L'RNA è stato estratto da tessuti congelati conservati a -80°C e sui corrispondenti campioni fissati in formaldeide e inclusi in paraffina sono state eseguite le colorazioni IIC con BiotHER, TAB250, Herceptest ® ed è stata eseguita la FISH.Per ottenere l'estrazione dell'RNA esclusivamente da tessuto normale o da tessuto tumorale, sezioni congelate provenienti dai campioni in oggetto sono state prima esaminate al microscopio ottico dopo colorazione con ematossilina ed eosina. Nei campioni classificati come normali è stata confermata la presenza di tessuto sano nel campione. In quelli classificati come carcinomi, l'eventuale tessuto normale intorno alla lesione è stato identificato su sezione e poi asportato con bisturi dal blocchetto congelato. La sola presenza di tessuto neoplastico è stata poi verificata su una seconda sezione di controllo colorata con ematossilina-eosina. L'RNA totale è stato estratto usando il reagente TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, U.S.A.) secondo le istruzioni del produttore. Per evitare la contaminazione da parte di DNA, 1μg di estratto così ottenuto è stato digerito con 10 U di DNasi priva di RNasi (Boehringer, Mannheim, Germania).