Il test del soft-agar consente di valutare la capacità delle cellule di produrre colonie, abbiamo testato le cellule primarie di osteosarcoma, le cellule delle linee commerciali e le cellule mesenchimali da donatori sani.Le cellule sono state seminate alla densità di 100, 500, 1000 cell/pozzetto in piastre da 24 pozzetti in quadruplicato. Il test è stato eseguito utilizzando l'agar allo 0,8% e 0,3% in α-MEM+10% HPL (Sigma Aldrich), disposti rispettivamente alla base e in superficie.Il test è come descritto di seguito:-sciogliere l'agar all'1,6 % in 12 ml di H 2 O in forno a microonde mantenendo allo stato liquido in bagnetto a 42° C; -aggiungere 12 ml di terreno α-MEM+20% HPL (Sigma Aldrich) e dispensare nei pozzetti della piastra da 24 pozzetti (1 ml/pozzetto);-sciogliere l'agar all'0,6% in 6 ml di H 2 O in forno a microonde mantenendo allo stato liquido in bagnetto a 42° C; -tripsinizzare le cellule, contarle e risospenderle in provette da 15 ml come segue: 400 cellule in 2 ml di terreno α-MEM+10% HPL; 2000 cellule in 2 ml di terreno α-MEM+10% HPL;-aggiungere a ciascuna provetta da 15 ml, 2 ml di agar al 0,6% e aliquotare 500 µl della sospensione cellulare in 1 pozzetto della piastra.Le   Tutte le colture primarie sono state mantenute in adesione e passate ogni volta che raggiungevano la confluenza. Colture primarie Giorni