Culture System da 16 well. I well plates B&D Osteologic Biocoated Bone Cell Culture System utilizzati consentono di valutare sia la morfologia e, quindi, il numero di osteoclasti formati che la loro attività di riassorbimento osseo, infatti questi supporti sono rivestiti da policarbonato di calcio che mima la matrice ossea mineralizzata e consente la miglior differenziazione ed attivazione dell'osteoclasto rispetto ad un supporto di plastica.Secondo i metodi standard di coltura cellulare le colture sono state mantenute a 37°C in atmosfera umidificata al 5% di CO2.Abbiamo cambiato il terreno ogni 3 giorni, il surnatante dai pozzetti non contenenti i fattori di crescita è stato raccolto a 3 e 6 giorni di coltura e conservato a -20°C, inoltre è stato effettuato un pool di surnatante che rappresenta l'intero periodo di coltura per il dosaggio di RANKL, OPG e TNFα. Al 21º giorno le cellule sono sate fissate e colorate per la fosfatasi acida tartrato resistente (TRAP) marker di differenziazione osteoclastica.  La densità ottica è stata letta a 570 nm con uno spettrofotometro automatico.  La densità ottica è stata letta con uno spettrofotometro a 450 nm.