SUPPLÉMENT DE BOIS ET FORÊTS DES TROPIQUES 

Édité par le CENTRE TECHNIQUE FORESTIER TROPICAL 45 bis. Avenue de la Belle-Gabrielle. 94130 NOGENT-SUR-MARNE (FRANCE) 

UER PHYSIQUE CHIMIE BIOLOGIE DIVISION DE PRESERVATION 

L'UNIVERSITÉ DE NANCY I pour obtenir le 

DOCTORAT DE TROISIEME CYCLE EN BIOLOGIE VEGETALE -INTERACTIONS DANS LES MILIEUX NATURELS. 

Etude microbiologique et (ultra) structurale des premiers stades de colonisation des bois de Pin (aubier), d’llomba et de Hêtre placés à l'extérieur et hors de contact du sol 

Soutenue publiquement le 4 décembre 1981 devant la commission d’examen 

CHAPITRE 2 CHOIX DES ESSENCES ET TRAITEMENTS 

221. Eprouvettes de type "y" 16 

222. Eprouvettes de type "plate" 17 

CHAPITRE 3 DESCRIPTION DE LA STATION 

31. Choix de la station 20 

32. Equipement de la station 22 

43. Etude structurale tultrastructu¬ 48 rale 431. Observations nacroscopiques 48 

433. Test de profordeur de pénétration 50 

CHAPITRE 5 DETERMINATION DES MICRO ORGANISMES 

CHAPITRE 6 EVOLUTION DE LA MICROFLORE 

622. Evolution de la flore bacté75 

63. Flore à capacité de pénétration 90 

modifications les plus significatives en fonction de la date d’installation des éprouvettes, influence des saisons 

721. Développement et mode de 110 

colonisation du bois par les champignons 

722. Détermination par des obser- 116 vations en MEB du passage de l'état de spore à celui de mycélium en surface du bois 

723. Détermination de la profon- 118 deur de pénétratior. de la flore fongique dans le bois 

724. Caractérisation des activi- 118 tés microbiennes 

Les techniques de laboratoire peuvent permettre de déterminer la durabilité naturelle d’un bois ou l’efficacité préventive d’un traitement de préservation vis-à-vis des agents biologiques destructeurs. Ces expérimentations présentent cependant divers inconvénients ( FOUGEROUSSE , 1976) et plusieurs instituts de recherche ont entrepris des ” essais de terrain ” ou " essais de champ ” plaçant le bois dans des conditions permettant aux phénomènes biologiques de se manifester dans leur complexité naturelle. 

C’est à la fin du siècle dernier que les premiers " essais de champ ” furent installés (BLEW, 1955). Cette méthode, consistant essentiellement à enterrer des piquets verticalement à mi-hauteur, donc en contact intime et permanent avec le sol, est encore utilisée de nos jours et apporte de nombreux renseignements sur les phénomènes de biodétérioration du bois en contact avec le sol, ainsi que sur la valeur des techniques de préservation du bois dans ses emplois correspondants (poteaux, pieux, traverses, etc. ). 

Ce n’est que dans les années 50 que les chercheurs ont vraiment pris conscience de l’importance et de la complexité des problèmes de conservation que posent les menuiseries extérieures. En effet, ils constatèrent une augmentation importante des cas de pourritures sur les fenêtres, les portes, etc. dans le sud des U.S.A. (VERRALL, 1949), en GRANDE-BRETAGNE (OLIVER, 1961; JACK, 1968; SAVORY et al., 1977), en SUEDE (HENNINGSSON, 1977) ou en SUISSE (WLCHLI, 1970). Ces faits ont amené différents laboratoires à imaginer des essais en conditions naturelles adaptés à ces problèmes : les essais de terrain, de bois traités ou non placés hors contact du sol, mais directement exposés aux intempéries. 

L’établissement, le développement et l’extension d’une pourriture dans une fenêtre sont grandement influencés par sa conception, sa fabrication, sa mise en oeuvre, la nature de l’essence, 

sa position et l’architecture générale du bâtiment où elle se trouve (VERRALL, 1949; BROOKS, 1976; HENVINGSSON, 1977 ). En effet, les infiltrations d’eau de pluie au niveau des assemblages ou de condensations internes peuvent augmenter l’humidité du bois jusqu'à un degré permettant l’établissement de la pourriture : c’est précisément en ces endroits que la dégradation commence (SAVORY et CAREY, 1976). VERRALL a ainsi installé en 1949 aux U.S.A. un dispositif représentant une partie de menuiserie extérieure sensible : " Rail Units ”, placé hors contact du sol de façon à permettre la pénétration de l’eau au niveau de l’assemblage. 

Il apparaît par conséquent que, pour étudier la dégradation des menuiseries extérieures par les agents biologiques, il est nécessaire de définir un dispositif expérimental favorisant la pénétration et le séjour de l'eau dans le bois. Concrètement, cela est obtenu par l'utilisation d'un assemblage défectueux jouant le rôle de piège, " Water trap " (SAVORY et al., 1977). 

Diverses méthodes sont utilisées par les instituts de recherche ( FOUGEROUSSE , 1976), parmi lesquelles : 

” Rail Units " (VERRALL, 1949) représentant une éprouvette en Y 

” Housed Window ” (TAMBLYN et BEESLEY, 1968). 

" T et L joints " (MORGAN, 1971; SAVORY, 1976). " Sash Units " (SEDZIAK, 1970) représente une éprouvette en F assymétrique. 

Ces expériences ont apporté de précieux renseignements sur la conservation des bois traités ou non, hors contact du sol. Mais rares ont été les auteurs qui ont profité de ces travaux pour étudier les mécanismes initiaux d’infestation, lé développement et la succession des microorganismes lignicoles, comme cela avait été fait sur les bois dans d'autres conditions (arbres sur pied ou fraîchement abattus, bois en oeuvre au contact du sol, copeaux, etc.); et comme en témoigne une importante bibliographie : 

Etude de la succession des microorganismes : a) sur les arbres sur pied, bûches, branches au sol, troncs, copeaux : 

FIDLAY, 1940, 1966; CHESTERS, 1950; HANGENOT, 1952; KRIK et RENNERFELT, 1957; BASHAM, 1957, 1958, 1959; HEREDITH, 1959, 1960; ETHERIDGE, 1961; GOOD et WELSON, 1962; SHIGO, 1962, 1963, 1965; GARRETT, 1963 ; UEYANA, 1965; HENNINGSSON, 1967; SMITH, 1970; DELATOUR, 1976; KILBERTUS et al., 1976; DELATOUR et SYL-VESTRE-GUINOT , 1978; etc. 

b) sur bois mi-enterrés, avec des études des parties aériennes et souterraines : 

CORBETT et LEVY, 1963 a, 1963 b; GARRETT, 1963; GREAVES et SAVORY, 1965; FINDLAY, 1965; MERRILL et FRENCH, 1966; KÄÄRIK, 1967, 1968, 1971, 1975; SHIGO, 1967; BUTCHER, 1968, BANERJEE et LEVY, 1971; DWYER et LEVY, 1975; LEVY, 1976; CLUBBE, 1978, 1980; MORTON et EGGINS, 1978. 

Les travaux les plus récents, ceux de C.P. CLUBBE de l'Impérial College of Science and Technology (London) portent sur la succession des microorganismes dans des poteaux mi-enterrés de Pin sylvestre (Pinussykvestris) et de Bouleau (Betula sp.) • Les séquences d'isolements sont les suivantes : 2, 4, 3, 16, 32, 96, et ce jusqu'à 591 jours. Ses investigations lui ont permis de proposer la succession suivante : 

Bactéries → courte période (germes cellulolytiques et pectinolytiques ) 

Champignons de pourriture molle (quelques dégradations) ( Phialenhora 

Ce schéma de succession rejoint, à quelques détails prêts, les chaînes trophiques proposées antérieurement par les différents auteurs précités. 

C’est en Mars 1976 que FOUGEROUSSE, dans le cadre d'une étude pour l'International Research Group on Wood Préservation (Stockholm) mit l'accent sur l'importance et la nécessité de déterminer les tous premiers stades de la biodétérioration des bois hors contact du sol. 

Il semble que le laboratoire pilote de ce type de travaux depuis 1967 soit celui de Princes Risborough au Building Research Establishment (Grande-Bretagne). Les divers résultats obtenus par cet institut ( SAVORY et CAREY, 1976; SAVORY, 1976 ; STRIBBLING et al., 1976; SAVORY et al., 1977; BAKER et al., 1977; SAVORY et CAREY, 1978; CAREY et al., 1981) ont permis à ces chercheurs de proposer une séquence de colonisation du bois par les microorganismes ("L joints'', MORGAN, 1971) placé hors contact du sol, pendant une courte période : 

Cette succession est superposable à celle de CLUBBE (1980), bien que les conditions d'exposition du bois soient différentes. Ces travaux et leurs résultats serviront de schéma de référence pour notre étude. Malheureusement, les publications actuelles ne donnent pas d'indications complémentaires à cette chaîne (date d'installation des éprouvettes, espèces isolées, etc.). 

