進行症例は、非常に難治性であることが特徴である。活用して、同疾患の新規治療戦略の構築を行う。vivoの実験系で実証し、さらにその抗腫瘍効果のメカニズムを解明することで、新しいMTMCT臨床へと繋がる成果を得ることを目的としている。非常に難治性の疾患である。これまで動物モデルや細胞株が存在しなかったため新規治療研究が行われてこなかったが、申請者は世界で初めて動物モデルと細胞株を樹立した。探索し、その効果を動物モデルを用いて実証することを目的としている。細胞株NOSCC1を用いて、CRISPR-Cas9ノックアウトスクリーニングを実施した。NOSCC1に対してCas9タンパクを導入後、sgRNAライブラリを発現するレンチウィルスをインフェクションさせた多様な遺伝子プロファイルを持つ細胞集団を作成し、スクリーニングの選択圧としてシスプラチン添加を行った。セレクション完了後にgDNAを抽出し、生存細胞に取り込まれたsgRNA配列のアンプリコンシーケンスを行い、リファレンス細胞との比較を行った。ネガティブスクリーニングの結果、25個の遺伝子が見出された。10個の遺伝子について、細胞株を用いたノックダウン実験を行い、さらに4種類の遺伝子へと選別を行った。樹立しており、PDXマウス腫瘍を分割して多数のヌードマウスに再移植することで、多数の擬似的な担癌患者集団を作成することが可能であり、これらのマウスへの投薬によってヒトの腫瘍に対する抗腫瘍効を検証できる。新たに1種のPDXが樹立され、腫瘍増大の自然史を含めた予備的データ取得を完了しており、新規標的遺伝子に対する阻害剤投与試験のフェーズを速やかに実行する体制が構築されつつある。ついて、細胞株を用いたノックダウン実験を行い、抗腫瘍効果の確認を行う。標的遺伝子を阻害する化合物を調査し、細胞株及び患者腫瘍由来マウスモデルを用いて、効果を実証する予定である。)卵巣癌は婦人科領域において最も予後不良な癌種の一つであり、抗癌剤への容易な耐性獲得がその主因である。BRCA遺伝子変異との合成致死性に基づき開発されたPARP阻害剤オラパリブが使用可能になったが、より広く適応可能且つ治療効果の高い分子標的薬の開発が望まれている。VRK1は卵巣癌細胞株における網羅的ノックダウンスクリーニングによって見いだされた新規治療のターゲット遺伝子であり、本研究では、VRK1を高発現する卵巣癌PDXモデルを用いて、VRK1阻害剤による腫瘍増殖抑制効果や、卵巣癌におけるVRK1阻害の合成致死性への関与と、それを引き起こす分子メカニズムを解明することを目的とする。VRK1は細胞分裂に関与するセリントレオニンキナーゼの一つであり、多くの癌種で高発現している。ルテオリンはVRK1の発現を抑制するフラボノイドであり、卵巣癌に対するルテオリンの抗腫瘍効果とそのメカニズムを検証した。ルテオリンの投与によって卵巣癌細胞株の増殖が抑制された。卵巣癌患者の腫瘍を移植したマウスモデルにおいても、ルテオリン投与によって腫瘍の増殖が抑制された。遺伝子変化の網羅的解析などによって、ルテオリンの抗腫瘍効果メカニズムは、癌抑制遺伝子であるTP53経路の活性化であることが示された。ルテオリンは緑黄色野菜に含まれるフラボノイドの一つで、癌を抑制する作用が知られているが、卵巣癌での効果を検証した報告はなかった。本研究では卵巣癌患者の腫瘍を用いた動物モデルにおいて、ルテオリンの経口摂取によって癌の増殖を抑制できることを示した。ルテオリンが癌を抑制するかのメカニズムも検証し示した。既存の抗がん剤などに比べて、ルテオリンというより自然な成分を用いて、新しいがん治療戦略の可能性を示した。)卵巣癌は婦人科領域において最も予後不良な癌種の一つであり、抗癌剤への容易な耐性獲得がその主因である。再発卵巣癌は多発的な病変を形成するが、抗癌剤治療によって縮小する病変と増大する病変とがしばしば混在し、この病態は近年では腫瘍内の遺伝子多様性(heterogeneity)の観点で論じられてきたが、腫瘍周辺の微小環境の違いがエピジェネティックに誘導する悪性形質である可能性がある。本研究では、これら微小環境が関与する抗癌剤耐性メカニズムを解明し、再発卵巣癌に対する新規治療戦略への布石を作ることを目的とする。【目的】多発的な病変を形成する再発卵巣癌では、抗癌剤によって縮小する病変と増大する病変とがしばしば混在し、これは微小環境の違いによって腫瘍にデリバリーされる酸素量と抗癌剤量に偏りが生じると、かえって癌の増殖を促進させてしまうという仮説に基づき検証を行った。【成績】NOS3は、IC50量の1/10~1/100量のCDDPを投与することで細胞増殖が有意に亢進した。この濃度帯の細胞増殖亢進は20%酸素培養に比して1%酸素培養で顕著だった。メタボローム解析では、抗癌剤からの保護作用を持つとされる還元型グルタチオン及びグルタチオン総量が、IC501/100量の細胞で増加していた。(抗癌剤ホルミシス)、低酸素状態によってこの作用が増強することが判明した。卵巣癌の腹膜微小環境においては、酸素や抗癌剤のデリバリーに不均衡が生じることは十分あり得、抗癌剤ホルミシスを念頭において治療に当たる必要があると考えられる。University。