Denti decidui in fase di esfoliazione precoce sono stati raccolti da pazienti in cui l'indicazione chirurgica all'estrazione era già stata posta principalmente per motivi ortodontici. Gli elementi dentari sono stati sottoposti a decontaminazione subito dopo l'estrazione mediante immersione prima in etanolo 70% per 30 secondi, quindi, in PBS addizionato di penicillina e streptomicina 5%. Per il trasporto dal luogo del prelievo si è fatto ricorso a contenitori isotermici contenenti ghiaccio.L'accesso alla camera pulpare è stato ottenuto praticando una frattura lungo la linea amelocementizia mediante scalpelli chirurgici. La polpa dentaria è stata delicatamente rimossa e quindi digerita in una soluzione di collagenasi tipo I (3 mg/ml) e dispasi (4 mg/ml dispase) per 1 h a 37°C. La sospensione cellulare è stata quindi colata attraverso un filtro da 70-μm (Falcon).La sospensione così ottenuta è stata seminata in piastre da 100 mm contenenti alpha modification of Eagle's medium (GIBCO-BRL, Life Technologies) supplementato con:-20% FBS -100 μM acido l-ascorbico 2-fosfato -2 mM l-glutamina -100 unità/ml di penicillina 100 μg/ml di streptomicina ed incubata a 37°C in presenza di 5% CO 2 .