I PBMC sono stati ottenuti da 60 ml di sangue intero prelevato in litio eparina con metodo di centrifugazione in gradiente di densità attraverso l'utilizzo del Ficoll-Pacque, già in precedenza descritto in letteratura (7).I PBMC così ottenuti sono stati piastrati alla concentrazione di 400.000 cellule/well in alpha minimal essential medium (α-MEM, GIBCO, UK) addizionato con il 10% di siero bovino fetale inattivato (FBS), benzil penicillina (100 IU/ml) e streptomicina (100 μg/ml). In media, a partire da 60 ml di sangue periferico, abbiamo isolato circa 40.000.000 di cellule per paziente. Le cellule non utilizzate per gli esperimenti sono state congelate a -80ºC e trasferite in azoto liquido.Le colture sono state allestite sia in assenza di fattori di crescita che in presenza di M-CSF (25 ng/ml) e RANKL (30 ng/ml) ogni coltura è stata effettuata in doppio.