Un circoscritto numero di soggetti ( 14) è stato inserito nello studio nonostante un DLCN Score inferiore a 4 (primo gruppo) o 6 (secondo e terzo gruppo) sulla base della famigliarità di primo grado con pazienti risultati positivi al test genetico per dislipidemia monogenica.A seguito della selezione i candidati inclusi nello studio hanno firmato un consenso informato al test genetico; nel modulo di consenso venivano indicati i dati che sarebbero stati raccolti e le finalità dello studio.Dopo la firma del consenso informato sono stati effettuati due prelievi di sangue venoso periferico in provette con EDTA da 10 mL.Il sangue così raccolto dai soggetti del primo gruppo è stato successivamente centrifugato per 20 minuti al fine di separare gli emocomponenti e raccogliere selettivamente solo la frazione dei globuli bianchi (Buffy Coat) portati in forma di pellet secco e conservati a -20°C fino all'invio presso il laboratorio di analisi genetica.Nel secondo gruppo di pazienti su indicazione del laboratorio analisi il sangue non è stato trattato come nel primo gruppo ma conservato intero a -20°C fino a raggiungere una numerosità adeguata di campioni (circa 50 pazienti) e successivamente inviato al centro di riferimento per le analisi (Laboratorio di Analisi Genetica dell'Ospedale Bassini di Cinisello Balsamo).Il terzo gruppo di pazienti è stato trattato in maniera analoga al secondo con il congelamento del sangue intero in provetta e successivo invio al laboratorio di analisi.In tutti i gruppi di pazienti l'analisi genetica è andata a ricercare la presenza di mutazioni legate all'ipercolesterolemia monogenica attraverso il sequenziamento del promotore, degli esoni e delle regioni introniche di splicing dei geni LDLR (18 esoni), APOB (regioni dell'esone 26 e 29 implicate nel legame con LDLR), PCSK9 (12 esoni), STAP1 (9 esoni), APOE (regioni dell'esone 4), LDLRAP1 (9 esoni).Nel primo gruppo l'analisi è stata svolta con la tecnica di Next Generation Sequencing SeqPro Lipo IS (Progenika Biopharma, Barcelona, Spain).Nel secondo e nel terzo gruppo di soggetti l'analisi genetica è stata svolta con la tecnica Lipid InCode (Ferrer InCode, Barcelona, Spain): in questo caso oltre al sequenziamento del promotore, degli esoni e delle regioni introniche di splicing dei geni LDLR, APOB, PCSK9, STAP1, APOE e LDLRAP1 è stata anche eseguita l'analisi del gene LPA, per valutare la presenza di polimorfismi (rs10455872) (rs3798220) responsabili di elevati livelli sierici di Lp(a), e la ricerca di determinati alleli dei geni HMGCR (rs1724484), SLCO1B1 (rs4149056), ABCB1 (rs2032582) associati a resistenza o intolleranza alle statine.Inoltre nei soggetti appartenenti al secondo e al terzo gruppo risultati negativi per mutazioni responsabili di ipercolesterolemia monogenica è stata eseguita l'analisi degli alleli dei seguenti geni: APOE (rs7412), APOE (rs429358), APOB (rs1367117), ABCG5-G8 (rs4299376), CELSR2 (rs629301), SLC22A1 (rs1564348), HFE (rs1800562), MYLIP (rs3757354), ST3GAL4 (rs11220462), NYNRIN (rs8017377), LDLR (rs6511720) e PCSK9 (rs2479409) al fine di calcolare il valore di LDL-C SNP Score, parametro indicativo della probabilità che una ipercolesterolemia negativa per mutazioni causali sui geni più comuni sia di natura poligenica e degli alleli LPA (rs10455872), ALOX5AP (rs10507391), PHACTR1 (rs12526453), CDKN2A/B (rs1333049), ALOX5AP (rs17222842), MIA3 (rs17465637), Chr.10 (rs501120), WDR12 (rs6725887), ALOX5AP (rs9315051), MRAS (rs9818870) e Chr.21 (rs9982601) al fine di calcolare il Cardio inCode Score, parametro indicativo del rischio genetico, indipendente da altri fattori, di malattia cardiovascolare.Sul versante clinico dopo la firma del consenso informato è stata raccolta l'anamnesi famigliare, patologica remota e farmacologica, è stato eseguito l'esame obbiettivo -con particolare attenzione ai segni caratteristici dell'ipercolesterolemia quali xantomi tendinei e arco corneale in età inferiore a 45 anni -e sono stati raccolti i dati di laboratorio per i seguenti parametri plasmatici: colesterolo totale, colesterolo HDL, trigliceridi, glucosio, creatinina e attraverso la formula di Friedewald è stato stimato il colesterolo LDL.La formula di Friedewald (indicata in seguito) permette di stimare i livelli di colesterolo LDL a partire dai valori di colesterolo totale, colesterolo HDL e trigliceridi purché questi ultimi rientrino nel range fisiologico.𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙𝑜 𝐿𝐷𝐿 = 𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒 − 𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙𝑜 𝐻𝐷𝐿 − ( 𝑇𝑟𝑖𝑔𝑙𝑖𝑐𝑒𝑟𝑖𝑑𝑖 5 )Inoltre, sono stati ricercati i dati relativi ad eventuali esami Eco-Color-Doppler pregressi al fine di individuare il valore dello spessore medio intimale (IMT) carotideo dei pazienti.In tutti i pazienti è stato valutato il numero e la tipologia di comorbidità presenti al momento dell'inclusione nello studio così come sono stati anche valutati i farmaci assunti per trattare l'ipercolesterolemia ed eventuali terapie delle comorbidità ed il loro numero.L'analisi statistica è stata svolta con il software IBM SPSS 24 