ATM)カラムを利用した弱陽イオン交換体/親水性インターラクション(WCX-HILIC)ミックス・クロマトグラフィ分離モードボトムアップ・プロテオミクスでは、逆相クロマトグラフィHPLCカラムを使用するのが一般的ですが、トップダウン・プロテオミクスでは、異なるクロマトグラフィ分離モードが必要となります。Modification)が生じた後、その組み合わせで派生する700を超えるヒストンH3のバリアントを同定しました。この難しい解析において質量分析装置に負荷する前に、これらのバリアントを非常に良く分離するクロマトグラフィが必要となります。A弱陽イオン交換体樹脂が充填されたキャピラリーLCカラムで可能となりました。ACNを添加した移動相による親水性インターラクションを用いて、アルギニン残基やリシン残基のメチル化で生じた極性の変化による翻訳後修飾箇所の違いが、分離につながります。弱陽イオン交換体樹脂は、pH4以下で(−)の電荷を喪失します。このWCX-HILICミックス・クロマトグラフィ分離モードはACN濃度を下げたり(親水性インターラクションを弱める)、pHも下げたり(電荷的吸着を弱める)して、完全に揮発性の移動相で使用できます。溶出してくるタンパク質を、質量分析装置(MS)に直接負荷できます。培養細胞内のアミノ酸を使用した安定同位体標識)を用いて、アルギニン残基とリシン残基をラベル化して検出した事例です。3μm粒径樹脂より分離が良いです。TypeとSuz12ノックアウト株)における、ヒストンH3の翻訳後修飾箇所や量を比較した事例です。H4)分析ヒストンH4はリシン残基のアセチル化に特徴があります。多くのアセチル化したアイソフォームは、よりいっそう(+)電荷が少なくなりますので、WCX-HILICでは初期の段階で溶出されます。下記のクロマトグラムはリシン残基のアセチル化に加えて、多数の翻訳後修飾をもつヒストンH4アイソフォームが溶出する位置を示しています。13:R86Topics>>。