طيب الجزء الآخر fractionation, identification and
quantitation of specific proteins طبعا بكيف ممكن
نحدد الـ fractions المختلفة لـ الـ proteins الموجودة
في الـ serum الآن عندنا ممكن نحسب الـ ratio لـ الـ
proteins ونحسب اللي هو الـ albumin to globulin
ratio وحساب هذه الـ ratio فعليا ممكن من خلالها نحصل
على useful diagnostic information. A significant
change in the ratio can point to specific diseases.
وإذا كان صار في أنه تغير في هذه النسبة هذا مرتبط
في يعني بعض الأمراض بعض specific diseases. طيب الآن
كيف ممكن نحسب هذه الـ ratio؟ الآن احنا عارفين أن الـ
total protein هو عبارة عن albumin زائد globulins.
الـ total protein بتكون من الـ albumin زائد الـ
globulins. طيب يبقى إذا كان احنا بدنا نشوف كمية
الـ globulins الموجودة يبقى بدنا نحسب الـ
total protein وممكن نحسب الـ albumin ونطرح
total protein نقص الـ albumin ومنها نحصل على الـ
globulins. إذا كان حسبنا شغلتين ممكن نحسب يعني عملنا
analysis وحددنا الـ concentration لـ الـ proteins
اللي هو الـ total protein و الـ albumin ممكن نحسب
اللي هو الـ globulin. أولًا حسبنا الـ total protein و
الـ globulins ممكن نحسب كمية الـ albumin
الموجودة. الآن إذا كان حددنا الـ total protein زي ما
قلنا باستخدام الـ Biuret reagent و حددنا كمية
الـ albumin باستخدام reagent اللي يسمى
بروموكريزول جرين يبقى ممكن نحسب كمية الـ globulin
وبالتالي ممكن نحسب الـ albumin to globulin ratio.
الآن زي ما قلنا تحديد هذه الـ ratio يعني بتعطيني
diagnostic significance. The albumin to globulin ratio may
reflect إذا كان كان عندنا انخفاض في الـ ratio يبقى
هذا ممكن يكون بسبب الـ over production of globulins.
إذا انخفضت النسبة زي عندنا بسط عندنا مقام إذا
المقام الكمية تبعته زادت يبقى أكيد الـ ratio هتنخفض.
تمام، و المقام هو الـ globulins يبقى إذا كان زاد
عندنا إنتاج لـ globulins يبقى هذا هيؤدي إلى انخفاض
في الـ ratio وهذا وين ممكن يصير؟ ممكن يصير في حالات
الـ multiple myeloma أو في حالات الـ autoimmune
diseases. طيب الآن شغلة تانية اللي ممكن تؤدي إلى
انخفاض الـ ratio أنه لو قل عندنا البسط إذا كانت الـ
concentration قليلة، ستقل الـ ratio وهذا ممكن يحدث
في حالات مثل الـ cirrhosis اللي هو التليف الكبد
أيضا selective loss of albumin from the
circulation as may occur with kidney disease. اه في
مرض اللي من أمراض الكلى يسمى nephrotic syndrome
وإيه هذا بيصير فيه أنه فقد للبروتينات والكمية
الأكبر من الـ proteins اللي بتنفقدها هي الـ albumin
تمام. بيجي هذه برضه هيصير فيه أنه فقد كمية كبيرة لـ
الـ albumin يبقى هينخفض عندنا الـ بسط وبالتالي الـ
ratio أيضا هتقل. عندنا حالات أخرى اللي بيزيد عندنا
الـ albumin to globulin ratio وهذا بدى يصير في
حالات الـ under production of immunoglobulins انه
يصير فيه انه انخفاض في الـ globulins تمام؟ و ضمن الـ
globulins عندنا الـ immunoglobulins اللي هو الـ
antibodies اه يبقى إذا كان انخفض عندنا المقام يبقى
معناته الراشيو هذه هترتفع. و الـ under production of
immunoglobulins may be seen in some genetic
deficiencies and in some leukemias. يعني ببعض
