Tra gli anni '50 e '60, l'unica terapia a disposizione per il trattamento del tumore colorettale in stadio avanzato era rappresentata dal 5-Fluorouracile (5FU), tale terapia forniva risposte obiettive nel 10-15% dei pazienti e una durata mediana della risposta di 10 mesi.A partire dagli anni Ottanta, allo scopo di migliorare l'attività terapeutica del 5FU, si intraprese la via della modulazione biochimica del farmaco [69][70][71] [72] , i due agenti modulanti più studiati furono il Methotrexate (MTX) e l'Acido folinico o Leucovorin (LV).Il Leucovorin, esplica la sua azione modulatrice attraverso la stabilizzazione del legame tra 5-Fluorouracile e timidilato sintetasi, potenziando così l'azione citotossica del farmaco.