En 1978, le laboratoire de Préservation du CENTRE TECHNIQUE FORESTIER TROPICAL de NOGENT SUR MARNE entreprit une étude de grande envergure (ceci grâce à l'aide incitatrice de la D.G.A.S.T.) portant sur la dynamique de la détérioration du bois nar les micro-organismes dans un environnement donné : hors contact du sol, suivant la nature du bois (deux essences résineuses, huit feuillues) et suivant certains traitements de préservation et/ou de finition. 

La mise en expérience d’environ 2.500 éprouvettes se fit en Mars-Avril 1979. Cette étude offre un intérêt scientifique et pratique en liaison avec de nombreux problèmes se posant actuellement en France dans la conservation des menuiseries extérieures, l’un des objectifs principaux étant de définir un schéma général de succession des microorganismes et de préciser pour ce type d’exposition, en fonction de l’essence et du traitement, si ce schéma est régulier et constant. 

En fait, la connaissance des tous premiers stades de la colonisation pourrait aboutir à l'établissement des bases scientifiques nécessaires à une amélioration des techniques de préservation. Actuellement, la fabrication et l’utilisation des produits de préservation sont basées sur les seules connaissances relatives à l’action des Basidiomycètes et on ne connaît pas l’influence que peuvent avoir les microorganismes qui s’installent sur et dans le bois avant le champignon de pourriture. Cette influence pourrait s’exercer sur le Basidiomycète lui-même et/ou sur le traitement protecteur (détoxification éventuelle des biocides). De même, on connaît mal l’influence du traitement sur ces microorganismes et ses effets sur l’installation d'une pourriture. 

Les résultats obtenus dès la première année d’expérimentation ont montré que pour certaines combinaisons essence-finition (en particulier Pin, Hêtre et Fraké non traités mais peints), le bois présentait après trois mois d'exposition des modifications d'aspect, et même des altérations causées par des agents de pourriture. Il s’est avéré que les maillons initiaux de la chaîne trophique n’avaient pas été mis en évidence. 

C’est pourquoi, au cours de nos recherches, nous avons défini un protocole expérimental mieux adapté : 

1. par le choix des essences (essences de faible durabilité naturelle). 

2. par une installation en conditions naturelles en définissant deux types d’éprouvettes : l’une (Y) favorisant l'infiltration d'eau dans le bois et aidant à ce qu'elle y demeure; par opposition, l'autre (plate) disposée horizontalement et offrant une grande surface d'évaporation. 

3. par une fréquence élevée des prélèvements (4,8,14,21,42 et 84 jours après installation) et une répétition dans le temps (plusieurs cycles au cours d’une année) 

4. par la caractérisation du proche environnement dans ses composantes biologiques et météorologiques : isolements des germes présents dans l’air, dans l'eau de pluie, relevés des températures et de pluviométrie 

5. par l'isolement et la détermination du plus grand nombre d'organismes présents sur et dans le bois 

6. par des observations macro- et microscopiques faisant état des modifications structurales et ultrastructurales. 

Deux essences provenant de régions tempérées : le Hêtre et le Pin (aubier), et une essence tropicale, l’Ilomba, sont retenues . 

Leur faible résistance aux agents de pourriture et leur utilisation (en ce qui concerne le Pin et le Hêtre) en tant qu'essences de référence pour les recherches et essais sur le bois en Europe ( FOUGEROUSSE , 1980) ont guidé notre choix. 

Les principaux éléments du plan ligneux de ces bois sont : 

Le Hêtre ( Fagus sulvatica L.) est un arbre élevé au tronc droit et régulier. Son bois est de couleur blanc-jaunâtre à rosé. L’aubier n’est pas différencié. Il appartient à la classe des Dicotylédones, à l'ordre des Fagales, et à la famille des Fagacées. 

Caractéristiques anatomiques : aisseaux (Figure 1 ) 

Ils sont répartis à peu près uniformément dans la couche annuelle (à peine moins nombreux dans le bois final), souvent isolés, parfois accolés par 2 ou 4, leur diamètre varie de 50 à 75 um et on peut en du nombrer 50 à 100 par mm². Leur paroi est mince. Les perforations des éléments vasculaires sont uniques ou scalariformes (2 à 10 barreaux, rarement plus), (figure 3). Les ponctuations intervasculai-res sont aréolées et relativement fines (7-8 um). C’est un bois homogène à pors diffus. 

Ils sont manifestement de deux tailles, les uns larges de 1 à 8 cellules, les autres très larges (15 à 25 cellules) et très hauts, atte gnant 4 mm. Leur structure est homogène. Ils possèdent des parois paisses et très ponctuées. Les ponctuations par champ de croisement rayon-vaisseaux sont grandes et de forme elliptiques (figures 2 et 4). 

Elles sont essentiellement libriformes, à ponctuations simples très fines, mais on rencontre des trachéides à ponctuations 

Il est relativement peu abondant, les cellules sont juxtavasculaires ou dispersées dans les tissus fibreux, leurs parois sont épaisses avec des ponctuations simples généralement groupées. 

Le Pin sylvestre (Pinus sylvestris L.) est une essence de pleine lumière, de sol. aride et frais. Son aubier est bien différencié du bois de couleur rosée et légèrement résineux. Il appartient à l'embranchement des Gymnospermes, à l'ordre des Coniferales, et à la famille des Pinacées. 

Elles sont longues de 1 à 3 mm. Les ponctuations inter-vasculaires sont aréolées : petites sur les parois radiales des trachéides du bois final, grandes et unisériées sur les parois radiales des trachéides du bois initial (figure 8). Le passage du bois initial au bois final est bien différencié. 

Rayons (figures 6 et 7) de 4 à 10 cellules de hauteur, ils sont unisériés et hétérogènes. Ils se composent de cellules de parenchyme prises en " sandwich” entre des trachéides horizontales. Les cellules de parenchyme possèdent des parois transversales, tantôt minces tantôt épaisses (seules les épaisses sont ponctuées). On peut noter la présence de quelques ponctuations de type pinoîde sur les parois radiales. Les cellules des trachéides transversales ont des parois épaisses dentées autour de petites ponctuations aréolées. 

Il n'existe pas de parenchyme vertical. 

. sous forme de canaux sécréteurs axiaux de diamètre de 100 à 150 um bordés de cellules sécrétrices à parois fines; ils sont plus nombreux dans le bois final 

. sous forme de canaux sécréteurs radiaux, fins divisant les rayons qui les contiennent en deux parties sensiblement égales. 

L'Ilomba ( PcnanthusanqcCensis larb.) est une essence de lumière, un arbre à fût très droit. Son bois est blanc ou rosé à l’état frais, ocré à l’état sec. Cette essence tropicale se rencontre dans la forêt dense Guinéo-Congolaise. De la classe des Dicotylédones, elle appartient à l’ordre des Laurales, et à la famille des Myristicacées. 

Ils sont disséminés, ovales, rares, de 2 à 3 par mm2, isolés ou accolés par 2 ou par 3, ils sont visibles à l'oeil nu (taille moyenne de 200 um, leur paroi mesure 6 um de large). Les perforations sont uniques ou plus rarement en grille à 2-10 barreaux. Les couples de ponctuations intervasculaires aréolées, très orosses, de 14 à 18 um, sont disposés en files obliques (figure 12). Dans le bois parfait, on rencontre des thylles à parois fines. 

Bi à tri-sériés, ils possèdent une structure hétérogène avec des cellules couchées au centre et une à deux rangées de cellules dressées au» extrémités. Plutôt petits, ils ont une hauteur variable de 500 _m à 1.200 um. Les ponctuations rayon-vaisseau sont grosses et allongées (figure 11). Ils peuvent contenir des tubes tannifères et aussi de nombreux grains d'amidon. 

Il est rare, sous forme de quelques cellules juxtavascu-laires. 

Ligneuses à section polygonale, elles sont très fréquemment ponctuées sur leurs faces radiales. 

Figure 1 - Témoin Hêtre, face transversale montrant les éléments 

éléments : vaisseaux (V); fibres (F); rayons (R). 

Figure 2 - Témoin Hêtre, face radiale montrant un champ de 

Figure 3 - Témoin Hêtre, face transversale montrant une perforation 

Figure 4 - Témoin Hêtre, face radiale, ponctuations simples 

(Ps) au niveau d’un champ de croisement vaisseau-rayon . 

