• Il vetrino con l'apposizione di tessuto non viene invecchiato in alcun modo • Fissare l'apposizione da pezzo congelato o da pezzo fresco in un coplin con metanolo per 10' (minuti) a temperatura ambiente.• Aggiungere 200 µl di Pepsina-HCl (0.005%-0.01M), mettere coprioggetto, lasciare in scatola umida a 37°C.• Rimuovere delicatamente il coprioggetto (sempre ogni volta che si toglie il coprioggetto bisogna essere delicati per non danneggiare le apposizioni di tessuto) facendolo scivolare sul vetrino in un coplin con PSB 1X (5 ml PBS 10X + 45 ml di H 2 O) per 5' a temperatura ambiente.• Trasferire il vetrino in un coplin con PBS 1X e MgCl 2 0.05 M (5 ml PBS 10X + 5 ml MgCl 2 ) per 5' a temperatura ambiente.• Trasferire il vetrino in un coplin con PBS 1X e MgCl 2 0.05 M, Paraformaldeide 4% (5 ml PBS 10X + 5 ml MgCl 2 + 25 ml Paraformaldeide 8% + 15 di ml H 2 O) per 5' a temperatura ambiente.• Trasferire il vetrino in un coplin con PBS 1X (5 ml PBS 10X + 45 ml di H 2 O) per 5' a temperatura ambiente.• Deidratare il vetrino nella serie di etanoli (70%-85%-100%) per 5' ciascuna a temperatura ambiente e asciugare all'aria.• Se si usa la macchina Hybrite della Vysis, mettere la sonda sul vetrino, mettere il coprioggetto, sigillare con la colla, co-denaturare per 2' a 72°C e lasciare a 37°C overnight nella macchina o nella scatola umida.• Per le sonde BAC/PAC fare 3 lavaggi del vetrino in un coplin contenente 0.1 X SSC per 5' ciascuno a 60°C. In relazione all'ottenimento di un buon risultato attraverso un approccio chemioterapico si è deciso di inserire il paziente nel protocollo con alte dosi di chemioterapia recentemente studiato. È stato eseguito il secondo ciclo con MTX, Vincristina, Ciclofosfamide con successiva mobilizzazione con G-CSF per la raccolta di cellule staminali periferiche. La RM encefaloasse di rivalutazione ha evidenziato un netto miglioramento del quadro precedentemente descritto. Sono stati dunque eseguiti i due cicli di chemioterapia ad alte dosi con infusione di cellule staminali periferiche (CBDCA+VP16 e Thiotepa+L-PAM). Durante il ricovero per il primo ciclo si è verificato un incremento dei valori di SGOT e SGPT ed è stata eseguita, nell'aprile 2002, un'ecografia addominale che ha evidenziato la presenza di una formazione ad ecostruttura disomogenea di circa 5-6 cm nella compagine del parenchima epatico. Tale lesione è stata indagata con TC addome e biopsia epatica: l'esame istologico ha escluso la presenza di una lesione ripetitiva. La RMN encefalo ed asse di rivalutazione, eseguita a giugno 2002, hanno evidenziato l'assenza di aree di enhancement di sicuro significato patologico e la RMN addome superiore ha evidenziato la lesione epatica già nota con volume sostanzialmente immodificato. La TC addome eseguita a maggio 2002 ha evidenziato una formazione espansiva di 6.5x5.4x4.6 cm di diametro massimo in sede sotto epatica in stretto rapporto di continuità con la lesione epatica già nota. In tale data è stata eseguita una biopsia allargata e la diagnosi istologica descrive un tumore maligno a piccole cellule il cui quadro morfologico, immunofenotipico e genico orientano nel senso di un tumore rabdoide. Il paziente ha quindi iniziato il trattamento polichemioterapico secondo il protocollo " RMS 99" ed ha eseguito, a d agosto 2002, il primo ciclo IVA 3 .Il bambino è deceduto il mese successivo per progressione di malattia. Il tempo di sopravvivenza dalla data di diagnosi è stato di 9 mesi e 3 giorni.