Il vettore di espressione mammifero pEF-BOS (figura 9), contenente l'intera sequenza del gene umano EphA3 ed il vettore pEGFP, per la valutazione dell'efficienza della transfezione, sono stati gentilmente concessi dal Dott. Lackmann e dal Dott. Bracco, rispettivamente.Cellule batteriche di E.Coli (ceppo TG1) rese competenti, sono state trasformate (processo che consente l'inserimento di DNA esogeno in una cellula batterica) mediante shock chimico. Tale metodica prevede l'utilizzo di una soluzione di sali KCM 5X (KCl 1.2M, CaCl 2 1M, MgCl 2 1M) capace di stirare e rilassare la membrana batterica, consentendo l'ingresso del DNA. Le cellule batteriche così trasformate, sono state messe in piastre di LB con l'aggiunta di ampicillina e lasciate in incubazione a 37°C per tutta la notte. Successivamente è stata prelevata una singola colonia batterica, lasciata nuovamente in incubazione in 200 ml di LB + 200 µl di ampicillina, per tutta la notte a 37°C in agitazione.In seguito al trattamento con differenti tamponi di lisi (TGE, 0.2 N NaOH + 1% SDS, 5M di K-acetato) per rompere le membrane cellulari, l'isopropanolo e l'etanolo sono stati impiegati per la precipitazione del DNA plasmidico. Quest'ultimo è stato successivamente purificato mediante un gradiente di CsCl (cesio chloride per molecular biology, 99% Sigma) ed il DNA plasmidico così ottenuto nuovamente sottoposto ad una reazione di precipitazione. Grazie a questo metodo, si sono ottenute grandi quantità di plasmide con cui poter transfettare le linee cellulari.E' stata a questo punto effettuata una co-transfezione del vettore pEF-BOS contenente l'intera sequenza del gene umano EphA3 e del plasmide pEGFP nelle linee cellulari COS- 