Si prepiastrano 20000 cellule per pozzetto in piastra da 96 pozzetti in un volume di 100µl di Neutralization Assay Medium (DMEM senza rosso fenolo, 10% di FBS inattivato, 1% di aminoacidi non essenziali, 1% di Hepes, 1% di Glutamax, 1% di antibiotici-antimicotici). Gli pseudovirioni vengono diluiti 1:1000 in Neutralization Assay Medium, utilizzando materiale sterile siliconato. Le cellule vengono infettate con 80 µl di pseudovirione e l'attività della proteina SEAP rilasciata nel surnatante viene misurata 72 ore dopo l'infezione attraverso la lettura chemioluminescente al luminometro Lumino (Startec Medical System, Birkenfeld, Germania).A differenza dell'elettroforesi, tale saggio permette di differenziare le frazioni contenenti VLP vuoti (prive di attività SEAP) da quelle contenenti pseudovirioni (dotate di attività SEAP).Esempio: nella figura 16 è riportato un esempio di analisi delle frazioni Optiprep per la produzione degli pseudovirioni HPV-16 SEAP. Il tracciato elettroforetico mostra chiaramente una banda pura del peso di 55 kD più intensa nelle frazioni 2 e 3 e meno intensa nelle frazioni 4 e 5.L'analisi al Western Blotting utilizzando anticorpi anti-L1 ha dimostrato che la banda corrisponde alla proteina strutturale maggiore capsidica L1 (dati non mostrati).La concentrazione della proteina L1 (titolo virale) è stata determinata comparando l'intensità della banda L1 con quella della proteina BSA (Albumina Bovina Sierica) in una curva doserisposta. Tale curva è stata ottenuta caricando su un secondo gel elettroforetico concentrazioni scalari di BSA pari a 0.05 µg, 0.1 µg, 0.2 µg, 0.5 µg, 1 µg, 2 µg.Nel grafico in 16C sono riportati i valori del segnale SEAP del saggio di infezione. Come si evidenzia dal grafico, le frazioni 3 e 4 mostrano elevati livelli di attività SEAP alla lettura chemioluminescente. Pertanto integrando i risultati dell'SDS-PAGE con quelli del saggio di infezione gli pseudovirioni purificati ad alta attività SEAP sono localizzati prevalentemente nelle frazioni 3 e 4 di questa produzione.A tali frazioni sono stati addizionati 100 µl di Neutralization Medium e conservate a -80˚C. 