Le cellule sono state omogenizzate in 0,5 ml di buffer salino contenente 1% Triton X-100 ed inibitori di proteasi e sottoposte ad una prima centrifugazione a 720 g per 5 min; i surnatanti sono stati raccolti e centrifugati a 10,000 x g per 5 min. Successivamente, questi surnatanti sono stati sottoposti a centrifugazione a 100,000 x g per 1 h a 4°C con un rotore SW40 Ti (Beckman Ultracentrifuge). Il pellet consiste nella frazione resistente al detergente. Le proteine erano separate mediante elettroforesi su gel al 7%, trasferite su membrane di nitrocellulosa (Bio-Rad Laboratories) ed incubate con anticorpi primari overnight a 4°C. Il sistema di chemiluminescenza HRP coniugato ad anticorpi secondari (1:5000; Santa Cruz Biotechnology) è stato generato attraverso ECL Plus Western blotting system (GE Healthcare Bio-Sciences) e le bande sono state quantizzate per intensità. Dato che la funzione di HO-1 si esplica nel momento in cui è compartimentalizzata in membrana, si è andato a valutare se vi fosse una differenza non solo nell'espressione di HO-1, ma anche nel suo livello di compartimentalizzazione.