Il virione nativo è formato da subunità proteiche ripetute, dette capsomeri, che sono assemblate a costituire un capside di struttura icosaedrica. L'icosaedro è un poliedro regolare formato da venti facce triangolari e dodici vertici. In questo tipo di simmetria nel virione sono presenti due tipi di capsomeri antigenicamente distinti: gli esoni che formano le facce dell'icosaedro e i pentoni, 12 capsomeri identici che si trovano alla sommità dei vertici. Strutturalmente la proteina L1 contiene 12 β-foglietti, 5 α-eliche e 6 loop; questi ultimi presentano sequenze abbastanza variabili tra Papillomavirus diversi e si estendono verso l'esterno della superficie capsidica. [Stauffer et al., 1998] 36Esistono diverse metodiche di biologia molecolare per produrre VLP di Papillomavirus, a cui farò cenno. Per far esprimere una proteina da un gene clonato si usano i cosiddetti vettori di espressione, contenenti tutte le sequenze regolatrici necessarie allo scopo; tali vettori sono adoperati per indurre un'elevata espressione di un prodotto proteico di interesse in modo controllato e indipendente da restrizioni di specie della trascrizione. Esistono vettori per sistemi procariotici, eucariotici o in grado di operare in entrambi (vettori shuttle). In tutti i casi, si tratta di vettori in cui un gene che codifica per la proteine di interesse, in questo caso L1 ed L2, viene posto sotto il controllo di forti sequenze regolatorie appartenenti ad un altro gene.I vettori molecolari usati per trasferire un segmento di DNA in una cellula sono in genere rappresentati da plasmidi o genomi fagici quando l'ospite finale è una cellula batterica, o da virus (es. Baculovirus) quando l'ospite finale è una cellula eucariotica. Si possono quindi utilizzare vettori plasmidici, i quali possono essere introdotti in cellule eucariote con varie metodi attraverso un sistema definito tecnicamente transfezione.Quando si sceglie un vettore è importante conoscere bene prima quali sono gli elementi funzionali che sono in genere contenuti; i tre fattori più importanti da prendere in considerazione sono: promotori, marker di selezione e origine di replicazione.Il lievito è un ottimo ospite per l'espressione di proteine perchè è in grado di crescere ad alte densità cellulari e di processare e secernere proteine eterologhe in modo molto simile a quello degli eucarioti superiori; il lievito utilizzato di solito come ospite è S. pombe o S. cerevisiae.Un altro sistema per l'espressione di proteine esogene è l'utilizzo di cellule d'insetto attraverso il vettore Baculovirus; questo permette di ottenere una quantità elevata di proteina in cellule di insetto e di superare i problemi di poca solubilità che si incontrano spesso quando si esprimono molecole ricombinanti in procarioti. Si tratta di un sistema veloce e facile, dato che le cellule di insetto crescono in colture monostrato o in sospensione e non necessitano di anidride carbonica per la crescita.Una volta prodotte con la procedura che si ritiene più idonea, le VLP possono essere conservate a basse temperature per lungo tempo (> 6 mesi) senza perdere le loro funzioni biologiche [Xu Y. F. et al., 2006].Negli ultimi anni la ricerca in questo campo della virologia è riuscita ad ottenere "Virus-LikeParticles" tramite la produzione di L1 ed L2 in sistemi di espressione e loro autoassemblaggio; è stato inoltre dimostrato che L1 è sufficiente per la formazione di VLP, in quanto media il legame alle cellule e la successiva internalizzazione, mentre la funzione di L2 non è ancora stata completamente chiarita.Tappa successiva che i ricercatori hanno affrontato è stata la produzione di pseudovirioni, probabilmente incrementare i titoli sierici. La risposta immunitaria cellulare è di assoluta priorità nelle sperimentazioni condotte con vaccini terapeutici, che utilizzano le proteine "Early", in particolare le oncoproteine E6 ed E7. Anche in questo campo d'applicazione è utile ricordare l'efficacia di questi saggi in vitro, così come nei primi studi su pazienti con CIN-3 o carcinoma microinvasivo [Garland et al., 2007].