L'estrazione dell'RNA è stato eseguita attraverso l'impiego del PAXGene Blood RNA Kit (Qiagen) (Fig. 10) a partire da 2,5 ml di sangue periferico raccolto nelle PAXgene Tubes.La purificazione inizia con una fase di centrifugazione per precipitare gli acidi nucleici nelle PAXgene Tubes.Il pellet viene lavato, riportato in sospensione e incubato in tamponi con proteasi K per la digestione delle proteine.Per omogeneizzare il lisato cellulare e rimuovere i detriti cellulari, si effettua una centrifugazione aggiuntiva.Il sovrastante eluato viene trasferito in una microprovetta per centrifuga.Per ottimizzare le condizioni di legame si aggiunge etanolo, quindi il lisato viene introdotto nella colonna RNA PAXgene e centrifugato. L'RNA si lega selettivamente alla membrana in gel di silice, mentre i contaminanti vengono eliminati.La membrana è incubata con DNAsi per eliminare qualsiasi traccia di DNA legato. Dopo le fasi di lavaggio l'RNA viene eluito nel tampone di eluizione e denaturato al caldo.Il protocollo di purificazione dell'RNA raccolto nelle PAXgene Blood RNA Tubes ha previsto nello specifico i seguenti passaggi:1. le PAXgene Tubes sono state centrifugate per 10 minuti a 3000 x g; 2. il surnatante è stato rimosso e sono stati aggiunti al pellet 5 ml di acqua priva di RNasi;3. il pellet è stato risospeso tramite vortex e centrifugato per 10 minuti a 3000 x g; tutto il surnatante è stato rimosso ed eliminato; 4. sono stati aggiunti 350 μl di tampone di risospensione (BR1) ed è stato miscelato su vortex fino alla completa dissoluzione del pellet; 5. il contenuto è stato trasferito in una micro-provetta da 1,5 ml e sono stati aggiunti 300 μl di tampone di legame (BR2) e 40 μl di proteinasi K (PK). Il tutto è stato miscelato su vortex per 5 secondi, quindi incubato a 55°C per 10 minuti; 6. il lisato è stato pipettato nella colonna PAXgene Shredder (lilla) posta in un Processing Tube da 2 ml e centrifugata per 3 minuti alla velocità massima; 7. il surnatante della frazione eluita è stato trasferito in una provetta per microcentrifuga pulita da 1,5 ml;  Il "bianco" è stato preparato con 56µl di Tris-Cl più 4µl di buffer BR5, tampone in cui è stato diluito l'RNA nell'ultimo passaggio dell'estrazione.Ricavata la concentrazione del mRNA si è calcolata la quantità necessaria da prelevare per poter retrotrascrivere 1µl di RNA in cDNA.