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  烏菲茲美術館的興建始於1560年。這裡一開始是喬爾喬·瓦薩里受第一代托斯卡納大公,科西莫一世·德·美第奇之託所建的市政司法機構辦公室(Uffizi為義大利語“辦公室”之意)。在瓦薩里死後由及接手,整個龐大的宮殿式建築直到1581年才完工。  科西莫一世的繼任者弗朗切斯科一世·德·美第奇開始將家族收藏存放至宮殿的頂層,並不斷的擴充,是歐洲最古老的博物館之一。至斐迪南二世·德·美第奇大公時期收藏達到頂峰,斐迪南二世的妻子是末代烏爾比諾公爵的唯一繼承者,藉著這段婚姻,他獲得了蒙特費爾特羅家族及德拉·羅維雷家族部分的收藏,而大公的兩位樞機弟弟以及也對擴充家族收藏不遺餘力,尤其是列奧波爾多,美術館的畫作中有十分之一是由他收藏的。科西莫三世·德·美第奇大公以收藏古雕像及法蘭德斯繪畫聞名,而美第奇家族最後的統治者吉安·加斯托內·德·美第奇也持續妝點這座美術館。

  美第奇家族在1737年絕嗣,公國繼承權原本要交給西班牙波旁王朝的卡洛斯三世,但後來又轉交給洛林家族的法蘭茲一世,兩者皆與美第奇家族有血緣關係。末代大公吉安·加斯托內·德·美第奇的姐姐普法爾茨選帝侯夫人安娜·瑪麗亞·路易薩·德·美第奇在與洛林家族簽訂藝術品遺產移交協定時確立了一些硬性條款,她規定這些藝術品必須留在佛羅倫斯不可攜出,且必須為公眾服務,如此具有前瞻性的條款可謂前所未有,她試圖傳達藝術遺產是一筆國家財富而非屬統治者的財產,也因為如此烏菲茲美術館的收藏在歷經數個世紀能儲存得如此完整。

  1762年夏天,美術館經歷了一場火災,幸好火勢很快被撲滅,沒有造成多大的損失,重新整修的美術館隨後於1765年正式對公眾開放。  美術館在接下來的數個世紀中不斷的擴充其收藏,在第二次世界大戰中美術館曾遭受納粹德國掠劫,約有300幅畫作被拿走,但在戰爭過後大部分被找回。  義大利藝術收藏家、政治家伯爵於20世紀中葉將自己的收藏捐贈給義大利政府,1969年正式收入烏菲茲美術館,總計1,066件收藏,有許多堪稱精品,為此烏菲茲美術館還特別開設了一個陳列室來展示他的收藏。  在1993年,一起汽車炸彈爆炸事件,造成了美術館部分破壞。損壞最嚴重的是尼俄伯廳:部分壁畫及17世紀畫作被完全損毀,一些雕塑也受到波及,除了幾幅損毀非常嚴重的繪畫,大部分的畫作都已修復。  由於館藏實在太多,一些藏品不得不轉移到佛羅倫斯的其他博物館中。比如一些有名的雕塑作品就被安放在了巴傑羅美術館。烏菲茲從2006年開始進行擴建工程,2011年完工。擴建之後展館面積將由6000平方米增至約13000平方米,使得許多過去放在儲藏室裡的作品得以公開展覽,另外美第奇家族的收藏還有很大一部分安放在碧提宮內的帕拉提納美術館中。  今天,烏菲茲已成為佛羅倫斯最受歡迎的旅遊點,於每個星期二到日的早上8:15-18:50對公眾開放。在旺季時,尤其是7月間,排隊等候進館的時間會非常久。
烏菲茲美術館(,)是在義大利佛羅倫斯最有歷史及最有名的一座藝術博物館。