L'estrazione dell'mRNA è stata effettuata previa selezione da parte della candidata dell'area tumorale sulla corrispondente ematossilina eosina, a partire da 10 sezioni dello spessore di 10m e colorate con NuclearFastRed (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). In seguito a microdissezione manuale, il materiale ottenuto è stato incubato a 92°C per 30 minuti con soluzione contenente 4 mol/L guanidina tioisocianato, 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5) e 25 mmol/L EDTA per rimuovere eventuali residui di paraffina. L'estrazione dell'acido ribonucleico è stato effettuato mediante procedura chimica con soluzione fenolo/clororformio/alcool isoamilico (250:50:1), che permette di isolare l'mRNA nella fase liquida dopo centrifugazione a 13000 rpm per 8 minuti. Mediante il trasferimento della fase acquosa così ottenuta in isopropanolo, si è proceduto a centrifugazione a 13000 rpm per 7 minuti, con la formazione di un sedimento contenente l'mRNA. L'alcool è stato asportato senza rimuovere il pellet e l'mRNA così ottenuto è stato risospeso in 50 µL di acqua.Prima di effettuare l'analisi quantitativa dei trascritti target, l'mRNA è stato retrotrascritto per ottenere il filamento a DNA complementare (cDNA) necessario per le successive indagini. La reazione di retrotrascrizione è stata effettuata in un volume finale di 40 uL, di cui 20 sono del mRNA estratto, secondo protocollo 57 .