Per analizzare la produzione di TNFα da parte dei PBMC in condizioni simili a quelle osservate in vivo senza la possibile alterazione prodotta dalla permanenza in coltura e per individuare le cellule responsabili della produzione di tale citochina abbiamo utilizzato un metodo di colorazione intracellulare in fluorimetria (Becton Dickinson Immunocitometry Systems, Franklin Lakes, NJ, USA). Questo sistema di colorazione intracitoplasmatica consente di misurare l'espressione della citochina all'interno della cellula e, usato in combinazione con anticorpi marcati di antigeni di superficie, consente di individuare il fenotipo della cellula che la produce. Inoltre si può stimolare la produzione della citochina con l'aggiunta di fattori che inducono I monociti CD14+ sono stati messi in coltura da soli (200.000/well), con linfociti T CD3+ (420.000/well) e con linfociti B CD19+ (360.000/well) in well plates biocoated.Le condizioni di coltura sono le stesse già descritte: con e senza fattori di crescita, con o senza l'aggiunta di vitamina D. pazienti prima e dopo 3 mesi di terapia con Risedronato 5 mg/die.