Se i livelli di cortisolo al mattino hanno valori superiori ai 500 nmol/l, la carenza di ACTH è improbabile, mentre un livello inferiore a 100 è indicativo. Livelli tra 100-500 richiedono un test di stimolazione. Anche questo è realizzato tramite il test di tolleranza insulinica. Un test di stimolazione simile che utilizzi l'ormone di rilascio della corticotropina (CRH) non è abbastanza sensibile ai fini dell'indagine. Se il test di tolleranza insulinica produce un risultato anormale, può essere eseguito un ulteriore test che misuri la risposta delle ghiandole surrenali all'ACTH sintetico (il test di stimolazione dell'ACTH) per confermare la diagnosi. Il test di stimolazione con metirapone è una valida alternativa. Alcuni suggeriscono che un test di stimolazione con ACTH sia sufficiente come indagine di prima linea e che un test di tolleranza insulinica sia necessario solo se il test ACTH fornisce risultati equivoci. Il test di tolleranza insulinica è sconsigliato nei bambini. Nessuno dei test per la deficienza di ACTH è perfetto e ulteriori test, dopo un periodo di tempo, possono essere necessari se i primi risultati non sono conclusivi.