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  伊莎貝拉二世是西班牙國王斐迪南七世的長女,生於馬德里。 她的母親是斐迪南七世的第四任妻子瑪麗亞·克里斯蒂娜·德·波旁-兩西西里。 屬於那不勒斯的波旁王朝,而且是在法國大革命中被處死的法國王后瑪麗·安東尼(哈布斯堡王朝成員)的外甥女。在沒有男性子嗣的斐迪南七世去世後,其女兒伊莎貝拉(當時只有3歲)被宣佈為西班牙的女王,瑪麗亞·克里斯蒂娜則成為攝政(1833年9月29日)。  伊莎貝拉二世能夠繼承王位,有賴於斐迪南七世設法說服了西班牙國會廢除薩利克繼承法。在來自法國的波旁王朝於18世紀入主西班牙時,他們把法國的薩利克法典也帶到了西班牙,並引用其中的王位繼承條例取代了西班牙原有的王位繼承法。按照薩利克法典,女性無權繼承王位;這很快成為西班牙王室男性宗室們反對伊莎貝拉二世統治的藉口,引發了長達半個世紀的卡洛斯戰爭。

  在伊莎貝拉二世繼承王位之後,斐迪南七世的弟弟唐·卡洛斯王子立刻發動了叛亂,即所謂第一次唐·卡洛斯戰爭(1833年10月4日)。唐·卡洛斯認為他自己是最合法的王位繼承人,伊莎貝拉二世作為女人無權成為國王。唐·卡洛斯自稱為“卡洛斯五世”,其支持者不在少數。支援唐·卡洛斯及其後代成為西班牙國王的人被稱為卡洛斯派,主要由舊貴族和天主教教會中的保守分子(如耶穌會)組成。他們的活動成為19世紀西班牙政治生活中的重要內容。  伊莎貝拉二世的支持者包括軍隊和國會中的自由主義者;這些人希望從沒收耶穌會和宗教騎士團財產的行動中獲利,並在西班牙通過一部限制國王權力的憲法。西班牙的資產階級也抱著削弱封建貴族勢力的願望支援女王。10月17日,得到葡萄牙、法國、英國等國支援的攝政瑪麗亞·克里斯蒂娜宣佈對叛亂者進行討伐。戰事延續了7年,其間唐·卡洛斯曾於1837年進攻西班牙首都馬德里。1839年卡洛斯派的主力才被粉碎,唐·卡洛斯被迫逃亡法國。1840年7月,在西班牙作戰的卡洛斯派分子被全部消滅,伊莎貝拉二世的王位終於獲得穩固。  在第一次唐·卡洛斯戰爭之後,瑪麗亞·克里斯蒂娜將攝政的權力交給了戰爭時期政府軍最有力的將領之一巴爾多梅羅·埃斯帕特羅。埃斯帕特羅進行了一些比較激進的改革,結果引起保守派的強烈反彈;他在兩年之後被納爾瓦埃斯將軍發動的軍事政變推翻。埃斯帕特羅被迫流亡英國,而納爾瓦埃斯一派則成立了由華金·馬里亞·洛佩斯領導的內閣。這個內閣誘使國會宣佈伊莎貝拉二世已經成年(實際上是13歲)。3年後來自卡斯提爾的保守派分子又迫使16歲的女王結婚,物件是她的堂兄弗朗西斯科·德·阿西西·德·波旁。 女王的婚後生活十分荒淫。實際上,一直有流言說她的所有孩子都不是弗朗西斯科親王生的,因為親王被指是一個同性戀者或失去效能力。例如,很多人相信伊莎貝拉二世唯一活下來的男孩、最終登上西班牙王位的阿方索十二世的父親是女王的一個情夫近衛軍長官恩裡克·普伊戈—莫爾託(Enrique Puig y Moltó)。  從1843年到1868年是伊莎貝拉二世親政的時期。這段時期的特點是宮廷陰謀和政變革命層出不窮,25年中西班牙更換了34屆政府,形形色色的佞臣集團紛紛上臺執政。伊莎貝拉二世本人過著荒淫頹廢的生活,有時還會用任性的、毫無理智的方式干預國內政治。女王似乎對軍隊和天主教會中的反動分子格外垂青,這就使她在西班牙人的心中更為可憎。在經歷了1843年到1854年的軍人獨裁之後,改革派於1854年至1856年間發動革命使1848年因大赦回國的埃斯帕特羅重新掌權。埃斯帕特羅不久引退,接下來是1856年到1863年“自由聯盟”的統治;隨後“自由聯盟”和軍閥輪番上臺執政,他們把改革派和一切進步人士排斥於政治權力之外。在整個伊莎貝拉二世統治時期,西班牙人民的生活狀況沒有改善。由奸臣和軍隊把持的政府極其腐敗,而女王的宮廷本身又是一個滋生腐敗的根源。種種原因終於導致了1868年西班牙革命(“光榮革命”)的爆發。  改革派將領胡安·普里姆在1866年發動過一次失敗的軍事政變。經過兩年準備之後,普里姆於1868年再次起事,結果成功地翻了政府。伊莎貝拉二世在她的主要依靠、保守派軍官們的零星抵抗被弗朗西斯科·塞拉諾和普里姆的軍隊粉碎之後,於1868年9月末逃亡法國。

