Gli estratti insolubili vengono preparati a partire dal pellet che si ottiene dopo l'ultima centrifugazione degli estratti solubili. Questo viene sonicato utilizzando il sonicatore che presenta una sonda capace di produrre ultrasuoni. Gli ultrasuoni ad alta frequenza possono essere impiegati efficacemente per disgregare agglomerati proteici, in quanto generano onde pressorie elevate.Il pellet degli estratti solubili in RIPA buffer viene risospeso direttamente in LSB (Laemmli Sample Buffer) 1X e sottoposto a sonicazione.Si sonica con impulsi di potenza pari al 40%, la durata è di 10'', di cui il 5% è il tempo dell'impulso e il restante di pausa fra un impulso e l'altro.