الأمراض الوراثية ممكن يكون في أنه انخفاض في الـ
concentration لـ الـ immunoglobulins أو في بعض أمراض
سرطان الدم. طبعا إن الـ ratio الـ normal ratio الـ
albumin لـ الـ globulins هي 1.24 لـ 2.36. هذه الـ normal
ratio. طيب،
الآن كيف ممكن احنا نفصل المكونات؟ ممكن نفصل
البروتينات عن طريق الـ salt fractionation
Fractionation of proteins done using precipitation
يا ممكن باستخدام concentration معينة من الأملاح من
الـ salts نعمل precipitation لنوع من الـ proteins
تمام، ويظل عندنا في الـ supernatant النوع الآخر و
باستخدام concentration معينة من الـ salts اه هيبدأ
الـ globulin تترسب لأنه لما نيجي احنا ندوب salt في
المحلول اللي كانت ذائبة فيه البروتينات هيبدأ الـ
salt ياخد من الـ bonds اللي متكونة بين البروتين
وبين الـ solvent تمام؟ هيبدأ الـ ... الـ ... الأملاح
هذه تبدأ ترتبط مع الـ ... الـ solvent تمام وبالتالي
تاخد من الـ bonds اللي كانت بين البروتين وبين هذا
الـ solvent وبالتالي هيبدأ يصير فينا بروتين بروتين
interaction وهيبدأ يصير فينا precipitation
للبروتين. طبعا هان احنا بنتحكم في الـ concentration
للـ salt يعني different salt concentrations ممكن
يعمللي precipitation لـ different proteins. يبقى الـ
globulins are separated from by salting out
using sodium salt to cause precipitation of
the globulins. بهيك احنا رسبنا الـ globulins تمام و
بيظل عندنا في الـ supernatant الـ albumin هو الموجود
تمام و الـ albumin ممكن انقيزه باستخدام الـ routine
total protein method تمام لأن احنا الآن إذا كان
أخدنا الـ supernatant واستخدمنا على سبيل المثال
اللي هي الطريقة اللي طبعا حكينا عليها اللي هو الـ
Biuret reagent وقصنا الـ total protein في هذه
الحالة الـ total protein هيمثل فقط الـ albumin اللي
موجود في الـ supernatant.
السلطة ليست مستعملة اليوم لأن هناك طرق مستعملة
تتعامل مع الـ albumin في مزيج من الـ protein يمكن
استخدامها حاليًا لأن هناك مجال مستخدم يسمى برومو
كريزول جرين.
الألبومين ميجرمنت يعني بجهة دي برضه طريقة. يبقى زي
ما شوفنا أنه توي عملنا separation لـ الـ globulins عن
الألبومين. طيب الآن ممكن نقيس الـ albumin.
Measurement: Most widely used methods for
determining albumin are dye binding procedures. زي
ما قلنا باستخدام اللي هو bromocresol green. pH
of the solution is adjusted so that albumin is
positively charged. حسب الـ pH زي ما قلنا سابقا
أن الـ pH بتأثر على إيش الشحنة الموجودة على
البروتين. يبقى الـ reagent اللي هنستخدمه هيكون الـ
pH بتاعته تخلي الـ albumin positively charged. الآن
الـ albumin اللي positively charged هينجذب لـ الـ dye
الموجودة اه يبقى is attracted to and binds to an
anionic dye اللي هو bromocresol green اللي حاكينا
عليها. By electrostatic forces. الآن ارتباط الـ albumin
مع هذه الـ dye برضه هيعمل لي shift في الـ absorption
maximum لـ الـ dye. يبقى الـ free dye هيكون عندي الـ
maximum absorbance بختلف عن الـ dye اللي مرتبطة مع
الـ albumin. وعند 515 هو الـ maximum absorbance لـ الـ
dye لوحدها لكن لما ترتبط مع الـ albumin بصير في عندي
shift لـ الـ absorbance وبصير 620.
