HyogoAbstractヒドロゲナーゼは水素の分解・合成反応を触媒する金属酵素である。発生させない次世代のクリーンなエネルギー源として水素が注目を集めているが、高価な白金などの金属触媒を必要とせず、安価に効率よく水素の合成・分解を行う事のできるヒドロゲナーゼの工業利用が有望視されている。株(DvMF)由来の[NiFe]ヒドロゲナーゼは、酸素に曝露されると不活性な酸化状態をとり不可逆的失活を防ぐことが知られている(酸素抵抗性)。取ることがわかっているが(図1)、それらの立体構造については未だ詳細が不明な点が多いのが現状である。本酵素の基質は水素であり、とりわけ各酸化還元状態でのプロトン化状態を決定することは、本酵素の機能を理解するうえで重要である。分解能でそれぞれ結晶構造が報告されている[1,2]。メカニズムや酸素抵抗性の分子基盤についての知見を得ることを目的とした。種々の酸化還元状態における[NiFe]ヒドロゲナーゼの活性部位。活性部位と(予想される)架橋配位子を表す。右肩の数字は、それぞれの酸化状態での価数を表す。実験:還元型結晶の調製は文献[1]の方法に従い行った。すべての精製操作をグローブボックス内で嫌気的に行い最終精製標品を得た。結晶化はシッティングドロップ蒸気拡散法を用いて行った。対して蒸気平衡させた。空気酸化型結晶は、得られた還元型結晶を大気に暴露することで調製した。X線で回折実験を行った。用いてデータプロッセッシング、データマージング、データスケーリングを行った。サーチモデルとして、Phaser[4]を用いて分子置換を行い初期位相を計算した。REFMAC5[6]により行った。分解能を超える構造解析を行い、結晶構造中での水素の可視化を目指した。分解能のデータセットを収集した。