Figlio di Mastro Antonio Tomaselli e di donna Rosa, quarto di sei figli, Salvatore Tomaselli fu avviato agli studi del Gymnasium e poi a quelli di medicina. Grazie alle sue doti di sintesi e prontezza d'apprendimento si laureò a Catania a soli 22 anni. Si recò poi a Napoli presso il fratello maggiore, don Vincenzo Tomaselli che insegnava in un collegio, dove il Tomaselli seguì i corsi privati che erano nel pieno splendore all'epoca e si svolgevano in concorrenza con i corsi statali. Fu allievo di Biagio Lauro, il quale teneva lezioni private di medicina clinica presso l'Ospedale degli Incurabili. Ritornato in seguito a Catania, il professor Tomaselli si cimentò nell'insegnamento e nel 1855 istituì un corso privato di diagnostica presso l'Università di Catania.