省けるため、コスト低下と大幅な所要時間の短縮(約2時間、従来法の1/4)ができる。現状では、QP法はPCR法の感度に及ばないものの、血液などを試料とした判定の簡易迅速化に有効である。ねらい牛の遺伝病は、現在、血液検査で保因牛同士の交配を避けることにより発生を防いでいるが、スーパーカウなどの優秀な牛が遺伝病を保因している場合、遺伝資源の有効活用が制限される。そこで、受精卵段階で遺伝病保因の有無を判定し、遺伝的に優れ、かつ遺伝病フリーな受精卵だけを移植できる遺伝病診断技術の開発が望まれている。本課題では新規な蛍光消光プローブであるQProbeを用いた遺伝子解析技術(QP法)に、平成13年度成績「受精卵の遺伝子解析による牛の遺伝性疾患診断法の開発」における少数細胞からの効率的なDNA抽出法を組み合わせることにより、牛受精卵の一部の細胞を材料とした簡便・迅速・安価な遺伝病診断技術を開発する。プライマーを設計して、QProbeはQP-1、プライマーはフォワードにF1、リバースにR2を選択する。表1の条件でリアルタイムPCRを行うことにより、正常型(ワイルド型)と変異型を安定して判定することができる(図1)。変異)においてそれぞれ10、25および50pgである。桑実胚から採取した細胞を用いてQP法とPCR-RFLP法を比較したところ、PCR-RFLP法が、割球5細胞以上で正常型、ヘテロ型それぞれの遺伝子型を100%正しく判定できるのに対して、QP法は、10細胞で正常型を100%、ヘテロ型を89%正しく判定できる(表2)。約4時間、電気泳動に約1時間で、合計8時間程度が必要であるが、QP法は準備からリアルタイムPCR終了まで約2時間で、すぐに遺伝子型を判定できるため所要時間を従来の1/4程度まで大幅に短縮することができる(表3)。成果の活用面・留意点QP法は、家畜において遺伝性疾患をはじめ様々な遺伝的形質について受精卵段階での遺伝子型判定に応用可能と考えられるが、現状では、QP法はPCR法の感度に及ばないことから、DNA量を十分に確保できる血液などを試料とした判定の簡易迅速化に有効である。QP法およびバンド3遺伝子型診断法は、特許取得または出願されており、営利目的の利用には権利者から特許実施の許諾を得る必要がある。用語の事典として使えます。Fisheriesこんにちは!お手伝いします。こんにちは!お手伝いします。