Ells lembra células T, células B e células T, respectivamente, com VLRB sendo secretado a partir da forma de complexos decaméricos ligados por dissulfeto. Os anticorpos tradicionais utilizam o domínio da imunoglobulina como unidade estrutural básica e, portanto, são gerados por recombinação a partir dos segmentos gênicos variáveis ​​(V), diversidade (D) e de união (J) para a cadeia pesada do anticorpo e os segmentos gênicos V e J no cadeia leve do anticorpo. Conforme ilustrado na Fig. 33, o anticorpo resultante consiste em um domínio F(ab)/F(ab')2 que envolve o antígeno em grande parte por meio de interações mediadas por resíduos encontrados nas áreas de determinação de complementaridade (CDR) um, dois e 3 enquanto o domínio Fc permite a comunicação com diversas células do programa imunológico para provocar respostas biológicas. A habilidade dos anticorpos em realizar seus antígenos que possuem um grau realmente mais alto de especificidade e em rotular esses reagentes com corantes fluorescentes torna os anticorpos o componente chave da maioria das aplicações de citometria de fluxo.Autor Manuscrito Escritor Manuscrito Autor Manuscrito Autor ManuscritoEur J Immunol. Manuscrito do autor; acessível em PMC 2022, 03 de junho.Cossarizza et al.PageAo contrário dos anticorpos padrão, os anticorpos VLR utilizam a repetição rica em leucina (LRR) como uma unidade estrutural fundamental 205; o produto ou serviço genético resultante assume uma forma solenóide (Fig. 34A), em que o antígeno correspondente interage com resíduos situados na superfície côncava interna e usando uma construção de loop variável que se projeta da unidade LRR C-terminal de cobertura 206, 207. Os anticorpos VLR tornaram-se uma nova classe de ferramentas de análise biomédica notavelmente específicas, em virtude do enorme repertório de anticorpos VLR. Um protocolo estabelecido aproveita o repertório expansivo para produzir anticorpos VLR monoclonais específicos do antígeno DNMT1 medchemexpress com pronta aplicabilidade em procedimentos laboratoriais comuns, como citometria de fluxo e ensaios imunoabsorventes ligados a enzimas 208. Numerosos grupos de investigação empregaram anticorpos VLR monoclonais, não modificados. ou projetadas como proteínas de fusão Fc para purificação utilizando colunas de proteína A/G e detecção usando vários reagentes disponíveis comercialmente que reconhecem o domínio Fc de IgG. Alternativamente, a purificação é adicionalmente facilmente realizada aplicando colunas de Ni com foco em um 6 His modificado seguido pela detecção no anticorpo VLR direcionado ao marcador de epítopo HA integrado (Fig. 34B). Aqui descrevemos um protocolo para uso de anticorpos VLR em análises de citometria de fluxo multicoloridas de PBMCs humanas em combinação com anticorpos monoclonais tradicionais marcados à direita. Com base no tipo de anticorpo VLR utilizado e também nos níveis de expressão com o antígeno alvo, uma estratégia de coloração de adesão HD2 de duas ou três camadas pode ser utilizada (veja abaixo o protocolo). O uso de anticorpos VLR monoclonais com marcadores de epítopos projetados ou proteínas de fusão VLR-Fc permite uma técnica de coloração muito mais de duas camadas. O uso de anticorpos VLR monoclonais não modificados ou experimentos direcionados a antígenos expressos em faixas mínimas exigem um método de coloração de três camadas porque o anticorpo monoclonal anti-VLRB 4C4 estabelecido não pode ser facilmente modificado com programas de rotulagem comuns que têm como alvo as aminas principais. Numerosos reagentes de manuseio favoráveis ​​e adversos para experimentos baseados em VLR são descritos em 20810. 9.dois Reagentes Marcadores antiepítopos marcados com fluorescência ou reagentes específicos para Fc podem ser encontrados em muitas fontes industriais. Clone monoclonal anti-VLRB de camundongo 4C4 211. Observe que este anticorpo é reativo com um epítopo na área do pedúnculo de todas as moléculas de VLRB e apresenta comprometimento.