La tecnica consente di individuare la presenza di una proteina specifica all'interno di un estratto cellulare, grazie alla sua reazione con un anticorpo. Le proteine vengono separate mediante elettroforesi in gel denaturante (SDS-page) in base al loro peso molecolare e vengono poi trasferite su un filtro di nitrocellulosa. La presenza di una proteina viene quindi visualizzata grazie al legame tra l'anticorpo specifico (primario), con un anticorpo secondario legato alla perossidasi.La perossidasi, reagendo con specifici substrati, dà una luminescenza che può essere rilevata mediante esposizione su lastra autoradiografica. 