EDLのpreparationと組織からの蛋白質抽出PDFファイルマウスを頚椎脱臼後、後肢を切り落とす。皮をはぎ、筋肉を露出させる。筋肉にくっついた毛を取り、軽く膜をはぐ。muscleとして大腿筋の一部を取る。エッペンに入れ、液体窒素へ。肢を裏側にしてピンでシャーレに止める。慎重に筋肉をはいでいき、ヒラメ筋(Soleus)を露出させ、腱から腱までを摘出する。両足のヒラメ筋を摘出しエッペンに入れた後、液体窒素へ。EDL)を露出させる。腱から腱までを摘出する。両足をエッペンに入れ、液体窒素へ。ml/ml)を加える(重さを量る際は、キムワイプで水分を吸い取り、あらかじめエッペンの重さを量っておいてから組織重量を測る)。bufferを加えた後、ポッター型orテーパー型ホモジナイザーによりホモジナイズする。上清を別のエッペンに移し、それを用いてウェスタンブロットを行う。Bradfoed法によるタンパク定量を行い、含有タンパク量を吸光度により測定する(検量線にはBSAを用いる)。mgのタンパクを流す。泳動後、メンブレンにトランスファーし、ブロッキングの後washし、一次抗体でブロットする(4°C、overnight)。washした後、二次抗体に浸す(4°C、1時間)。mlを滴下し、フィルターに貼り付ける。暗室にて自動現像機を用いて感光させる。