L'RNA totale precedentemente estratto con la metodica sopra indicata, è stato retro-trascritto a c-DNA utilizzando l'enzima retrotrascrittasi M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase) 200 U/µl (Invitrogen, Carlsbad, California). Si è scelto di retrotrascrivere 1 µg di RNA di ciascun campione. Il trascritto è stato aggiunto ad una miscela acquosa costituita da 4µl di buffer 5x, 2 µl di DTT 0,1 M, 1µl di dNTPs 10 mM (contenente dATP, dGTP, dCTP e dTTP, ognuno di 10 mM), 0,2 µl di esameri random, 0,8 µl di acqua e 1 µl di RNAse out. Infine è stato addizionato 1 µl di enzima M-MLV.La miscela di reazione così ottenuta (volume finale di 20 µl) è stata incubata per 50 minuti a 37°C. Successivamente l'enzima è stato inattivato lasciando i campioni a 70°C per 15 minuti.Per ogni esperimento è stato aggiunto un controllo negativo in cui non era presente RNA, al fine di escludere l'eventuale contaminazione della miscela di reazione. OBIETTIVO 2: ANALISI PROTEOMICA