Gli osteoclasti sono cellule plurinucleate formatesi dalla fusione di cellule della linea monocito-macrofagica (7). Alcuni studi dimostrano come sia possibile identificare precursori degli osteoclasti nella frazione di cellule mononucleate circolanti nel sangue periferico (PBMC) (7)(8)(9) e come sia possibile ottenerne la differenziazione in osteoclasti maturi in vitro (9)(10)(11); in particolare, è stato dimostrato come queste cellule derivino dalla frazione cellulare CD14+, ovverosia dalla popolazione monocitaria circolante (7,9). I monociti CD14+ sono una popolazione cellulare eterogenea da cui derivano macrofagi, granulociti, cellule dendritiche ed osteoclasti. circolante (9,11). La differenziazione dei monociti precursori del midollo in osteoclasti maturi si ritiene sia sostenuta soprattutto da M-CSF (Macrophages Colony Stimulating Factor), che agisce principalmente aumentando le dimensioni del pool di pre-osteoclasti presenti nel midollo osseo, e da RANKL (Receptor Activator of NF-kB Ligand, anche conosciuto come OPGL, TRANCE o ODF) che rappresenta il principale fattore in grado di modulare il passaggio finale della cascata differenziativa che conduce alla formazione di osteoclasti maturi e funzionalmente attivi. (Figura 12). Figura 1 2: Tappe dell'osteoclastogenesi Dopo aver posto in coltura cellule CD14 positive con aggiunta di fattori proosteoclastogenetici (M-CSF e 1-25OH vitD) si è evidenziato un incremento del riassorbimento mediato da osteoclasti di circa 2-4 volte rispetto all'entità di riassorbimento osservato in identiche condizioni sperimentali da colture di PBMC non frazionati (12). È stato inoltre condotto uno studio (8) finalizzato alla differenziazione dei precursori degli osteoclasti dagli altri PBMC (in particolare monociti) circolanti. Un precedente lavoro (13) aveva dimostrato come RANK espresso su precursori di osteoclasti murini trattati con citochine interagisse con il ligando OPGL per dare inizio alla cascata differenziativa che conduce alla formazione di osteoclasti maturi. Sono stati identificati tramite tecniche di separazione cellulare i possibili precursori degli osteoclasti, che esprimevano RANK, esponendoli al contatto con la forma umana fluorescente del ligando (Hu-OPGL-F), al quale invece non si legano i linfociti T. Le cellule Hu-OPGL-F+ esprimevano inoltre i seguenti antigeni: CD33, CD61, CD11b, CD38, CD45 e CD54, ma non il CD34 ed il CD56. Colture cellulari stimolate con OPGL e CSF, costituite rispettivamente da cellule Hu-OPGL-F+/CD33+/CD14+, Hu-OPGL-F+/CD33+, oppure Hu-OPGL-F+/CD14+, hanno dato rapidamente origine a cellule simili ad osteoclasti.