Over-expression and B-cell linear epitope identification of Woodchuck hepatitis virus (WHV) core protein
目的 建立高效表达土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg)的方法并对其B细胞表位进行鉴定.方法 分别构建不同截短型WHcAg的质粒以了解能大量表达并形成WHV核心颗粒的区段,利用变性WHcAg制备单克隆抗体以寻找能与WHcAg线性B细胞表位结合的单克隆抗体.结果 WHcAg前144或149氨基酸残基能够大量表达并能形成颗粒样结构.这2种截短型WHcAg能够在大肠杆菌中表达并组装成直径为34 nm的核心颗粒,最终纯化获得毫克级的核心蛋白.截短型WHcAg保留了全长WHcAg的抗原性,而且变性WHcAg存在另外的B细胞线性表位,利用变性WHcAg进行免疫制备单克隆抗体获得的5株抗体均针对WHcAg的N末端表位,该表位在WHcAg和HBcAg高度保守.结论 建立了高效表达WHcAg的方法,制备了针对WHcAg单克隆抗体.并对WHcAg的线性B细胞表位进行了鉴定,发现WHcAg和HBcAg的N末端存在共同的线性B细胞表位。