2~3週間後、EJBは非接着造血細胞を懸濁液に放出し始めます。注:この中断細胞放出期間は、細胞株によって異なる場合があり、また、細胞株に依存する。懸濁造造細胞を収集し、EBプレート上の培地(ステージ2培地)を補充します。遠心分離機の懸濁液細胞を200xgで3分間用した。mMグルタマックス、および1%ペニシリンストレプトマイシンを補充した)。mL)またはコーティングされていない6ウェル組織培養プレート(3mL)に細胞を紡いだ。日ごとにメディアを変更します。注:ステージ3のステップ3.4.1~3.4.5は3~4日ごとに繰り返し、元のEBプレートから最大3ヶ月間回収されたサスペンションセルを繰り返すことができます。U/mL)で細胞を48時間刺激します。ng/mL)で細胞を刺激します。ng/mL)でマクロファージを刺激します。血球細胞計でそれらを数えることによって、6ウェルプレートの6ウェルプレートあたりに産生される造血性懸濁液細胞の数を決定する。前に述,べたように遺伝子発現解析およびフローサイトメトリーを用いてマクロファージ特異的マーカーおよび偏光マーカーの発現を検出する。6ウェルプレートのマクロファージの1ウェルでフローサイトメトリー実験を行う場合、成熟培地を吸引して細胞を収穫し、2mLのPBSで洗浄し、室温(RT)で5分間の酵素フリー細胞解離緩衝液2mLでインキュベートする。ピペットは、マクロファージを取り外して収穫するために繰り返し上下します。