Gli ingredienti del veleno sono noti, ma non se ne conoscono le esatte dosi. L'acqua tofana conteneva acqua, anidride arseniosa, limatura di piombo, limatura di antimonio e succo estratto dalle bacche della belladonna. L'anidride arseniosa, fatta bollire in acqua, crea un ambiente acido e consente lo scioglimento del piombo e dell'antimonio, dando luogo ad una soluzione incolore, inodore e insapore ad altissimo tasso di tossicità.