Dopo incubazione O/N con anticorpo anti-IFN-γ, sono stati effettuati 4 lavaggi con PBS sterile in modo da eliminare l'anticorpo di cattura in eccesso ed aggiunti 200 µl per pozzetto di soluzione di blocco (blocking solution, RPMI-1640 completo) al fine di saturare i siti di potenziale legame aspecifico dell'IFN-γ. Le piastre sono state quindi incubate per 2 ore in termostato a 37 °C. Dopo aver eliminato la soluzione di blocco per inversione, la piastra può esser fatta asciugare sotto cappa per circa 2 ore. Se i campioni non vengono processati immediatamente, la piastra può essere mantenuta a 4 °C per circa una settimana.