TRAP染色(左:红色)和ALP染色(中:褐色)的单染色,双重染色(右)也呈阳性。会导致酶失活,因此推荐80%乙醇固定。TRAP·ALP双重染色。仅用酒精2次固定的样品,ALP染色呈强阳性。福尔马林固定1个月的临床案例(骨软骨瘤)中TRAP染色呈阳性,但不能ALP染色。需要添加ZnSO4,作为ALP活化剂。1%ZnSO4,来补充Zn离子。3天(Histra-DC,8~16°C)后的大鼠膝关节。TRAP/ALP双重染色。TRAP/ALP染色试剂盒(Wako,产品编号:294-67001)。37°C,反应时间从30分钟调至45分钟或60分钟。两者色调平衡,染色效果好(图5)。用1年龄小鼠腰椎的EDTA脱钙石蜡切片,进行TRAP/ALP双重染色。