L'RNA totale è stato estratto utilizzando il reagente TRIzol (Ambion, Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, USA), seguendo le istruzioni del produttore. Per ottenere l'RNA, il pellet di leucociti è stato risospeso in 0.5 mL di reagente TRIzol per ogni 2,5-5x10 6 cellule ed incubate per 5 minuti a RT per permettere la dissociazione completa dei complessi nucleoproteici. Per separare l'RNA dagli altri componenti cellulari, sono stati aggiunti 0.2mL di cloroformio per ogni 1 mL di TRIzol utilizzato per la lisi e, dopo un'incubazione di 2-3 minuti, i campioni sono stati centrifugati per 15 minuti a 12000 RPM a 4°C. La miscela si separa in tre strati: uno strato inferiore rosso composto da fenolo-cloroformio (proteine e membrane), uno strato intermedio (DNA) e uno strato superiore, la così detta fase acquosa, contenente RNA. Una volta trasferita la fase acquosa in una nuova Eppendorf, l'RNA è stato fatto precipitare con l'aggiunta di isopropanolo (0.5mL di isopropanolo per ogni 1 mL di TRIzol utilizzato per la lisi) per 15 minuti a RT e, successivamente, centrifugato per 10 muniti a 12000 RPM a 4°C. Dopo aver rimosso il surnatante, il pellet di RNA è stato lavato con 1 mL di etanolo al 75% per ogni ml di TRIzol utilizzato per la lisi, centrifugato a 7500 RPM per 5 minuti e risospeso in acqua senza RNasi. L'RNA è stato poi sottoposto a trattamento con DNasi 