得られた液性因子は、伸展刺激を与えないこれらの細胞から得られた液性因子に比べ、優れた骨再生能を有することが明らかになった。その結果、伸展刺激を与えた細胞から得られる液性因子は血管再生を促進することにより、骨再生を促すことが遺伝子レベル、タンパクレベルで明となった。vitroの実験系においても、伸展刺激を加えた細胞から得られた液性因子は優れた血管形成能があることがわかった。間に大きな差は認められなかった。再生された組織を取り出し、コラゲナーゼ処理後に細胞培養をすると、間葉系幹細胞の性質(骨、軟骨、脂肪の3系統への分化、幹細胞マーカーの発現)を示す細胞が培養できた。この細胞集団は伸展刺激を加えた細胞から得られた液性因子において数が増加していた。細胞種間での差は認められなかった。今年度までの実験結果から、血管形成と共に、骨組織再生の場において、幹細胞の集積も重要な役割を担っていることが示唆された。今後、組織再生の場に集まってくる幹細胞のキャラクタライゼーションを進め、さらには、どこから組織再生の場に集まってくるのかを解析していく予定である。大きな差は認められなかった。組織再生の場に集まってくる幹細胞のキャラクタライゼーションを進め、さらには、どこから組織再生の場に集まってくるのかを解析していく。defect群):骨切り後、創外固定装置で4mmの欠損を作製、固定。defect群):骨切り後、創外固定装置で2mmの欠損を作製、固定。以上の3群の延長組織、骨間隙の組織を取り出し、培養を行った。代表的な幹細胞マーカー、血液系細胞を除外するLineageマーカーを用いてフローサイトメトリーを行った。すべての群の細胞集団から、いわゆる間葉系幹細胞の集団が認められた。有する間葉系幹細胞を含むことが明らかとなった。すべての実験群から間葉系幹細胞の集団が得られたことより、骨形成がされるかどうかは間葉系幹細胞の有無が問題ではなく、細胞を骨形成性細胞に導くシグナルによることが示唆された。ヒトの自己再生能力を最大限に活用した大型組織再生法である。仮骨延長術の治癒過程では、生体に内在する幹細胞や前駆細胞の集積、増殖が重要な働きを担っている事が推察されているが基礎的解析は十分になされていない。本研究ではマウス仮骨延長モデルを用い、骨延長治癒において重要な役割を持つと考えられる機械的刺激(細胞伸展刺激)が幹細胞、前駆細胞に与える影響を解析する。骨延長術を詳細に解析することにより生体内での間葉系幹細胞の挙動を捉え、生体本来が持つ再生現象の一端を明らかにする事が本研究の最終目的である。本研究は、細胞移植を必要としない再生医療実現のための第一歩である。ヒトの自己再生能力を最大限に応用した大型組織再生法である。全ての組織再生が認められる、ヒトでは極めて稀な再生現象である。仮骨延長術の治癒過程では、生体に内在する幹細胞や前駆細胞の集積、増殖が重要な働きを担っている事が推察されているが基礎的解析は十分になされていない。骨延長術を詳細に解析することにより生体内での間葉系幹細胞の挙動を捉え、生体本来が持つ再生現象の一端を明らかにする事が本研究の目的である。本研究は、細胞移植を必要としない再生医療実現のための第一歩である。)はじめに、申請者らが解析対象としてきたマウス骨延長モデルを用いて、間葉系幹細胞の局在解析に取り組んだ。PDGFレセプターα,Nestinなど)を数種類組み合わせた免疫染色を経時的に行った。延長終了時の骨延長部のサンプルでは間葉系幹細胞が延長部に集積している像を得た。延長部の組織を取り出し、コラゲナーゼ、ディスパーゼで処理した後に間葉系幹細胞培地を用いて培養を試みた。分化能)を有していた。形態学的にも繊維芽細胞様の細胞であった。以上のことから、マウス骨延長治癒過程に置いて内在性の間葉系幹細胞は延長部に集積し、骨、軟骨再生に寄与していることが示唆された。細胞移植治療はこれまで治癒が困難であった大型組織欠損の再生を実現しうる可能性を持っている。細胞移植治療には多くの問題点も残されているのも事実である。細胞培養のための時間と経費、細胞品質の安定性の問題、移植後の腫瘍化、細胞採取に伴う侵襲などが挙げられる。これらの問題は、細胞を体内から取り出し、培養するため起こる問題である。そのため、もし内在性幹細胞の移動をコントロールすることができれば、再生医療は新しいステージへと進むことができる。University。