Le sezioni sono state asciugate in stufa a 56° C e trattate con immunocoloratore Ventana Benchmarke che, mediante un processo automatizzato, deparaffina, reidrata, blocca le perossidasi endogene e riscalda il materiale in modo da ottenere lo smascheramento antigenico.Le colorazioni immunoistochimiche si sono effettuate in modalità automatica con streptavidina-biotina e utilizzando un sistema di rilevazione con diaminobenzidina che permette di evidenziare la reazione (view detection DAB). Si sono impiegati gli anticorpi monoclonali diretti contro CD10, Bcl-6, MUM/IRF-4 e CD138.Le reazioni sono state considerate positive quando più del 30% delle cellule tumorali veniva colorata dall'anticorpo.I casi sono stati classificati utilizzando due diversi algoritmi in base all'espressione di:marcatori del centro germinativo (CD10 e Bcl-6)marcatori di attivazione delle cellule periferiche (MUM1 e CD138).In accordo con lo studio di Hans et al 27 , è stata considerata la positività/negatività solo per tre marcatori (CD10, Bcl-6 e MUM1) classificando i casi in due sottogruppi (algoritmo di Hans):-GERMINAL CENTER (GCB) quando si riscontra la positività sia per CD10 che per Bcl-6, oppure solo per CD10, oppure quando CD10 è negativo, Bcl-6 positivo e MUM1 negativo caratterizzato da CD10 negativo e Bcl-6 negativo, oppure da CD10 negativo, Bcl-6 positivo e MUM1 positivo.Quindi quando CD10 è negativo e Bcl-6 è positivo, è MUM1 a discriminare tra GCB e ABC.In accordo con lo studio di Chang et al 29 , è stata invece considerata la reattività nei confronti dei quattro anticorpi (CD10, Bcl-6, MUM1, CD138), suddividendo così i casi in tre gruppi:-GERMINAL CENTER (GCB)-ACTIVATED (ABC), non germinal center, quando è espresso almeno un marcatore di attivazione e nessuno del centro germinativo -GERMINAL CENTER ACTIVATED (GCB act) se esprimono almeno un marcatore del centro germinativo e almeno uno di attivazione.