I polmoni ventilati e perfusi sono stati randomizzati a ricevere due differenti strategie ventilatorie, entrambe con una frequenza respiratoria di 90 atti/minuto, FiO2 del 21%, un volume tidalico ed un flusso variabili a seconda della strategia utilizzata. Tutti gli esperimenti hanno previsto una prima ora di stabilizzazione della ventilazione con pressione inspiratoria a -10 cm H20 e perfusione a 0.5 ml/min, ogni 10' è stata eseguita un'inspirazione prolungata (sigh) della durata di almeno 3", a pressione di -25 cm H20, per riespandere le zone del polmone non più ventilanti ; a partire dalla seconda ora di ventilazione, la velocità di perfusione è stata aumentata ad 1 ml/min e le pressioni inspiratorie sono state impostate in base alla strategia ventilatoria scelta.Gli esperimenti, per ogni condizione, sono stati condotti con due differenti durate, oltre alla prima ora di stabilizzazione:1 h: per determinare l'attivazione precoce delle chinasi intracellulari e di eNOS;3 h: per determinare la concentrazione di nitrati e nitriti nel perfusato e ed il danno a livello istologico.Ogni 30', a partire dall'inizio dell'esperimento, sono stati prelevati 1000 µl circa di perfusato polmonare per le successive analisi e sono stati stoccati a -80°C.Alla fine di ogni esperimento da 1 h, entrambi i polmoni sono stati isolati, congelati in azoto liquido e stoccati a -80°C per le analisi molecolari; al termine di ogni esperimento da 3 h un polmone è stato isolato, congelato in azoto liquido e stoccato a -80°C, mentre l'altro è stato fissato mediante inflazione di 1 ml di una soluzione contenente paraformalaldeide al 4% (Sigma-Aldrich) con lo scopo di preservare l'architettura polmonare per studi istologici. Le frequenze respiratorie, in ambo le strategie, sono state di 90 atti/minuto.