(les échelles sont données en um) 

Figure 5 - Témoin Pin, face transversale montrant les éléments 

Figure 6 - Témoin Pin, face radiale montrant un champ de croisement vaisseau-rayon (V/R). , 

Figure 7 - Témoin Pin, ponctuations picéoïdes (Pp) au niveau 

Figure 8 - Témoin Pin, ponctuation de type abiétinéen (Pa). 

(les échelles sont données en um) 

Figure 9 - Témoin Ilomba, face transversale montrant les éléments 

éléments : vaisseau (V); parenchyme juxta-vasculaire (Pj); fibres (F); rayons (R). 

Figure 10 - Témoin Ilomba, face transversale montrant des cellules 

cellules rayon bordant un vaisseau (V), et contenant des grains d'amidon (Ga). 

Figure 11 - Témoin Ilomba, champ de croisement vaisseau-rayon 

(V/R), orné de ponctuations simples (Ps). 

Figure 12 - Témoin Ilomba, ponctuations intervasculaires (Pi) 

(les échelles sont données en um) 

Les bois utilisés pour nos expériences proviennent de la forêt de Fontainebleau ( Pin sylvestre) , de l’est de la France (Hêtre) et de Côte d'Ivoire (IEomba). 

Ces bois, livrés sous forme de billes, ont été débités en chevrons, passés au séchoir (humidité : 153), puis stockés dans un endroit sec. 

Le matériel ligneux ainsi préparé est utilisé pour la fabrication d'éprouvettes de deux types : 

221. EPROUVETTES DE TYPE (figures 13, 14 et 16) 

Il s'agit d'une éprouvette en "Y" " constituée de deux branches parallélépipédiques de 3 cm de côté, 28 cm de long pour la plus grande et 10 cm pour la plus petite (figure 13). Elles sont assemblées par un système classique tenon-mortaise. Le tenon est porté par la petite branche, la mortaise (2 cm de profondeur, 1 cm de large et 3 cm de long) est située à 10 cm du haut de la grande branche. 

Les dimensions ont été volontairenent fixées de manière à avoir un assemblage assez lâche pour ne pas s'opposer à la pénétration d'eau dans la mortaise. 

Ces éprouvettes, une fois confectionnées, sont soigneusement ébarbées, puis vernies (vernis glycérophtalique passé en trois couches; la première diluée par un solvant organique). 

L'application du vernis présente deux avantages : 

a) Dans des expérimentations équivalentes, les auteurs remarquèrent que des éprouvettes peintes, non traitées, étaient le siège d'une pourriture plus rapidement installée et plus importante que sur des éprouvettes non traitées non peintes (SEDZIAK et al., 1970); BAKER et al., 1975; SAVORY. 1976; STRIBBLIVG et al, 1976; FOUGEROUSSE, 1980, 1981 ). 

L'eau pénétrant dans la mortaise, la peinture empêche une évaporation rapide de celle-ci (TACK, 1963 ; SEDZIAK et al., 1973) et un gradient d'humidité s'installe dans l'éprouvette (VAX LOAN, 1964, 1965; SEIFERT, 1967). 

b) L’emploi d'un vernis transparent permet, contrairement à une peinture opaque, d 'observer avec plus de facilité les changements d'aspect du bois au cours du phénomène. 

Les faces transversales sont obturées par l'application d'un enduit au silicone de façon à les rendre imperméables. SAVORY et al., en 1977, concluent que des éprouvettes imperméabilisées en bout permettent de mieux saisir les phénomènes qui se déroulent au niveau des assemblages de fenêtre. En effet, si ces faces ne sont p.as obturées, la pourriture n'est pas répartie de la même façon dans l'éprouvette et, en particulier, est moins systématiquement concentrée au niveau des jointures, zone d'étude privilégiée par la définition même de l'éprouvette. 

Ainsi traitées, les deux parties sont assemblées et maintenues entre elles au moyen de deux agrafes inoxydables. 

Ce type d'éprouvette a été conçu à la Division de Préservation du Centre Technique Forestier Tropical (cf. Introduction). Elles étaient de taille plus importante et comportaient plusieurs traitements (figure 16). Devant, dans la suite de cet exposé, faire souvent référence à cette expérience, nous la qualifierons " d'expérience des grands "" 

222. EPROUVETTES DE TYPE " PLATE " (figures 15 et 16) 

Ce sont des éprouvettes parallélépipédiques de 20 cm de long, 5 cm de large et 1 cm d'épaisseur. 

Une fois ces éprouvettes fabriquées et finies d'usinage (rabotage), leurs faces transversales sont imperméabilisées par l'enduit au silicone précité. 

De façon à pouvoir les maintenir horizontalement sur notre support deux crochets inoxydables sont vissés sur les faces transversales. 

L'expérience a été mise en place dans le bois de Vincennes. sur le toit en terrasse du Centre Technique Forestier Tro-pical, situé à Nogent-sur-ilarne (Val de Marne). 

La situation géographique de la station présente les avantages suivants : 

- d’être à proximité immédiate de nos laboratoires, donc de permettre des observations régulières et des interventions directes et immédiates sur du matériel parfaitement frais. 

- d’être soustraites à toutes perturbations (actes de vandalisme, passage d'engins ou de personnes, etc.) 

- de se trouver dans un environnement biologique convenable (bois de Vincennes) qui est, par ailleurs, celui de l'expérience préalable sur " grands )" mise en place au printemps 1979 (cf. In-t roduc t ion ) . 

Figure 15 - a - éprouvette grand Y 

b - éprouvette petit Y uti1isée dans le cadre de notre étude 

Figure 16 - Installation des éprouvettes, positionnement. 

Les enseignements tirés de l’expérience des " grands "Y" nous ont amenés à modifier le dispositif de soutien des éprouvettes. Le support (en Eucalyptus) trop large, permettait une accumulation d'eau importante, si bien que les Basidiomycètes se développaient entre le support et l’éprouvette. 

Pour pallier cet inconvénient, nous avons utilisé comme support du fil d'acier gainé de nylon, qui présente les avantages d’être biologiquement inerte, et de n’offrir qu'une surface d'accu-mulation d'eau minime. Ces fils sont tendus entre deux cheminées et maintenus à un mètre du sol par trois supports situés à 2 m d'intervalle. Ces supports ont la forme d'un " U " renversé, et sont constitués de deux billots en Eucalyptus et d'une traverse en Tchembussin (Xulia evensei) . 

321. INSTALLATION DES EPROUVETTES (figure 16) 

Les éprouvettes de type "Y" sont posées sur les deux fils maintenus à 6,5 en l'un de l'autre, de façon à ce que les extrémités transversales des deux branches fassent un angle de 450 avec les grandes faces correspondantes, et qu'une fois en place les extrémités de l'éprouvette soient verticales. Cette disposition favorise sans aucan doute la pénétration de l'eau au niveau de l'assemblage. 

Ce type d'éprouvette est disposé horizontalement. Les crochets la maintiennen: dans cette position, grâce à deux fils placés à 21,5 cm l'un de l'autre. 

Cette positicn et la conception de l'éprouvette, contrairement à celle de type "V‘ ne favorise pas la stagnation de l'eau, la surface d'évaporation étant très grande. 

Notre expérience comporte donc deux systèmes totalement différents en ce qui cor cerne le pouvoir de rétention de l’eau de l'un par rapport à l'autre, l'humidité influant grandement le comportement des organismes présents sur et dans le bois. 

La station se trouve au même niveau que la première couronne des Pins laricio ( Pinus laricio Poir.) essence dominante dans le peuplement végétal l’entourant. 

Dans un rayon de 100 mètres autour de l’expérience, la strate arborescente est représentée, par ordre décroissant d’importance,par : 

La proximité de ce couvert végétal, ainsi que la présence des ” grands Y", créent autour de nos éprouvettes des conditions favorables à leur contamination par les microorganismes. Diverses fructifications de champignons lignicoles ont été, en effet, observées, aussi bien sur des arbres sur pied que sur des ” grands >" ou sur des souches. 

. Sur des arbres sur pied : 

Tnametes p. Fr. sur Pin laricio 

. Sur une souche de Hêtre : 

. Sur les grands "" installés en 1979 : (par ordre décroissant) 

- Coriolus versicolor sur des éprouvettes non traitées mais peintes de Fraké (Terminalia superba Eng. & Diels) et de Hêtre, ainsi que sur les supports en Eucalyptus (Eucalyptus deguyta Bl.) (figures 17, 18 et 19). 

- Gloeophyllum abietinum Fr. Karst. sur Epicea (Picea abies) 

- Lenzites Fr. (betulina ?) sur Hêtre 

Figures 17 et 18 — Fructifications de Corioluss versicolor 

sur éprouvettes " grands " de Fraké 

Figure 19 - Fructifications de Coriolus versicolor 

à la base des supports en Eucalyptus 

Ces données ont une grande importance car l’environnement météorologique influence directement le comportement des populations microbiologiques présentes. 