بجه هذه الطريقة ممكن نحسب من خلالها الـ albumin
concentration وطريقة الـ Biuret reagent نحسب
فيها الـ total protein وبالتالي ممكن نحسب النقص الـ
total protein من الـ albumin ونحصل على الـ globulins.
عشان نشوف الـ albumin to globulin ratio. طيب، الآن
طريقة أخرى ممكن نحسب الـ total globulins ونحسب الـ
Total Protein ونطرح الـ Total Protein من الـ Total
Globulins ممكن نحصل على الـ Albumin. يبقى another
approach to fractionation of proteins is the
measurement of total globulins. Albumin can then be
calculated زي ما حكينا by subtraction of the
globulin from total protein. ممكن نحسب الـ Total
Globulin Level باستخدام Glycosidic Acid.
والجليكوزيليك أسيد تتعامل مع تريبتوفان موجود في
الجلوبيولين. عيبجة بيجي برتبط مع الـ tryptophan الموجود
بالبروتينات وبيعطيني purple color. الـ albumin
لديه تقريبا 0.2% تريبتوفان. هذه الميزة أنه
بالألبومين عندي نسبة لـ tryptophan قليلة جدا، 0.2%.
لكن الـ tryptophan في الـ globulins بتمثل 2 إلى 3%.
وبالتالي النسبة أعلى بكثير. When calibrated using
serum of known albumin and globulin concentrations
the total globulins can be determined. Measurement
of globulins based on their tryptophan content
has never come into common use. يبقى برضه طريقة مش
مستخدمة يعني أنا ليش أروح لطرق شوية يعني صعبة و
معقدة مزال أنا عندي فيه طرق بسيطة اللي هو ال bio
-retreat agent و زي ما قلنا ال bromocresol-green
يعني هدول two methods بسيطين ممكن أنا من خلالهم
أحسب ال total protein أحسب ال albumen و منها أحسب
ال globulins وبالتالي أحسب ال albumin tooglobulin
ratio طيب،
الآن في عندنا تغيرات في fraction معينة من البروتين
أو في بروتين معين هذا ممكن يغير أو يعمل
abnormality في البروتين الآن من خلال الـ Serum
Protein Concentration والـ Proportions Of The
Individual Protein Fractions تمام ممكن هذا يعني
يتغير زي ما قلنا يعني بسبب أمراض مختلفة طيب الآن
when abnormality is found in the total protein
other techniques can be used إذا كان أنا عندي
مشكلة في الـ total protein زي ما قولنا إذا كان
المشكلة يعني مش يعني عامة يعني إنه زي يكون عندي
liver disease مثلا وبالتالي liver disease فأكيد في
عندي انخفاض في ال proteins عندي مثلا malnutrition
عندي malabsorption يبقى حيكون في عندي اللي هو يعني
decrease في ال proteins ككل لكن في عندنا في بعض
الأحيان ممكن يكون عندي ال total protein
concentration abnormal مش طبيعية تمام لكن ما عنديش
الحالات اللي حكينا عليها يبقى ممكن اللي يخلي ال ال
total protein abnormal هو وجود مشكلة في protein
معين تمام سواء بإنه زيادة أو ممكن في نقص يبقى الآن
عشان نحدد احنا المشكلة موجودة في أي protein بنعمل
electrophoresis بنعمل serum protein
electrophoresis
والآن زي ما قلنا من خلال الـ Ectophoresis بنقسم ال
proteins اللي موجودة في ال serum إلى أكثر من peak
زي ما شفنا فينا اللي هو pre albumin والألبومين وبعدين
فينا ال alpha 1 و ال alpha 2 و ال beta و ال gamma
يبقى هيك بنقسم احنا ال proteins اللي موجودة إلى
different fractions والآن بيصير يعني إن الموضوع
