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  所有的蜘蛛,除了渦蛛科、Holarchaeidae和中突蛛亞目共約350種的三類蜘蛛,其餘的都可以以注入毒液來保護自己或殺死獵物。不過只有約200種會叮咬人,並可能構成人類的健康問題。被許多較大的物種叮咬可能會,但是不會持久地產生健康問題。但少數種類的蜘蛛咬傷人,可能會有致命的危險,如黑寡婦蜘蛛、大蘭多蜘蛛和樺黃蜘蛛等。

  在蜘蛛的身上,一般節肢動物的體節結合成兩個體段,頭胸部和腹部,由一個圓柱狀的小肉莖連線。和所有的節肢動物一樣,牠們的體腔很小,主要的體腔是血腔,血淋巴經由血腔輸送氧氣和養分到組織中,並移除廢物。牠們的消化系統太狹窄了,以致於蜘蛛們無法吃大塊的固體。所以牠們透過將食物充滿消化酵素將食物液化,並且用嘴邊的附屬肢磨碎食物。

  除了最原始的中突蛛亞目以外,所有的蜘蛛都擁有全節肢動物裡最集中的神經系統-牠們所有結合在一起。不像大部分的節肢動物,蜘蛛的腳沒有伸肌,而是靠液壓來伸展牠們的腳。

  牠們的腹部擁有絲囊的附屬肢,可以從腹部的腺體擠出(extrude)多達六種絲。蜘蛛絲同時具有的輕質、強度和彈性遠超過了人造物質,並且已有蜘蛛絲的基因被嵌入哺乳類動物和植物中,以觀察是否能當作生產絲的工廠。

  蜘蛛,不像昆蟲,只有兩個體節(tagmata)而不是三個,分別為頭部及胸部的融合(稱為頭胸部或前體部)和腹部(稱為後體部)。例外於此規則的是刺客蜘蛛,其頭胸部幾乎分成兩個獨立的單位。除了少數非常原始的蜘蛛物種(節板蛛科),腹部不是從外部分割的。腹部和頭胸部經由一個薄薄的腰部連線,這個部位被稱為肉莖、椎根或pregenital somite,此性狀使蜘蛛的腹部可以向任何方向移動。這腰部其實是頭胸部最後的節(somite),大多數其它蛛形綱的成員失去了這個部位(蠍子的只有在胚胎時才能探測到)。  蜘蛛的口器旁有二隻短短的觸肢,比步腳明顯短小,相當於昆蟲的觸角,有觸覺、嗅覺和聽覺的功能,雄性蜘蛛觸肢末端形成手套狀,可於交配時傳送精子,遊獵性雌蛛會利用觸肢攜帶卵囊。

  除了 "Bagheera kiplingi" 主要為偏草食性的雜食性蜘蛛外,其牠已知的蜘蛛大多是以肉食為主的掠食者,大部分是掠食昆蟲和其牠蜘蛛,但也有較大的物種也捕捉鳥類、蜥蜴和蛇類。然而許多蜘蛛的幼體以花蜜為食,而且有個統計學上的證據顯示,即使是成年的個體也會以花粉為食。  蜘蛛的螫肢被修改成牙,通常用來注射毒液到獵物中。因為相對來說只有少數物種的毒液對人是有危險的,現在科學家們正在研究蜘蛛毒液的醫學用途和當作殺蟲劑。  蜘蛛用具有黏性的網當陷阱來捕捉獵物、等待伏擊獵物或是直接追捕獵物。使用蜘蛛網或伏擊戰術的物種對空氣、地面和絲線的震動極為敏感,牠們以此作為警戒線;而主動攻擊的獵人們則擁有比蜻蜓最高準確十倍的視力。有些主動攻擊的獵人對不同的獵物使用不同的戰術,並且顯示出了智慧的徵兆-牠們對付困難的獵物時會嘗試使用各種戰術,而且牠們在對付不熟悉的獵物時,也能很快的學會該使用哪種戰術。其他的物種則擁有修改過的身體和行為模式,使牠們能夠在獵食時模仿螞蟻。蜘蛛網有許多不同的大小、形狀和黏性絲線的使用量。現在顯示出螺旋球狀網可能是最早的形狀中的一種。即使球形蜘蛛網的蜘蛛是眾所周知的也是被最廣泛地研究的,牠們在所有蜘蛛物種中也只算是少數,製造出其他種類蜘蛛網的蜘蛛較多,這可能是因為牠們雜亂的蜘蛛網對掠食性的黃蜂來說是較大的阻礙。

  雄性蜘蛛的觸肢(毒牙旁邊的附屬肢)被修改成注射器用來注射生殖器。為了避免在交配前被吃掉,雄性蜘蛛藉由種種複雜的求偶儀式來顯示自己的身份。大多數物種的雄性在幾個交配之後仍然生存,這主要是受到牠們的短暫的壽命限制,而且在一些少數的物種中,雄性可以在牠配偶的蜘蛛網中住上一段時間。然而,有些物種的雄性在交配時會把自己釘在雌性的牙上,這可能是為了要保證牠們配偶的營養充足,進而增加可能的子代數量。  雌性蜘蛛會以絲編織蛋殼,每顆裡可以容納幾百顆的蛋;稍後這些蜘蛛會孵化成看似小型的成年個體,然而牠們大部分依然無法進食直到牠們第一次蛻皮。許多物種的雌性會照顧牠們的小孩,像是揹著牠們,或是和牠們分享食物。少數的物種是社會性的,會建造公共的蜘蛛網,這些網子可能會有少數到50,000只蜘蛛住在其中。社會行為從互相容忍不穩定的危險-像是好鬥的寡婦蜘蛛,到合作狩獵和分享食物都有。儘管大部分的蜘蛛只能活2年,但捕鳥蛛科和其牠原疣亞目蜘蛛可以在被囚禁的狀態下活上25年。

