L'analisi molecolare è stata effettuata su 52 pazienti, più i campioni dei due pazienti che presentavano all'esame istologico due nodi tumorali sincroni morfologicamente differenti e il campione del paziente con i nodi metacroni.L'analisi di sequenziamento di nuova generazione a permesso di identificare alterazioni genetiche semplici e/o complesse per i geni analizzati e la relativa frequenza allelica, informativa nel caso di analisi mutazionale somatica. Tali alterazioni sono state raggruppate in alterazioni ad alta (HF) e bassa (LF) frequenza allelica, sulla base di un cut off del 10%, che corrisponde al limite di rilevamento raggiungibile con le convenzionali metodiche di sequenziamento.La distribuzione della prevalenza delle alterazioni genetiche identificate nella popolazione in esame è rappresentata in Figura 4. Tale distribuzione suddivisa in modo omogeneo secondo quattro quartili permetteva di distinguere 4 gruppi di geni con prevalenza decrescente delle alterazioni. Ogni gruppo presentava una differenza nella distribuzione delle alterazioni ad alta frequenza allelica (HF) statisticamente significativa (Kruskall-Wallis, p<0,0001); considerando invece solo le alterazioni ad alta frequenza, che sono più probabilmente legate ad un significato biologico, si evidenziava una significativa differenza tra i primi due gruppi, mentre gli ultimi due risultavano simili (Figura 5).Il primo gruppo risultava costituito da geni alterati con alta prevalenza e per la maggior parte ad alta frequenza allelica, i geni erano i seguenti: FGFR3 e PDGFRA (94,2% Il terzo e il quarto gruppo possono essere riuniti in uno unico, vista la scarsa differenza tra la percentuale di casi ad alta frequenza allelica presente al loro interno, non statisticamente significativa. Infatti questi ultimi due gruppi contengono prevalentemente i geni le cui alterazioni sono a bassa prevalenza e bassa frequenza allelica, come l'oncogene BRAF, le cui alterazioni hanno una prevalenza del 27,8%, tutte a bassa frequenza allelica. Una piccola minoranza di 24 geni, presenta alta frequenza allelica, tra questi JAK3 (4/52 HF), FGFR2 (2/52 HF), SMAD4, FBXW7, PTPN11, FGFR1 e GNAS (1/52 HF).Abbiamo poi analizzato nello specifico il gene KRAS perché quello più descritto in letteratura associato all'istotipo mucinoso. Siamo andati quindi a separare i casi KRAS alterati (42/52, 81%) da quelli KRAS wild type (10/52, 19%) e ne abbiamo analizzato la correlazione con gli altri 49 geni sequenziati. L'analisi statistica mediante test χ 2 ha mostrato una espressione differenziale di geni nel gruppo dei tumori KRAS alterati rispetto ai non alterati, che è risultata statisticamente significativa per i geni: PDGFRA (p=0,03), APC (p=0,0025), KDR (p=0,0002), HRAS ed EGFR (p=0,05), SMARCB1 (p=0,025), VHL (p=0,04), CDKN2A (p=0,0008), ERBB4(p=0,012), CTNNB1 (p=0,02) e BRAF (0,03). Un trend statistico di significatività è stato riscontrato nei geni: SMO (p=0,06), IDH1 (p=0,07), ALK ed ERBB2 e FGFR1(p=0,08), CDH1(p=0,095) e FLT3 (0,09) (Figura 6). Tali risultati sono speculazioni basate sull'identificazione di alterazioni genetiche ancora da caratterizzare.Inoltre, tali popolazioni mostravano caratteristiche clinico-patologiche, immunofenotipiche e molecolare differenti (Tabella 6).