Da ciascuno dei soggetti, dopo digiuno di 12 ore, è stato ottenuto un prelievo ematico per la determinazione di parametri metabolici-ormonali e di marcatori della flogosi, della disfunzione endoteliale e della iperattività piastrinica. Glicemia a digiuno, colesterolo totale, colesterolo HDL, e trigliceridi sono stati determinati presso il Laboratorio Centrale dell'ASO San Luigi con le metodiche automatizzate di chimica clinica. L'insulinemia a digiuno è stata misurata con metodo radioimmunologico (RIA) utilizzando un kit della Biochem Immuno System S.p.A. (Bologna, Italia); la specificità dell'anticorpo era del 100% per l'insulina umana, del 14% per la proinsulina umana, dello 0,0002% per il C-peptide e il glucagone. I livelli di C-peptide a digiuno sono stati misurati con metodica RIA utilizzando un kit prodotto dalla Biochem Immuno System S.p.A. con le seguenti specificità: 100% per il C-peptide umano, 3,2% per la proinsulina umana, assenza di reattività per glucagone.La sensibilità all'insulina nello stato di digiuno è stata valutata utilizzando l'Homeostasis Model Assessment (HOMA-IR), ottenuto con la seguente formula:Glicemia a digiuno (mmol/l) x Insulinemia a digiuno (μU/ml) / 22.5.La formula è stata originariamente proposta da Matthews (Matthews et al., 1985) e successivamente utilizzata in numerosi studi clinici come marker di insulino-resistenza (Haffner et al., 1997;Ferrannini et al., 1998). Un valore elevato di HOMA IR denota la presenza di bassa sensibilità all'insulina.I campioni di siero per la determinazione dei marcatori di disfunzione endoteliale e infiammazione e delle adipochine sono stati conservati a -80 °C sino al momento del dosaggio. Per i marcatori endoteliali e il CD40 ligand (CD40L) sono stati utilizzati kits in ELISA della Bender MedSystem (Vienna, Austria). Per la Intracellular Adhesion Molecule-1 (sICAM) il livello più basso di sensibilità del metodo era 2.17 ng/ml, il coefficiente di variazione intra-assay era 9,5% e il coefficiente di variazione inter-assay era 12,9%; per la Vascular Cell Adhesion molecule-1 (sVCAM) il livello più basso di sensibilità del metodo era 0,59 ng/ml, il coefficiente di variazione intra-assay era 3,1% e il coefficiente di variazione interassay era 5,2%; per la P-selectina (sPselectin, CD62) il livello più basso di sensibilità del metodo era 0,85 ng/ml, il coefficiente di variazione intra-assay era 6,5% e il coefficiente di variazione interassay era 5,5 %; per il CD-40L (sCD40L) il livello più basso di sensibilità del metodo era 0,062 ng/ml, il coefficiente di variazione intra-assay era 6,8% e il coefficiente di variazione inter-assay era 14,2%; per l'Interleuchina-6 (sIL-6) il livello più basso di sensibilità del metodo era 0,92 ng/ml, il coefficiente di variazione intra-assay era 6,2% e il coefficiente di variazione inter-assay era 7.0%.La determinazione dell'adiponectina è stata effettuata mediante un kit EIA della R&D (Minneapolis, MN, USA), il livello più basso di sensibilità del metodo era 0,246 ng/ml, il coefficiente di variazione intra-assay era 3,4% e il coefficiente di variazione inter-assay era 5,8%.La determinazione della leptina è stata effettuata mediante kit della Cayman Chemical Company (Ann Arbor, MI, USA), il livello più basso di sensibilità del metodo era 1 ng/ml, il coefficiente di variazione intra-assay era 5,6% e il coefficiente di variazione interassay era 8,5%.Per la determinazione dei livelli serici di proteina C-reattiva è stato utilizzato un metodo ad alta sensibilità (hs) della Dade Behring GmbH (Marburg, Germania).