In seguito a stimolazione con LPS, per 4 e 15 ore, è stata evidenziata una ridotta compartimentalizzazione in membrana di HO-1 nei macrofagi BMD provenienti da topi FC KO rispetto ai controlli WT. Si è potuto anche stabilire che il difetto di compartimentalizzazione si configura come causa predominante della ridotta funzionalità di HO-1.Al fine di confermare i dati ottenuti sono state eseguite indagini con l'utilizzo delle tecniche di immunofluorescenza (IF). Sono stati valutati i livelli di colocalizzazione di HO-1 e TRL4 nei macrofagi BMD di topi FC KO e WT, i quali sono risultati ridotti nei KO rispetto ai WT.Inoltre è interessante notare come, in seguito a stimolazione con CORM2, molecola che agisce sulla via HO-1/CO, venga ripristinata la colocalizzazione di HO-1 e TRL4 nei topi FC KO.Al fine di valutare se il difetto che porta alla ridotta compartimentalizzazione ed espressione di HO-1 sia presente a livello pre o post trascrizionale, sono state eseguite indagini, con tecniche di Real Time PCR, per valutare i livelli di espressione di mRNA in macrofagi BMD FC KO in confronto ai rispettivi controlli WT.Un aumento dei livelli di HO-1 è stato osservato in seguito a trattamento con CORM2 nei MF BMD FC dei topi KO.Inoltre, è interessante osservare come in seguito a stimolazione con LPS dei macrofagi BMD FC KO non si determini un aumento significativo dei livelli di mRNA di HO-1. Se tali macrofagi, però, vengono trattati con CORM2 i livelli di mRNA per HO-1 aumentano in modo significativo, come avviene nei controlli WT.Per confermare questi dati sono stati valutati mediante Western blot i livelli di espressione di HO-1 in seguito a stimolazione con LPS e si è osservato che anche in questo caso l'incubazione dei macrofagi con CORM2 determina un aumento dei livelli di HO-1.Poiché Questi dati dimostrano che nei sistemi FC, sia murini che umani, sussiste un difetto di espressione e di compartimentalizzazione di HO-1 legato anche alla proteina scaffold CAV1, e che tale difetto è in grado di determinare un impatto sui marker di infiammazione in seguito a stimolazione con LPS proveniente da PA (95).  Il gruppo di ricerca di Abdulrahman ha dimostrato che il difetto di clearance in macrofagi FC infettati da B. cenocepacia è legato all'alterazione dell'autofagia attraverso un aumento dei livelli della proteina p62, una proteina che si accumula nelle cellule in corso di autofagia difettiva (82).Pertanto, sono stati valutati mediante Western blot i livelli di p62 i quali, come è mostrato nella figura 11A, risultano significativamente più elevati nei macrofagi FC infettati da PAO1 rispetto ai controlli WT.Per confermare che il difetto di clearance batterica potesse essere legato all'accumulo intracellulare di p62, e conseguentemente all'alterazione dell'autofagia, macrofagi WT sono stati trasfettati con il vettore virale per p62.In seguito ad infezione con PAO1 i macrofagi trasfettati con p62 risultano incapaci di eseguire la clearance batterica, come accade nei macrofagi FC (figura 11B). Pertanto, sono stati valutati i livelli di TG2 nei macrofagi FC in presenza ed in assenza di infezione con PAO1 ed è stato osservato che l'espressione della TG2 è significativamente aumentata rispetto ai controlli WT sia in condizioni basali che in corso di infezione, come si può osservare in figura 12.   