La valutazione dell'espressione genica è stata effettuata mediante quantificazione relativa con l'utilizzo di sonde di idrolisi TaqMan in Real-Time PCR. Tale saggio permette di amplificare regioni di interesse e valutare in tempo reale l'avvenuta amplificazione mediante l'utilizzo di sonde che emettono luce fluorescente solo in presenza del proprio target. La quantificazione relativa è stata effettuata mediante il metodo comparativo del delta Ct, previa normalizzazione dell'espressione dei geni di interesse con quella del gene house-keeping scelto 97 . In tale modo è stata valutata l'espressione dei geni TS e -actin (gene house-keeping), utilizzando il sistema di rilevazione ABI PRISM 7900 Sequence Detection System (Life Technologies) dove ogni campione è stato testato in doppio per eliminare variabilità analitiche. Le sequenze dei primers e delle sonde sono quelle precedentemente utilizzate 57,92 . L'amplificazione è avvenuta nelle seguenti condizioni: 50°C per 2 minuti, 95°C per 10 minuti, seguiti da 46 cicli a 95°C per 15 secondi and 60°C per 1 minuto, in un volume di reazione di 20 µL contenente 1,200 nmol/L dei primers, 200 nmol/L di sonda, 200 nmol/L di nucleotidi, 3.5 mmol/L MgCl2 e 1x Taqman Universal PCR Master mix (Applied Biosystems, FosterCity, CA).