Numerose evidenze sperimentali sono state raccolte circa la capacità dell'ALDH-2 di bioattivare la GTN, ma pochi studi sono stati effettuati sulla capacità di altri nitrati organici di interagire con questo enzima.Chen e colleghi (Chen et al., 2005) hanno riportato che, in topi ALDH-2-knock-out, la vasodilatazione indotta da isosorbide dinitrato e mononitrato (ISDN e ISMN) non risultava alterata, mentre risultava inibita quella del pentaeritritolo tetranitrato (PETN).Studi successivi, su aorta di ratto con endotelio intatto e aggiunta di benomyl 10 µM nel bagno, confermarono questi dati e aggiunsero che anche il pentaeritritolo trinitrato (PETriN) perde efficacia, ma non i metaboliti de-nitrati PEDN e PEMN.Dai dati raccolti sembrerebbe che i tri e tetranitrati (GTN, PETN, PETriN) vengano bioattivati dall'aldeide deidrogenasi mitocondriale quando utilizzati in dosi clinicamente rilevanti (< 1 µM), il che spiega la loro elevata potenza. I derivati dinitrati e mononitrati sono meno efficaci (Koenig et al., 2007) ). La presenza di due pathway operanti a diverse concentrazioni spiegherebbe il caratteristico aspetto bifasico della curva concentrazione/risposta della GTN e di altri nitrati organici riportato in molti lavori e non spiegato in modo soddisfacente. La curva concentrazione/vasodilatazione con aorte di topi mtALDH -/-, geneticamente modificati e privati del gene per l'enzima, appare monofasica con la parte a più basse concentrazioni (< 1µM), visibile nella curva ottenuta dalla wtALDH, completamente assente (Chen et al., 2006). Koenig e colleghi nel 2007 (Koenig et al., 2007) hanno studiato il comportamento di diversi mononitrati. Questi si sono rilevati tutti a bassa potenza tranne il benzil mononitrato (EC 50 = 4.12•10 -7 M), che sembra essere 300 volte più potente rispetto al fenilnitrato evidenziando il ruolo importante dei sostituenti. Il benzil mononitrato si caratterizza quindi come un nitrato organico di elevata potenza, ma l'ALDH non sembra coinvolta nella sua bioattivazione. L'elevata attività del mononitrato è dovuta piuttosto alla sua capacità di decomporsi per dispoporzionamento in condizioni fisiologiche liberando ione nitrito, come mostrato in Figura 17. Un altro mononitrato studiato dal gruppo di Koenig, la 2-nitrossietilammina, protonata a pH fisiologico, si è dimostrata essere attiva al pari della GTN (Koenig et al., 2007), ma l'eventuale coinvolgimento dell'ALDH nella bioattivazione non è stato indagato.ONO 2 CHO NO 2 - + +3 +5Figura 17. Reazione di disproporzionamento del benzil nitrato.È opinione largamente condivisa che il numero dei gruppi nitrato e la lipofilia (logP) influenzino notevolmente la potenza, anche se una correlazione vera e propria non è mai stata trovata. Questi nuovi risultati hanno evidenziato l'elevata importanza della struttura rispetto alla semplice lipofilia e al numero di gruppi nitrato, probabilmente perché i gruppi funzionali addizionali permettono di aumentare o diminuire l'affinità per il sito dell'enzima, ALDH o citocromo, mediante interazioni specifiche. Questa ipotesi potrebbe spiegare il differente profilo farmacologico di molecole strutturalmente molto simili.