Il programma terapeutico prevedeva la riabilitazione con protesi mobile totale mascellare e mandibolare e il successivo inserimento di 3 impianti osteointegrati in titanio ad modum Branemark, posti tra i forami mentonieri, nella regione corrispondente ai canini di destra e di sinistra ed in posizione mediana, per la realizzazione di una MIR-OVD (mandibular implant retained overdenture).L'overdenture mandibolare è ancorata tramite attacchi a pallina del diametro di 2,25 ( Fig. 1) Gli abutments protesici sono stati connessi 3 mesi dopo l'intervento chirurgico ed ogni paziente è stato istruito sulle procedure di igiene orale sia per la protesi sia per gli abutments di titanio (spazzolini e filo). L'altezza dell'abutment usato è stata registrata nella cartella clinica. La presenza di mucosa cheratinizzata è stata osservata intorno agli impianti di tutti i pazienti.Sono stati eseguiti tre richiami dopo la connessione protesica a 4, 8, 12 mesi. Durante le 3 visite di controllo sono stati registrati i seguenti parametri peri-implantari (21):• Indice di placca: ciascuna delle quattro superfici di ciascun impianto (buccale, linguale, mesiale e distale) ha ricevuto un punteggio da 0 a 4 attraverso l'ispezione visiva (0 = assenza di placca, 4 = placca su tutte le superfici). Al termine si è ottenuto un punteggio medio di 0 indicante assenza di placca o di 1 indicante placca su tutte la superfici.• Indice di sanguinamento: valutato nei 3 siti implantari con un sondaggio parodontale. Il valore 1 era attribuito ai siti con sanguinamento visibile.• Sondaggio: misurato come distanza in mm tra il margine gengivale e la giunzione impiantoabutment.I prelievi bioptici, di dimensioni comprese tra i 3 e i 5 mm 2 di tessuto, sono stati eseguiti:• Al primo tempo chirurgico (al posizionamento dell'impianto): il campione di mucosa è stato prelevato da un lembo scolpito nell'area del sito del futuro impianto (T0). Questa biopsia è stata usata come valore basale di riferimento per le valutazioni immunoistochimiche • A 4 mesi dopo il posizionamento protesico: il campione è stato prelevato dai tessuti dell'impianto destro (T1)• A 8 mesi dopo il carico protesico: il campione è stato prelevato dai tessuti circostanti l'impianto sinistro (T2)• A 12 mesi dal carico protesico: il campione è stato prelevato dai tessuti peri-implantari dell'impianto mediano (T3).Il sito di biopsia è stato anestetizzato con Mepivacaina (Carbocaina 2%; senza adrenalina) attraverso l'infiltrazione della mucosa alveolare ad almeno 1 cm dal sito di biopsia, al fine di prevenire ogni modificazione delle caratteristiche istomorfometriche del tessuto.È stata eseguita un'incisione attorno all'abutment; la ferita chirurgica peri-implantare è guarita per seconda intenzione. I campioni prelevati sono stati fissati immediatamente in formalina al 4%, inclusi in paraffina, preparati in sezioni di 3 micron e messi in vetrini rivestiti di poly-lisina che sono stati usati per aumentare l'adesione della sezione di tessuto durante i procedimenti di colorazione.Sono state usate tecniche convenzionali di colorazione con eosina ematossilina e tecniche immunoistochimiche usando anticorpi antiCD 31 (1 a 10, VENTANA, PREDILUITO), un marker vascolare specifico, ed anti transglutaminasi tissutale 2 (TG2) (TGase II AB-1 CLONE CUB7402, NEOMARKERS) per ciascun campione di tessuto usando un immunocolorante automatizzato VENTANA ( BenchMark, Autostainer, Ventana, Medical Systems, Tucson, AZ ;USA). I dati immunoistochimici dell'espressione di TG2 sono stati valutati in termini di numero di cellule stromali con positività citoplasmatica per questa proteina per mm 2 di area di tessuto molle peri-implantare e la densità vascolare come numero di vasi per mm 2 .