La determinazione del gruppo sanguigno Rh è effettuata su una piccola quantità di sangue, solitamente prelevata attraverso un ago inserito nella vena situata all’interno del gomito. Tutti i test “diretti” per la determinazione del gruppo sanguigno (eseguiti con differenti metodiche: piastra o micro piastra, provetta, schedine con micro colonne di gel o di microsfere, oppure con strumento automatico) si basano sulla presenza, o meno, di una reazione quando il sangue viene messo a contatto con del siero (parte liquida del sangue senza fattori della coagulazione) immune contenente anticorpi anti-D (test di agglutinazione); se si osserva la reazione di agglutinazione (i globuli rossi si radunano in ammassi e si ritrovano in fondo alla provetta - precipitano) la persona è definita Rh positiva (D+).