  類蜘蛛的蛛形綱生物,擁有能產生絲的栓,在泥盆紀時期(3.86億年前)出現,但是這些動物明顯缺少絲囊。真蜘蛛被發現存在於石炭紀石頭,從3.18至2.99億年前,而且和仍存在的一個原始的中突蛛亞目,很相似。現代主要的蜘蛛種類-原疣亞目和新蛛亞目,最早在2億年之前三疊紀期間出現。距今1.3億年前之後,化石琥珀保留了蜘蛛解剖構造和行為的細節,包括交配、獵殺獵物、產生蜘蛛絲和可能照顧著它們的小孩。有些少數的例子,琥珀儲存了蜘蛛的蛋囊和蜘蛛網,偶爾也附帶了獵物。  蜘蛛遍佈世界各地,從熱帶到北極地區,又或在充滿空氣的絲制居所內在水底生活,以及生活在山頂上。在1973年,天空實驗室3號帶了兩隻蜘蛛進入太空,發現它們在零重力狀況下也可以織出和地球上相似的網。

  以生活及捕食方式可以大致分成:結網性蜘蛛和遊獵性蜘蛛。

  結網性蜘蛛的最主要特徵是它的結網行為。蜘蛛通過絲囊尖端的突起分泌粘液,這種粘液一遇空氣即可凝成很細的絲。以絲結成的網具有高度的粘性,是蜘蛛的主要捕食手段。對粘上網的昆蟲,蜘蛛會先對獵物注入了一種特殊的液體消化酶。這種消化酶能使昆蟲昏迷、抽搐、直至死亡,並使肌體發生液化,液化後蜘蛛以吮吸的方式進食。蜘蛛是卵生的,大部分雄性蜘蛛在與雌性蜘蛛交配後會被雌性蜘蛛吞噬,成為母蜘蛛的食物。

  遊獵性蜘蛛則不會結網,而是四處遊走或者就地偽裝來捕食獵物,如白額高腳蛛,即臺灣俗稱的喇牙(教育部用字:蟧蜈),以蟑螂為食物。另有中小型的蟹蛛,也是不結網的,會以花瓣、花蕊的顏色擬態,待昆蟲接近即捕食之。蠅虎、跳蛛也是如此。跳蛛視力很發達,一般通過視力發現獵物並使用各種方式捕食。狼蛛的視力僅次跳蛛,狼蛛在各國基本都有分佈,有穴居狼蛛,挖洞等待獵物;也有遊獵狼蛛,一般四處跑,發現獵物後像狼一樣捕捉獵物;捕鳥蛛是會結網的大型蜘蛛,如今捕鳥蛛科內已有很多的屬種被人工飼養視作寵物。比如:智利紅玫瑰蜘蛛、宏都拉斯捲毛蜘蛛、亞馬遜藍色華麗雨林蜘蛛。  有的蜘蛛可以用網固定,保護自己,隨風飄行到別的地方捕食。  由於牠們多樣化的行為,蜘蛛在藝術和神話中成了常見的象徵-代表耐心、殘忍和創造力的各種組合。

  蜘蛛對人類而言,並非餐桌上的食物,甚至懼而遠之,但一些地區如柬埔寨素昆地區是以販賣蜘蛛為菜餚。 大部分的蜘蛛無害於人,蜘蛛在農田中捕食農作物的害蟲。  現代醫學證實蜘蛛的毒素對治療腦溢血、癲癇、腦退化症、腦動脈硬化等疾病有療效。  蜘蛛絲是一種絲蛋白,堅韌而富有彈性,可製造人造血管、人造肌腱,強度是鋼的5～6倍,可製造防彈衣。

  下表粗體標示的科含有一種或以上的有毒蜘蛛。

  《荊楚歲時記》記載古代女子在七夕夜的“閨中祕戲”,“七月七日,為牽牛織女聚會之夜。是夕,人家婦女結采縷,穿七孔針,或陳几筵酒脯瓜果於庭中以乞巧。有喜子網於瓜上。則以為符應。”喜子是指一種小型蜘蛛。《東京夢華錄》則說:“婦女望月穿針,或以小蜘蛛安合子內,次日看之,若網圓正,謂之得巧。”  袁巨集道寫有《鬥蛛》文:“登場之時,初以足相搏;數交之後,猛氣愈厲,怒爪獰獰,不復見身。勝者以絲縛敵,至死方止。亦有怯弱中道敗走者,有勢均力敵數交即罷者......”,“其色黧者為上,灰者為次,雜色為下。名目亦多,曰玄虎、鷹爪、玳瑁肚、黑張經、夜叉頭、喜娘、小鐵嘴,各因其形似以為字。”
蜘蛛是螯肢亞門節肢動物,有兩個體段,八條腿,但沒有咀嚼器官。古代北燕、朝鮮之間謂之蝳蜍(音同「毒餘」),四川重慶部分地區叫蟴。截至2014年,共有114科3,935屬44,906種。蜘蛛目是蛛形綱中數量最多的一個目。研究蜘蛛的學科稱作蜘蛛學。