P200で手早く加える(注8)。30分後に溶液の色の変化を調べる(表1)(注9)。定性試験Dセットとして1〜4の番号を記したチューブを用意し、以下の反応液を調製する(表2)。すべてのチューブに基質と阻害剤を入れたのち、酵素液を最後に手早く加え、酵素液添加30分後の様子を観察する(注9)。注意:酵素溶液は2の実験結果を参考にし、酵素がもっともたくさん含まれていると考えられる分画を使用する。チロシナーゼ分画チロシナーゼ分画の処理前後(30分)の色の変化を調べる(注9)(表3)。注1:皮まですりおろす。注2:じゃがいものカスが濾液に入らないように注意する。注3:上清には、デンプン粒が入らないように気をつける。上清を2500rpmで5分遠心分離することにより、デンプン粒の混入を防ぐ方法もある。注4:カラムは、常に溶液で満たされている状態を保ち、涸らさないように注意する。注5:沈殿しているでんぷんを吸わないように気をつける。注6:混ぜるとき、内部の溶液を泡立てないように注意する。注7:タンパク質比色検定試薬は、タンパク質と結合すると青く発色するので、タンパク質の濃度が高いほど濃い青色となる。注8:チロシナーゼ分画は手早く最後にいれる。注9:室温によって、反応時間を10〜30分の間で適宜、調整する。実験前チロシン溶液の調整法に注意する(詳しくは『試薬』へ)。実験中ゲル濾過のためのカラム操作において、デンプンを入れないようによく注意する。カラム操作の前に必ずマイクロチューブに画分を示す番号を記入する。同じ反応時間で実験結果を比較させるために、酵素特性の実験では、先に種々の溶液を準備させておき、最後に酵素液を手早く入れさせることを注意する。実験後タンパク質比色検定試薬は、所定の廃液ビンに集め、流しなどに流さないように注意する。酵素特性の実験から何が言えるのか、(c)粗抽出液およびチロシナーゼ分画は、実験終了時にどのようになっているか、違いと原因は何かなどの項目ごとに考えさせ、それらを含めた形で考察させることに留意する。分子量に大差のある色素を用いて、ゲル濾過クロマトグラフィーの原理を理解する実習と組み合わせることにより、実験の操作もスムーズになり、理解を深めることができる(『ゲル濾過クロマトグラフィーの使い方』参照)。酵素反応の至適pHや温度を求める実験などに展開させることもできる。熱による変性、基質特異性などの酵素の性質を確かめるための実験を学生自身が考案し、実行するようなプログラムにし、仮説から結果を導く実験のやりかたを習得するプログラムにすることができる。反応速度を速める物質で、触媒自身は、反応の前後で変化しない。ゲル濾過クロマトグラフィーカラムに詰めたゲルにサンプルを流して、試料の分子サイズにより篩わけをする物質の分離方法。ビーズ状のゲルには小さな孔が多数存在し、分子サイズの小さいものは、その孔を出たり入ったりしながら、ゆっくり移動する。大きな分子は、孔に入れずにゲルの間をすり抜けるため、早く移動する。特定の基質の立体構造を認識して、その基質に対してのみ反応を促進する酵素の特性。