氷の上にキットコンポーネントを解凍し、穏やかに渦巻きと短い遠心分離機。次のように、氷の上または氷冷金属プレートホルダーにPCRマスターミックスを準備します。μLの最終体積が含まれている必要があります。次のPCRプログラムでサーマルサイクラーにチューブを入れます:5分間95°Cで初期変性。変性の45サイクル(15sのための95°C)、アニーリング(30sのための57°C)、および伸び(15sのための72°C)、72°Cで10分間の最終伸び、そして4°Cで無期限に保持する。2%アガロースゲルで10μLの反応を実行します。酵素およびdNTP残基を除去し、少なくとも20μLのDNase/RNaseフリー水で増幅されたDNAを溶出させるカラムベースの方法でPCR製品を精製します。分光光度計で精製したDNAを定量化します。ngを使用してください。28SRプライマーを使用して両方向に配列する。配列を公知の非変換配列(28SリボソームN5(RNA28SN5)と一致させる。位置C4447にC残基の存在を確認し、他の場所でCの代わりにT残基を確認してください。Stranded)を使用してシーケンシング用のライブラリを準備し、Elute-Prime-Fragmentステップでプロトコルを開始し、メーカーの指示に従います。入力RNA-SeqおよびMeRIP-Seqサンプルについては、サンプルを80°Cで2分間インキュベートし、素数のみで、さらに断片しません。イルミナプラットフォームを使用してシーケンシングを実行します。長さの最小値を持つ、単一または対端の好みおよび実験計画に従って行うことができます。ファイルを入力します。シーケンスをトリミングします。実行中に次のパラメーターを設定します。