In questo secondo test il paziente ha normalizzato i valori di Phe plasmatica a 24 ore. Tuttavia, i valori di partenza in questo secondo test erano <10 mg/dl (circa 8 mg/dl). Secondo lo stesso metodo (valutazione a 52 ore con dosi multiple di BH 4 ) sono stati valutati i pazienti 4 e 5. Il paziente 4 presenta le stesse mutazioni del paziente 3 e, da valori di circa 9 mg/dl al T0, ha raggiunto valori di circa 6 mg/dl a 24 ore, rimanendo a circa 5 mg/dl a 52 ore.Il paziente 5 si è mostrato refrattario alla supplementazione di BH 4 , la Phe sierica è scesa molto lentamente, ritornando a 36 ore ai livelli basali. Il test da carico ha mostrato un calo significativo della Phe plasmatica in 18 pazienti con HPA: 3 bambini con PKU classica, 4 con PKU mild e infine 11 con HPA mild. In media, la riduzione della concentrazione di Phe ottenuta è stata del 46% dopo 8 e 24 ore dalla somministrazione di BH 4 .