Già sul finire del XII secolo si riscontra l'esistenza in Roma di due ospedali dell'Ordine di Santo Spirito: il primo (quello di cui si parla maggiormente in questa trattazione) vicino a S.Maria in Trastevere; l'altro nei pressi di Sant'Agata, alle porte della città. Mentre nel XII secolo in Italia se di ospedali sotto quest'ordine se ne potevano contare sostanzialmente 3, includendo anche quello vicino alla chiesa di S. Biagio ad Orte, già alla fine del secolo seguente gli Ospedali di Santo Spirito ammontavano già a un centinaio, molti dei quali nel Lazio e gli altri in Umbria, Abruzzo, Marche, Toscana e Regno di Napoli. Di questi ricordiamo i più famosi ed importanti: oltre alla casa madre di Roma, quello di Firenze, di Milano, di Foligno, di Pozzuoli e di Viterbo.