Al giorno 0, le CD14+ DC esprimono HLA-DR e CD14. Non esprimono i marcatori di maturità CD80, CD83, CD86, CD40.Al giorno +5, l'avvenuta maturazione è confermata dalla perdita del CD14, dall'incremento del livello di espressione di HLA-DR ad oltre il 98% e dalla comparsa in superficie dei marcatori di maturità e di co-stimolazione. Questi ultimi manifestano valori di co-espressione con HLA-DR superiori al 95%.Al giorno +5, i dati citofluorimetrici dei campioni nelle condizioni di co-coltura con le cellule di osteosarcoma sono stati confrontati con i controlli.I livelli di espressione dei marcatori di maturità e di co-stimolazione CD80, CD83, CD86, CD40 risultano essersi ridotti in entrambe le condizioni 2:1 e 5:1 in maniera significativa (**p<0.01) (Fig. 6.1) secondo i seguenti risultati. Nella condizione di co-coltura di cellule dendritiche ed osteosarcoma nella proporzione 5:1, il valore di co-espressione con HLA-DR è sceso intorno al 30% per i CD80, CD83, CD40 e si è ridotto al 10% per il CD86. Nella condizione di co-coltura di cellule dendritiche ed osteosarcoma nella proporzione 2:1, la co-espressione con HLA-DR è scesa a valori compresi tra il 28% ed il 30% per i CD80, CD83, CD40, mentre è risultato di poco superiore al 10% per il CD86.L'effetto immunosoppressivo generato dalle cellule tumorali è stato parzialmente arrestato dall'introduzione in coltura di rhIL-12, CD40L ed Indometacina, come è dimostrato dalla significativo incremento dei livelli di CD80, CD83, CD86, CD40 soprattutto nella condizione 5:1 (*p<0.05, **p<0.01) (Fig. 6.2). Nella condizione di co-coltura di cellule dendritiche ed osteosarcoma nella proporzione 5:1, la co-espressione del CD80 con HLA-DR, partendo da un valore vicino al 30%, è salita a livelli superiori al 75% con i trattamenti con IL-12 ed indometacina, si è collocata invece tra il 60% ed il 70% con l'introduzione di CD40L. La co-espressione del CD83 con HLA-DR, partendo da un valore vicino al 30%, ha raggiunto un intervallo compreso tra il 60-70% con i trattamenti con IL-12 e CD40L, migliore è stato invece l'incremento osservato con l'introduzione di indometacina (valore superiore all'80%). La coespressione del CD86 con HLA-DR, partendo dal 10% circa, è salita intorno al 25% con i trattamenti con IL-12 e CD40-ligando, è incrementata fino ad oltre il 45% con indometacina. La co-espressione del CD40 con HLA-DR, partendo da un valore vicino al 30%, è salita ad 80% con i trattamenti con IL-12 ed indometacina, ha raggiunto invece il 70% con l'introduzione di CD40-ligando.Nella condizione di co-coltura di cellule dendritiche ed osteosarcoma nella proporzione 2:1, la co-espressione del CD80 con HLA-DR, partendo dal valore di 30% circa, si è avvicinata al 60% con i trattamenti con IL-12 ed indometacina, ha superato il 30% con l'introduzione di CD40-ligando. La coespressione del CD83 con HLA-DR, partendo da un valore inferiore al 30% è salita ad oltre il 40% con il trattamento con IL-12, al 60% con indometacina, mentre non è cresciuta con l'introduzione di CD40L. La co-espressione del CD86 con HLA-DR, partendo da un valore di poco superiore al 10% è salita ad oltre il 25% con i trattamenti con IL-12 e CD40L, ad oltre il 35% con l'introduzione di indometacina. La co-espressione del CD40 con HLA-DR, partendo dal valore di 30% circa, è salita ad oltre il 70% sia con il trattamento con IL-12, sia con indometacina, mentre l'introduzione di CD40-ligando non ha incrementato il livello di espressione oltre il 35%.Gli istogrammi inerenti l'analisi citofluorimetrica sono mostrati nelle Fig. 6.3 e 6.4.