Per la valutazione dell'espressione di tutti gli antigeni selezionati è stata utilizzata una procedura di smascheramento dell'antigene basata sul calore, sottoponendo i vetrini portaoggetti a tre cicli consecutivi (5 min) di riscaldamento al forno microonde settato alla massima potenza (800 W) previa loro immersione in buffer citrato di sodio 0,01M (pH 6,0). L'attività endogena perossidasica è stata inibita immergendo le sezioni in H2O2 al 3% per 10 minuti. Dopo essere state sciacquate in PBS, sono state incubate con la Blocking solution (ChemMate Buffer Kit; DakoCytomation, Glostrup, Denmark) e successivamente con l'anticorpo primario in camera umida a 4°C per tutta la notte. Dopo alcuni lavaggi in PBS le sezioni sono state quindi incubate per 30 min a temperatura ambiente con un polimero di destrano pre-coniugato con molecole ad attività enzimatica e con anticorpi secondari anti-immunoglobuline di topo (sistema di rivelazione biotin-free -Envision System, DakoCytomation, Glostrup; Denmark). Si è quindi provveduto immediatamente a processarle per perossidasi coniugata con streptavidina (DAKO, Glostrup; Denmark). Dopo un ulteriore lavaggio in PBS, i vetrini sono stati incubati con 3,3'-diaminobenzidina tetraidroclorato (DAKO) per 10 minuti. Tutti i campioni sono stati contrastati con una soluzione di emallume acido di Mayer, montati in Entellan (Merck, Darmstadt; Germany) ed esaminati con il microscopio DM-RBE Leica (Leica Microsystems AG, Wetzlar; Germany) dotato di obiettivi planapocromatici 16x e 63x. Come controlli positivi sono stati utilizzati gli istiociti immunoreattivi presenti nella sezione esaminata, mentre i controlli negativi sono stati ottenuti omettendo l'anticorpo primario.