Étude du rôle de la tyrosine kinase Src dans la régulation de la signalisation des récepteurs opioïdes delta (∆OR)
Les opioïdes sont les analgésiques les plus efficaces mais leur utilisation est limitée  par la tolérance, un processus lié en partie à la désensibilisation des récepteurs. Le  rôle de la présente étude était de mieux caractériser le processus de désensibilisation  des récepteurs et plus particulièrement, d’étudier le rôle de la tyrosine kinase Src sur  la régulation de la signalisation des récepteurs delta opioïdes. Nos résultats  démontrent que l’inhibition pharmacologique avec PP2 (à faible concentration : 20-  40µM) ou encore l’inhibition moléculaire de la kinase avec de faibles concentrations  d’ADN d’un mutant dominant inactif de Src (0,2µg/ml) potentialise l’amplitude et la  durée de l’activation de la cascade ERK lorsqu’un agoniste, DPDPE (1µM; 5 min), se  lie aux récepteurs. Nous avons également démontré que de fortes concentrations  d’inhibiteurs de Src (80 et 100µM de PP2 ou 1µg/ml d’ADN du mutant dominant  négatif) bloquent la cascade des MAPK suivant la stimulation de DOR par l’agoniste  DPDPE. Ces observations indiquent que Src a un effet biphasique sur l’activité de  ERK : l’inhibition complète de Src inhibe l’activité de la cascade MAPK alors qu’une  inhibition modérée potentialise cette même cascade. Nous pensons aussi que de  fortes concentrations des bloqueurs de Src interfèrent avec l’activation de ERK alors  que de faibles concentrations interfèrent avec la désensibilisation des récepteurs.  Cette possibilité a été testée à l’aide d’essais d’accumulation d’AMPc qui visaient à  évaluer l’effet des bloqueurs de Src (PP2, 20 µM; 1h) sur la désensibilisation induite  par un agoniste. L'activation de DOR par DPDPE inhibe la production d’AMPc,  préalablement stimulée par du forskolin, de façon dose-dépendante. Le maximum  d'inhibition observé est de 61%, mais lors d’un prétraitement au DPDPE (1 µM, 30  min) l’inhibition maximale est réduite à 72% de l’inhibition initiale observée.  Cependant, un prétraitement des cellules au PP2 (20µM pendant 1 heure) avant  d’effectuer la désensibilisation protège contre cette désensibilisation. L’effet  protecteur des bloqueurs de Src n’entraîne pas de changement au niveau de  l’internalisation des DOR mais l’altération de leur internalisation via un mutant  tronqué du DOR ou via un milieu sucré hypertonique (0.4M de saccharose) réduit  cette protection. Ces données suggèrent alors que l’internalisation optimale du  récepteur est nécessaire pour que l’effet protecteur prenne place. Nous concluons  donc que Src contribue à la désensibilisation de DOR après que l’internalisation du  DOR soit survenue.
Désensibilisation récepteur mutant delta opioïde tronqué (DOR344T) Src PP2 DPDPE Internalisation Tolérance kinase activant les protéines mitogéniques (MAPK) kinase régulatrice de signaux extracellulaires (ERK) Adénosine monophosphate cyclique (AMPc)