Come detto nell'Introduzione, sia la tirosina-cinasi non recettoriale Src sia la tirosina-cinasi recettoriale Met sono coinvolte nei processi cellulari di proliferazione, protezione dall'apoptosi, migrazione, invasione e neoangiogenesi. Esse sono inoltre funzionalmente correlate e cronicamente attive in diversi tipi di tumore e numerose evidenze suggeriscono che l'inibizione farmacologica di Src sia in grado di compromettere la regolazione dei processi cellulari primariamente dipendenti da Met.Pertanto, in questo lavoro si è valutato, con saggi in vitro e in vivo, l'effetto dell'inibizione di Src con un inibitore chimico (AZD0530, AstraZeneca), in linee cellulari tumorali caratterizzate dall'amplificazione del gene MET e dipendenti, per la loro proliferazione, dall'attivazione di questo recettore.In particolare è stata studiata la capacità delle cellule in cui Src è inibito di formare colonie in assenza di ancoraggio, con saggi in soft agar, e la capacità di formare tumori in vivo, tramite xenotrapianti sottocute in topi nudi.La caratterizzazione degli effetti dell'inibitore ha considerato la latenza di sviluppo del tumore, il volume finale dopo circa un mese di trattamento, lo stato di attivazione dei trasduttori di Src e gli indici di proliferazione cellulare e di apoptosi, in immunoistochimica. Infine, per valutare il ruolo del microambiente tumorale nel rallentamento della progressione, si è analizzato, con metodi di immunofluorescenza, l'effetto di AZD0530 sull'induzione della neoangiogenesi e dell'infiltrato infiammatorio nei tumori in vivo.  (Hennequin et al., 2006), è un inibitore del sito di legame per l'ATP delle cinasi Src e Abl (Figura 1A).La small-molecule AZD0530, formula chimica N-(5-cloro-1,3-benzodiossolo4-ile)-7-[2-(4- metilpiperazina-1-ile)etossi]-5-(tetraidro-2Hpirano-4-ilossi)quinazolin-4-aminaSi è valutata l'azione di AZD0530 nelle GTL-16, linea cellulare di carcinoma gastrico in cui è presente una amplificazione dell'oncogene MET.Attraverso un saggio in soft agar, si è voluto valutare come l'inibizione di Src influisse sulla capacità tumorigenica delle GTL-16, intesa come capacità di crescita indipendente dall'ancoraggio in vitro.Queste cellule sono state trattate con dosi crescenti di AZD0530 e hanno mostrato una diminuzione della formazione di colonie, già alla concentrazione di 0.25µM di AZD0530, che diventa statisticamente significativa (p=0.03) a 0.5µM. Con una concentrazione di 2µM di AZD0530 la crescita è completamente azzerata (Figura 1B).Per confermare l'effetto di AZD0530, si è inibito Src tramite l'utilizzo di shRNA (short hairpin RNA). Sono stati clonati tre shRNA in vettori lentivirali, con cui sono state infettate le GTL-16.Dei tre shRNA analizzati, solo uno si è rivelato efficace nell'abbattare i livelli di espressione di Src, il shRNA 38149 (Figura 1C). Le GTL-16 infettate con il shRNA 38149 hanno mostrato una netta riduzione nella formazione di colonie in soft agar, rispetto sia alle cellule wild-type (wt) sia a quelle infettate con un shRNA di controllo (ctrl), confermando il risultato ottenuto precedentemente con l'inibitore chimico (Figura 1D). Le GTL-16-wt e quelle infettate con il shRNA di controllo hanno formato un numero analogo di colonie, escludendo la possibilità che la minore crescita dalle GTL-16-shRNA 38149 fosse conseguenza di un effetto tossico legato al shRNA stesso.Quindi, in vitro, l'inibizione di Src in presenza di una aumentata e persistente attivazione di Met, compromette la proliferazione cellulare, provocando una diminuzione della capacità tumorigenica delle cellule.