I bacilli di Koch erano coltivati per 30-45 giorni in "terreno Petragnani". Si procedeva alla disgregazione delle patine batteriche, o veli dei batteri coltivati, che dovevano essere spappolati, prima con spatola e successivamente con agitatori meccanici per ottenere così una più fine dispersione dei bacilli. L’uccisione delle sospensioni batteriche, era attuata con l’esposizione della durata di pochi minuti al calore sotto pressione alla temperatura di 110°, evitando però ebollizione.