Le idrolasi sono prodotte nel Reticolo Endoplasmatico Rugoso (Rough E. R.) e sono secrete al Golgi (tramite vescicole ricoperte di molecole adattatrici di COP II per la fusione con la membrana accettrice) dove vengono addizionate con mannosio-6-fosfato (grazie all'enzima N-acetilglucosaminafosfotransferasi nella cis cisterna, il quale unisce l'UDP-N-acetilglucosamina all'idrolasi per poi lasciare il residuo di fosfato inorganico sul mannosio come segnale e tagliare l'UMP-N-acetilglucosamina per poi poterla indirizzare verso altri destini metabolici) per il riconoscimento ed il trasporto ai lisosomi da parte di uno specifico recettore, anch'esso trasportato nei lisosomi, dai quali è però recuperato per essere riutilizzato. Nella migrazione verso il lisosoma la vescicola contenente le idrolasi si acidifica grazie ad un'ATPasi che introduce ioni idrogeno (idrolizzando ATP) fino ad arrivare circa a ph 6; infine vi sarà la fusione con la membrana accettrice, il distacco del recettore (attuato a ph 5,2 lisosomiale) dal cargo e l'attivazione degli enzimi idrolitici. Se sorgono problemi (di solito di natura genetica) al recettore o al processo di mannosidazione possono sorgere malattie da deposito lisosomiale (come la "malattia di Hurler" o la "malattia da inclusioni lisosomiali").