Deux paramètres importants sont pris en considération : la température et la pluviométrie. Les relevés correspondent à la période s’étendant de Juillet 1980 à Août 1981. 

Un thermomètre à maximum et minimum de type Belani, dit " thermométrographe à l’index ” est fixé, à l’abri, sous le support expérimental. 

Les relevés sont effectués journellement à 8 heures. 

Les résultats sont exprimés sous forme de courbes montrant les variations des minima, moyennes et maxima de température en fonction du temps. Chaque point représente la moyenne des températures de 10 jours. 

Les dates de prélèvements sont représentées sur la courbe des températures moyennes. 

Les trois séries figurent dans les zones de température suivantes : 

- Série n° 1 - Juillet 1980 

- Série n° 2 - Novembre 1980 

- Série n° 3 - Mars 1981 

La saison hivernale se ca.actérise par des températures minimales relativement douces ; en effet, ces températures sont toujours supérieures à - 5°C, cette couceur étant peut-être dépendante de la station (toit de bâtiment, chauffage, proximité des cheminées, etc. ). 

Un maximum de + 28°C est atteint en Juillet 1980. 

Les précipitations sont recueillies dans un pluviomètre de type ” Association " placé aux abords de l'expérience. 

Les relevés sont effectués sur l'échelle des mm tous les jours à 8 heures. 

Les résultats sont exprimés sous forme d'histogrammes résultant de la somme des précipitations de 10 jours, et les dates de prélèvement des éprouvettes y sont indiquées. 

La figure montre que les maxima de pluviosité se situent en Juillet et Décembre 1983. et des périodes de sécheresse de 10 jours en Août et Novembre 1980. Février et Avril 1981 . 

La première série est à la fois soumise à des périodes humides et sèches. La deuxième, par contre, est régulièrement soumise aux précipitations. La troisième se caractérise par le fait que les trois premiers prélèvements interviennent lors d'une période de sécheresse. 

TEMPERATURES juillet 1980 à juillet 1981 

PRECIPITATIONS juillet 1980 à juillet 1981 

La plupart des auteurs s’accordent sur le fait que l’infection initiale des bois hors contact du sol dépend de l'arrivée de spores ou germes libres transportés par l'air ou l'eau de précipitation (MANGENOT, 1952 ; FINDLAY, 1965; SHIGO, 1967; BANERJEE et LEVY, 1971; TOOLE, 1971; SCHEFFER, 1973; SMITH, 1974, 1977; MORTON et EGGINS, 1976; SAVORY et CAREY, 1978; CAREY, 1981). 

Le potentiel( 1) des germes présents dans l'air ou dans l’eau va par conséquent directement influer sur la nature et l'évolution des colonisations et, secondairement, sur la dégradation du bois. 

Cette phase initiale nous a paru être essentielle; c’est pourquoi, nous en avons tenu compte dans nos investigations en procédant à des isolements et à des déterminations des germes de l’air et de l’eau de pluie. 

Pour pouvoir isoler une fraction des germes présents à un moment donné dans le milieu aérien, nous avons disposé à proximité immédiate du lieu d’expérience, une eure avant chaque prélèvement sur bois, 20 boîtes de Pétri (5 contenant un milieu Malt gélosé utilisé pour la captation des champignons, 5 un milieu plus spécifique aux bactéries, Nutrient Broth célosé, 5 un milieu pour Actinomycètes et 5 un milieu pour germes cellulolytiques (cf. Techniques et milieux). 

La fréquence des prélèvements a été liée aux caprices météorologiques; néanmoins, chaque fois que cela a été possible, l’eau de précipitation a été recueillie dans des flacons préalablement stérilisés et placés aux abords directs tes éprouvettes. 

Une suspension dilution classique a ensuite été effectuée en répartissant 0,1 ml de la solution-mère sur les différents milieux de cultures précités. 

(1) Ce qui intégre : importance quantitative globale, composition et importance relatives des différentes espèces inventoriées. 

Aucun comptage des germes n'a été fait, cela paraissant aléatoire compte tenu de la faible fraction d'eau employée. Le but de l'opération était essentiellement d'identifier le maximum d ' espèces. 

Nous sommes bien conscients que les techniques utilisées ne permettraient pas de faire une étude exhaustive du milieu biologique autour de l'expérience. Ne disposant pas du matériel adapté, tel un capteur de spores, ” Hirst spore trap ", nous nous sommes donc limités à ces moyens simples. 

Toutefois, nous estimons pouvoir dégager des résultats obtenus des notions de fréquence de certains germes par rapport à d'autres. , - Résultats 

Nous avons présenté ces résultats sous forme de figures (22,23 et 24) chaque case de ces tableaux (correspondant en fait à un prélèvement pour un genre donné) est divisée en cinq échelons, représentant les cinq boîtes de Pétri utilisées pour chaque milieu de culture (cf. Chapitre IV). Nous avons voulu ainsi indiquer, non pas le nombre des germes isclés, mais le nombre de boîtes où ils apparaissent. 

Divers types d'organismes ont été isolés à la fois ceux transportés par l'air et par l'eau. 

44 genres de champignons imparfaits ont été isolés du milieu aérien et 13 de l'eau de pluie (dans ce cas, le nombre de prélèvements est plus faible). 

L'examen des figures 22 et 24 montre que la plupart des espèces sont isolées sporadiquement, et ce n'est qu'un nombre réduit de germes qui est capté régulièrement et massivement tout au long de l'année. Dans l'air, 7 espèces sont bien représentées : A.tenuis C.herbanum, E.putvunascens, H. dematioides et 3 mycélium stériles blancs. Dans l'eau, on ne rencontre régulièrement que deux genres : C. herbarum et H. dematioides 

La fréquence des germes isolés pendant la période hivernale est plus faible. 

Deux espèces prédominent dans le milieu environnant les éprouvettes : C.henbatum et H.dematioides. 

C. est un champignon commun sur différents 

substrats (ELL1S, 1971; REISINGER, 1979). Organisme xérophile, ses conidies sont facilement transportées par l’eau (PADY et KAPICA, 1955 ; HYDE et WILLIAMS, 1952; HUDSON, 1969 ; BANERJEE et LEVY, 1971). La dominance de ce genre semble être liée au fait qu'il est apte à coloniser les milieux les plus divers : matériaux organiques en décomposition (VRIES, 1952; ELLIS, 1971), tourbes (NIETHAMMER , 1963; ZABAWSKI, 1967; DICKINSON et DOOLEY, 1969; MIRCHINK et ZAPROMETOVA, 1970), sols pauvres (GOCHENAUR et WHITTINGHAM, 1967; L0U3, 1967), terrains salés (PUGH, 1962; PUGH et BUCKLEY, 1971; MOUSTAFA, 1975), mine d’uranium (FASSATIO-VA, 1970), etc. 

Il est de plus très fréquent sur du bois pourri (MELIN et NANNFELDT, 1934 ; MANGENOT , 1952; BANERJEE et LEVY, 1971; HAWKS-HORTH, 1976 ). 

Nous disposons de très peu de renseignements sur la fréquence d ‘ Hermonema dematioides dans l'air ou dans l'eau. Cette espèce est souvent confondue avec Aunecbasidium pullulans et la séparation de ces deux genres a été très discutée (30BAK, 1952), ils sont souvent isolés ensemble de bois bleui (LAGERBERG et al., 1927; BUTIN, 1963; ARX, 1970). La différence la plus significative entre Honmonema et Aureobasidium est çue la production de conidies est basipète chez Hormonemc et synchrome chez Auneobzsidium (HERMANIDES-NIJHOF, 1977). De plus, la production de mélanine par Aureobasidiumg (REISINGER et KILBERTUS, 1972) est plus tardive sur milieu de culture que celle d ' Hormenema (immédiate dans ce dernier cas ). 

Deux genres sont présents au cours de chaque prélèvement, aussi bien dans l'air que dans l'eau de pluie : Candida. sp. et Rhodotorula p. 

La détermination de la fréquence d'apparition de ces organismes présente une grande importance pour notre expérience. 

En effet, ce sont eux les agents responsables de la pourriture du bois, et leur présence plus ou moins importante dans le milieu environnant peut influer sur le délai de leur installation sur et dans les tissus ligneux. 

Dans l’air, diverses espèces ont été isolées, et plus particulièrement Coniooeusvensico€on, agent de pourriture blanche, et deux autres espèces apparaissant que rarement, et qui sont en cours de détermination. 

Une seule espèce a été isolée de l’eau : CotioCuveni-color 

La dominance apparente de C.vensicolor est certainement en relation avec l'importance des sources d'émissions de spores. 

En effet, on a constaté que 90% des éprouvettes " grand Y" (FOUGE-ROUSSE, 1980) sont infestées par ce champignon de pourriture. De plus, 60% de celles-ci présentent des fructifications. 

