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  1547年,昌幸出生。7歲時,父親倖隆將他送往甲斐,成為武田晴信(信玄)的人質。真田昌幸年少時,過繼到信玄母親孃家武藤氏做養子,名為武藤喜兵衛,擔任起武田信玄的近侍與見習。初陣便是在有著龍爭虎鬥之稱的第四次川中島之戰,當時的身份為武田家足輕大將。  1564年,迎娶遠江國領主尾藤賴忠(宇多賴忠)之女山之手殿為正室。山之手殿為喜兵衛誕下了信幸(信之)及信繁。1569年,武田信玄準備攻擊北條家,喜兵衛負責來往各部隊的傳達情報的任務。喜兵衛在三增峠之戰取得了一番槍(最多戰功者)的稱號;1572年,參與三方原之戰;1574年,父親倖隆病逝,由長兄信綱繼承家督。1575年,武田勝賴徵召大規模部隊西征,在長<unk>之戰(設樂原)被德川織田聯軍大敗,兩名兄長真田信綱及真田昌輝陣亡,真田昌幸遂改回原姓,繼任家督。  1578年,上杉謙信去世,武田氏與上杉氏達成了甲越同盟。同年,昌幸攻擊上野北條氏領地沼田城及名胡桃城;1580年,敘任從五位下安房守。1582年初,織田軍大舉入侵甲州,武田軍節節敗退,昌幸曾向勝賴在文書中提議來到巖櫃城,途中卻因為巖殿城主小山田信茂向織田信長投誠,導致勝賴無法前往;武田家在天目山之戰大敗後,勝賴全族自盡身亡。至此真田家四處隨著局勢依附強權求存。

  武田家滅亡後,真田昌幸曾與上杉、北條等示好,最終則歸順織田家,受關東方面大將瀧川一益的節制。6月爆發本能寺之變,織田信長死亡,織田家陷入內亂,導致上野、信濃、甲斐等領土陷入戰亂。北條家最後以5萬600大軍在神流川之戰中使瀧川一益潰不成軍,一舉奪取關東、上野主導權。瀧川一益則逃亡到伊勢長島,真田家見勢改投北條家。  接著北條家準備經略信濃,想借由一場大戰事順便統管真田家領地,認知到真田家存續受威脅時,真田昌幸又背棄北條家,透過武田舊臣屬曾根昌世的居中協調與德川家親善,並派長子真田信幸(關原戰後改名信之)至德川家成為人質。之後德川、北條兩家和解;德川家康為了取信北條家,要求形式上屬於己方的真田家將沼田城歸還北條方。真田昌幸加以回絕,除了著手修築上田城外,並倒向上杉。真田昌幸的反覆引來德川、北條的不滿;1585年,兩家分別攻擊真田家在信濃、上野的領地。信濃上田城遭受德川家的鳥居元忠領軍攻打,爆發第一次上田城之戰(別稱神川合戰)。此役,真田軍僅以2000兵,擊退德川方面的7000大軍,戰後仍然與家康對立,並於同年攻擊德川領地佐久郡。此後真田昌幸將次男真田信繁送至上杉景勝處做為人質,以取得上杉家的保護。

  1586年,上杉景勝歸順羽柴秀吉,真田昌幸亦隨同效忠。不久,德川家康亦臣服秀吉,於是,真田的威脅只剩北條。真田家與北條家為了上野沼田的領地,長年紛爭不斷,1589年終於由豐臣家加以調停,名胡桃城歸真田家,沼田城歸北條家。惟沼田城城代豬俁邦憲私自出兵奪取名胡桃城,豐臣家以此為口實,於次年召集眾大名展開小田原征伐。1590年,真田昌幸被編入前田利家及上杉景勝的聯合軍,北條家在這場戰爭滅亡。戰後,昌幸因功由原本的地方豪族被提拔為大名。1592年,秀吉發動文祿之戰期間,真田昌幸亦出兵支援,文獻留下昌幸當時在名護屋城留守的記錄。

  1598年8月,豐臣秀吉死亡。豐臣氏文治、武斷兩派之間的鬥爭亦逐漸白熱化,當中影響力最大者為五大老之一的德川家康。1600年7月,家康向全日本大名發出討伐上杉景勝,當時家康對昌幸發出的書狀是可以保證保留小縣郡一帶的領土。20日,父子三人在犬伏討論日後去向,最終安排長子信幸支援東軍,而自己與次子信繁則支援西軍石田三成。此後,上田城成為上杉景勝及近畿的石田三成互相通訊的重要中途站。另一方面,德川家康派出次男秀忠攻擊小縣郡。9月1日,秀忠的部隊到達小縣郡。秀忠派遣使者,要求真田昌幸投降。昌幸假裝投降,而暗中準備迎擊德川軍。翌日,昌幸表明不會投降。德川軍首先進攻戶石城,守城的信繁拒絕交戰,開城撤離。9月3日,德川軍向上田城發動攻擊,真田軍以游擊戰反擊,連日戰爭使德川軍陷入苦戰。7日,秀忠撤兵繼續前往關原,但已經趕不及參加關原的戰爭。  然而在關原之戰取得勝利的家康決定懲處真田昌幸及信繁。原先命令他們切腹自盡,惟因長男信之與本多忠勝還有井伊直政向家康求情,忠勝直言道:「若主公不答應饒他們真田父子不死,我忠勝將不惜與主公一戰」,12月德川家康免除兩人死罪,改將兩人流放到紀伊國高野山附近的九度山,命令終生不得離開,隨行家臣共16人。幽禁期間,發明了真田紐販賣餬口,大受民眾歡迎。昌幸生前仍然希望德川家赦免他,但是苦等不到赦免而在1611年於失意中病逝,享年65歲。抑鬱而終的昌幸,外加德川家蓄意惡整的態度,使得信繁後來死命逃脫投奔豐臣家留下伏筆。

  被豐臣秀吉評為「表裡比興之者」,意為內外不一、居心叵測的牆頭草,昌幸與忠於武田氏的父兄不同,一心只想延續真田家的存在,認為忠義死節沒有任何意義,東西軍兩邊都安插人馬可以確定不論哪方勝敗日本都能飄著真田家旗幟。後世研究多說是信之與昌幸理念不合才分道揚鑣乃無稽之談,實為昌幸刻意的政治操作,當時也有許多知名武士安排子女加入不同陣營以求存續。

  昌幸的墓地在長野市鬆代町鬆代真田山長國寺及和歌山縣九度山町九度山真田庵<unk>羅陀山善名稱院。
真田昌幸(1547年-1611年-7月13日),日本戰國時代軍事家及大名,信濃上田城城主,真田幸隆之三男,其兄為真田信綱、真田昌輝。生下四男七女,當中包括了長男真田信幸及次男真田信繁。昌幸正室是寒鬆院,另有多名側室。官位是「從五位下安房守」。