Identification des partenaires de gM du virus VHS-1 par BioID couplée à la spectrométrie de masse
Parmi les glycoprotéines du VHS-1, la glycoprotéine M (gM) régule la fusion du virus avec la membrane plasmique. gM est la première à être détectée à la membrane nucléaire très tôt dans le cycle viral, 4 h après l’infection. Cependant, le mécanisme par lequel elle est ciblée aux membranes nucléaires, de même que pour les protéines de l’hôte, est encore inconnu. Les partenaires connus de gM trouvés précédemment par double hybride et par co-Immunoprécipitation ne sont pas impliqués dans ce ciblage. L’hypothèse est que d’autres protéines virales, ou cellulaires, y sont impliquées. Afin d’étudier de nouveaux partenaires de gM, une approche par BioID a été utilisée. Des lignées cellulaires exprimant gM couplée à BirA* et d’autres lignées contrôles ont été infectées pendant 4 h ou 12 h avec le virus ∆gM-2 VHS-1. Les échantillons purifiés ont été ensuite analysés par spectrométrie de masse où 177 protéines ont été identifiées. Parmi elles, les protéines SNX1, SNX2, SCAMP3, VPS33B, MTMR6, TMEM43 et XPO6 ont été choisies pour valider leur rôle potentiel par siRNA dans la délocalisation de gM. Leurs effets sur gM sont analysés par immunofluorescence et leurs répressions ont été confirmées par RT-qPCR. Éventuellement, ces cibles seront étudiées pour leur rôle dans la sortie du virus par essai de plaque. Dans le futur, cette étude permettra d’approfondir nos connaissances sur le mécanisme de ciblage à la membrane nucléaire de gM et des protéines cellulaires en proposant un modèle.
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