La transfezione è un processo mirato all'introduzione di materiale biologico esogeno all'interno di una cellula eucariotica.Si è deciso di sfruttare questa tecnica per introdurre il DNA plasmidico all'interno delle cellule COV434.Per questo esperimento è stato utilizzato un kit commerciale costituito da un reagente di transfezione basato sulla formazione di nanoparticelle lipidiche in grado di inglobare il DNA plasmidico e successivamente di fondersi con la membrana cellulare rilasciando il DNA all'interno della cellula.Il kit in questione è Xfect prodotto dalla CLONETECH.Il protocollo di transfezione con kit Xfect prevede la preparazione delle cellule per la transfezione 24 ore prima dell'esperimento: bisogna piastrare le cellule in 6well, in 1 ml di terreno completo, affinché al momento della transfezione in ogni pozzetto vi sia un numero compreso fra le 5x10 5 -1.25x10 6 cellule, ovvero una confluenza del 50-80%Il giorno della transfezione si prepara per ogni campione due eppendorf (chiamate rispettivamente tube 1 e 2) da 1.5 ml contenenti: Si aggiungono infine i 200 l della reazione alle cellule in coltura.Le cellule vengono rimesse nell'incubatore a 37°C. Dopo 4 h si rimuove il medium di coltura al fine di rimuovere i complessi di nanoparticelle e si aggiunge 1 ml di terreno fresco per ogni pozzetto.Il picco di espressione del vettore è massimo dopo 48 h dalla transfezione.