Ossitetraciclina, similmente ad altre tetracicline, è dotata di attività prevalentemente batteriostatica. Il composto esercita il suo effetto antimicrobico mediante l'inibizione della sintesi delle proteina. Agisce infatti inibendo il trasporto degli aminoacidi dall'aminoacil-t-RNA ai ribosomi, impedendo il legame con la subunità 30S. Il farmaco viene così ad impedire la formazione della catena peptidica e pertanto la sintesi delle proteine.