Per la validazione dai campioni tissutali della casistica di validazione descritta al paragrafo precedente sono state tagliate sezioni spesse 5μm seriali a quelle ottenute per la colorazione convenzionale con ematossilina-eosina. Sono stati testati gli stessi anticorpi per calreticulina e perossiredossina usati per l'analisi Western blot con una diluizione 1:250 per entrambi.L'immunoistochimica è stata eseguita automaticamente con Ventana BenchMark Ultra instrument (Ventana, Roche, Tucson, AZ). Gli score di immuno-reattività sono stati valutati indipendentemente da due diversi patologi usando l'H-score, generato con la seguente equazione: H-score= ΣPi (i + 1), dove "i" rappresenta l'intensità di marcatura (0-3+), e "Pi" sta per la percentuale di cellule tumorali marcate (0% to 100%).