Dans nos prélèvements, aucun Basidiomycète n'a été isolé pendant la période hivernale (Novembre 1980 à Mars 1981), ceci provenant peut-être du fait que les sources d’émissions de ces champignons ne produisent aucun spore pendant cette saison. L'apparition plus fréquente de ces germes lors du troisième cycle de prélèvements est en liaison avec l’observation de la formation de nouveaux hymeniums présents sur les éprouvettes ” grand Y " et les supports en Eucalyptus proches du lieu de l'expérience. 

La présence de Ce£uComonas n‘a pas pu être mise en évidence ni dans l'air, ni dans l'eau, et seuls des organismes fongi-ques 

Plusieurs espèces cellulolytiques ont été isolées sur le milieu de culture sélectif. Les résultats obtenus confirment la dominance de Cladosporium herbarum • 

Il faut noter qu‘Altetnaria tenuis a été plus fréquemment rencontré sur ce milieu. C.henbanum et A. tenuis peuvent enzymatiquement détruire la cellulose, et sont d'ailleurs souvent signalés comme dégradant les fibres de coton (WLCHLI, 1969). 

Les Bactéries (figures 23 et 24) 

27 genres bactériens ont été isolés au total. Deux familles sont bien représentées : 

- la famille des Pseudomonacées (10 genres) 

- la famille des Bacillacées (8 genres) 

Les germes isolés sont couramment rencontrés dans les milieux aériens et aquatiques (BERGEY, 1974). 

Il semble que l’on ne puisse pas dégager une dominance d'un genre par rapport à un autre, les bactéries n’apparaissant que sporadiquement. 

Ces organismes n'ont pratiquement pas été isolés ni dans l'air, ni dans l'eau de pluie. 

Cette partie de l'expérience nous permet de dégager que : 

- des champignons tels que C. herbarum et H. damatioides sont fréquemment représentés dans le milieu aérien et dans l'eau de pluie, A.puuLans, 8. E.punpunascens et quelques 

- des levures : Candida sn. et Rhodotorula sp. sont isolés souvent. 

- des Basidiomycètes, dont le représentant principal est C. versicolor. 

- l'apparition des bactéries est sporadique. 

- les Actinomycètes sont rares, souvent absents. 

- l'influence des saisons sur l'apparition des organismes est très nette. 

Toutes ces constatations devront être prises en cor. sidération dans l'interprétation des résultats des prélèvements faits sur le bois. Le transport de germes par l'air, et l'arrivée de ceux-ci sur le bois en plus ou moins grand nombre représentent la première phase du phénomène de biodétérioration du bois placé hors contact du sol. 

Une fréquence de prélèvements adaptée tenant compte de l’influence des saisons, des techniques d'isolements permettant de déterminer le maximum de germes, ainsi que des méthodes d'observations structurales et ultrastructurales nous ont permis d'étudier l'évolution des ponulations microbiennes et leur com-portement vis-à-vis du substrat. 

Deux éprouvettes à chaque prélèvement sont utilisées (deux par type d’éprouvette et par essence); l'une pour l'isolement des microorganismes, l'autre pour les observations macro et microscopiques. 

Les prélèvements sont effectués 4, 8, 14, 21, 42 et 34 jours après la mise en place. 

Ce cycle a été répété trois fois dans l'année : le premier du 25 Juillet au 2 Octobre 1980, le deuxième du 28 \ovembre 1981au 13 Février 1981, le troisième du 27 Mars au 18 Juin 1981. 

Au total, 36 éprouvettes de type "" et 36 de type " plate " ont été mises en place pour chaque cycle. (3 essences, x 6 prélèvements x 2 éprouvettes). 

Il s'agit, par ces techniques, de piéger le plus grand nombre possible d'organismes à la surface et de l'intérieur du bois. 

Parmi les microorganismes de la surface, un certain nombre sont potentiellement aptes à dégrader le matériel ligneux, en particulier s'ils ont la possibilité de pénétrer dans le substrat. D'autres se retrouvent accidentellement sur le bois et sont inaptes à le décomposer, mais peuvent se comporter en opportunistes en utilisant, par exemple, une fraction des substances libérées par les premiers. 

- Flore de surface (figures 25 et 27) 

A l'aide d'une râpe à bois de texture n° 29 et de longueur utile de 29 cm, préalablement flambée, on arase la surface d'étude en effectuant sur celle-ci un nombre constant de deux 

allers et retours représentant 0,1 mm d’épaisseur de la zone étudiée. La poudre ainsi formée est directement et aseptiquement recueillie sur du papier d’aluminium, puis mise en suspension dans 10 ml d’eau stérile et agitée pendant 20 mn. Cette solution est répartie sur différents milieux de culture à raison de 0,1 ml par boîte de Pétri (1 ml pour le milieu cellulolytique). 

La surface d’étude est représentée par le demi-tenon de l'éprouvette (figure 25), partie la plus sensible de l’ensemble. La surface totale est de 12,6 cm2. 

• Eprouvette de type ” plate ” 

Seule, la partie centrale de l’éprouvette est utilisée de façon à n’avoir aucune interaction avec les bords transversaux. La surface est représentée par un carré de 5 cm de côté situé sur la face supérieure et de deux rectangles de 5 cm de long sur 1,5 cm de large se trouvant sur les bords (figure 25). La surface totale est de 40 cm 2. 

- Flore de profondeur (figures 26 et 27) 

Suite au traitement précédent (flore de surface), une éqaisseur de bois de 0,1 mm est éliminé sur la surface traitée par quatre passages de la râpe, de façon à supprimer au maximum les organismes inféodés à la surface. 

Ensuite, une épaisseur de 0,5 cm (marquée par un trait à l'aide d’une lame étalonnée de scie à métaux) est débitée en fins copeaux de taille inférieure à 0,5 cm 2, en utilisant un ciseau à bois (n° 10) très finement aiguisé et préalablement aseptisé. Les copeaux sont recueillis aseptiquement et mis en suspension dans 100 ml d’eau stérile. La suspension est agitée et répartie sur les différents milieux de culture. 

Le volume d’étude, pour les deux types d’éprouvettes, correspond aux surfaces utilisées précédemment, et sont respectivement de 2 cm 3 pour l'éprouvette ">" et 12,5 cm 3 pour l'éprouvette " plate ". 

De façon à isoler les organismes dont l’activité est visible macroscopiquement, des copeaux ou des fragments de bois issus de la zone ayant subi des modifications sont déposés à la surface de milieux de culture sélectifs. 

Cette technique permet de déterminer avec précision le ou les organismes présents au niveau d’une altération quelconque du bois par rapport au témoin., 

Parallèlement à l’expérience décrite précédemment, on a entrepris une expérimentation permettant de déterminer le temps minimum d’apparition de modifications macroscopiques notables et de rechercher l'influence des saisons sur ce paramètre. 

Cette expérience n'a débuté qu'en Décembre 1980, compte tenu d’observations antérieures ayant prouvé que ce seuil ne permettait généralement pas aux agents de pourriture à proprement parler de s'installer. 

Une éprouvette par type et par essence est installée le premier jour de chaque mois, elle subit un examen macroscopique tous les 10 jours et, éventuellement, un essai d'isolement. 

Nous utilisons, d'une part des milieux à spécificité très large : 

- Pour avoir la plus grande représentativité de la flore bactérienne, un bouillon nutritif gélosé : 

. Bouillon nutritif peptoné (Nutrient broth) 

. Pour l'isolement des champignons, un milieu malt-gélosé : 

D’autre part, des milieux à spécificité plus étroite : 

- Pour l’isolement des Actinomycètes, le milieu yeast extract-malt extract aqar de PRIDHAM et al. (1957) : 

_ Pour la recherche de Cellulomonas, le milieu ” Dubos salts " : 

Pour éviter les précipitations, on peut remplacer FeSO4, 7 H20 par 1 ml de citrate de fer à 1 % (1 g de citrate ferrique, 0,64 g d’acide citrique et 100 ml d’eau). 

On dispose, avant ensemencement, un papier filtre à la surface du milieu (ensemencement à raison d’un ml de suspension par boîte). 

-Milieu au "Benomyl" (HUNI et COBB, 1971; HALE et SAVORY, 1976). 

Ce milieu sélectif est utilisé lorsque le cas se présente, pour l'isolement et la purification des souches de Basidio-mycètes. En effet, la croissance de ces champignons est moins rapide que celles des Fungi imperfecti. Ce milieu n’empêche pas le développement de ceux-ci, mais retarde leur croissance. 

Pour chaque opération, qu'il s'agisse de flore de surface ou de flore de profondeur, 5 boîtes de Pétri par milieu de culture sont ensemencées, ceci pour nous permettre d'avoir un ordre de grandeur de la fréquence d'apparition de la flore présente. 