  1870年6月25日,伊莎貝拉二世在巴黎正式宣佈退位,以希望其子阿方索可以繼承西班牙的王冠。但是,以弗朗西斯科·塞拉諾為首的攝政團選擇了義大利王子阿梅迪奧·德·薩伏依擔任西班牙的君主。當年12月,發生了胡安·普里姆遇刺身亡的事件,使阿梅迪奧的處境十分尷尬。由於窮於應付西班牙的混亂局勢,阿梅迪奧在1873年主動退位,共和主義者建立了西班牙第一共和國。  1874年12月28日,保皇派將領阿塞尼奧·馬丁內斯·德·坎波斯發動政變,迎回伊莎貝拉之子阿方索十二世,波旁王朝得以復辟。  在阿方索十二世復辟之後,伊莎貝拉二世仍然定居在法國。伊莎貝拉二世於1904年4月10日去世,葬在埃斯科里亞爾修道院。

  1837年,西班牙在法律上成為一個君主立憲制的國家。在該年之前,伊莎貝拉二世按照封建時代的慣例,與卡洛斯一世以來的歷代西班牙國王一樣擁有一個極長的貴族頭銜:“尊貴的伊莎貝拉二世,蒙受上帝恩典,是卡斯蒂利亞,萊昂,阿拉貢,兩西西里,耶路撒冷,納瓦拉,格拉納達,托萊多,巴倫西亞,加利西亞,馬略卡,塞維利亞,薩丁島,科爾多瓦,科西嘉,穆爾西亞,門諾卡,哈恩,洛斯阿爾加韋斯,阿爾赫西拉斯,直布羅陀,加那利群島,東印度和西印度,海洋中的大陸和島嶼的女王;奧地利女大公;勃艮第,布拉班特和米蘭的公爵;阿斯珀格,佛蘭德,蒂羅爾和巴塞羅那的伯爵;比斯開省和摩里納的領主;等等”(Doña Isabel II por la Gracia de Dios, Reina de Castilla, de Leon, de Aragon, de las Dos Sicilias, de Jerusalen, de Navarra, de Granada, de Toledo, de Valencia, de Galicia, de Mallorca, de Sevilla, de Cerdeña, de Córdoba, de Córcega, de Murcia, de Menorca, de Jaen, de los Algarbes, de Algeciras, de Gibraltar, de las Islas Canarias, de las Indias Orientales y Occidentales, Islas y Tierra firme del mar Océano; Archiduquesa de Austria; Duquesa de Borgoña, de Brabante y de Milan; Condesa de Aspurg, Flandes, Tirol y Barcelona; Señora de de Vizcaya y de Molina &c. &c)。這個沒有什麼實際意義的頭銜幾乎列出了歷代西班牙統治者所獲得的所有領地和榮譽。  在1837年通過君主立憲的法案之後,一個新頭銜被製造出來並賦予伊莎貝拉二世:“尊貴的伊莎貝拉二世,蒙受上帝的恩寵並遵照憲法,是西班牙的女王”(Doña Isabel II, por la gracia de Dios y la Constitución de la Monarquía española, Reina de las Españas)。

  伊莎貝拉二世的丈夫是堂兄西班牙配國王弗朗西斯科·德·阿西西·德·波旁,後者是西班牙國王卡洛斯四世的孫子。兩人於1846年10月10日結婚。在婚後,弗朗西斯科得到了西班牙配國王的稱號,但沒有任何實權。  伊莎貝拉夫婦生育了9個孩子,其中只有5個活到了成年:
伊莎貝拉二世(,全名:,瑪麗亞·伊莎貝拉·路易莎·德·波旁—波旁-兩西西里,1830年-10月10日-1904年-4月10日)波旁王朝的西班牙女王(1833年~1868年在位)。