Ogni procedura deve essere eseguita mantenendo la temperatura a 4°C1. Aspirare il terreno di coltura mediante pompa a vuoto 2. Lavare due volte con PBS 3. Aspirare fino a lasciare asciutta la piastra di coltura 4. Porre 800 microlitri di RIPA buffer con inibitori delle proteasi per piastra e lasciare su basculante a 4°C per 10 minuti.5. Staccare con scraper il contenuto della piastra e porlo in eppendorf.6. Centrifugare per 15 minuti a 14.000 rpm (a 4°C) 7. Raccogliere la fase acquosa 8. Leggere la OD per determinare la concentrazione proteica dopo aver diluito 5 microlitri di liquido contenete la proteina in 1ml di colorante Biorad (preparato 1:5 in acqua).