Per giungere a valutare l'efficacia del trattamento col farmaco targeted, è necessario ricavare da un singolo tumore una coorte sufficientemente ampia di animali da randomizzare in due gruppi, quello dei trattati e quello dei non trattati (gruppo di controllo). Abbiamo raggiunto tale obiettivo facendo espandere il tumore in generazioni di topi successive, dalla generazione indicata p0, corrispondente al primo impianto, alla generazione p2, che è quella oggetto del trattamento.Nella pratica, i tumori impiantati nei due topi vengono lasciati crescere fin quando le dimensioni della lesione non raggiungono un diametro di circa 15 mm; il tempo richiesto è in genere 1-3 mesi, anche se sussistono notevoli variazioni di crescita da un animale all'altro, da un minimo di una settimana fino a un massimo di quasi 7 mesi. Attuiamo un controllo della crescita della massa tumorale settimanalmente, attraverso la palpazione della lesione in sede d'impianto.Operiamo successivamente il sacrificio del topo, attraverso una dose letale di anestetico seguita da dislocazione cervicale; apriamo la tasca contenente il tumore e lo estraiamo.Sempre lavorando sotto cappa, suddividiamo quindi la lesione in più cubetti di 3 mm di lato, dei quali alcuni sono congelati in azoto liquido, altri archiviati in RNAlater per l'analisi genetica e trascrizionale e quattro vengono impiantati in altri 4 topi. Realizziamo questa procedura per ognuno dei due topi, in modo tale da ottenere, al termine del secondo impianto, una popolazione di 8 topi in totale (p1). Come in precedenza, monitoriamo i tumori impiantati periodicamente e li lasciamo accrescere fino al raggiungimento delle dimensioni desiderate (circa 15 mm). Da ogni topo della generazione p1, esclusi due che vengono tenuti come riserve, preleviamo nuovamente la massa neoplastica, la suddividiamo in frammenti che, in modo del tutto identico a come descritto sopra, destiniamo in parte all'archiviazione in azoto liquido e RNAlater e in parte all'impianto in altri 2 topi. Considerando l'espansione dei 6 topi della generazione p1, si ricava una popolazione di 18 animali, che vanno a costituire la popolazione randomizzata per il trattamento o il controllo (p2).