Étude d’interactions biologiques à l’aide de la résonance des plasmons de surface et de la spectroscopie de fluorescence
L’étude d’interactions biologiques est d’une importance primordiale pour la compréhension des mécanismes complexes se produisant dans tout être vivant. Ces interactions peuvent se produire entre protéines, oligonucléotides ou peptides, mais ne se limitent pas à ces catégories de biomolécules. Ces interactions biologiques entre biomolécules sont caractérisées par leur degré d’affinité et la cinétique de leur liaison. Il est donc important d’avoir des outils analytiques permettant de mesurer ces propriétés afin de caractériser des interactions entre biomolécules d’intérêt. L’objectif de ce mémoire était d’optimiser la résonance des plasmons de surface (SPR) pour l’étude de systèmes biologiques peu étudiés et pour caractériser l’interaction entre deux molécules biologiques. Cette technique repose sur l’assemblage de récepteurs à la surface d’un prisme recouvert d’une mince couche d’or. L’une des biomolécules étudiées est attachée à la surface du prisme tandis que la seconde est injectée en solution dans une cellule fluidique recouvrant le prisme. Le signal produit résulte de la liaison entre les deux biomolécules et permet de déterminer les paramètres thermodynamiques (KD) et cinétiques (kon et koff) associés au complexe. Ces propriétés seront exploitées dans ce mémoire pour établir des capteurs SPR permettant de caractériser l’interaction de la protéine CD36 (« Cluster of Differentiation-36 ») avec des peptides homologues au GHRP-6 (« Growth Hormone Releasing Peptide-6), l’interaction d’un ganglioside (GM1) avec la sous-unité B de la toxine cholérique (CTB) et un peptide synthétique, l’interaction entre des cytokines et le récepteur protéique solubleEBI3 (« Epstein-Barr virus Induced gene-3 ») et l’interaction entre la protéine fluorescente verte (GFP) et une autre protéine provenant d’un collaborateur. Les capteurs SPR développés durant ce mémoire ont permis l’étude d’interactions pour lesquelles peu de solutions disponibles. Le mémoire décrira aussi brièvement un prototype d’appareil pouvant mesurer un signal de fluorescence provenant soit de la solution submergeant le biocapteur ou de sa surface lors de la même expérience.
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