ممكن شوية أسهل إنه أشوف أنا أي fraction اللي فيها
المشكلة اللي abnormal وابدأ أركز عليها وأشوف وين
بالضبط المشكلة موجودة وفي أي protein اللي وضمن هذه
ال fraction في عندي المشكلة
يبقى بنعمل Electrophoresis وممكن نحدد زي ما قلنا
المشكلة موجودة في أي fraction وبعد هيك ببدأ أنا
طبعا بناء على حالة المريض ممكن بناء على ال
symptoms بناء على ال history ممكن أبدأ أستخدم ال
ال immunological techniques ل different
proteins الموجودة في هذه ال fraction اللي طبعا
فيها مشكلة أو abnormal
تمام يبقى عندنا ال .. عملنا ال total protein ال
total protein طلعت abnormal اجينا عملنا
electrophoresis وقسمنا أو فصلنا ال fractions
المختلفة الآن بشوف أنا ال .. المشكلة موجودة بأي
fraction تمام؟ هل موجودة في ال album؟ هل موجودة
بال alpha one؟ بال alpha two؟ بال beta أو بال
gamma؟ وبعد هيك المشكلة إذا كانت موجودة بالـAlpha
-1 زي ما قلنا بنركز يبقى على الـAlpha-1 وإيش
البروتينز الموجودة بالـAlpha-1 وزي ما قلنا إيش
البروتينز اللي ممكن أنا أقيسها وأشوف إذا كان فيها
مشكلة أو لأ A quantitation of total serum protein
and its individual fractions is of value on the
diagnosis of certain acute and chronic disorders
Plasma proteins are often still classified into
groups according to their electrophoretic mobility
كما قلنا هو الألبوم الـ α1 و الـ α2 و الـ Beta و
الـ Gamma الآن احنا قلنا إنه بنعمل separation
لسيرم تمام؟ Serum protein electrophoresis طب ليش
ما نستخدمش لبلازمة تمام؟ و بنعمل electrophoresis
لبلازمة ويكون لنا plasma protein electrophoresis
لأن الـ Plasma موجود فيها الـ Fibrinogen الـ
Plasma تحتوي على الـ Fibrinogen ولما بنيجي بنعمل
Separation باستخدام الـ Electrophoresis ل .. و الـ
Plasma Proteins بيعطيني Band في الـ Beta Region و
الـ Band هذه ممكن يتم تشخيصها خطأ على إنها
Paraprotein اللي بتظهر في حالات ال multiple myeloma
عشان هيك بنستخدم ال serum بدل ال plasma لأن ال
serum طبعا صار في excluding واتخلصنا من
الفيبرينوجين هذا
عنا اللي هو normal serum protein electrophoresis
يعني كيف تكون عنا اللي هو ال bands وهنا في حال ال
plasma شايفين في حال ال plasma ظهرت إن بيك هنا في
الـ beta تمام والبيك هذه بتشبه لحد ما البيك اللي
ممكن تظهر في حالات ال multiple myeloma عشان هيك
بنستخدم ال serum ومش ال plasma تمام،
هنحكي الآن شوية عن ال serum protein
electrophoresis عبارة عن simple technique for
separating serum proteins والـ Solid Support اللي
بنروح نحط نفس البروتينات بنستخدم cellulose acetate أو
agarose gel وطبعا من خلال ال Electrophoresis بيصير
فيه Separation للبروتينات الموجودة بالدم إلى أقسام من
Alpha 1, Alpha 2, Beta and Gamma Globulins
طبعا Electrophoresis أكيد الكل يعني أخذ وعارف عنه
اللي بيتم طبعا من خلاله فصل لبروتينات طبعا
البروتينات بتكون بتحمل شحنات تمام والشحنات
المختلفة و ال size لها البروتين بيعمل على فصلها
إلى طبعا يعني ال ال ال bands المختلفة اللي حكيناها
بالعادة، buffer قلوي pH 8.6 يسمح بتحريك لجهة
الـ anode بسبب تحريك نت charge سالب لجميع البروتينات
