Anche se in modo eterogeneo, tutti i geni analizzati sono risultati influenzati dal trattamento nei campioni tessutali di carcinomi prostatici sottoposti a terapia ormonale rispetto ai campioni da pazienti non trattati. Infatti, i livelli di espressione di WNT-11 e AR sono aumentati a seguito del trattamento, sia confrontando le medie di espressione, sia mediante analisi di contingenza utilizzando come variabili il trattamento e la mediana di espressione nei due gruppi. Il significato di questa prima osservazione emerge dalla letteratura che dimostra come AR e WNT-11 siano coinvolti nella progressione verso un fenotipo tumorale resistente alla deprivazione androgenica [246,257]. Se l'up-regolazione di AR quale meccanismo di resistenza è un meccanismo conosciuto e consolidato [79,258], il significato della modulazione positiva di WNT-11 risiede nel ruolo di questa molecolaspecifico nella classe di molecole legate al "signaling" di Wntdi indurre un fenotipo neuroendocrino. Il ruolo specifico di WNT-11 in questo senso è già stato dimostrato in letteratura in modelli in vitro [90], ma, fino ad oggi, non esistevano dati consolidati su tessuto relativi ad una sua modulazione in corso di terapia anti-androgenica. Un risultato analogo, ma con una tendenza opposta, si è osservato nel caso di PDEF. Infatti, i livelli di espressione di questo gene, la cui perdita è associata a meccanismi di progressione tumorale [129], sono risultati ridotti in seguito a trattamento ormonale.La traslocazione TMPRSS2-ERG è tra le più frequenti alterazioni geniche che sono state evidenziate nell'adenocarcinoma prostatico, essendo presente nel 40-50% dei casi di tumore [96]. Il ruolo di questo riarrangiamento nella patogenesi del tumore prostatico non è stato completamente chiarito, così come rimane in dubbio quale sia la correlazione tra la presenza della traslocazione TMPRSS2:ERG e la prognosi tumorale [108][109][110]. Nel nostro studio, la traslocazione TMPRSS2:ERG è risultata essere presente nel 46% dei pazienti trattati e nel 41% dei pazienti non trattati, senza differenze tra i due gruppi. Un dato di particolare interesse è emerso però dall'analisi combinata della presenza di traslocazione TMPRSS2:ERG e di CgA. Quest'ultima, infatti, non è risultata differenzialmente espressa in pazienti trattati con terapia androgeno-ablativa rispetto ai controlli. Tuttavia, suddividendo i pazienti di entrambi i gruppi in base alla presenza o meno di traslocazione TMPRSS2:ERG e confrontando i livelli di espressione di CgA, si è osservato un aumento significativo di quest'ultima nel gruppo dei pazienti traslocati sottoposti a trattamento (dato osservato per nessuno degli altri geni studiati).Alla luce di questo risultato si può affermare che la presenza di traslocazione TMPRSS2:ERG sia un fattore favorente lo sviluppo di fenotipo neuroendocrino a seguito di terapia androgeno-ablativa.Un discorso a parte va fatto per SPINK-1. Anche in questo caso i dati in letteratura ne indicano una relazione con una prognosi tumorale peggiore [89]. Nel nostro studio è emerso che confrontando i livelli di espressione di SPINK-1 nel gruppo dei pazienti trattati rispetto ai non trattati non si evidenziano variazioni, ad indicare come la terapia non influenzi i livelli di espressione di questo gene. Tuttavia, se si confrontano i pazienti in base alla presenza della traslocazione e del trattamento, si è osservato come il trattamento androgeno-deprivativo sembri determinare una perdita della mutua esclusività osservata da molti studi tra l'over-espressione di SPINK-1 e la traslocazione TMPRSS2-ERG [89].I dati ottenuti in vivo sono stati largamente confermati in vitro. Le ragioni di un'analisi complementare a quella tessutale basata su colture cellulari sono due. La prima è stata fornire una validazione metodologica ai risultati ottenuti in vivo. La seconda, più rilevante in ottica speculativa, è stata verificare se le modulazioni di espressione genica osservate nei tessuti fossero maggiormente riferibili a meccanismi di selezione o di induzione. La teoria che il carcinoma prostatico, anche nelle fasi iniziali, contenga cloni cellulari ormono-indipendenti è argomento di letteratura contrastato, ma supportato anche da dati recenti [259]. Se questo fosse tuttavia il meccanismo predominante, in modelli in vitro, in cui la popolazione tumorale di partenza è omogenea, non si sarebbero dovute osservare in condizioni di trattamento grandi variazioni, e in termini probabilistici non necessariamente le stesse osservate in vivo. Il nostro modello su cellule LNCaP ha invece mostrato lo stesso profilo determinato nei tessuti, compresa la over-espressione di CgA, osservata nei tessuti solo in soggetti positivi per la traslocazione TMPRSS2-ERG una cui variante è presente nelle stesse cellule LNCaP.Questa osservazione suggerisce che il meccanismo di modulazione genica ad opera del trattamento ormono-ablativo sia più probabilmente su base induttiva, ovvero una modulazione specifica operata sulle cellule tumorali i cui meccanismi restano tuttavia da chiarire.Presi insieme questi risultati sottolineano l'importanza del trattamento androgenodeprivativo nel determinare la presenza di un fenotipo di carcinoma prostatico più aggressivo. Tuttavia, dallo studio delle correlazioni clinico-patologiche non è emersa nessuna associazione specifica tra i geni analizzati e parametri di aggressività patologica quali stadio avanzato, presenza di metastasi linfonodali, o score di Gleason elevato.L'unica eccezione è risultata lo stato dei margini chirurgici per PDEF e WNT-11. Nel caso di PDEF, la proporzione di pazienti con margini indenni è risultata maggiore in presenza di espressione ridotta del gene. Questo dato è però apparentemente in contrasto con la letteratura che supporta come la riduzione dei livelli di espressione di PDEF siano associati a una maggiore invasività locale [88]. Anche per quanto riguarda WNT-11, abbiamo osservato una ridotta espressione di tale gene in pazienti con margini chirurgici positivi, nonostante la letteratura ne dimostri un coinvolgimento nella capacità migratoria in cellule epiteliali intestinali [260]. Non è possibile ad oggi giustificare questa apparente discrepanza tra la letteratura ed i dati ottenuti, sebbene la spiegazione più probabile sia legata ai criteri particolari di scelta della casistica in oggetto nel nostro studio. Infatti, essendo stata selezionata per terapia potrebbe essere affetta da bias statistici per quanto riguarda altri parametri clinico-patologici.L'analisi di correlazione reciproca tra i geni oggetto dello studio ha fornito invece alcuni dati di difficile interpretazione. Considerando il gruppo dei pazienti non sottoposti a terapia ormonale si è evidenziata un'inaspettata correlazione tra i livelli di espressione della CgA e di PDEF, mentre analizzando il gruppo dei pazienti trattati con ormonoterapia è emersa una correlazione statisticamente significativa tra i livelli di espressione di WNT-11 e AR. In entrambi i casi le due associazioni sono apparentemente casuali e non spiegabili su base biologica, almeno in base alla letteratura disponibile.Considerando sempre il gruppo dei pazienti trattati, è anche emersa una correlazione positiva tra PDEF e AR. Nella prostata normale PDEF è un coattivatore dell'AR [123], ma risulta essere normalmente ridotto nelle cellule tumorali [129]. È ipotizzabile che le diverse modificazioni cui va incontro il recettore degli androgeni in corso di terapia androgeno-deprivativa comprendano la maggiore espressione di alcuni coattivatori [79,81], tra cui PDEF, quale meccanismo di aumentata sensibilità.