Grâce aux méthodes culturales, une certaine quantité de germes est isolée. Mais l’importance du développement de ces derniers sur les milieux de culture n'est pas forcément en relation avec leurs activités sur et dans le tissu ligneux. C'est pourquoi, nous complétons ces données par des observations macroscopiques et microscopiques. 

431. OBSERVATIONS MACROSCOPIQUES (figures 34 et 35) 

Ces observations permettent de détecter à l'oeil des modifications visibles sur le bois. C'est une donnée utile à la connaissance de la relation entre la présence de certains germes et une modification du bois. 

Ces modifications peuvent se caractériser par des discolorations : noircissement, mouchetis, blanchiment, jaunissement, etc.; éruptions mycéliennes et autres. 

Depuis les premières utilisations, aux environs de 1950 (LIESE et al., 1950 ; MEIER, 1955) de la microscopie électronique dans le cadre de l'étude des phénomènes de dégradation du bois, de nombreux résultats en relation avec les progrès techniques ont pu être acquis. 

De nos jours, la microscopie électronique est un outil pratiquement indispensable. 

La microscopie électronique à balayage (‘EB) permet l’obtenir une vue en trois dimensions avec une bonne profondeur de champ et autorise l'observation d'échantillons de taille rela-iivement importante (‘ cm de côté) . Elle se prête bien à l'étude lu cheminement des hyphes dans le bois (BRUNEGGER et al., 1976). Elle convient pour la mise en évidence des organismes in situ : Forme, position, associations, etc. 

Des études plus poussées nécessitent l'utilisation d'un matériel mieux adapté, tel le microscope électronique à 

transmission (MET). Ce dernier répond à de nombreux problèmes posés dans la littérature sur la croissance des champignons et leurs mouvements (WILLIAM et al., 1970) il apporte de nombreux renseignements sur l’écologie des divers organismes, leurs relations et vis-à-vis du substrat (OLLAH et al., 1978). 

Ces deux techniques combinées complètent les résultats obtenus par les analyses microbiologiques. 

Deux cubes de 0,5 cm de côté sont découpés au niveau du centre des zones étudiées (milieu du tenon pour les éprouvettes de type ” ”, milieu de l’éprouvette de type ” plate ”). 

Un de ces cubes est utilisé pour l'observation de l'état de surface, il ne subit pas de traitement. 

L’autre permet de déterminer la profondeur de pénétration des organismes dans le bois (figure 27). La face transversale est affinée à la lame de rasoir, un état de surface correct permet une observation nette des phénomènes. 

La préparation des échantillons est classique : fixation sous vide, dans l'acide osmique (0s04) à 1% dans l'eau, déshydratation par passages successifs dans des bains d'acétone à concentrations croissantes (10, 20, 40, 60, 80, 90 et 100%) et dessèchement au point critique. Le matériel est alors métallisé à l'or-palladium et observé au microscope électronique à balayage. 

Des écailles sont prélevées au scalpel au niveau de la surface des zones étudiées, prises dans le sens des fibres du bois, elles mesurent environ 5 mm de long et 0,1 à 0,5 mm d’épaisseur. Si les observations macroscopiques décèlent une anomalie . les prélèvements sont faits au niveau de cette modification. 

La technique de fixation est conventionnelle : fixation sous vide de 2 heures dans l'acide osmique à 1% (OsC4) dans le tampon phosphate Millonig pH 7,5 (cf. Annexe), déshydratation par passages successifs dans les bains d'alcool à concentrations croissantes (10, 20, 40, 60, 80, 90 , 95 et 100°), puis passages progressifs dans le solvant de la résine (oxyde de propylène) et dans la résine de plus en plus concentrée Epon (cf. Annexe). Les échantillons sont inclus dans la résine pure et mis à polymériser dans 

une étuve à 50°C pendant 24 heures. 

Après durcissement, les blocs d’inclusion sont pré-o 

taillés. Des coupes de 800 A d’épaisseur sont faites à l’ultra-microtome, recueillies sur des grilles de cuivre, puis contrastées selon la technique de REYNOLDS (1963). 

Les coupes sont observées au microscope électronique à transmission. 

Il convient de préciser que l'échantillon observé représente une infime partie du volume étudié. 

Enfin, il y a parfois de grandes difficultés à faire des coupes,aussi fines dans le bois, malgré un couteau de diamant neuf. 

433. TEST DE PROFONDEUR DE PENETRATION 

Ces observations macro et microscopiques sont toujours suivies d'un découpage des éprouvettes : 

. dans le sens longitudinal pour les grandes et petites branches des éprouvettes de type ” ", de façon à co 

que le sciage passe par le milieu de l'échantillon. 

. dans le sens transversal pour l'éprouvette de type " plate ". 

Ces découpes nous donnent une vue de la profondeur du bois; par conséquent, nous indiquent la pénétration de l'altération ou des variations par rapport au témoin : noircissement, blanchiment, etc. 

Il faut préciser que dans le cas d'une attaque ou invasion par un agent de pourriture, sa profondeur et son extension dans le bois sont mises en évidence par application sur les faces fraîchement découpées d'un réactif de pH (cf. Annexe) mis au point par WILLEITVER et PEAK,(1979). La zone envahie prend une teinte jaune, tandis que la partie intacte se colore en bleu. 

Figure N° 27 - Techniques d'étude 

Le protocole expérimental adopté permet d’isoler une grande partie de la microflore présente sur le bois, à un moment donné, grâce à l'utilisation de différents milieux de culture : bouillon nutritif gélosé, malt gélosé, milieux pour Actinomycètes, milieux pour isolement des Ce£uomonas et germes cellulolytiques, milieux pour Basidiomycètes. 

Cette flore se décompose essentiellement en champignons, bactéries et Actinomycètes. 

Seuls, les bactéries et les champignons font l’objet de déterminations dont les critères sont énumérés ci-dessous. 

Les champignons sont déterminés par examens macroscopiques et microscopiques (microscope optique). 

Ces caractères de détermination sont les suivants : 

. aspects de la culture (forme, teinte, etc.) 

. la structure de l’appareil sporifère (mode de coni-diogénèse, position, forme des conidies, etc.) 

. la présence de boucles (détermination des Basidiomycètes). 

Si la détermination des champignons imparfaits ne pose pratiquement pas de problèmes, il n’en est pas de même pour les Basidiomycètes. La présence d’une fructification est indispensable à une identification absolument sûre. Ceux-ci fructifiant rarement en milieux de culture, il faut replacer le champignon dans un contexte le rapprochant le plus possible des conditions naturelles. 

Pour ce faire, la souche est inoculée à du bois (correspondant à l’essence où elle a été isolée), bois disposé dans un bac contenant de la vermiculite régulièrement humidifiée, placé dans une serre (technique mise au point au C.T.F.T., FOUGEPOUSSE, 1980). La méthode donne environ 70 à 80% de résultats positifs. Après un temps variable d’incubation (1 à 2 mois), les fructifications obtenues permettent une bonne détermination : 

- soit au laboratoire de mycologie du C.T.F.T. (Mademoiselle LUCAS) 

- soit au laboratoire du Professeur BOIDIN, Université Claude Bernard - Laboratoire de Mycologie - 69622 VILLEURBANNE Cedex. 

Les mycéliums stériles posent un problème; en effet, leur mode de reproduction n'est pas connu ou ne se manifeste pas. Certains Basidiomycètes ne possèdent pas de boucles, ou elles sont alors très fines. Pour faire la part exacte entre ces deux catégories de champignons, tous les mycéliums stériles sont inoculés en utilisant la méthode de fructifications précitée. 

Les ouvrages consultés pour la détermination de ces germes sont : 

BARNETT, 1960; GILLMAN, 1966; RIFAI, 1969; SMITH, 1969; ARX, 1970; AINSVORTH, 1971; ELLIS, 1971, 1976; BARRON, 1972; DOHANSKI, 1972; DOHANSKI, ORTOS et SKIRGIELLO, 1973; GAIS et HOLUBOVA-JECHOVA, 1976; RYVARDEN, 1976, 1978; DE GRQ0T et HERMANIDES-NIOHOF , 1977 ; REI-SINGER, KILBERTUS et KIFFER, 1978. 

Les bactéries isolées sur milieu nutritif sont déterminées en fonction : 

Les souches sont observées à l’oeil lorsqu’elles se trouvent en boîte de Pétri. 

Sont notées : la forme, la taille et la couleur de la colonie. 

Les bactéries sont pour cela observées au microscope optique et on notera : 

- leur forme et leur mobilité par observation dans une goutte d’eau. Sont sélectionnés les germes en bâtonnets pléomorphiques ou en coccis, ainsi que leurs associations (amas, grappes, chaînes, etc.). 

- le caractère ” gram ” : les parois bactériennes présentent des différences dans leur structure et leur composition chimique. La coloration gram effectuée selon BURKE et KOPELOV (cf. Annexe) permet de nettre ces différences en évidence et de définir les bactéries gram positif et gram négatif. 

