Dopo avere informato i pazienti dello scopo di questa indagine ed avere ottenuto il loro consenso, è stato eseguito il prelievo di sangue.Tutti i campioni sono stati genotipizzati per il polimorfismo biallelico del gene TNFRSF11A (H141Y e A192V) presente sull'esone 6.Tale esone è stato amplificato mediante tecnica PCR usando una coppia di primers:5'-TGAAGGAGCTGGCAATCTGG-3/5'-CACCCTGGGGCACATCTATC-3' La reazione di PCR è stata eseguita in un volume finale di 50 microlitri, con 90 ng di DNA genomico, 0,4 unità di Taq Gold DNA polimerasi (Applied Biosistem), 250 nm di ciascun primer, 1,5 mM MgCl2 e 50 mM dNTPs. I prodotti della PCR sono stati testati in elettroforesi in un terreno agar gel al 2% TBE1X e colorati con bromide di etidio. La reazione di sequenziamento è costituita da 37 cicli ripetuti di denaturazione per 3 minuti a 94C°, poi per 30 secondi a 94C°, per 30 secondi a 64C°, per altri 45 secondi a 72C° ed infine per 10 minuti a 72C°.Il prodotto di PCR è di 237 bp e l'analisi del SNP è stata effettuata con l'enzima Ssil che riconosce il sito CCGC (GCGG) e digerisce a 37C°.Se il SNP A192V e' presente su entrambi gli alleli, si hanno 2 bande (149 bp e 88 bp).Invece in eterozigosi si hanno 3 bande (237bp, 149bp, 88 bp). Se il SNP H141Y e' presente su entrambi gli alleli si ha una sola banda (237 bp).