4.0国際ライセンスの下に提供されています。データベースでは160を超えるGHファミリーに分類される大きな酵素クラスであり、アミラーゼ、セルラーゼを含む多数の酵素からなる。基質の一部(N-アセチル基やヒドロキシ基)が触媒基として働くものや、ごく一部の例外(触媒残基がチロシンやヒスチジンであるもの)が知られているが、基本的には、GHの活性中心は、ファミリーが異なっていてもほとんど同じと言ってよい。近くに存在することを見出した(1)。HypBA1はアノマー保持型の加水分解反応を触媒することが分かっており、この事実は、システインが求核触媒として働くことを強く示唆していた。Cys417が通常のアノマー保持型GHの求核触媒としてのAspやGluと同様に働くと予想された。Glu322はアラビノフラノースのO1ヒドロキシ基と水素結合しており、こちらは通常のアノマー保持型GHと同様に酸/塩基触媒残基として機能すると予想された。システイン修飾剤が酵素活性を失わせるという実験結果から、GHの活性中心がシステインであるという主張は古くから数多くあったが、その全てが後に否定され、AspとGluを触媒残基とするものが大部分であると判明している。したがって、HypBA1のように、前例のないアミノ酸残基が活性中心と予想される場合には、その反応機構を証明するためにさらなる検証が必要であった。反応が起こるのかということも疑問点として挙げられていた。システイン残基を特異的にラベリングするプローブとしての阻害剤の利用、そして計算化学的手法の導入である。特異的な阻害剤としては、アラビノフラノシル基を導入したハロアセトアミド化合物と、アラビノフラノース配置のシクロフェリトール化合物を用いた。前者は求核触媒残基がシステインであるペプチド:N-グリカナーゼのラベリングでの成功例があり、後者は多数のGH酵素で特異的阻害剤として用いられてきた経緯がある。HypBA1とこれらの阻害剤を反応させてX線結晶構造解析を行ったところ、いずれもCys417と共有結合した付加物が結晶構造中で観察できた。3状態にあたる結晶構造が得られたことになる(下図)。脱グリコシル化における問題点は、詳細なQM/MM計算を行ったところ、自由エネルギー的に無理のない遷移状態を取って反応することが明らかになった。システインの硫黄原子に亜鉛原子が配位することにより、この反応が進行しやすくなっていると推察された。酵素も同様に亜鉛残基に3つのシステインと1つのグルタミン酸が配位した活性中心を持っていることが分かっている。システインが活性中心であるGH酵素は今後も見つかる可能性があるといえよう。