الـ serum buffer 8.6 يجعل جميع البروتينات تحمل
نوع شحنة سالبة وبالتالي لما نعمل Electrophoresis
هتتجه هذه ال proteins باتجاه ال anode بالنسبة ل
migration إن أسرع ال protein هو ال albumin أو طبعا
زي ما قلنا في عندنا اللي هو ال pre albumin اللي
بيكون قبله طبعا بعد هيك في عندنا اللي هو ال alpha
1 في عندنا ال alpha 2 ال beta واللي هو الأبطأ
fraction هي الـ Gamma بعد عملية الـ Separation طبعا
مش هنقدر نشوف ال proteins إلا بعد صباغتها وبالتالي
acid fixed then stained by dyes to visualize on
support media cellulose acetate
طبعا بعد هيك ممكن نستخدم الـ densitometer زي ما
حكينا سابقا عشان نشوف ال concentration أو ال
percentage ل ال peaks المختلفة من ال total protein
the
most important diagnostic use of serum protein
electrophoresis is for the recognition of
paraproteins تمام، هي مفيدة جدا في ال diagnosis
والكشف عن وجود بعض ال proteins وزي ما قلنا قلت هي
هذه بتكون في حالات ال benign أو malignant
gamopathies اللي هو في حالات ال multiple myeloma
برضه في إن disorders أخرى ممكن تكون ال ال ال
protein electrophoresis برضه مفيدة فيها زي ما
هنشوف كمان شوية هو أيضًا استخدام للتعامل مع خطرات
بروتينات أخرى مثل التهاباتية أو المناعية الذاتية
مناعية أو التهابات أو التهابات بروتينات أو التهابات
بروتينات بروتينات بروتينات بروتينات بروتينات
بروتينات بروتينات بروتينات بروتينات ب
زي ما قلنا طبعا ال solid sub-bottle بنستخدم إما
agarose gel أو ممكن نستخدم cellulose acetate وهنا
لدينا protein Electrophoresis لأكثر من sample تمام
ومبين بعض ال samples فيها عندنا مشكلة تمام زي ال
sample هادر ممكن يكون فيها ال paraproteins ممكن زي
ما قلنا ال paraprotein بنشوفها في حالات ال
multiple myeloma
ممكن حالات زي هيك اللي ممكن تكون إنها Polyclonal
Antibodies ممكن تكون في حالات اللي هو ال chronic
inflammations مثلا أو diseases طبعا الصورة هتوضح
أكثر لما نعمل densitometry ونشوف ال area أو
قدر كل band بتمثل من ال total protein طبعا هي إن
ال normal
percentage لكل band يعني أن ال album بيمثل 53% ل
65% ال alpha 1 2.5% ل 5% ال alpha 2 7 ل 13% ال
beta 8 ل 14% و ال gamma globulins 12 ل 22%
طب الآن احنا ممكن فعليا نحدد قد إيش كمية ال
protein قد إيش ال concentration ل ال album مثلا من
خلال ال electrophoresis أو قد إيش ال concentration
لل alpha oneoglobulins تمام فعليا ممكن يحدد لأن
بعد احنا قلنا ما هي الخطوة الأولى بعد ما نشتغل اللي
هو ال electrophoresis قلنا باستخدام ال
densitometer تمام ويقول إن هو عبارة عن جهاز بيشوف
قد إيش طبعا بناءً أنا على كمية ال protein الموجود
هيتم صباغة هذه ال band طبعا و الآن بناءً طبعا على
اللون الموجود يعني كل ما زاد عندنا اللون كل ما كان
فعليا في عندنا ال protein أكتر و عشان هيك ارتبطت
عندنا ال dye أكتر يبقى بنيجي باستخدام ال
densitometer بنشوف ال density لها ال dye طبعا و
طبعا بنحصل على من خلال ال densitometer على peaks و
بتم حساب ال area المساحة تحت ال peak والمساحة هذه
هتمثل الكمية ال protein هذا من ال total protein
طيب كيف بعدين ممكن هنحسب كمية ال protein؟ حسبة
