La prima determinazione del CLU, clinicamente utilizzata, risale al 1968; tale test ha gradualmente, e definitivamente, sostituito il test biochimico più comunemente impiegato in passato, vale a dire il dosaggio dei glucocorticoidi urinari. Il cortisolo non legato alle proteine di trasporto è filtrato dal rene e pertanto la misura del cortisolo nelle urine delle 24 ore rappresenta la quota libera del cortisolo sierico e, nello stesso tempo, la sua misura "integrata", non inficiata dalle variazioni circadiane. Infatti, le raccolte temporizzate (es. urine di 12 o 24 ore) sono raccomandate per la determinazione di analiti che possono risentire di variazioni significative nel corso della giornata in dipendenza di ritmi circadiani, come appunto è il caso del cortisolo sierico. Tuttavia i problemi della raccolta temporizzata sono numerosi: (1) correttezza dei volumi raccolti, specie in soggetti anziani, obesi e pazienti allettati; (2) conservazione del campione; (3) tipo di contenitore utilizzato. Poiché nella sindrome di Cushing l'ipersecrezione di cortisolo è intermittente, può risultare utile fare ricorso a raccolte multiple di urina (da due a tre raccolte consecutive). Infatti, in un lavoro su 146 pazienti con sindrome di Cushing la sensibilità diagnostica del CLU, eseguito su raccolte multiple, è del 95%; l'11% dei pazienti presentava, però, una raccolta su quattro con un valore di CLU nella norma.Alcuni autori hanno dimostrato inoltre che il CLU è in grado di differenziare i pazienti con sindrome di Cushing dai soggetti normali e da quelli obesi con una sensibilità del 95% e una specificità del 98%, mentre altri hanno messo in luce una sua scarsa capacità di distinguere fra Cushing e pseudo-Cushing. Dal momento che l'inadeguatezza della raccolta delle urine delle 24 ore costituisce uno dei limiti maggiori del dosaggio, è consigliabile effettuare la misura della creatininuria per verificare la validità della raccolta stessa. Alcuni autori, inoltre, per minimizzare il problema, hanno proposto un periodo di raccolta più breve (12 ore), solitamente notturno. E' stato così dimostrato che un rapporto CLU/creatininuria notturno (h 20.00 -h 8.00) differenzia i pazienti con sindrome di Cushing dai soggetti obesi con una sensibilità del 100% e una specificità del 97%, maggiori di quelle ottenute con il rapporto CLU/creatininuria delle 24 ore. Per quanto concerne in particolare la specificità, grande importanza è rivestita dalla scelta del valore utilizzato come limite superiore della norma; esso risulta metodo-specifico e nella maggior parte dei casi (metodi diretti) è compreso tra 80 e 120 µg/24h. Un recente lavoro suggerisce che la diagnosi di sindrome di Cushing vada posta qualora la concentrazione del CLU, eseguito su tre raccolte, risulti >180 µg/24h e, al contrario, sia da escludere se < 50 µg/24h. Nella zona di incertezza (50 -180 µg/24h) l'algoritmo diagnostico prevede ulteriori indagini per la diagnosi differenziale con lo pseudo-Cushing. Fino ad ora non sono stati stabiliti dei veri limiti inferiori di normalità per il CLU, atti cioè a discriminare i soggetti normali da quelli con ipocortisolismo; pertanto non è corretto porre diagnosi di insufficienzasurrenale basandosi soltanto sulla determinazione del CLU.