Les germes gram positif prennent une couleur violette, les gram négatif apparaissent roses. Il existe toutefois entre ces extrêmes de teintes, toutes les colorations intermédiaires. 

Permet surtout de déterminer les Bacillacées. L’utilisation de la coloration de VIRTH-SCHAEFFER et FULTON (cf. Annexe) met en contraste la spore vis-à-vis du corps bactérien. Les spores sont des organes de résistance; elles représentent en plus du caractère taxonomique, un caractère écologique évident (PROTH, 1978). 

Il s'agit de déterminer quelques aptitudes enzymatiques. Pour ce faire, nous utilisons le système ” API” mettant 22 caractères en évidence (cf. Annexe). Ce système est utilisé couramment dans cette étude pour l'ensemble des bactéries et fournit des renseignements rapidement. Ces caractères permettent de faire une sorte de " screening pour la détermination des espèces, des tests plus spécifiques sont effectués (cf. KILBERTUS et al, 1977). 

Ouvrages consultés pour la détermination des genres bactériens ; PREVOT, 1961; BERGEY’S Manual, 1974; KILBERTUS, REI-SINGER et MOUREY, 1977. 

Les principaux genres et espèces fongiques isolés sur et dans le bois sont : 

• des levures "imparfaites” (Blastomycètes) : Candida sp., Rhodotorula sp. , levures indéterrines. 

. des levures "ascosporées" ( Endomycètales ) : Sacchanomyce 4p. 

. des Mucorales : Mucor hiemalis, Mucon sp. 

. des Sphaeropsidales : Phoma herbarum, Phoma. sp1 et phoma pithyophila. 

. des Agonomycetales : (Mycelia sterilia) de type blanc, brun ol gris. 

. des Hyphomycetales de la famille des " Mucedinacées " : Aspe"‘ gillus niger, A. de groupe nestrictus, Aspergillus sp. 

dium roseum, Penicillium frequentans, Penicillium impicatum, Penicillium sp1, sp2, sp3, sp4 ; Spicaria sp. Trichoderma, zianum. 

De la famille des ” Dematiacées ” : 

. des Basidiomycètes : Coriolus versicolor et deux espèces en cours de détermination. 

. Micrococcales : Micnococcus luteus • M. roseus, M. . varians S 

. Bactériales : Cellulomonas sp1 , sp2; Flavobacterium sp. Pseudo monas sp1, sp2, Pseudomonas alcaligenes, P.aenuginosa, Serratiamancescens, Xanthomonas sp. 

. Bacillales : Bacillus cereus, B.ceneus, var. mycoides, B. 

culans, B. megaterium, B. pumilus, B. subtilis, Bacillus sp1 e 

La position taxonomique de toutes les espèces citées figure en annexe. 

La décomposition des tissus lignifiés est un phénomène très lent (MANGENOT, 1952); par conséquent, notre expérience s’inscrit dans un intervalle de temps très petit par rapport à la durée nécessaire à une destruction complète du bois. Il faut rappeler que l’objet de ces investigations est de montrer ce qui se passe sur et dans le bois au tout début de son exposition dans les conditions expérimentales définies. Cette première phase, malgré sa brièveté, peut déterminer, par l’action des microorganismes, l’arrivée et le développement d’agents de pourritures. En fait, les organismes primaires dans la séquence de succession affectent la susceptibilité de l'essence à une éventuelle pourriture (PEECK et LIESE, 1976; BATEHAN, 1980). 

Après usinage et finition, les éprouvettes sont stockées dans un endroit sec. Avant leur installation, comme elles ne sont pas stérilisées, elles subissent un examen microbiologique et microscopique . 

La figure 23 montre que très peu de microorganismes ont été isolés. Le genre Penici££ium est le plus représenté, mais les examens au microscope électronique à balayage permettent d’observer que les champignons se trouvent disséminés sous forme de rares spores, et aucun mycélium et aucune bactérie n’ont été décelés aussi bien en surface qu’en profondeur du bois. Cette rareté et la présence des organismes observés sous leurs formes de résistance peuvent être expliquées par la faible humidité des éprouvettes conservées en attente de mise en expérience. 

62. EVOLUTION DE LA MICROFLORE DE SURFACE 

Les résultats sont exprimés sous forme de tableaux (figures 29 et 30). Le mode de représentation condensée est le même que celui utilisé pour exprimer les résultats des prélèvements effectués dans l’air et dans l’eau de pluie. 

Il nous apparaît comme illusoire de vouloir quantifier cette mycoflore compte tenu de son mode de multiplication et de 

FIGURE N° 28-Eprouvettes témoins : microflore 

développement. On pourrait adapter au bois la technique utilisée par JONES et MOLLISON (1948) en mesurant la longueur des hyphes colonisant la matière ligneuse, mais cette méthode est difficile à mettre en oeuvre à la suite de la dureté et l’architecture du substrat. La quantité et l’importance du développement de certains germes sur et dans le bois peuvent être appréciés grâce aux différentes observations faites en microscopie électronique à balayage. 

Les champignons jouent un rôle déterminant dans le phénomène de dégradation du bois par leurs activités métaboliques spécifiques. Les Basidiomycètes causent les dégâts les plus spectaculaires en catabolisant les deux principaux composés des parois cellulaires du bois : lignine et cellulose. Qu'ils appartiennent, selon la classification, aux champignons imparfaits ou supérieurs, le mode d’extension de ces organismes leur permet de coloniser facilement les éléments ligneux. Le phénomène d'envahissement et de pénétration dans le substrat est en relation directe avec la structure du bois (LIESE, 1970; VILCOX, 1973 ; SHITH, 1974; RADTKE, 1979). 

Il apparaît essentiel de déterminer les espèces fongiques isolées car chacune joue un rôle plus ou moins important en liaison directe ou non avec le phénomène de biodétérioration. 

Au total, 39 espèces de champignons ont été isolées de la surface des éprouvettes (figures 29 et 30), parmi lesquelles des Fungi imperfecti, des Basidiomycètes et des Levures. 

L'examen global de ces tableaux montre que la population microbienne peut se diviser en deux catégories : 

1. Germes n'apparaissant qu’épisodiquement et ne semblant pas se maintenir sur le substrat. 

2. Germes isolés régulièrement et massivement d'un prélèvement à l'autre. 

En fait, 70% environ, donc une forte majorité des champignons, appartiennent à la première catégorie. Bien que ne se manifestant que sporadiquement et de manière fugace, il n'est pas évident qu’ils puissent, parfois, jouer un certain rôle dans le processus de dégradation ou de préparation à la dégradation. 

Seul, un nombre très réduit de germes est représenté de façon régulière sur le bois : A. tenuis» A. pullulans, C. herbarum, B. cinerea, E. purpurascens, H. dematicides, Penicilium sp1., Candida, sp., Rhodototula sp. 

On observe un parallélisme entre les résultats des isolements faits à partir du milieu environnant et ceux effectués sur le bois. Les organismes présents le plus souvent dans l’air ou dans l'eau le sont aussi sur le bois, et réciproquement les moins représentés sont les plus rares en surface des éprouvettes. 

La relation entre la toute première phase, c’est-à-dire " organismes présents dans le milieu ambiant " et la deuxième phase ” dépôt de ces germes sur le bois " est parfaite. 

Les genres Cladosporium herbanum et Hormonema dematioides semblent les plus représentés : C. herbarum est très fréquent dans les milieux les plus divers. C’est une des espèces colonisant de façon précoce les végétaux sénescents ou morts (DOMSCH et al., 1980); fréquent sur les bois placés dans différentes conditions (ROBAK, 1932; BANERJEE et LEVY, 1971; WANG, 1965; GERSONDE et KERNER-GANG, 1968; KRIK, 1968 ; SASAKI et YOSHIDA, 1971). Colonisateur de surface (BUTIN, 1965), il peut causer des discolorations superficielles (WALCHLI, 1969; SASAKI, 1971; WANG et al., 1972; SMITH et SWAN, 1975; SAVORY et al., 1977 ; BRAVERY et MILLER, 1980; FOUGEROUSSE, 1980). 

H. dematioides est un important champignon de bleuissement (LAGERBERG et al., 1927; HERMANIDES-NIJHOF , 1977) pouvant provoquer des discolorations profondes (FOUGEROUSSE, 1980). Sa forme pycnidienne, Dothichiza pithycphila (Corda) Petr. ou Scle¬ - rephoma pithyophila (Corda) Hoenkel, a été isolée de bois vernis (BUTIN, 1963). 

Lorsque cette forme est isolée, il y a généralement apparition de ” pustules ” en surface des éprouvettes (figure 34). 

