E' un metodo di analisi genetica basato sul principio di sequenziamento attraverso un processo di sintesi.Nella fase 1 un primer di sequenziamento è ibridato con singolo filamento, amplificato attraverso PCR e incubato con gli enzimi DNA polimerasi, ATP solforilasi, luciferasi, apirasi ed i substrati adenosina 5' fosfosolfato (APS) e luciferina.Nella fase 2 il primo dei quattro desossiribonucleotidi trifosfati (dNTP) è aggiunto alla reazione. La DNA polimerasi catalizza l'inserimento del dNTP nel filamento di DNA, se esso è complementare alla base nel filamento copiato. Ogni evento di inserimento è accompagnato dal rilascio di pirofosfato (PPi) in una quantità equimolare alla quantità di nucleotide incorporato.Nella fase 3 l'ATP solforilasi converte PPi in ATP in presenza di adenosina 5' fosfosolfato (APS).Questo ATP guida la conversione mediata dalla luciferasi della luciferina in ossiluciferina che genera una luce visibile in modo proporzionale alla quantità di ATP. La luce prodotta viene rilevata da una speciale camera e vista come un picco con il pirogramma. L'altezza di ciascun picco è proporzionale alla quantità di ATP.La apirasi, enzima degradante nucleotidi, degrada continuamente ATP e dNTPs non incorporati. Ciò determina la scomparsa della luce e rigenera la soluzione reagente. Viene quindi aggiunto il successivo dNTP.L'aggiunta di dNTP è effettuata volta per volta.Continuando con il processo il filamento complementare di DNA viene sintetizzato e la sequenza nucleotidica è determinata attraverso i segnali di picco valutati con il programma (80). La DHPLC rileva la differenza tra la molecola dell'omoduplex, che ad una determinata temperatura è ancora sotto forma di doppia elica, e quella dell'eteroduplex, che alla stessa temperatura mostra una parziale denaturazione in corrispondenza del sito in cui vi è misappaiamento.