Cloni di shRNA lentivirali PLKO.1 diretti contro il VDR umano e un controllo di interferenza non mirato sono stati acquistati da Sigma (Sigma Mission shRNA) (Sigma, St. Louis, MO, USA). In un lavoro precedente condotto nei nostri laboratori [11] l'efficienza dei singoli cloni di shRNA lentivirali nelle cellule è stata determinata usando la real-time PCR e analisi di Western Blot. Negli esperimenti descritti in questo studio è stata utilizzata la sequenza shRNA 4 (TRCN0000276543): 5′-CCGGCTCCTGCCTACTCACGATAAACTCGAGTTTATCGTGAGTAGGCAGGAGT TTTTG-3′, Le particelle lentivirali usate per la trasduzione sono state prodotte nelle cellule HEK293T: la cotrasfezione del vettore di packaging e del plasmide contenente la sequenza codificante per shRNA è stata effettuata con il reagente lipofectamina, e i surnatanti sono stati usati per la trasduzione overnight delle cellule. La selezione con la puromicina è iniziata 24 ore dopo l'infezione. Entro una settimana dall'infezione o dopo due settimane, le cellule sono state seminate per i saggi sperimentali o messe in coltura per l'analisi di RNA e proteine.