DNA ad alto peso molecolare è stato isolato da sangue intero utilizzando un kit Flexigene (Qiagen, Hildren, Gemania). La genotipizzazione C9ORF72 è stata effettuata tramite tecniche di PCR repeat-primed e sequenziamento. Questo metodo permette di evidenziare da 30 a 50 ripetizioni (Figura VII.3.). In accordo con la letteratura, un'amplificazione maggiore di 30 ripetizioni sull'elettroferogramma era considerata evidenza di un'espansione patologica delle sequenze ripetute.Figura VII.3. Elettroferogramma della reazione PCR repeat-primed. In alto si osserva un paziente FTD con espansione della sequenza esanucleotidica nel gene C9ORF72, in basso un paziente con lunghezza normale del gene 59 .  Viceversa, una differenza significativa è stata osservata nella storia familiare dei due gruppi.Una storia familiare di demenza era, infatti, comune nei portatori dell'espansione (80% dei portatori vs 37.5% dei non portatori, p=0.008). In caso di storia familiare di demenza, l'OR per l'espansione C9ORF72 era 6.6 (95% IC 1.3-32.4). BvFTD era il fenotipo clinico più comune tra i portatori di espansione (n = 9, 90%), un solo paziente presentava SD (10%) e nessuno paziente aveva diagnosi PNFA. Tra i non portatori, le distribuzioni del fenotipo erano, rispettivamente, 80.9%, 5.8% e 13.3% (p = 0.42).Un quadro di MND associata è stato trovato in 4 portatori dell'espansione (40%) contro 31 (17.9%) dei non portatori (p= 0.08) e correlava con un odds ratio di 3 non statisticamente significativo di C9ORF72 espanso (IC 95% 0.8-11.4). Tutti gli MND tra i portatori erano associati a una bvFTD. La sopravvivenza dei pazienti non affetti da malattia del motoneurone associata non differiva tra i portatori e i non portatori (7 anni e 6.5 anni rispettivamente, p = 0.37). È curioso notare che in 1 portatore dell'espansione (N.2) con un corso estremamente lungo di malattia, di 13 anni. La Tabella VII.6. riassume il confronto clinico tra i due gruppi. una più generalizzata e con prominente dilatazione ventricolare (Figura VII.4.), l'altra più specificatamente corticale frontotemporale (Figura VII.5.).Figura VII.4. TC cerebrale del paziente N.9. Si osservano l'ampliamento del sistema ventricolare e degli spazi subaracnoidei della convessità, con atrofia diffusa (maggiore a livello frontale).Figura VII.5. RMN cerebrale del paziente N.10. In alto a sinistra si apprezza l'atrofia temporale bilaterale. In alto a destra è visibile l'atrofia della corteccia prerolandica e del midollo, coerente con la concomitante MND. In basso a sinistra si nota la sclerosi ippocampale, maggiore a sinistra.L'allargamento ventricolare è stato rilevato in 3 dei 10 casi espansi, l'atrofia frontotemporale nei restanti 7 casi. In 1 caso era presente un'atrofia del verme cerebellare (paziente N.2). Per 2 pazienti, l'atrofia si estendeva anche a livello parietale.Il quadro era principalmente simmetrico tra i due emisferi sia per gli espansi sia per i non espansi (rispettivamente 80% e 88.7%, p=0.41). Non si è osservata una sostanziale differenza nei segni di vasculopatia tra le due sottopopolazioni (27.1% per i non espansi e 10% per gli espansi, p=0.23).Dei 7 pazienti espansi che sono andati incontro a indagini di medicina nucleare di tipo SPECT, tutti presentavano un'ipoperfusione frontoparietotemporale, la quale era asimmetrica (maggiore a sinistra) nell'85.7% dei pazienti contro il 44% della popolazione non espansa (p=0.03). In Figura VII.6 e VII.7. sono riportate le SPECT di due pazienti.Figura VII.6. SPECT del paziente N.7. Si osserva l'ipoperfusione frontotemporale maggiore a sinistra.Figura VII.7. Due particolari della SPECT del paziente N.3: si osserva l'ipocaptazione frontotemporale maggiore a sinistra.