Advancedシステムに独自の技術を盛り込んでいる。IRES配列と蛍光タンパク質(mCherry、ZsGreen1)マーカーを利用することにより、発現調節、誘導が良好なクローンの選抜を容易に行え、スクリーニングにかかる時間を大幅に短縮できる。site)配列を利用していることである。真核生物のmRNAは5’端に近い開始コドンから選択的に翻訳が開始される。IRES配列はリボソームを引きつけてmRNAの途中から2度目の翻訳を開始する。このため2つの異なる遺伝子がバイシストロニックに1つのmRNAから翻訳されることになる(図1、2)。バイシストロニックに転写される2つ目の遺伝子の発現レベルは蛍光タンパク質マーカーを指標に視覚的に容易にモニターできる。目的遺伝子の高い発現レベルと厳密な調節性が、一過性のプラスミド導入でも得られる(図3)。高い発現レベル、またはより厳密な調節性を示すクローンを必要とされる場合には従来法どおり、調節ベクター、応答ベクターをトランスフェクション後、安定株のスクリーニングを行うことで可能になる。Advanced調節因子と蛍光タンパク質ZsGreen1を発現する(パネルA)。Tet調節性の応答ベクターpTRE-Dual2は、mCherryとMCSにクローニングした2つ目の遺伝子を同時に発現(パネルB)。pTRE-Dual1(終売)はMCS上の任意の2つの遺伝子を同時に発現する。293細胞にトランスフェクションしてから14日後、ピューロマイシン選択培地上のコロニーは2種類の蛍光を示した(パネルA)。Advanced調節タンパク質とZsGreen1を共発現している。293細胞は赤色の蛍光を示している。Dox濃度依存的に減少するルシフェラーゼの発現(RLU)をパネルBに示した。IRES配列上流のMCSに翻訳されるORFをクローニングしていない状態では、蛍光タンパク質の発現が弱く、蛍光顕微鏡による検出が難しい場合がある。kbの遺伝子を挿入して使用することをお勧めする。ページの製品はすべて研究用として販売しております。ヒト、動物への医療、臨床診断用には使用しないようご注意ください。して使用しないでください。ための改変、商用製品の製造に使用することは禁止されています。タカラバイオ製品に関連するライセンス・パテントについては、ライセンスマークをクリックして内容をご確認ください。他メーカーの製品に関するライセンス・パテントについては、各メーカーのウェブサイトまたはメーカー発行のカタログ等でご確認ください。ウェブサイトに掲載している会社名および商品名などは、各社の商号、または登録済みもしくは未登録の商標であり、これらは各所有者に帰属します。