Vectors関連製品(2019年10月時点)また、OrigamiシリーズおよびRosetta-gamiシリーズホストには、細胞質ジスルフィド代謝のもうひとつの中心的酵素であるグルタチオンリダクターゼ(gor)遺伝子にもさらに変異が加えられています。pET-32およびpET-48コンストラクトをtrxB/gor変異体ホストで発現させることで、可溶かつ活性をもち正しく折り畳まれた目的タンパク質を最も効率よく回収できる可能性がさらに高くなります。以下の図は15°C、25°C、37°Cで誘導されたpET-32a(+)IL-2クローンの分析結果です。示されている組換え体は、BL21(DE3)で産生され、IPTGによって標的タンパク質の発現を誘導し、可溶性および不溶性画分が作製されました。同じ細胞数のサンプルをSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動(4-20%勾配ゲル)、クマシーブルー染色によって分析しました。ゲルAとゲルBのレーンは、それぞれ、同じ培養液中の可溶性および不溶性画分に対応します。誘導温度は温度は図中に示されている通りです。IサイトでクローニングされたIL-2を指します。GST•Tag)が組込まれています。可溶性で正しく折り畳まれて発現したGST•Tag融合タンパク質は、固定したグルタチオンを用いて精製可能です。還元グルタチオンを含むバッファーを用いて、穏やかな溶出を行うことができます。可溶なGST融合タンパク質の定量は、トランスフェラーゼ活性の測定によって行えます。Xa(IleGluGlyArg、pET-42シリーズ)およびエンテロキナーゼ(AspAspAspAspLys、pET-41シリーズ)のタンパク質切断部位は、ベクターに由来する配列を100%完全に除去し、もともとのN末端残基をもつ目的タンパク質を生成できるように設計されています。pET-40b(+)ペプチド配列に208アミノ酸のDsbA•Tag[pET-39b(+)]または236アミノ酸のDsbC•Tag[pET-40b(+)]を融合させ、高レベルな発現を行うために設計された製品です。Trx•Tagシリーズとは異なり、このDsbA•TagおよびDsbC•Tagベクターはペリプラズムへの局在化を促進します。pET-27b(+)目的タンパク質にペリプラズムへの輸送を促進するシグナル配列(ペリプラズムへ移行させるためのpelBシグナルシークエンス)を融合するよう設計されたベクターです。ペリプラズムは非還元的でフォールディングに適した環境であり、ジスルフィド結合の形成を促進することから、ある種の目的タンパク質では可溶性と活性が高まります。通常、シグナル配列は輸送に伴って、シグナルペプチダーゼにより切断されます。Vectors関連製品(2019年10月時点)以上、タンパク質を正しくフォールディングさせ、可溶性を高めるベクターについて紹介しました。これらの問題解決には、ベクター選択、ホスト選択両方からのアプローチが可能です。目的や状況に合わせて適切なものを選択し、試してみると良いでしょう。(編集註)データや解説は2009年1月当時のものです。一部の製品は2019年10月時点で販売停止となっております。大腸菌の菌体内は動物細胞などと大きく異なり、極めて還元的な環境となっています。pETシステムは、大腸菌を用いた組換えタンパク質のクローニング・発現システムのひとつです。酵素阻害剤は酵素による生化学的な反応を阻害するため、研究や医療な...2018年7月18日CRISPR-Cas9とは?原理をわかり...ゲノム編集ツールの中でも、世界中の研究室で使われているのがCRISPR-Cas9です。下記フォームでは、M-hub(エムハブ)に対してのご意見、今後読んでみたい記事等のご要望を受け付けています。メルクの各種キャンペーン、製品サポート、ご注文等に関するお問い合わせは下記リンク先にてお願いします。アルドリッチジャパン合同会社はメルクのグループ会社です。