生物学DNA精製2018年3月21日エタノール沈殿―DNAサンプルを濃縮する細胞から抽出したDNAサンプルは、濃縮や不要物の除去を行って精製する必要がありますDNAの精製には様々な方法がありますが、DNAのエタノール沈殿は、ライフサイエンス実験の中で最も頻繁に行われる操作の1つでしょう。DNAはエタノールに溶けないため、溶液にエタノールを加えるとDNAは沈殿しやすい状態になります。ここに、一価陽イオンを加えるとDNAの荷電が消えて凝集しやすくなり、DNAが沈殿します。この沈殿を回収すれば、濃縮されたDNAを得ることができます。以下にエタノール沈殿のプロトコールを紹介します。エタノール(滅菌した脱イオン水で希釈したもの)(-20°Cが理想的)※100%エタノールとは希釈していないエタノールのことで、一般的には規格99.5%以上のエタノールが用いられます<プロトコール>DNAサンプル溶液を適切な大きさのチューブに入れる。チューブに入れる量はチューブの容量に対して1/4以下になるようにする。例)1.5mLチューブの場合、DNA溶液は375μL以下イオン濃度を平衡化させるため、DNA溶液に対して1/10倍量の3M酢酸ナトリウム溶液を入れる。DNA溶液に対して2~3倍量の冷却した100%エタノールを加え、-20°Cで1時間以上静置する。rpm)で15分間遠心する。沈殿を崩さないよう注意しながら、ピペットやシリンジなどで上清をできるだけ取り除く。上清を取り除き切れない場合は再度遠心して上清を除去する。4°C、最大速度で5分間遠心する。μLのピペットなどで上清を取り除き、室温または37°Cで上清の残りを乾燥させる。乾燥させすぎるとペレットが溶けにくくなるので注意すること。希望する量の水またはTEバッファーで、ペレットを溶解する。ng/μL)では4°Cのほうが効率的。RNase処理―DNAサンプル中のRNAを除去するマキシプレップによって抽出したプラスミドDNAサンプルにはRNAが混在しています。以下に、RNase処理によってDNAサンプルからRNAを取り除く方法を紹介します。mLのTEバッファーで希釈する。mg/mL)を添加し、室温で30分間インキュベートする。mLのフェノールを添加し、1分間ボルテックスなどで激しくシェイクし、スイング型のローターを用いて最大速度で15分間遠心する。チューブを静置し、徐々に上部の水層と中間層が生じるまで待つ。mLのクロロホルムを加えて1分間激しくシェイクまたはボルテックスし、同様に最大速度で5分間遠心してスピンダウンする。