La misurazione dei livelli di OPG sierica è stata resa possibile dallo sviluppo di anticorpi anti-OPG adoperati in metodiche ELISA a "sandwitch" che prevedono abitualmente una capture con anticorpi monoclonali ed una determinazione con anticorpi policlonali.Nel considerare i risultati ottenuti dal dosaggio dell'OPG sierica, è opportuno anzitutto ricordare che, essendo la sua espressione pressoché ubiquitaria, e non essendo stata riportata l'esistenza di isoforme diverse, "tessutospecifiche", i livelli circolanti rispecchiano la produzione da parte di numerosi tessuti, il cui contributo relativo non è noto.In secondo luogo, emerge una spiccata discrepanza nei valori assoluti di OPG circolante riportati.Le discrepanze osservate sono riconducibili anzitutto alla diversità dei reagenti utilizzati. L'OPG è attualmente dosata con metodica ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), utilizzando come elemento di cattura o un anticorpo monoclonale anti-OPG, o RANKL ricombinante, mentre l'elemento di rilevamento è un anticorpo (mono-o policlonale) anti-OPG 153 . È stato inoltre descritto un metodo di immuno-PCR (Polymerase Chain Reaction) specifico per la forma omodimerica. L'OPG circolante è infatti presente in forma monomerica (> 90% in condizioni fisiologiche) ed in forma omodimerica (< 10%); quest'ultima sembra essere la forma più attiva 154 . Le metodiche a tutt'oggi disponibili in commercio utilizzano diverse coppie di anticorpi anti-OPG. Naturalmente diverse coppie di anticorpi diretti verso differenti epitopi possono essere responsabili delle differenze tra le misurazioni; in particolare, l'OPG circolante, oltre che in forma mono-ed omodimerica, può essere sia libera, sia legata a RANKL solubile; la specificità delle coppie di anticorpi per le diverse forme non è a tutt'oggi completamente definita. Tuttavia, è interessante notare come risultati sensibilmente differenti (fino a tre ordini di grandezza) siano stati ottenuti anche da Autori che utilizzano verosimilmente la stessa coppia di anticorpi. Quest'ultima osservazione sottolinea l'importanza di una serie di variabili analitiche e pre-analitiche; tra le prime, ricordiamo in particolare la proteina ed il diluente utilizzati per la preparazione degli standard. Per quanto concerne le seconde, è dimostrata l'importanza della tipologia del campione, in quanto livelli superiori sono misurati nel siero rispetto a quelli riscontrati nel plasma 155 . È stato inoltre dimostrato che la conservazione del campione non separato a temperatura ambiente comporta un aumento significativo dei livelli successivamente misurati nel siero; tale aumento può essere prevenuto mediante refrigerazione del campione 156 . Altri fattori, quali l'influsso dell'alimentazione rispetto allo stato di digiuno e l'eventuale esistenza di una variabilità ritmica, non sono stati a tutt'oggi indagati.Resta dunque aperto il problema dei valori assoluti, "reali" dell'OPG circolante. Non è attualmente possibile escludere che metodiche diverse rilevino forme diverse della molecola, potenzialmente dotate di specifiche attività biologiche e significato fisiopatologico. Allo stato attuale delle conoscenze, lo studio dell'OPG sierica è quindi possibile attraverso il confronto tra popolazioni di soggetti opportunamente selezionati ed il rigoroso controllo delle condizioni di prelievo e delle metodiche di dosaggio.La forma solubile di RANKL può derivare o da splicing alternativo di un comune pre-RNA, o da clivaggio proteolitico della forma di membrana ad opera di metalloproteasi, tra cui il TNF- Converting Enzyme (TACE). La forma di membrana ha, almeno in modelli murini, una maggiore attività biologica rispetto a quella solubile 157 . I livelli circolanti di sRANKL sono attualmente dosati con metodica ELISA. Utilizzando come elemento di cattura OPG e come elemento di rilevamento un anticorpo anti-RANKL si misura solo la quota libera di sRANKL, ovvero quella non complessata con OPG. La sensibilità di questa metodica è condizionata dalla concentrazione di OPG del campione ed, in effetti, è stato suggerito che le differenze nei livelli circolanti di sRANKL in alcune patologie possano semplicemente riflettere le differenze nei valori di OPG 124,158 . Dal 2003 è disponibile una metodica per il dosaggio di sRANKL totale (libero e complessato) (Immundiagnostik, http://www.immundiagnostik.com).