بسيطة احنا بنكون حاسبين ال total protein يعني احنا
بنكون قايسين ال total protein باستخدام ال biuret
بنكون حاسبين كمية ال total protein باستخدام ال
biuret وطلعت مثلا ال total protein مثلا 9 gram
مثلا per
deciliter
طيب الان لو انا بدي احسب قد إيش كمية ال album لو
لجينا انه ال percentage لها المساحة هذه لل
album على سبيل المثال ستين بالمية يبقى ال
concentration لل album هتكون ستين على مية ضرب تسعة
تمام هذا بتكون لو كمية ال album اللي بال sample
اللي عندي ال alpha one مثلا طلعت عندنا خمسة بالمية
يبقى خمسة على مية ضرب
تسعة وهذا بتكون عندنا عبارة عن ال concentration ل
ال alpha one fraction
طيب عندنا الخط اللي هو المتصل هذا هذا بيبين ال
normal تمام الشكل ال normal الخط المتقطع هذا بيبين
اللي هو التغير اللي بيصير في الحالة المرضية هذه
الآن في هذه الحالة في عندنا nephrosis وفي حال ال
nephrosis قلنا بيصير فقد ل proteins
وبشكل أساسي اللي بيفقد عندنا ال albumin اللي هو
كمية أكبر من البروتين اللي بيفقد ال albumin وبعض
ال immunoglobulins طبعا هذا بيعتمد على ال
molecular weight للبروتين تمام يبقى زي ما واضح أنه
في عندنا صار انخفاض في ال albumin تمام صار في
عندنا انخفاض في ال albumin عندنا ال alpha و ال
normal هان صار في عندناالارتفاع في الـ
concentration لـ Alpha 2 طب ليش؟ لأن الـ Alpha 2
بتحتوي على نسبة كبيرة من الـ Alpha 2 Macroglobulin
و الـ Alpha 2 Macroglobulin هو عبارة عن بروتين
حجمه كبير وبالتالي صعب أنه يصير له filtration و تم
فقده عن طريق الكدن وبالتالي أنه بيرتفع ال
concentration ل الـ Alpha 2 fraction ال beta 2 عادية
و كما قلنا الوان بيبقى فقط لبعض immunoglobulins
وبالتالي بتنخفض اللي هو ال peak هذه حالة أخرى
hypogamaglobulinemia اللي هو عندي hypo يعني انخفاض
في ال gamma globulins اللي هو في الدم
hypogamaglobulinemia يبقى هذا عندنا كل الـ fractions
طبيعية تمام؟ لأن الخط المتقطع جاي مع الخط المتصل
إلا في حال الـ Gamma fraction تمام؟ في Gamma
fraction في أننا انخفاض بشكل كبير في ال percentage
تمام؟ لأن هنا في عندنا مشكلة و المشكلة هذه أدت إلى
انخفاض في ال immune globulins أو ال antibodies في
الدم حالة ثالثة اللي هو hepatic cirrhosis اللي هو
التليف الكبد التليف الكبد تمام بيبقى بيصير فيه
عندنا يعني انخفاض بشكل عام في ال proteins لكن اللي
بينخفض أكتر ال albumin وبتلاقي أنه فعليا في عندنا
انخفاض في ال percentage ل ال albumin
مع اللي هو normal لأ ال alpha one و ال alpha two
لكن بيصير في عندنا اللي هو ارتفاع في ال beta مع ال
gamma فاهم و زي بيصير الاتصال طبعا ال ال ال gamma
هي اللي بيكون عندي أكبر ارتفاع لأن في عندنا
chronic infection او chronic يعني disease وبالتالي
في عندي polyclonal antibodies موجودة تمام؟ بيجي
ال immunoglobulins بترتفع بشكل كبير ومع الارتفاع هذا
اللي بيصير في ال gamma بيصير زي اتصال شايفين؟ فيه
اتصال بين ال beta مع ال gamma وهذا شكل مميز في
حالات الـ hepatitis الروزز واللي بيسموه beta gamma
bridging في هذا الشكل المميز اللي هو الـ Beta-Gamma
Bridging بنشوفه في حالات الـ Hepatic Cirrhosis
الشكل
الأخير اللي هو الـ Monoclonal Gamma Pathy زي في
