Le cellule sono state raccolte, lavate in PBS ed incubate (10 5 cellule in 100 µl di PBS) per 30 minuti a 4° C con gli opportuni mAbs coniugati (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ USA) secondo gli schemi sotto riportati e con i rispettivi isotipi di controllo. Al termine dell'incubazione le cellule sono state lavate in PBS, centrifugate a 1600 rpm per 5 minuti, risospese in PBS ed analizzate mediante FACSCalibur (Becton Dickinson).Sono stati analizzati 10.000 eventi per ciascun campione.Le cellule primarie di osteosarcoma sono state analizzate per i seguenti marcatori:Le PBMC sono state analizzate per i seguenti marcatori:FITC-coniugato PE-coniugato PerCP-coniugato APC-coniugato CD45 CD14 CD3 CD8 CD45 CD4 CD3 CD16/56 CD45 CD19 CD45RA CD45RO CD3 CD8 CD45RA CD45RO CD3 CD4Le DC sono state analizzate per i seguenti marcatori:FITC-coniugato PE-coniugato PerCP-Cy5.5 APC-coniugato CD83 CD40 HLA-DR CD11c CD80 CD86 HLA-DR CD11c CD45 CD14 HLA-DRCD11c