画像をクリックすると拡大表示されます。†クロマトグラフィーとは、物質を分離・精製する方法のひとつで、20世紀初め、ロシアの植物学者が植物色素クロロフィルを分離する方法として開発した。そのため、「クロマトグラフィー」とは、色を分けるといった意味合いを持つ。クロマトグラフィーには、電荷の違いを利用するイオン交換クロマトグラフィー、疎水性の違いを利用する疎水クロマトグラフィー、互いの親和性の違いを利用するアフィニティークロマトグラフィー、分子サイズの違いを利用するゲル濾過クロマトグラフィーなどがある。†ゲル濾過クロマトグラフィーは、物質の分子サイズを利用して分離する方法である。「カラム」と呼ばれる筒に詰められたビーズ状のゲルには小さな孔が多数存在する。物質は、分子サイズによってその孔に入ったり入らなかったりしながらゆっくり移動する。小さい分子ほど小さな孔にまで入り込み、移動に時間がかかる。大きな分子は、孔に入れずにゲルの間をすり抜けるため、早く移動する(図1)。移動距離が長くなり、遅く溶出する。小さな分子(緑)は、ビーズの小さな孔にも入り込むため、より移動距離が長くなり、溶出までに時間がかかる。分子量200万)を混ぜた溶液をサンプルとして、ゲル濾過クロマトグラフィーを行う。分子量の異なる物質を分離できることを確かめる。課題:色素溶液をゲル濾過クロマトグラフィーした結果について考察する。pH7.35〜7.65)PBSタブレット(タカラバイオ株式会社)10錠を蒸留水に溶かし、1リットルにメスアップする。試験管にNo.1〜8の番号を書いたラベルシールを貼り、試験管立てに並べる。ゲル濾過用カラムの下に廃液用ビーカーを置いて、カラムの上下の蓋を開ける。緩衝液が全てゲル内に移動し、カラムのフィルター上に緩衝液がなくなったら、すぐに下側の蓋をキッチリと閉める。試験管立てのNo.1の試験管がカラムの真下にくるようにセットする。0.5mlをカラムの上部に静かに加える。カラム下の蓋をはずし、カラム溶出液を試験管に回収する。色素溶液がすべてゲル内に移動したら、すぐに緩衝液をカラムの上部に満たす。カラム上部の緩衝液が半分になったら、緩衝液を上端まで足すという操作を繰り返す。試験管に溶出液が2.5mlたまったら素早く試験管立てを移動して、次の試験管に溶出液を入れる。この操作を8回繰り返す。溶出液の回収が終わったら、すぐに、カラム下側の蓋を閉める。カラムの上部に緩衝液を満たし、上側の蓋をする。画面左下のアイコンについて3秒間隔の自動でページを進めます。そのページで停止します。手動で次のページを表示します。一つ前のページに戻ります。Playerが必要です。