Il trattamento non ha modificato la latenza del tumore ma ha influenzato il volume massimo raggiunto. La dose più bassa utilizzata ha rallentato la crescita in maniera non statisticamente significativa. L'effetto sulla crescita tumorale con 25 mg/kg/die o con 50 mg/kg/die di inibitore è sovrapponibile, provoca una riduzione della massa rispetto al veicolo ed è statisticamente significativo, con p<0.01 (Figura 3A). Appurata l'efficacia del trattamento con AZD0530, si sono voluti studiare gli aspetti molecolari dell'inibizione di Src in vivo, valutando sia il livello di attivazione delle vie a valle di Src sia l'effetto sui processi biologici in cui esso è coinvolto. Pertanto si sono analizzati il livello di fosforilazione di Fak e paxillina, l'effetto sulla proliferazione cellulare, sulla neoangiogenesi e sull'infiltrato infiammatorio, nei tumori di topi trattati con veicolo o con 50 mg/kg/die di AZD0530.Innanzi tutto, si sono potuti confermare i risultati ottenuti in vitro: la fosforilazione di Met non è influenzata dal trattamento con AZD0530 (Figura 3B) e vi è una diminuzione della fosforilazione dei trasduttori a valle di Src, come si può vedere dalla decorazione in immunoistochimica delle fettine di tumore, con anticorpi anti-fosfo-paxillina (Figura 4A) e anti-fosfo-Fak (Figura 4B).Per quanto riguarda l'azione di AZD0530 sul ciclo cellulare, esso comporta una riduzione della proliferazione e un aumento dell'apoptosi, come si può osservare in immunoistochimica decorando rispettivamente con anticorpi anti-Ki67 (Figura 5A) e anti-caspasi-3 proteolizzata, cioè attivata (Figura 5B).Dal momento che Src è noto essere coinvolto nella neoangiogenesi, ci si è chiesti se il numero e la dimensione dei vasi fossero influenzati dal trattamento con AZD0530. Si è studiata sulle fettine di tumore la morfometria dei vasi, considerandone il numero e la dimensione per ciascun campo, decorando in immunofluorescenza con un anticorpo anti-CD31, marcatore endoteliale.La positività della decorazione è sovrapponibile nei tumori provenienti dai topi trattati con veicolo e da quelli trattati con AZD0530 (Figura 6). Quindi, l'inibizione di Src non compromette la neoangiognesi, dal momento che nuovi vasi si sviluppano sia in presenza sia in assenza dell'attività cinasica. Per escludere che la diminuzione del volume finale del tumore fosse conseguenza di un ridotto infiltrato infiammatorio, si è valutata la sua presenza all'interno della massa.Le fettine di tumore sono state decorate in immunofluorescenza con un anticorpo anti-CD45, marcatore pan-leucocitario. Considerando l'estensione dell'area positiva per CD45 rispetto all'area totale della fettina, non si è osservata alcuna differenza né nel numero né nella disposizione (area centrale vs periferia) delle cellule infiammatorie (Figura 6).Si può quindi concludere che il rallentamento della crescita tumorale, nei topi trattati con AZD0530, sia legato selettivamente all'inibizione di Src nelle cellule tumorali e non all'azione dell'inibitore sul tessuto stromale. Il volume minore della massa tumorale dopo un mese di trattamento è quindi conseguenza delle modificazioni che AZD0530 provoca sul ciclo cellulare della cellula neoplastica e non dell'azione sulla vascolarizzazione o sull'infiltrato infiammatorio.Una ridotta vascolarizzazione potrebbe infatti portare a sofferenza cellulare mentre l'infiltrato infiammatorio potrebbe liberare fattori di crescita in grado di esacerbare le caratteristiche intrinseche di malignità delle cellule tumorali.