Lo screening viene effettuato mediante un test EIA (Enzyme Immunoassay) per IgG, IgM, IgA specifiche (BEIA Mab syphilis screen, Bouty S.p.A. Italiana Laboratori) 38-39-40-46-47 . Il test è basato sul principio "back tritation" in due fasi: dopo aver fatto ragire gli anticorpi anti treponema del siero in esame con gli antigeni adesi al micropozzetto, aver dispensato anticorpi monoclonali anti TpN47 e anti TpN15,5 coniugati con perossidasi (HRP) ed aver aggiunto il Substrato-TMB (che per azione dell'enzima presente sulla fase solida, sviluppa una colorazione azzurra), viene aggiunta una soluzione di acido solforico 1N che blocca la reazione e provoca il viraggio del colore dall'azzurro al giallo. La densità ottica, letta a 450/620, è direttamente proporzionale alla quantità di anticorpi coniugati legati e, perciò, inversamente correlata alla concentrazione degli anticorpi IgG/M/A presenti nel campione. Il dosaggio può essere eseguito su siero o plasma (Eparina-EDTA). Per ogni dosaggio nel pozzetto sono necessari 100 l di siero o plasma 38-39-40 . Se è eseguito entro 5 giorni dal prelievo, i campioni possono essere conservati a 2-8 °C. In caso contrario, bisogna aliquotare i campioni e congelarli a -20°C. La presenza di emoglobina fino a 10 mg/ml, bilirubina fino a 1 mg/ml e trioleina fino a 30 mg/ml non interferisce con i risultati. Non vanno, invece, usati campioni lipemici, torbidi o emolizzati 38-39-40 .Vengono considerati positivi per la presenza di anticorpi anti-Treponema pallidum i campioni con valore < 0,9; negativi se > 1,0 e dubbi quelli tra 0,9 e 1,0.Questi ultimi vengono chiariti con la ripetizione del test sullo stesso campione o su un prelievo successivo, o col confronto con un test di riferimento.I campioni positivi vengono ritestati. Se il risultato non è confermato, il campione viene considerato non reattivo per anticorpi anti-Treponema pallidum.La sensibilità del kit BEIA è riferita essere del 100% 38-39-40 . La specificità è stata determinata confrontando i risultati di 692 sieri supposti negativi per anticorpi anti-Treponema pallidum con i risultati ottenuti da un kit in emoagglutinazione (TPHA) ed un altro kit EIA presenti sul mercato. Poiché si ottennero 691 risultati negativi la specificità con il kit BEIA Mab Syphilis Screen risulta essere del 99,85%.La conferma dei sieri reattivi viene eseguita mediante: RPR (Axis-Shield, Technology Park, Dundee DD2 1XA, Regno Unito). Per i campioni che forniscono risultati positivi o indeterminati al test SERODIA-TPPA, i dati devono essere confermati mediante prove con altri metodi e nuovi test eseguiti in altra seduta e con campione fresco. Nelle prime fasi dell'infezione, in caso di concentrazione estremamente bassa degli anticorpi, i metodi disponibili (compreso questo kit) per il rilevamento degli anticorpi anti-Treponema pallidum non sono sufficientemente sensibili.Pertanto, in caso di sospetta infezione, a fronte di un risultato negativo, i campioni devono essere rianalizzati ed interpretati congiuntamente ai risultati forniti da altri metodi, ai sintomi clinici, all'anamnesi del paziente e ad ogni altro dato disponibile 42-43-44-45 .Abbiamo controllato sierologicamente i bambini esposti all'infezione, oltre che con gli stessi test materni: ELISA, RPR, TPPA, anche con il Western Blot IgM anti-Treponema pallidum (BIOLINE-Bottigliera Alta-Torino). Per la spiegazione del principio dell'esame rimando a pagina 34. La sua sensibilità è del 93,8%, mentre la specificità è del 100%. Le proteine principali specifiche per Treponema pallidum sono quelle con peso molecolare di 47-45,5-17 e 15,5 kDa. La presenza di precipitati a livello di tali bande, indica positività per IgM anti-Treponema pallidum 48-49-50 .