Si richiede al paziente di compiere uno sforzo, in genere pedalando sul cicloergometro. Al momento del massimo sforzo si inietta il tracciante radioattivo che tipicamente viene catturato in modo molto efficace dalle zone del cuore ben irrorate, e molto meno bene dalle regioni ipoperfuse. A distanza di 4 ore o in una giornata successiva, a riposo, si ripete la scintigrafia. Se esistono differenze nella distribuzione del tracciante tra la scintigrafia sotto sforzo e quella a riposo, si può diagnosticare una ischemia da sforzo. 