Nel 1523, dopo sei mesi di assedio e fieri combattimenti contro la flotta e l'esercito del sultano Solimano il Magnifico, i cavalieri di San Giovanni vennero costretti ad arrendersi e lasciarono Rodi coi pieni onori militari. L'ordine rimase senza un dominio territoriale proprio sino al 1530, quando il gran maestro fra' Philippe de Villiers de l'Isle Adam prese ufficialmente possesso dell'isola di Malta, garantitagli dall'imperatore Carlo V del Sacro Romano Impero e da sua madre, la regina Giovanna di Castiglia in quanto monarchi del Regno di Sicilia, con l'approvazione di papa Clemente VIII.