In questo studio, l'analisi è stata eseguita mediante la WAVE TM DHPLC DNA Fragment Analysis System (Transgenomic). I campioni da analizzare, dopo essere stati amplificati mediante PCR, sono stati posizionati sull'autocampionatore del sistema, che provvede a prelevare 10 µL di amplificato PCR (circa 20-50 nanogrammi di DNA) ed ad iniettarlo nel sistema DHPLC.La separazione avviene alla temperatura di "quasi-denaturazione" che è stata per ogni regioni analizzata mediante l'algoritmo di Stanford tramite il sito http://insertion.stanford.edu/melt.html. Tale algoritmo calcola la temperatura raccomandata (RTm) alla quale effettuare la separazione che deve essere sufficiente per la parziale denaturazione dell'eteroduplex eventualmente presente (in caso di una mutazione puntiforme), ma non in grado di denaturare l'omoduplex.Questa temperatura può richiedere piccoli aggiustamenti (di un paio di gradi) attorno a quella calcolata per trovare sperimentalmente quella più corretta. Si riconosce la temperatura idonea quando la molecola della coppia omoduplex è ancora intatta, mentre la molecola della coppia eteroduplex mostra una parziale denaturazione nel sito di non perfetta corrispondenza (dove c'è la mutazione) e viene eluita, solitamente, prima della coppia omoduplex. Per avere una sensibilità >96%, è consigliato di analizzare il frammento oltre che alla RTm anche a RTm + 2°C.In questo studio, le temperature raccomandate per i frammenti 15A, 15B, 15C e 15D sono riportate in tabella 12.