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  萬曆十七年(1589年)進士,授行人司行人。萬曆二十一年(1593年),為趙用賢之事上疏指責首輔王錫爵,又與戶部郎中楊應宿互相攻擊,謫揭陽縣典史,回鄉家居近三十年。萬曆三十二年(1604年),與顧憲成等人於東林書院講學,時稱“高顧”。  明熹宗即位,起用為光祿寺丞,官至左都御史。在剷除外戚、權貴及浙黨方從哲的鬥爭中發揮很大作用。又主張澄清吏治,反對恢復徵商。天啟四年(1624年),因為揭露魏忠賢黨人崔呈秀貪穢而被罷官,再歸故里。  天啟六年,魏忠賢命人偽造織造太監李實的奏本,誣告高攀龍、周起元、周順昌、繆昌期、李應升、周宗建、黃尊素七人貪汙白銀十餘萬兩,高從容不迫,先去拜謁宋儒楊中立廟宇,而後跳水自沈而死,其自盡之處即為今“高子止水”。  崇禎初平反,贈太子少保、兵部尚書,諡忠憲。  侄孫高愈。

  嘉靖、萬曆年間,海內學者遵從王守仁,高攀龍不以為然,其與顧憲成同在東林書院講學,以靜為主。《明史》評價高攀龍「操履篤實,粹然一出於正,為一時儒者之宗。」有遺著《高子遺書》。易學著述有《周易孔義》、《周易易簡說》,另有《春秋孔義》、《二程節錄》、《正蒙釋》等。

  高攀龍葬於惠山南麓青山寺北,墓在今無錫市濱湖區河埒街道青山公園內,現為無錫市文物保護單位。
高攀龍(1562年-1626年),字雲從,改字存之,號景逸,直隸無錫(今江蘇)人,明朝政治人物,東林黨領袖,同進士出身。