Parte sperimentale 57 a) Valutazione dell'espressione della nefrina.• Sezioni di 3 micron ottenute dal materiale incluso in paraffina sono state sparaffinate con Bioclear (ditta Bioptica) e reidratate mediante passaggi seriali in etanolo a concentrazioni decrescenti fino all'acqua distillata.• Smascheramento dell'antigene: le sezioni sono state trattate con Buffer Citrato pH 6 10mM in bagnetto termostatato alla temperatura di 100°C.• Immunofluorescenza su tessuto: le sezioni sono state incubate per un'ora a temperatura ambiente con una soluzione contenente PBS + NaAzide 0,02% + 10% siero di capra (GOAT), per consentire la saturazione dei siti aspecifici.Le sezioni sono state quindi incubate per 2 ore a temperatura ambiente con una soluzione costituita da PBS + NaAzide 0,02% + 3% siero di capra (GOAT) + 0,1%   L'espressione della nefrina nelle biopsie esaminate, rapportata a quelle del controllo è risultata diminuita in 26 delle 27 biopsie sia nei pazient trattati con sirolimus (10/27; 37%, con valore medio di concentrazione ematica alla biopsia di 7,8 ± 0,6 ng/ml), sia nei pazienti trattati con everolimus (16/27; 59%, con valore medio di livelli ematici alla biopsia di 5,5 ± 1ng/ml).Il valore medio di espressione di nefrina per i casi con proteinuria assente o inferiore a 0,5 è risultato di 21,2 mentre quella relativa ai casi con proteinuria maggiore o uguale a 0,5 è risultato 14,7 (tabella 4).   Parte sperimentale 66 Successivamente è stato applicato il test T, separando il campione in due gruppi in base alla presenza/assenza di proteinuria clinicamente significativa (pto<0,5 e pto≥0,5).