Un altro modo per misurare i livelli di ematocrito è attraverso metodi ottici come la spettrofotometria. Attraverso la spettrofotometria differenziale, le differenze nelle densità ottiche di un campione di sangue che fluiscono attraverso tubi di vetro in piccoli fori. Vengono rilevate le lunghezze d'onda isosbestiche attraverso deossiemoglobina e ossiemoglobina e ciò permette di stabilire una relazione lineare che viene utilizzata per misurare i valori dell'ematocrito.