Il siero di tutti i pazienti è stato esaminato nel laboratorio di Neuropatologia, centro di riferimento per la detenzione di anticorpi contro il sistema nervoso per il Piemonte e la Valle d'Aosta.Gli anticorpi anti-sistema nervoso centrale sono stati ricercati facendo interagire il siero dei pazienti con preparati di encefalo di ratto. A tal fine si è prelevato e sierato il sangue di ogni paziente, il siero è stato conservato a meno 80 °C fino all'uso.L'encefalo di ratto è stato ottenuto sacrificando ratti Wistar adulti (Charles River Italia, Calco, Italy), anestetizzati per mezzo di somministrazione intraperitoneale di ketamina (100mg/kg; Ketavet; Bayer, Leverkusen, Germany) in aggiunta a xylazina(5 mg/kg, Rompun, Bayer) o diazepam (2,5 mg/kg; Roche Molecular Biochemicals, Mannheim, Germany) in accordo con le linee guida dell'Istituto Superiore di Sanità e le leggi italiane per l'uso e la gestione degli animali da esperimento (DL 116/92), approvate dal ministero della Salute e dal comitato etico dell'Università di Torino.Si è proceduto dunque a perfusione endocardica con paraformaldeide al 4% al fine di preservare al meglio i diversi siti antigenici. Si sono ottenute sezioni di gangli della base, di corteccia cerebrale e di cervelletto dello spessore di 10-30 µm . Le sezioni, flottanti o su supporto, sono state quindi incubate con concentrazioni decrescenti(1:100-1:1000) di siero dei pazienti, overnight a 4°C. Gli anticorpi sono stati svelati con metodo Avidin-Biotin Complex (ABC) complessato con perossidasi, sviluppato con diaminobenzidina (DAB).I sieri risultati positivi sono stati ulteriormente studiati con metodiche di Westernblot. Prelievi di corteccia e di testa del caudato di encefalo bovino appena sacrificato sono stati congelati in azoto liquido. In seguito si sono ottenuti degli omogenati procedendo alla polverizzazione a freddo dei frammenti prelevati e la concentrazione proteica è stata quindi dosata mediate metodo di Lowry con spettrofotometro a 659 nm.Un quantitativo standard di proteine è stato fatto correre su gel d'agarosio al 7 e 10%, trasferito su membrane di nitrocellulosa che sono poi state incubate con diluizione crescenti (1:1000-1:10000) di siero del paziente. Queste sono poi state incubate con anti-human goat immonuglobulins peroxidase e rivelate con diaminobenzidina (DAB). Tale metodica è tuttora in corso.