Ogni singolo campione è stato disgregato con un omogenizzatore (Ultra Turrax T25); l'omogenato ottenuto è stato utilizzato per l'estrazione dell'RNA seguendo il protocollo del Kit NucleoSpin® RNA II (MACHEREY-NAGEL). L'RNA estratto è stato quantificato allo spettrofotometro alla lunghezza d'onda di 260 nm.Una volta quantificato l'RNA, si è proceduto con la retro trascrizione che è stata realizzata a partire da 1µg dell'RNA totale estratto da ciascun campione. La retrotrascrizione è stata effettuata utilizzando il kit High-Capacity cDNA ReverseTranscriptions Kit® (Applied Biosystems). Per verificare l'assenza di contaminazioni in ogni esperimento è stato effettuato un controllo negativo in cui il cDNA è stato sostituito da acqua.Ogni campione è stato amplificato in duplice copia in ogni reazione, che è stata condotta per almeno tre volte.Per convalidare il confronto tra campioni, la PCR semi quantitativa richiede l'amplificazione del gene di interesse e di un gene housekeeping, cioè costitutivamente espresso (perché essenziale per la sopravvivenza cellulare). A tale proposito è stato utilizzato il gene GAPDH (gliceraldeidefosfato deidrogenasi).Sono stati valutati i valori di ciclo soglia (Ct) ottenuti da ogni reazione. Il valore inserito nei singoli grafici deriva dal calcolo 2 -∆∆Ct dove:∆Ct corrisponde a Ct gene di interesse -Ct GAPDH ∆∆Ct corrisponde a ∆Ct del prelievo a 7 giorni -∆Ct del prelievo al tempo 0.