حالات الـ Multiple Myeloma هنا إنه يعني انخفاض
بسيط فيه اللي هو الـ albumin مع الـ normal لال
fractions الأخرى ولكن في عندي الارتفاع و peak حاد
في ال immunoglobulin أو في الجامة طبعا طبعا مع
زيادة اللي هو بشكل كبير هذا بيدل على أنه في عندي
monoclonal antibodies موجودة طبعا وبالتالي زي ما
قلنا هذا بتصير في حالات اللي هو ال multiple
myeloma لكن في حالات اللي هو ال chronic diseases
بيصير في عندنا زي ما قلنا اللي هو polyclonal
ما يكونش في عندي sharp peak موجودة شايفين ال peak
لأنه في عندي ال different antibodies صار في صار
في زيادة
طيب، عندنا أيضًا من الـ methods اللي بتستخدم لفصل
لبروتينز الـ Isoelectric Focusing وإذا كان فاكرين
في بداية كلامنا عن البروتينز قلنا إنه في عندنا الـ
Isoelectric Point وفعليًا بهذه الـ method بيتم
استخدام الـ Isoelectric Point لفصل لبروتينز
يبقى بتتم فصل البروتينات بناءً على الـ Isoelectric
point بيتم استخدام في هذا ال technique مركبات اللي
هتسمى Ampholites of varying Isoelectric point و
هذه ال Ampholites بالأجار اللي هستخدمه بتيجي
بتعملي pH Gradient يبقى بتعملي
البروتين عندما يتم تدرجه
إلى البروتين الإيزوجيل يتحول إلى مجال الإلكتروني
يبقى بتتم وضع البروتين وبعدين بتتم طبعا التوصيل
بطيار كهربائي الآن البروتينات هتبدأ يصير لها migration
هتبدأ تمشي في الجل و زي
ما قلنا إن احنا فينا اختلاف في ال pH وفينا تدرج في
ال pH الآن لما بيصل بيتساوى ال pH للوسط مع ال
isoelectric point ل ال protein إيش بيصير بيها
في هذه الحالة؟ اه قولنا إنه بيصير ال net charge ل ال
protein zero وما زال مش عندي شحنة على ال protein
يبقى ال protein إيش هتصير فيه؟ هيتوقف عن ال
migration لأن إيش بيخلي ال protein يمشي في تيار
كهربا؟ الشحنة اللي بيحملها إذا حصلت تساوية الـ pH
مع الـ isoelectric point فسيكون الـ net charge
مُزالة و سيتوقف البروتين عن الـ migration وهذه
الفكرة اللي بتستخدم في الـ isoelectric focusing زي
ما قلنا اللي هو الـ Ampholites اللي بتعمل التدرج في
الـ pH بنحط اللي هو البروتين اللي بدنا نفصلها و
بنوصل طيار كهربائي زي ما قلنا بتبدأ ال proteins
تتحرك ووين بيصير إنّها بتساوي البيئة مع الـ
isoelectric point بيتوقف ال protein وأكيد طبعا هنحتاج
إلى صباغة عشان نشوف ال different bands الـ
immunochemical methods احنا قلنا إنّه بعد ال
separation لـ Proteins عن طريق الـ Electrophoresis
وقلنا بنستخدم أو بنشوف المشكلة في أي fraction
موجودة وبعد هيك بنبدأ نشوف ال fraction هذه إيش ال
proteins اللي موجودة فيها وبنبدأ نفحص ال proteins
المختلفة ونشوف إذا كان المشكلة فيها أو لأ يعني كل
protein ممكن على حدة تمام أو بناءً زي ما قلنا على
يعني إيش التصور لطبيب بناءً على ال symptoms وبناءً
على ال history وبناءً ممكن على فحوصات أخرى من خلال
الـ Immunochemical methods بنفحص البروتينز المختلفة
وبنشوف إذا كان في عندي abnormality في هذه
البروتينز طبعا عندنا من ال methods اللي بتستخدم
ردًّا على ال immunodiffusion في عندنا
immunoelectrophoresis immunofixation
electrophoresis electroimmunodiffusion و
immunonephelometry هذه methods مختلفة، وزي ما قلنا
