Il presente studio è stato condotto presso il Laboratorio Centro Trapianti Cellule Staminali e Terapia Cellulare, Oncoematologia, Presidio Ospedaliero Regina Margherita, Città della Salute e della Scienza di Torino.Scopo dello studio è generare ed espandere in vitro linfociti T citotossici osteosarcomaspecifici utilizzando come fonte di antigene cellule primarie autologhe di pazienti affetti da osteosarcoma al fine di ottenere dati sperimentali a supporto di protocolli clinici di fase I per il trattamento dei pazienti in seconda o successiva recidiva.Obiettivi primari dello studio sono pertanto:la generazione e l'espansione di linfociti T citotossici (CTL) osteosarcoma specifici autologi a partire da sangue periferico di pazienti;la coltura e la caratterizzazione delle cellule primarie di osteosarcoma e di sarcoma di Ewing da utilizzare come fonte di antigene.Obiettivo secondario dello studio è determinare le condizioni sperimentali di espansione in vitro che consentano di ottenere CTL specifici in numero sufficiente per il futuro utilizzo in protocolli clinici, per l'infusione in pazienti.La caratterizzazione delle cellule primarie verrà eseguita attraverso la valutazione della crescita e della capacità differenziativa in vitro e l'analisi dell'immunofenotipo.L'analisi della specificità dei CTL verrà condotta attraverso la valutazione dell'immunofenotipo in termini di percentuale di cellule CD3+/CD8+ ed il loro potenziale citotossico mediante saggi in vitro contro bersagli specifici.