Queste prime tre fasi utilizzano le stesse metodologie attuate nella FIVET.L'unica differenza consiste nel pretrattamento dell'ovocita con ialuronidasi e con mezzi meccanici, quali pipette di diverso diametro, in modo da rimuovere il cumulo ooforo e la corona raggiata dell'ovocita. L'esposizione della zona pellucida è infatti indispensabile per valutare il grado di maturità degli ovociti e per consentire l'inserzione dello spermatozoo. Solo gli ovociti maturi giunti inMetafase II e presentanti il primo globulo polare possono essere fecondati e utilizzati per l'ICSI.4. Fertilizzazione degli ovociti mediante ICSI. Sotto visione microscopica si afferra l'ovocita con una micropipetta e si pungono la zona pellucida e la membrana plasmatica mediante una pipetta appuntita che serve per veicolare lo spermatozoo all'interno dell'ovocita. L'ovocita fertilizzato viene posto in un terreno di coltura dove inizia lo sviluppo embrionario.Figura 3, Figura 4, Figura 5: Questa serie di immagini mostra le fasi più importanti di introduzione dello spermatozoo ( indicato dalla freccia ) all'interno del citoplasma dell'ovocita.5. Posizionamento in utero degli embrioni. La tecnica è analoga a quella utilizzata nella FIVER.La tecnica ICSI è in grado di ottenere la fertilizzazione del 60-80% degli ovociti mentre la percentuale di gravidanze risulta pressoché sovrapponibile a quella della FIVET, ovvero circa un 30%. I dati pubblicati dall'ESHRE, riguardanti 114378 cicli di ICSI in 23 diversi Stati Europei nell'anno 2001, dichiarano un tasso complessivo di concepimento pari al 28.3%. (10) Anche in questo caso la probabilità di nascita di un neonato vivo si colloca su un valore intorno al 22% in quanto l'eventualità di aborti spontanei è di circa il 20%.In circa 25 anni di esperienza nel campo della Fecondazione In Vitro, si è assistito a continui progressi per ciò che riguarda i protocolli di stimolazione ovarica e le procedure di fertilizzazione, garantendo sempre più il transfer di embrioni di buona qualità. Nonostante ciò, non si è riusciti ad aumentare in maniera significativa le probabilità di impianto e il tasso di concepimento.Sottoponendosi a diversi tentativi FIVER o ICSI ovviamente la probabilità cumulativa di gravidanza sale rispetto alla possibilità di successo di un singolo ciclo che abbiamo detto essere di circa il 30%. Dopo infatti due trattamenti la probabilità teorica si colloca su un valore del 50% e dopo tre tentativi il tasso cumulativo sale a circa il 65%. 