Vengono posizionati nell'apposita struttura per il trasferimento: una spugnetta, due fogli di carta 3MM della grandezza di 5 x 9 cm, il gel, il filtro di nitrocellulosa della grandezza di 5 x 9 cm ed infine un'altra spugnetta; questo viene definito "sandwich". Ogni componente, ad eccezione del gel, viene imbevuto in Transfer Buffer 1X precedentemente tenuto a 4°C.Il trasferimento avviene a freddo a voltaggio costante: 100 V per 2 ore.Composizione del Transfer Buffer 10X: