Lo studio mira a generare un metodo per l'identificazione in fase preclinica dei predittori di risposta a un farmaco a bersaglio molecolare che possa valere in generale, ovvero essere applicato anche ad altre patologie (le metastasi epatiche sono state prese come modello) e ad altri agenti targeted.Per quanto riguarda i farmaci, abbiamo focalizzato l'attenzione di questo studio su un composto che può essere impiegato nell'ambito delle secondarietà epatiche da tumore del colon retto: il Cetuximab, anticorpo monoclonale antagonista di EGFR, già in uso in clinica come terapia singola o in combinazione con altri chemioterapici standard (irinotecan) per pazienti con tumore colorettale in fase metastatica. La scelta del Cetuximab come trattamento è motivata innanzitutto dal fatto che il farmaco, proprio perché già validato per l'impiego nella pratica clinica, serve da controllo dell'efficacia dello studio; ciò significa che ritrovare mancate risposte all'anticorpo monoclonale sarebbe indice di scarsa qualità della ricerca, dal momento che è ben nota la validità del Cetuximab, mentre, viceversa, il successo del trattamento avvalorerebbe lo studio. Inoltre la definizione di criteri predittivi di risposta al Cetuximab sarebbe interessante nell'ottica di applicare tale farmaco come terapia adiuvante delle metastasi epatiche, per la quale ad oggi mancano linee guida e chiare indicazioni.Realizziamo il trattamento dopo aver suddiviso la popolazione di animali in due gruppi omogenei per quantità, per testare l'efficacia del Cetuximab, e per avere un gruppo di controllo. Nella pratica i 24 topi della generazione p2 vengono separati a formare 2 gruppi di 12 topi ciascuno. Trattiamo un gruppo con il Cetuximab, e l'altro non lo sottoponiamo ad alcuna terapia (Figura 6.2).In una prima fase, effettuiamo il trattamento sulla popolazione p2 subito dopo l'impianto, per valutare la massima sensibilità al farmaco. Se il tumore non risponde, scartiamo il topo e consideriamo il caso un fallimento terapeutico, per cui l'animale non riceve più il farmaco. Se la neoplasia risponde, invece, eseguiamo la seconda fase del trattamento, ovvero consideriamo il gruppo dei controlli e iniziamo a trattarli.Ci attendiamo tre tipi di risposta dopo la somministrazione del farmaco: una progressione della crescita tumorale, indice di mancata responsività all'agente targeted, per cui i risultati positivi ottenuti in precedenza nel gruppo trattato non sono da considerare validi, quanto da attribuire a fattori casuali; una stabilizzazione della crescita tumorale (dal trattamento il volume della lesione non diminuisce, né aumenta, ma rimane costante); una riduzione della crescita tumorale (Figura 6.2). Consideriamo sia la stabilizzazione che la riduzione della massa neoplastica come risposte al farmaco e come prova del successo della terapia nel gruppo primariamente trattato. Solo in caso di risposta terapeutica, espandiamo i tumori che non sono stati trattati, ottenendo così la generazione p3.Suddividiamo i topi appartenenti a questa popolazione in due gruppi, quello di controllo e quello trattato; sottoponiamo una parte dei topi randomizzati per la terapia a trattamento cronico, per confermare il successo terapeutico dimostrato in precedenza. Trattiamo, invece, gli altri per breve tempo, in acuto, per poter eseguire analisi biochimiche e trascrizionali al fine di ricavare i marker dinamici, ovvero quelli presenti in corso di risposta terapeutica.Figura 6.2: Rappresentazione della seconda fase di trattamento della generazione p2 I punti cardine del metodo presentato sono fondamentalmente due: innanzitutto il sistema è controllato dal punto di vista delle procedure sperimentali; inoltre il metodo offre la possibilità di identificare sia i correlati biochimici che genetici rispetto alla risposta ai farmaci targeted.