تستخدم لتحديد the proteins أو concentration لـ proteins
مختلفة حسب وين عندي المشكلة في أي fraction طيب
آخر جزئية في هذه المحاضرة قلنا إنه ممكن برضه نقيس
الـ protein concentration في body fluids أخرى زي ال
urine وزي الـ CSF، الـ urine proteins بجارة of
proteins found in urine arises from the blood
وعندنا بعض البروتينات جاية من طبعا الـ kidney ومن
الـ urinary tract ممكن يظهر عندنا proteins في ال
urine لأنه طبعا صار في فلترة لهذه البروتينات من
خلال الـ glomerulus في النفرون، هذا الشكل بيمثل
النفرون، و النفرون هو يعتبر الـ functional unit في
الـ kidney، ولما نحكي على الـ kidney هنحكي على
النفرون، إن شاء الله. الآن بتصير عندنا عملية
filtration للدم، الدم بيدخل من afferent arteriole و
بيصير عندنا عملية filtration للدم، والمفروض ان هنا
عند الـ pore size للـ agglomerul يلازم تسمح بمرور
بعض المواد الموجودة في الدم، الآن ممكن يصير في عندي
خلل في الـ glomerulus، وهذا يسمح ممكن بمرور مركبات
الـ molecular weight تباعتها كبيرة، وتبدأ تظهر
عندي هذه المركبات ومن هذه البروتينات في الدم، الـ
routine screening in urinalysis، طبعا في أن
الـ qualitative test for proteinuria are
commonly performed using a reagent strip، تمام في أن
الـ reagent strip هذا اللي بيتم طبعا يعني غمسه في
الـ urine وبعدين حسب اللون اللي بيظهر عندنا، تمام
ممكن يقول يدلّ تقريبا كمية المركبات المختلفة
الموجودة في الـ urine ومن ضمنها طبعا الـ protein
بجهد، طريقة ممكن من خلالها نشوف تقريبا كمية
البروتين الموجودة فيها، أيضا method acid
-precipitation اللي هو باستخدام الـ
Trichloroacetic Acid، البروتين يتميزون كميات صغيرة
وبعد ذلك يمكن نقيس الـ turbidity باستخدام الـ
Spectrophotometer
وآخر إيش الـ proteins in CSF، CSF formed in the
choroid plexus of the ventricles of the brain، عن
طريق الـ ultra filtration of the blood plasma، يعني
برضه عن طريق الـ filtration ultra filtration الـ
blood plasma أو بتكون عندنا cerebrospinal fluid الـ
CSF، أيضًا من الفحصات اللي بتُطلب لما بتم سحب عينة
CSF، بتم طلب له فحص البروتينات أو كمية البروتين
الموجودة، abnormally increased total CSF proteins
may be found in conditions
وهناك تزايد الـ permeability عندما يحدث الـ Ultra
-filtration، إذا كانت الفلترة زادت
الـ permeability، يمكن أن يزيد كميات البروتين
الموجودة بالـ CSF، وهذا يمكن أن يكون بسبب الانفكاشن
البكتيريا، الانفكاشن الفيرال أو الـ fungal meningitis
أو التهاب السحايا
المستخدمات المستخدمة أكثر هي التربيدومتريك، يستخدم
التربيدومتريك، يستخدم التربيدومتريك، يستخدم التربيدومتريك
يستخدم التربيدومتريك، يستخدم التربيدومتريك، يستخدم
التربيدومتريك، يستخدم التربيدومتريك، يستخدم التربيدومتريك
يستخدم التربيدومتريك، يستخدم التربيدومتريك، يستخدم
التربيدومتريك، يستخدم التربيدومتريك، يستخدم التربيدومتريك
يستخدم التربيدومتريك، يستخدم التربيدومتريك، يستخدم
التربيدومتريك، يستخدم التربيدوم
وهيك بنكون انتهينا من فصل الـ proteins، و الله
يعطيكم الف عافية، ونلقاكم على خير إن شاء الله، و
السلام عليكم ورحمة الله وبركاته