Abbiamo visto come l'integrazione dei dati sull'analisi mutazionale di KRAS, BRAF e PI3CA ha permesso di incrementare la capacità di selezionare i tumori responsivi alla terapia nel nostro studio. Infatti tramite questo metodo il 53% dei tumori che possedevano tutti i geni analizzati non mutati ha risposto al Cetuximab, contro il 47% ottenuto utilizzando il più valido marcatore predittivo a disposizione, cioè KRAS.E' plausibile che aggiungendo a questa analisi integrata altri possibili marcatori si possa arrivare a raggiungere la sensibilità e la specificità adeguata nel selezionare i pazienti che rispondono alla terapia. Proprio per ottenere il numero più alto possibile di fattori capaci di influenzare la risposta alla terapia con Cetuximab verranno portate avanti una serie di analisi all'interno dello studio che si sviluppano in due diversi ambiti.Tramite tecnologie classiche di biologia molecolare saranno effettuate analisi multiparametriche su tutti i fattori già proposti e su altri possibili biomarcatori funzionali che sono noti correlare con l'attività di EGFR, allo scopo di poterli utilizzare in una analisi integrata capace di ottimizzare il potere predittivo dei singoli marcatori grazie alla possibile esistenza di sinergie tra di essi per poter incrementare l'accuratezza della selezione dei pazienti da trattare con Cetuximab.In particolare sul materiale conservato in paraffina si applicherà l'Ibridazione in situ a fluorescenza (FISH), una metodica di ibridazione in situ particolarmente utile per evidenziare sia alterazioni cromosomiche quali delezioni, traslocazioni che alterazioni a carico di geni di interesse, come ad esempio un'amplificazione genica. Nel nostro caso la Inoltre sarà oggetto della ricerca anche l'espressione della fosfatasi PTEN tramite immunoistochimica poiché la presenza di questa proteina all'interno della cellula è regolata in maniera epigenetica. Essa ha la funzione di regolatore negativo di PI3K e la sua inattivazione potrebbe conferire resistenza al trattamento e potrebbe rappresentare un nuovo marcatore predittivo negativo di risposta al Cetuximab. A sostegno di questa ipotesi vi sono studi che dimostrano che la inattività di questa proteina in linee cellulari di carcinoma della mammella provoca una mancata risposta al trastuzumab (Nagata, 2004).Il secondo ambito in cui si svilupperà il lavoro prevede approcci definiti "unbiased", cioè  Ford, et al., 2007).Un ultimo studio che verrà portato avanti sui campioni tumorali è il "Deep Sequencing" ovvero il sequenziamento completo e accurato di tutto il DNA delle cellule tumorali.Questo strumento permetterà di individuare e conoscere tutte le mutazioni somatiche note e non note presenti nella neoplasia in modo da identificare quelle capaci di influenzare la risposta al farmaco.In definitiva tramite le tecniche di ricerca definite "unbiased" potrà essere possibile individuare nuovi marcatori predittivi di risposta tramite la ricerca di pattern trascrizionali, amplificazioni geniche o mutazioni di diverso genere analizzando l'intero patrimonio genetico delle cellule tumorali.