マイクロコンピュータ断層撮影(ダクト)は、2つの管状システムの視覚化、デジタル化、セグメンテーションを同時に可能にし、臓器アーキテクチャの3D解析を容易にします。注入とそれに続くマイクロコンピュータ断層撮影スキャンと断層撮影データのセグメンテーションを組み合わせたものです。Abstract肝臓はヒトおよびマウスで最大の内臓であり、高い自己蛍光は全器官レベルでの器官の3次元(3D)アーキテクチャを評価するための重要な課題を提示する。肝臓アーキテクチャは、血管や胆道樹を含む樹脂で満たすことができる複数の分岐性内腔化構造によって特徴付けられており、それ以外の場合は肝細胞が豊富なパレンチマに高度にステレオタイプ化されたパターンを確立します。このプロトコルは、マイクロコンピュータ断層撮影、または「ダクト」を二重樹脂鋳造を行うためのパイプラインを記述する。ダクトは、2つの異なるラジ不透明な合成樹脂を持つ門脈と共通の胆管を注入し、続いて組織固定を伴う。1つのローブ、または肝臓全体を光学的なクリア剤でクリアすることにより品質管理は、適宜注入されたサンプルの事前スクリーニングを可能にする。ダクトパイプラインの第2部では、ローブまたは肝臓全体をマイクロコンピュータ断層撮影(microCT)スキャン、(半)自動セグメンテーション、およびポータル静脈および胆道ネットワークの3Dレンダリングに使用できます。つのシステムの定性分析と、それらの空間的関係の定量的分析を可能にします。ダクトは、出生後および成人マウス肝臓に適用することができ、さらに他の管状ネットワーク、例えば、肺の血管ネットワークおよび気道に拡張することができる。現代の樹脂鋳造の最初の例の1つは、解剖からヒト肝臓で行われた。肝内胆管はゼラチンと混合した造影剤で満たされ、続いてX線CTスキャン2による画像化を行った。ダクト技術の目的は、3Dで2つの管状樹脂鋳造ネットワークを3Dで視覚化、デジタル化、解析することです。広範な既存の知識に基づいており、2つのシステムの同時3D視覚化と分析に拡張します。ダクトは、異なるコントラストの2つの放射不透明樹脂を混合し、これらの樹脂を2つの異なるネットワーク、特に共通の胆管およびポータル静脈に注入することによって、二重樹脂鋳造に単一樹脂鋳造を進んだ。ダクトは、出生後15日目(P15)の早い時期に再現可能な結果を有する若い出生後マウスに適用することができる。顕微鏡ベースのイメージング技術と比較して、主な利点は、ダクトが高速で、抗体を含まない、および肝臓組織の自己蛍光がイメージングを妨げないです。ネットワーク接続性、および灌流を記述する定量的データを提供する。管腔形成細胞の存在と、その事実上の形態形成の存在をチューブに区別することは、管内細胞が存在するが、アラジル症候群10の場合と同様に、チューブを形成しない器官を分析するために不可欠である。μm)のチューブに入らない樹脂の限られた浸透です。リンパ管などの注入入り口点を決定した後、任意の管状構造に適用することができる。したがって、肺や膵臓などの他の組織の全臓器アーキテクチャ分析を容易にする可能性があります。MicroCTセグメント化された画像は、ImageJなどの市販のイメージングソフトウェアまたはカスタム書き込みパイプライン(MATLABなど)を使用して処理できます。樹脂注入された肝臓は、体積、長さ、分岐、単一システムのトート、2つのシステム間の距離、または分岐点依存(システム1がシステム2分岐に近接して分岐する)などの2つのシステム間の相互作用について、ネットワーク拡張および接続性または定量的に定性的に分析することができる。樹脂注入、マイクロCTスキャン、CTデータセグメンテーションを含むダクトパイプラインは、2つの管状システムの建築メカニズムの詳細な定量分析と組み合わせることで、動物モデルにおける肝臓全体分析の標準を提供することができます。)の動物福祉規則と規制に従っています。本研究で使用された動物は、混合C3H/NおよびC57bl6Jバックグラウンドで野生型またはホモ接合型Jag1H268Q変異マウスであった。男性と女性の両方が研究に含まれていました。動物は出生後15日目に、または3〜8ヶ月の間に成人として使用された。準備樹脂溶液を準備します。二重系樹脂注入の場合、ステップ1.1.2-1.1.4に記載されているように黄色と緑の両方の樹脂を準備します。1マウスにつき希釈樹脂の1mLアリコートを準備します。イエローレジン:3:1希釈で透明希釈したイエローシリコーンゴム(高放射性pacity)を希釈し、注射用の黄色樹脂を調製します。グリーン樹脂:青いシリコーンゴム(検出不可能な放射性パシティ)と1:1希釈で透明希釈剤を混合し、ブルー樹脂を調製します。グリーン樹脂を生成するには、希釈した青色樹脂と希釈黄色樹脂を1:1の比率で混合します。色が均質になるまで、グリーン樹脂を完全に渦に入れる。注:ブルー樹脂は、マイクロCTでは検出できない非常に低い放射性pacityを有するため、異なる放射性pa00で2つの樹脂を作成するために黄色の樹脂で希釈する必要があります。樹脂には、発がん性物質である鉛クロメートが含まれている場合があります。それは火の中で有毒ガスを生成します。取り扱い、有害廃棄物として樹脂を処分します。注:成体マウス(>P30(出生後30日目)=P30-2年)の場合、一般的な胆管注入用注射セット#1(0.6mm外径のPE10チューブ)と注射セット#2(0.96mm外径のPE50チューブ)を使用して、ポータル静脈注入を行います。若い出生後マウス(P30まで)の場合は、胆管用とポータル静脈注射用の2つの#1注射セットを準備します(ポータル静脈が狭すぎてPE50チューブを収容するには注射セット#2はありません)。●射出セット#1を用意するには、PE10チューブの30cmを切り、できるだけ薄くなるまで引っ張ってチューブの片端を手で伸ばす(図1A、B、直径約0.15mm、伸ばされていないPE10チューブ径は0.6mm)。PE10チューブの非伸ばされた端を30G針に接続します(図1A、インジェクションセット#1)。