Quantificazione dell'attività dell'enzima -glucosidasi acida su spot di sangue La possibilità di quantificare l'attività dell'enzima -glucosidasi acida su spot di sangue è stata valutata su campioni adsorbiti su carta bibula in assenza di inibitori enzimatici.Esistono infatti altri approcci proposti in letteratura che eliminano l'interferenza da α-glucosidasi plasmatiche aspecifiche (maltasi-glucoamilasi, MGA) , che potrebbero influire nella determinazione dell'attività dell'enzima GAA .Per ovviare a questo problema, la separazione di GAA da MGA può essere ottenuta con l'ausilio di anticorpi 138 o con inibitori competitivi 139 .Attualmente gli anticorpi non sono disponibili a livello commerciale, e la loro produzione richiederebbe eccessive spese di produzione; oltretutto la separazione effettuata con questa metodica, comporta una perdita dell'attività di GAA stimata in circa il 71% 138 .Tra i competitori, quelli attualmente in uso sono il maltoso 139 e l'acarbose, che fornisce, secondo recenti studi, i risultati migliori 48,140 .In base alla nostra esperienza l'utilizzo degli inibitori non comporta nessun vantaggio nella sensibilità diagnostica del test, con, oltretutto, una riduzione dell'attività enzimatica specifica.La nostra tecnica diagnostica, a differenza delle precedenti è molto meno indaginosa.Dallo spot su carta bibula si preleva un dischetto con diametro di 1/6 di pollice contenente 3 µl di sangue intero posto in micro piastre da 96 pozzetti. I campioni sono stati confrontati con una matrice costituita da sangue privato di leucociti mediante filtrazione selettiva, e quindi con attività enzimatica pari a zero, con uno o più controlli provenienti da pazienti noti e con una soluzione contenete una quantità nota di umbelliferone, pari a 20 mM/ml, in modo da escludere con ragionevole certezza dall'analisi qualsiasi interferenza attribuibile al materiale contenuto nel campione di sangue o all'umbelliferone stesso.Tale tecnica, completamente automatizzata, è stata applicata su 105 soggetti di controllo.