L'ampicillina è attiva su germi Gram-positivi e anche un discreto numero di Gram-negativi. In particolare, tra i microrganismi Gram-positivi, risultano sensibili: "Streptococcus viridans", "Streptococcus faecalis", "Staphylococcus aureus" (limitatamente ai ceppi penicillino-sensibili), "Streptococcus pneumoniae", "Streptococcus pyogenes", "Corynebacterium" spp., Clostridium spp., "Listeria monocytogenes" e "Bacillus antrhracis". 