Mécanismes modulant la stabilité de l’ARNm alphaENaC des cellules épithéliales alvéolaires dans un environnement inflammatoire
Le canal épithélial sodique (ENaC) exprimé dans les cellules épithéliales alvéolaires joue un rôle important dans la clairance liquidienne à la naissance et lors d’un syndrome de détresse respiratoire aigu (SDRA). Des travaux préliminaires dans le laboratoire ont montré que le TNF-α régule à la baisse l’expression de l’ARNm αENaC en partie via une modulation post-transcriptionnelle de sa stabilité. Dans les travaux présentés dans ce mémoire, cinq séquences du 3’UTR αENaC qui sont hautement conservées (CS) dans différentes espèces ont été étudiées pour déterminer l’impact de chacune d’elle dans la modulation de l’ARNm αENaC en conditions basales ainsi qu’en présence de TNF-α. Pour étudier l’implication de celles-ci dans la modulation de l’ARNm αENaC, un modèle Tet-Off a été utilisé pour inhiber l’expression du transcrit à l’aide de la doxycycline. Les niveaux de transcrit dans le temps ont été estimés par RT-qPCR. Avec cette technique, la demi-vie de l’ARNm αENaC est de ~100 min. Des mutants de délétion ponctuelle du 3’UTR ont été générés en retirant spécifiquement les domaines  CS1 (31pb), CS3 (22pb), CS2&3 (82pb), CS4&5 (74pb), CS1-5 (187pb) et CS3+ (165pb). Nos résultats montrent que la délétion de chacune des CS affecte leur demi-vie respective à 169 min, 172 min, 246 min, 193 min, 208 min et 237 min. La stabilité des différents mutants a ensuite été évaluée en présence de TNF-α (une cytokine retrouvée dans les poumons de patients atteints de SDRA). La courbe de dégradation de l’ARNm avec son 3’UTR complet observée est différente en présence de TNF-α de celle observée en condition basale. La courbe prend allure biphasique avec une dégradation rapide suivit d’un plateau à environ 50% de l’expression du contrôle (t=0). La même observation a été faites pour le mutant de délétion CS1-5. Nous concluons donc que de façon générale le 3’UTR de l’ARNm αENaC, via les domaines conservés identifiés, est impliqué dans la déstabilisation du transcrit. Les CS ne sont pas impliquées dans le mécanisme post-transcriptionnel par lequel le TNF-α fait chuter l’expression de l’ARNm αENaC. Il n’en demeure pas moins que d’autres séquences du 3’UTR pourraient jouer un rôle important dans la dégradation rapide de l’ARNm αENaC durant l’inflammation ou lors d’une lésion pulmonaire.
canal épithélial sodique (ENaC) ARN messager stabilité région 3' non traduite (3'UTR) demi-vie cellules épithéliales alvéolaires inflammation oedème SDRA edema