Il protocollo ELISpot per la rivelazione di cellule secernenti interferone-γ in un campione di PBMC si basa sull'incubazione delle cellule per un periodo di tempo definito, in piastra a 96 pozzetti precedentemente funzionalizzata ("coating") mediante adsorbimento di un anticorpo monoclonale ad alta affinità per la citochina investigata che viene prodotta durante l'incubazione. La combinazione di un anticorpo biotinilato anti-citochina e di un anticorpo secondario anti-biotina enzima-coniugato, in presenza di substrati cromogeni per l'enzima, permette la rivelazione della produzione della citochina in aree definite dovute alla precipitazione del prodotto di reazione mediante la formazione di spot (accumuli di colore). Se tali aree sono discrete, ossia non sovrapposte e quantificabili, si assume che ogni spot derivi dalla produzione di citochina da parte di una singola cellula secernente, per questo quantificando il numero di spot si quantifica il numero di cellule secernenti IFN-γ.