Per la determinazione quantitativa dei livelli plasmatici di HLA-G1/G5 è stata utilizzata una metodica ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) impiegando il Kit sHLA-G ELISA (Biovendor GmbH, Heidelberg, Germania). E' stato utilizzato l'anticorpo murino monoclonale anti HLA-G solubile umano MEM-G/9, che riconosce allo stesso modo le molecole di HLA-G1 e G5.I dosaggi sono stati eseguiti in accordo con le istruzioni della casa produttrice: i calibratori ed i campioni vengono incubati in micro pozzetti pre-rivestiti di anticorpo monoclonale anti-sHLA-G a 2-8°C per 16/20h. Dopo lavaggio, viene quindi aggiunto un anticorpo monoclonale anti-β2microglobulina umana coniugato alla perossidasi di rafano (HRP) e incubato per 60' a temperatura ambiente basculando a 300 rpm. Dopo lavaggio, l'HRP coniugata viene fatta reagire con l'appropriata soluzione-substrato. Dopo 25' a temperatura ambiente, la reazione viene interrotta mediante l'aggiunta di una soluzione acida. Successivamente, viene misurata l'assorbanza del risultante colore giallo a 450 nm con una curva di riferimento settata a 630 nm. Tale assorbanza è proporzionale alla concentrazione di sHLA-G. Viene quindi costruita una curva di calibrazione, confrontando i valori di assorbanza con le concentrazioni dei calibratori, e le concentrazioni dei campioni vengono stabilite in base a tale curva di riferimento.I campioni in cui le concentrazioni di sHLA-G eccedevano le 200 UI/ml (limite massimo di concentrazione valutabile attraverso la curva standard utilizzata) sono stati rivalutati effettuando una diluizione con un fattore 1:4.