Nell'ottica di classificare i pazienti come responsivi o non responsivi al trattamento con Cetuximab sono stati identificati dei criteri che rendessero la nostra analisi ex-vivo il più possibile paragonabile a ciò che avviene in clinica.Il criterio adottato per identificare il momento opportuno in cui iniziare il trattamento sui topi si basa sulla dimensione raggiunta dal tumore. Infatti il trattamento dei singoli topi è stato iniziato quando il loro tumore raggiungeva un volume compreso tra i 400 e i 600 mm 3 . Questa dimensione è decisamente elevata se paragonata all'intera massa del topo e alla massa tumorale che normalmente viene sottoposta a trattamento in studi simili. E' stato scelto di trattare volumi così ragguardevoli per poter valutare la risposta nel modo più chiaro possibile in tumori che mimino nel miglior dei modi il contesto di terapia effettuata su una malattia metastatica.Il trattamento consiste in una iniezione intraperitoneale di 0.4 mg di Cetuximab per 2 volte alla settimana (Luo, et al., 2005). Analizzando il volume raggiunto dai tumori trattati è possibile osservare come sia presente un unico caso in cui il volume è rimasto sostanzialmente molto simile a quello iniziale e che risulta del 104%. Il resto della popolazione si colloca invece in modo abbastanza netto nelle due categorie considerate e risulta nel complesso ben stratificabile.Infatti tra i responsivi ci sono ben 6 casi su 10 che presentano un volume dopo il trattamento inferiore al 60% e tra essi il tumore che ha avuto un decremento minore di volume ha raggiunto una massa pari al 90% di quella iniziale. Tra i 24 tumori non responsivi 18 presentano una crescita superiore al 150% e il tumore che è cresciuto meno comunque ha un volume pari al 127% del valore iniziale (Tabella 8.7).Adottando i criteri descritti il tasso di risposta al Cetuximab ottenuto è del 29%, poiché 10 dei 35 tumori che hanno portato a termine il trattamento sono risultati responsivi (Tabella 8.7). Questo dato non può essere direttamente confrontato con nessun'altro in letteratura poiché ad oggi non esistono studi condotti in questo modo che valutino la risposta al Cetuximab in monoterapia. Infatti gli studi clinici che indagano l'azione del Cetuximab in monoterapia indicano un tasso di risposta a questo farmaco intorno all'8-12%, ma questi studi sono pochi e sono generalmente condotti in regime di seconda linea in pazienti refrattari ai trattamenti tradizionali quindi si tratta di risultati ottenuti su popolazioni con tumori molto diversi da quelli inclusi in questo studio e per questo motivo non paragonabili (Jonker, et al., 2007) (Folprecht, Lutz, Schöffski, & al, 2006.Mentre dati più facilmente comparabili al tasso di risposta ottenuto in questo studio sono quelli che si possono estrapolare da lavori che paragonano l'efficacia del cetuximab unito a chemioterapia all'efficacia della chemioterapia tradizionale da sola su pazienti non ancora trattati. La differenza tra il tasso di risposta ottenuto con la terapia combinata di Cetuximab e chemioterapia tradizionale con quello ottenuto con la sola chemioterapia si aggira tra il 10 e il 30% a seconda degli studi considerati e del tipo di chemioterapia utilizzato (M. Borner, et al., 2008) (O'Connell, Paik, Yothers, & al., 2006) (Venook, Niedzwiecki, Hollis, & al., 2006) (Min, et al., 2007. Il calcolo di questa differenza può in qualche modo quantificare l'azione del Cetuximab da solo e i tassi di risposta ottenuti risultano generalmente più bassi ma nel complesso compatibili con ciò che risulta nel nostro lavoro.Mettendo in relazione i dati sulla popolazione che ha risposto al farmaco con l'analisi mutazionale di KRAS osserviamo che tra i 14 tumori che possiedono una mutazione nel gene di KRAS non ve ne è alcuno che possa essere considerato responsivo alla terapia.Mentre 10 dei 21 tumori che possiedono KRAS non mutato, quindi il 47% di essi, risultano rispondere alla terapia. Anche questo dato è perfettamente in linea con gli studi in letteratura presenti fin'ora. Infatti è ormai chiaro ed indiscusso il ruolo dello stato mutazionale di KRAS come predittore negativo di risposta alla terapia con Cetuximab e in tutti i lavori pubblicati risulta che i tumori che non presentano alcuna mutazione nel gene di KRAS hanno circa il 50% di probabilità di risultare responsivi al trattamento (De Roock, et al., 2008) (Raoul, et al., 2009) (Van Cutsem, et al., 2009) (Lievre, et al., 2006 .In definitiva molti risultati di questo lavoro non appaiono dissimili da quelli degli studi clinici condotti fin'ora. Infatti il tasso di risposta al Cetuximab appare nel complesso non dissimile ai dati estrapolabili da studi condotti in regime di prima linea. Anche la frequenza di mutazioni di KRAS, BRAF e PI3CA risulta essere comparabile a quella ottenuta in studi clinici. Infine l'analisi dello stato mutazionale di KRAS conferma il suo forte valore come marcatore predittivo negativo di risposta alla terapia. Infatti ad oggi la presenza di mutazione di KRAS è l'unico criterio identificato riconosciuto valido per l'esclusione dal trattamento con Cetuximab e per questo motivo questi risultati sono una convalida dello studio in corso. In considerazione dei dati ottenuti sul tasso di risposta al Cetuximab, sulla frequenza di mutazione delle proteine studiate ma soprattutto della forte correlazione negativa tra la presenza di mutazione di KRAS e la risposta al farmaco, possiamo affermare che il modello pre-clinico qui illustrato mima la crescita delle metastasi e la risposta alla terapia che si possono osservare in ambito clinico e per questo motivo può essere utilizzato per portare avanti altre analisi alla ricerca di un marcatore predittivo positivo di risposta alla terapia.Per quanto riguarda BRAF anch'esso sembra possedere la funzione di predittore negativo di risposta. Infatti anche se l'incidenza di mutazioni di questa proteina risulta molto bassa(2/35) osserviamo che il 100% dei tumori che possiedono una mutazione in questo gene non risponde alla terapia con il Cetuximab. Anche queste osservazioni concordano con ciò che fin'ora è stato rilevato in letteratura (Di Nicolantonio, et al., 2008).Per quanto riguarda l'analisi di PI3CA ad oggi in letteratura il dibattito circa la possibilità che una mutazione di questa proteina possa svolgere il ruolo di predittore negativo della risposta al Cetuximab è ancora aperto. Infatti in due studi molto recenti pubblicati a pochi mesi di distanza l'uno dall'altro si è giunti a conclusioni totalmente opposte: il primo 