elettrostatica negativa sono le caratteristiche fisiche e chimiche che conferiscono a MUC1 l"abilità di mantenere l"integrità dei lumi nei tessuti ghiandolari normali, verosimilmente attraverso l"interazione con altre piccole molecole associate nell"adesione cellula-cellula come E-caderina [27] , e cellule-stroma come la β-integrina [28] . Varianti di MUC1 con diverso grado di glicosilazione sono iperespresse nei carcinomi della mammella [30][31][32][33][34] e provocano una diminuita adesione tra cellule adiacenti, nonché tra cellule e matrice extracellulare. L"antigene viene riconosciuto da anticorpi differenti [35] : la forma ipogliscosilata e sialilata è riconosciuta dal clone Ma695 ("Anti-MUC1") [36] , mentre il clone E29 ("Anti-EMA") si lega all"epitopo indipendentemente dal grado di glicosilazione [37] . L"espressione di MUC1 sul versante basale dei nidi di cellule di IMPC (Fig. 1.5.1) potrebbe essere responsabile, almeno in parte, del distacco delle cellule dallo stroma circostante: l"inversione di polarità e l"iperespressione di MUC1 favorirebbero infatti la secrezione verso lo stroma di enzimi con funzione di lisi stromale, come le metalloproteasi [22][38] . L"azione di tali enzimi potrebbe giustificare sia la peculiare morfologia di IMPC sia la sua maggiore propensione alla metastatizzazione linfonodale rispetto a carcinomi convenzionali di pari dimensioni [39][40] . In emboli linfatici di IMPC e non-IMPC si osserva spesso lo stesso pattern di espressione di MUC1 (osservazione personale)(Fig. 1.5.2).MUC1 mostra una modalità di espressione simile anche nei carcinomi mucinosi della mammella; tuttavia, i carcinomi mucinosi esprimono anche MUC2, un"altra isoforma di mucina, che manca totalmente nel IMPC. La presenza di MUC2 giustificherebbe il comportamento indolente dei carcinomi mucinosi poiché, contrastando l"azione di MUC1, agirebbe come barriera fisica alla diffusione locale e a distanza [22][41] [42] .  Una corretta classificazione dei carcinomi della mammella assume sia un importante valore prognostico sia notevoli implicazioni predittive: le differenze presenti a livello molecolare molto spesso corrispondono a differenze osservabili a livello fenotipico, anche dal punto di vista prognostico [43] . L"attenzione degli anatomopatologi si è quindi rivolta all"analisi del profilo di espressione genica su larga scala utilizzando una metodica high-throughput, quale è la microarray gene expression profiling: si tratta di un"analisi condotta utilizzando cDNA microarrays rappresentanti diverse migliaia di geni umani, grazie alla quale è possibile valutare l"espressione di RNA correlata alla presenza di geni noti. In sostanza, i microarrays sono composti da una collezione di segmenti di DNA spottati su di un supporto solido (il cosiddetto "chip", che può essere un vetrino oppure una membrana costituita da maglie di fibrina) che costituiscono il target per l"ibridazione con del cDNA, corrispondente all"RNA estratto dai campioni tissutali [44] .Utilizzando questa metodica di analisi è stata recentemente introdotta una classificazione molecolare dei carcinomi della mammella, che trova il suo razionale nel fatto che la variabilità fenotipica dei tumori mammari si associa a corrispettive differenze nel pattern di espressione genica. In particolare, l"analisi dell"espressione genica è stata condotta utilizzando cDNA microarrays rappresentanti 8102 geni [45] . I geni presi in considerazione sono molteplici, spesso raggruppabili in cluster comuni: il più ampio di questi è senza dubbio il "cluster di proliferazione", un gruppo di geni il cui livello di espressione è correlato con il tasso di proliferazione cellulare; questo cluster include anche i geni codificanti per due marcatori ICC di proliferazione largamente utilizzati nella pratica clinica, vale a dire Ki-67 e PCNA. Un altro ampio cluster di geni che ha mostrato una sostanziale variabilità di espressione tra i diversi istotipi è quello dei geni regolati dalla via di segnalazione dell"interferone, tra i quali si trova STAT1.La variazione nell"espressione genica del recettore per gli estrogeni (isoforma α) è ben correlata con la misurazione immunoistochimica diretta dei livelli del recettore nei tumori, e lo stesso accade nel caso dell"espressione di un numeroso gruppo di geni che include, tra gli altri, tre importanti fattori di trascrizione quali GATA-binding protein 3, X-box binding protein 1 e Hepatocyte Nuclear Factor 3α. Anche l"amplificazione genica di HER2, che inoltre si accompagna all"iperespressione di altri geni compresi nel cosiddetto "Her2/Neu cluster" (cioè un insieme di geni tutti localizzati sul cromosoma 17) corrisponde all"iperespressione della relativa proteina nelle cellule tumorali. Infine, anche l"espressione di un cluster di geni che include c-Fos e JunB varia notevolmente tra carcinomi diversi. La metodica con la quale vengono presentati graficamente i risultati ottenuti dall"analisi della gene expression profiling è quella del clustering gerarchico, grazie alla quale le differenze e le somiglianze tra i diversi campioni sono riassunte in un dendrogramma: in questo modo diviene possibile evidenziare i principali sottogruppi di carcinoma della mammella.L"analisi dell"espressione genica condotta usando i cDNA-microarrays ha dimostrato che i carcinomi della mammella possono essere classificati, sulla base del loro pattern di espressione, in almeno cinque gruppi: luminal A, luminal B, normal breast-like, HER2+ (ERBB2) e basal-like [45][46] . Come si può osservare nell"immagine seguente (Fig. 1.6) la più robusta suddivisione dei carcinomi della mammella dipende dal pattern di espressione genica di ER (recettore per gli estrogeni) [47] . Si evidenziano innanzitutto due branche principali: quella di destra raccoglie i carcinomi ER positivi, anche indicati con il nome di "carcinomi luminali"; quella di sinistra contiene tre sottogruppi, i Basal-like, gli HER2 positivi e i Normal Breast-like, neoplasie tutte caratterizzate da bassa o assente espressione genica di ER, nonché di altri fattori di trascrizione invece espressi nei tumori raccolti nella branca di destra.Figura 1.6. Classificazione molecolare dei carcinomi della mammella. Il dendrogramma mostra i diversi cluster di espressione genica, ottenuti analizzando il profilo di espressione genica di 78 carcinomi; si osserva la suddivisione in cinque (o sei, considerando anche i luminali C) sottotipi. Il grado di correlazione tra i diversi carcinomi è inversamente proporzionale alla distanza tra due neoplasie, misurata lungo i bracci del dendrogramma. Tratto da Sørlie T et al. Proc Natl Acad Sci USA. 2001 [47] .