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  公元前479年,溫泉關戰役結束後的那一年,斯巴達軍隊中計程車兵迪里奧斯回憶起斯巴達的國王列奧尼達一世的一生。列奧尼達是位按照斯巴達的傳統長大的英勇戰士,在他成為國王后的某日,波斯使節造訪斯巴達城邦,要斯巴達歸順於波斯帝國的帝王薛西斯一世,列奧尼達一世拒絕臣服,大喝「這就是斯巴達!」並將波斯使者踹下深坑。  為了向波斯進軍,列奧尼達請示監事並提出戰略,由於雙方兵力懸殊,他的規劃是佔據溫泉關隘口後取得防守的優勢,監事依照先知的指示,下令列奧尼達不得在卡尼亞節期間發動戰爭,在列奧尼達憤而離開後,來自波斯的間諜向監事表達謝意,並給他們金幣作為協助的獎勵。  在歌果王后提點列奧尼達,要他為了家園和自由而戰後,列奧尼達召集了三百名壯士向隘口前進,期間會同了友邦阿卡迪亞人的部隊。中途,一名殘疾的斯巴達人艾菲亞提希望加入列奧尼達的部隊效力,以洗刷父親汙名,但被列奧尼達拒絕,因為他的殘疾使他無法維持軍隊的陣型,這讓艾菲亞提非常憤怒。  波斯大軍殺至,三百壯士靠著隘口的優勢和出色的戰技接連擋住了步兵、弓兵和騎兵的攻勢,薛西斯一世前來招降,他表示自己有無比神力,只要斯巴達向他跪拜,便可以享有富貴和權力。被激怒的波斯王派出麾下的菁英部隊「幽靈戰士」,在三百壯士的戰術和阿卡迪亞部隊的協力下,他們擊退了幽靈戰士,以及犀牛、戰象、炸彈兵等各式部隊。不受重用的艾菲亞提效忠了波斯王,並向他提供情報,阿卡迪亞人得知後認為無法與波斯軍隊抗衡,就此撤退。  在斯巴達,歌果王后希望能進入議會發言,說服議員派兵支援國王,但在斯巴達的制度下,她即使貴為王后也只是女性,因此不得不屈服於賽隆議員的淫威之下,用自己的肉體換取出席議會的機會。歌果王后進入議院大廳爭取議員支援,但賽隆背叛了王后,將她指為蕩婦。王后憤而殺死賽隆,賽隆身上帶著的波斯金幣證明了他是叛徒,而議員也一致同意派兵增援。  在戰場上,列奧尼達面對處於優勢的波斯軍隊,假裝棄兵卸甲跪下臣服,卻藉機投擲長矛刺傷薛西斯一世,證明薛西斯自稱的神力不過是虛言。戰事立即爆發,三百壯士雖頑強抵抗,但仍很快就被消滅,列奧尼達堅持許久,終於因身中數箭而倒下。列奧尼達派遣的使者返回斯巴達城邦,將其遺物交給王后,列奧尼達的兒子繼承了遺物。  迪里奧斯以及諸多的斯巴達士兵受到列奧尼達的感召,在一年之後組織了過萬人的部隊,連同希臘的三萬兵馬共同作戰。迪里奧斯率領部隊,與波斯軍隊在普拉提亞交戰。

  在2003年5月,電影的製作計劃展開,由賈尼·努納利(Gianni Nunnari)和馬克·坎頓(Mark Canton)主導,同時麥可·戈登(Michael B. Gordon)也完成了電影的第二版劇本草稿,共有121頁。2004年6月,導演查克·史奈德(曾執導過《活人生吃》)受邀執導本片。史奈德在編劇寇特·強斯塔(Kurt Johnstad)的協助下,改寫了戈登的草稿以符合製作需求。原著漫畫作者法蘭克·米勒也以執行製作人和顧問的身份參與電影計劃 。  《300壯士:斯巴達的逆襲》將漫畫中的每一個鏡頭確實改編成電影,和另一部改編作品《罪惡之城》類似。

  伊朗總統艾哈邁迪-內賈德公開指責這齣電影不符史實,妖魔化伊朗的祖先波斯人,把他們描繪成殘暴不仁的民族,這片等同是對伊朗宣戰,並禁止國內播放,並呼籲其他伊斯蘭國家禁播。香港傳媒在盛讚此片的特技時,亦覺電影過分黑白分明,不符史實。

  榮獲美國電視臺Spike TV主辦的2007年度尖叫頒獎禮“Scream Awards”終極尖叫大獎。

  二十世紀大眾製作了一套諧仿該片的電影,名為《這不是斯巴達》(Meet the Spartans)。  片中主角大叫的對白:「This is Sparta!」(“這就是斯巴達!”)成為了不同媒體的惡搞的網路爆紅材料。

  本片的續集《300壯士:帝國崛起》於2014年3月7日上映。《帝國崛起》的導演已經不是由查克執導,而是改為諾姆·穆羅(而查克則擔任監製和劇本工作)。
《300壯士:斯巴達的逆襲》(英語:"300")是一部2006年的美國史詩戰爭電影,改編自法蘭克·米勒關於溫泉關戰役的視覺文學《300》。電影由查克·史奈德執導,法蘭克·米勒擔任顧問和執行製作人。為了達到原本漫畫中的視覺效果,本片幾乎都在藍幕前拍攝。《300壯士:斯巴達的逆襲》由傑哈德·巴特勒、琳娜·海莉、大衛·溫漢、多明尼加聯邦·韋斯特和麥克·法斯賓達主演。本片於2007年3月9日在美國和臺灣同步上映,並有傳統戲院版和IMAX版本,香港則在3月15日上映。這部電影有著很成功的票房,票房收入超過4.5億美元。