Le reazioni immunoistochimiche sono state allestite su sezioni dello spessore di 5 micron seriali a quelle utilizzate per l'analisi istopatologica convenzionale e per l'estrazione del DNA ai fini della ricerca molecolare. Tutta la procedura è stata svolta utilizzando l'immunocoloratore automatico BenchMark, Ventana. I marcatori valutati sono stati i seguenti: La valutazione della reazione immunoistochimica per i marcatori TTF1 e TS è stato eseguita assegnando uno score istologico semiquantitativo (HS) che tiene conto sia dell'intensità della reazione che dell'entità della distribuzione secondo le seguenti istruzioni 96 : si dà un punteggio all'intensità di espressione della proteina, 1 (lieve), 2 (moderata) e 3 (intensa) e per ogni score si quantifica la distribuzione in termini di percentuale rispetto al totale; a questo punto ogni score viene moltiplicato per la corrispondente percentuale di distribuzione e i risultati sommati secondo la formula: HS=Σ(IxPC), dove I sta per intensità e PC per percentuale di cellule positive, ottenendo così dei valori che vanno da 0 a 300. Per i marcatori di membrana CK20 ed HER2, il marcatore citoplasmatico ALK e il marcatore nucleare CDX2, la valutazione è stata espressa in base alla positività o negatività nel campione; per i marcatori CK7 e MET si è assegnato un punteggio da 1 (lieve) a 3 (elevato) in base all'intensità del segnale di membrana osservato; l'indice di proliferazione Ki67 è stato valutato come media percentuale di 10 campi ad alto ingrandimento (HPF) a maggior espressione nucleare, mentre p53 è stata valutata secondo la percentuale di positività globale nel campione.