克自從被戀人瑪莉珍·華生髮現自己的「蜘蛛人」身份後,如今跟她交往三年而準備向她求婚。就在瑪莉珍剛在百老匯劇院初演完成後,彼得和她在中央公園裡賞流星雨時,未注意到一顆小型隕石落至他們附近。隕石中附有的外星黑色共生體,爬上彼得的摩托車跟著他回家。哈利·奧斯本得知彼得是蜘蛛人後決心為父報仇,通過父親遺留的科技和配方增強體能、繼承父親的綠惡魔身份。他搭乘滑翔翼襲擊回家途中的彼得,經歷街巷的一番鬥爭後被水管撞擊頭部至昏迷,被彼得送醫清醒後患上失憶症,忘記彼得是蜘蛛人等相關記憶。與此同時,一位剛越獄的逃犯佛林特·馬可,回家見他身患絕症的女兒潘妮一面,隨後繼續逃亡卻不慎掉進實驗重地,受粒子加速器實驗影響而身體發生分解,跟周圍的沙子融合後變成能自由變形的「沙人」。  彼得化身蜘蛛人營救即將墜樓的大學同學關·史黛西,使她在慶祝活動上公然感謝蜘蛛人並當眾吻他,這讓瑪莉珍感到生氣與不解。遠處,獲得控制沙子能力的馬可襲擊一輛運鈔車,希望能將其作為女兒的治療費,彼得前去幹預時因未預估他的能力,雖然救下運鈔車卻也讓馬可逃跑。後來,關的父親兼紐約市警察隊長喬治·史黛西向彼得和梅嬸彙報說,馬可才是五年前搶車並槍殺班叔的真凶,而搶錢的搶劫犯 (漫威漫畫)只是幫凶。憤怒的彼得收聽警用頻道追尋馬可過程中,共生體偷偷爬入穿著蜘蛛人戰服的彼得身上,跟其混合後將戰服變為黑色並增強彼得的實力。然而,共生體同時黑化彼得的善良心靈,使他著裝黑戰服跟著搶完錢的馬可至下水道。得知水是馬可的弱點後,彼得開啟水管將馬可分解並沖走,認為他已為班叔報完仇。  瑪莉珍的演藝事業一落千丈,失落之下找出院的哈利獨處乃至親吻,最後她不想背叛彼得而離開。受打擊的哈利因此恢復記憶,在父親幻覺督促下繼續他的復仇,以彼得的性命來威脅瑪莉珍忍痛跟他分手。在聽完瑪莉珍分手是因為“愛上某人”後,彼得發現是哈利搞鬼而換上黑戰服,跑到哈利的頂層公寓跟他一決高下。彼得擊敗哈利後諷刺他父親從來沒有愛過他,當哈利扔出一顆南瓜炸彈時,彼得將其扔回去使哈利被炸傷而毀容。與此同時,彼得發現他在《號角日報》的競爭對手攝影師艾迪·布洛克,在報紙上發表一張經過電腦合成而偽造的“蜘蛛人偷竊”之照片。他來到報社以確鑿證據公開艾迪的造假行為後,總編J·喬納·詹姆森憤怒地將艾迪開除並發表更正宣告;一切順心讓彼得認為這件黑戰服是天賜。同時,馬可成功克服怕水弱點,存活下來並逃出下水道。  為了讓瑪莉珍嫉妒,彼得將關約至瑪莉珍如今工作的夜間俱樂部,當關領略到彼得的企圖後便離開,而彼得因為在夜店裡的小爭執,無意間打到瑪莉珍。彼得霎那間發現自己變得殘暴無常,在教堂頂上為了擺脫共生體,利用教堂鐘聲的強大聲波來干擾共生體且將其撕下來。這時,身敗名裂的艾迪來到教堂裡祈禱能殺死彼得時,聽見彼得的喊聲後來到鐘下方,不僅注意到彼得是蜘蛛人、還跟落下來的共生體融合後變成邪惡的「猛毒」。艾迪隨後找到馬可來提出合作,殺死蜘蛛人來達到各自的目的,他隨後綁架瑪莉珍、在一座建築工地高樓上佈下黑色蜘蛛網,而底下由變成沙子巨人的馬可負責看守。  由於哈利拒絕幫他,彼得只好獨自上陣,在一對二的情況下完全無力招架。就在彼得幾近被打死之際,哈利從曾經處理過父親遺體的管家伯納德口中得知,自己父親死因其實是咎由自取,在覺醒之下搭滑翔翼及時趕到與彼得攜手對敵。彼得對抗猛毒途中,哈利發射導彈使馬可散架,隨後跟彼得一起救下瑪莉珍。但猛毒幾乎能以一敵二,當猛毒撿起哈利的滑翔翼刀刃刺向彼得時,哈利跳過去為彼得擋下刀而受致命傷。彼得找準時機用多根鐵柱將猛毒罩住,通過敲打出高音聲波來讓艾迪脫離共生體。當彼得準備用南瓜炸彈消滅猛毒時,艾迪不情願讓牠毀滅而自行跳過去,最後跟共生體一起炸成灰燼。  恢復人形的馬可向彼得陳述五年前的實情,解釋道班叔在被他搶車時一度勸過他住手而使他動搖,後來被搶完錢的搭檔丹尼斯用手推一下,才導致他手裡的槍意外走火殺死班叔。馬可表示他五年來都因這件事備受煎熬,如今只想救他的女兒,彼得最終原諒馬可,讓馬可化為沙子離去。重傷的哈利臨死之際,跟彼得釋盡所有前嫌且證明他們的友情,最後死在彼得和瑪莉珍面前。哈利被譽為英雄後被安葬,彼得、瑪莉珍、梅嬸、關和管家伯納德等人均出席。葬禮過後,彼得和瑪莉珍在夜店裡正式和解,兩人跳著舞並相擁。

  爛番茄新鮮度63%,基於254條評論,平均分為6.2/10,而在Metacritic上得到59分,IMDB上得6.2分,評價兩極。

  由於商業原因,《蜘蛛俠3》在2007年5月1日全球公映。全球總票房為8.908億美金。  北美方面,零點首映票房為1000萬美金,首日的票房收入為5984萬美金,打破《神鬼奇航2》的5580萬美金票房。首周票房並創下1.51億美金票房。最終總票房為3.36億美金票房。  在日本和韓國,此電影的首日票房都超越了《蜘蛛俠2》。《蜘蛛俠3》在香港、臺灣、東南亞等地方也創下首日票房新高。其中香港的開畫日收入為738萬港元。  臺灣方面,首日票房為新臺幣3300萬元;最終全臺票房為新臺幣2.48億元。
《蜘蛛人3》(英語:Spider-Man 3)是一部2007年上映的美國超級英雄電影,由史丹·李和史蒂夫·迪特科所創作的漫畫《蜘蛛人》所改編。電影是蜘蛛人系列電影的第三部作品,為2004年電影《蜘蛛人2》的續集,同時作為該系列的最終作。電影繼續由前兩部導演山姆·雷米執導,由陶比·麥奎爾、克莉絲汀·鄧斯特、詹姆斯·法蘭科、蘿絲瑪莉·哈里斯和J·K·西蒙斯主演,這次加入湯馬斯·海登·喬許、陶佛·葛瑞斯、布萊絲·達拉斯·霍華和詹姆斯·克倫威爾飾演新角色。