Il 4 novembre del 1573, Jehanne morì, all'età di 53 anni. Ambroise rimase dunque solo con la sua unica figlia sopravvissuta, che aveva 13 anni. Tre mesi dopo il lutto, nel gennaio del 1574, egli sposò Jacqueline Rousselet; questa aveva una dote abbastanza cospicua e quindi il secondo matrimonio ebbe un aspetto decisamente diverso dal primo da un punto di vista economico; inoltre ebbero sei figli, alcuni dei quali ebbero personaggi di spicco come madrine e padrini di battesimo, grazie al buon nome della famiglia Rousselet.