La stimolazione antigene-dipendente prevede due stimolazioni successive a distanza di una settimana l'una dall'altra.1° Prima dell'allestimento della co-cultura di espansione le PBMC dei 3 donatori sono state aliquotate in un'unica provetta da 15 ml in 1 ml di terreno SCGM Medium + 5% HS ed irradiate a 3000 rad.Le co-culture di espansione sono state allestite in pozzetti di piastre a 48 pozzetti contenenti ciascuno un volume di 2 ml di SCGM Medium addizionato del 5% di HS e di IL-2 (100 U/ml) e di anticorpo anti CD3 purificato per colture cellulari (Anti-CD3) (50 ng/ml).La piastra è stata incubata per alcune settimane a 37° C in incubatore al 5% di CO 2 umidificato e ogni 3-4 giorni sono stati aggiunti a ciascun pozzetto 100 µl di SCGM Medium + 5% HS contenenti IL-2 (50 U/ml sul volume totale del pozzetto).