Aureobasidium vullulans et H. dematioides sont des genres très voisins et facilement confondus (DOMSCH et al., 1980). Ils sont très souvent isolés ensemble (HERMANIDES-NIJHOF , 1977 , FOUGEROUSSE, 1980) et provoquent les mêmes modifications de discoloration du bois. A. pullulans est une espèce très fréquemment isolée de milieux divers et possède une large répartition dans les 

pays tempérés et tropicaux (BROWN, 1959; SEMEL, 1959; CHRISTENSEN et WHITTINGHAM, 1965; HOLDING et al. 1965; GOCHENAUR et BACKUS, 1967; COOKE, 1969; DICKINSON et DOOLEY, 1969; FIEDLER et KASTNER, 1970; AHEARN et MEYER, 1972; HUANG et SCHMITT, 1975; SMITH et SWAN, 1975). Isolé de bois d’essences et de provenances différentes (ROBAK, 1932; MANGENOT, 1952; BUTIN, 1965; MORRALL et VANTERPOOL, 1968; PUGH et BUCKLEY, 1971; SASAKI et YOSHIDA, 1971; WICKLOW et WITTINGHAM, 1974; HAWKSWORTH, 1976), il peut, comme H. dematioides provoquer des bleuissements profonds (COOKE, 1959; SANERJEE et LEVY, 1971; GREAVES et SAVORY, 1965; WÄLCHLI, 1969; SAVORY et al., 1977; CLUBBE, 1980; FOUGEROUSSE, 1980). 

B. cinerea apparaît avec les bactéries, Fusanum.spp. et C.°henbanum, comme le premier colonisateur de la surface du bois (BANERJEE et LEVY, 1971). Sa répartition est très large (DOMSCH et al., 1980), mais son action au niveau des parois lignifiées ne semble pas être connue. 

Les sclérotes de B. cinerea peuvent être parasitées par Gliocladium roseum ou Trichothecium roseum ( ERVIOE , 1965 ; JARVIS, 1973). Ce dernier est isolé de l’air et non sur le bois. 

A. tenuis est essentiellement isolé sur le milieu de culture pour germes cellulolytiques. Champignon très commun, il colonise les substrats les plus variés (ELLIS, 1971). On le trouve ouvent associé au bois (VERRALL, 1939; BUTIN, 1961; COURTOIS, 1963; 

HUTHERFORD, 1965; BARRON, 1968; LEVY, 1971; FOUGEROUSSE, 1980) sur lequel il provoque des discolorations noires (LIESE, 1964; KRIK, 1980). 

Il est connu pour ses capacités à dégrader la cellulose (VÄLCHLI , 1969, LIZAK, 1975) et peut utiliser l'amidon (se trouvant er grande quantité dans les cellules narenchymateuses chez l'Ilomba) (BORUT, 1960; FRANZ, 1975 ), xylane et pectines (BORUT, 1960; DOHSCH et GANS, 1969). 

Epicoccum purpurascens est très fréquent dans l'air 

( SCHOL-SCHWARZ, 1959 ; HEREDITI, 1966 ; IGOLD, 1971) et de distribution mondiale; il colonise pratiquement tous les milieux. On l'isole de bois altéré (BARNETT, 1960; HAWKSWORTH, 1976), de la surface de po eaux mi-enterrés (BANERJEE et LEVY, 1971), d'éprouvettes placées hors contact du sol (FOUGEROUSSE, 1980). Son action sur le bois est 

Les Penici£Rium représentent un genre très vaste et sont isolés pratiquement partout. Ces champignons produisent des cellulases et peuvent altérer la cellulose (SMITH et BERRY, 1974). Certains peuvent pénétrer profondément dans le bois (KRIK, 1980). 

Les levures Candida sp. et Rhodotorula sp. ont été isolées massivement de certaines éprouvettes. La présence et l’action des levures ont été signalées par les chercheurs : BASHAM, 1959; KÄÄRIK, 1975; KILBERTUS et al., 1976, et montrent la présence de levures lors des stades initiaux de la colonisation du bois par les microorganismes. Les levures formeraient d'importantes associations avec les Basidiomycètes et utiliseraient les composés libérés par ceux-ci (BLANCHETTE et SHAW, 1978). Ces organismes doivent probablement intervenir dans le processus grâce à leur pouvoir de fermentation de certains sucres (KILBERTUS, 1981). 

Si les germes appartenant à la première catégorie ne sont isolés que sporadiquement, cela ne signifie pas pour autant que leurs actions au niveau du phénomène de biodétérioration soient négligeables. En fait, certains peuvent occasionner des pourritures profondes : 

- pourritures blanches : Coriolus versicolor 

- pourritures molles : Phcma herbarum (DUNCAN et ESLYN, 1966), Phoma sp., Scytalidium lignicola (KARIK, 1980). 

D'autres ne paraissent pas agir directement sur les parois lignifiées, mais provoquent des changements de teintes du bois, ceci en relation avec la couleur de leur mycélium : Ph oma sp. S. lignicola, Epicoccum putnutascens (KÄÄRIK. 1930). 

D’autres peuvent agir sur la dynamique du phénomène par les relations qu'ils ont avec les autres microorganismes. En particulier, ceux connus pour leur pouvoir antagoniste; espèces appartenant aux genres Trichoderma, Scytulidium (ou 

Gliccladium sont connues pour être antagonistes vis-à-vis de Basidiomycètes ou d'autres champignons (SMITH, 1969; WE\DLI\G, 1932, 1934; WENDLING et EMERSON, 1936 ; RICARD et al. 1969; 

DENNIS et WEBSTER, 1971; KLINGSTROM et JOHANSSOV, 1972; RICARD, 1974, 1975, 1977; MORRIS, 1979). 

Enfin, plusieurs espèces isolées paraissent n’avoir aucun rôle au niveau de la chaîne de succession. Certaines ont toutefois été isolées du bois: Aspenrg£Eus spp. , Mucor spp.» Spicaria spp., penicillium spp. (BANERJEE et LEVY, 1971). 

. Analyse des résultats en fonction du type d'éprouvette de l'essence et du prélèvement 

Parmi les espèces présentes en surface des éprouvettes, une certaine quantité peut participer activement à la détérioration du matériel ligneux. Il faut donc essayer de définir leur comportement en fonction du type d’éprouvette de l'essence utilisée et du prélèvement. 

L'irrégularité de la présence des germes appartenant à la première catégorie ne semble pas être dépendante ou liée à l’essence ni au prélèvement. En effet, on constate le même phénomène qu’il s'agisse du Hêtre ou de l’Ilomba. Par conséquent, on ne peut pas vraisemblablement tirer de conclusions quant à leur rôle éventuel dans le processus. 

Seul, le cas des isolement des Basidiomycètes fait excep ion, car leur action se manifeste très nettement et elle est visible macroscopiquement. 

Ce n'est que lors du premier cycle de prélèvement 

(25 Juillet au 2 Octobre 1980) qu’une pourriture a été décelée sur des éprouvettes " Y " en Hêtre. Cette pourriture blanche 

provoquée par C. versicolor est à ce moment (84e jour) isolée avec une fréquence maximale. Le champignon a envahi tout le tenon. Cet agent s’est donc déposé, puis développé entre le 42e et le 84e jour de mise en place des éprouvettes. Le test de la profondeur de pénétration (cf. Protocole expérimental) montre ue la pourriture s'est étendue très profondément dans la grande branche (4,5 cm) et dans la petite branche de l'éprouvette (3,5 cm). 

En fait, aucun autre cas de pourriture n'a été constaté, ni par l’observation macroscopique, ni lors d'examen en microscopie, pendant les trois cycles de prélèvements. Bien que diffé- 

rents Basidiomycètes aient toutefois été isolés en surface des éprouvettes, il semble qu’ils n’aient pas trouvé des conditions favorables à leur développement (nature du substrat, humidité superficielle, etc.) 

En ce qui concerne les germes de la deuxième catégorie, diverses remarques peuvent être faites : 

- Aureobasidium pullulans : sa présence est notable sur les éprouvettes en Hêtre et en Ilomba pendant toute la durée du 1er cycle, moins fréquent lors des 2e et 3e cycles, il n’est pratiquement pas isolé des éprouvettes de Pin. 

- Cladosporium herbarum : ce champignon est très souvent isolé sur les trois essences au 1er cycle de prélèvements, alors qu’il l’est plus rarement lors des autres cycles. 

- Hormonema dematioides est l’espèce semblant la plus représentée en surface des éprouvettes quel que soit le cycle ou l’essence. Si la gradation de son apparition est nette lors du 1er cycle, au niveau des séries de Novembre et Hars il y a un léger décalage ; en effet, il est alcrs isolé qu’à partir des 2e et 3e prélèvements. 

" Botrytis cinerea est présent en fin de cycle (42e et 84e jours) sur les éprouvettes en Hêtre. Son apparition sur celles de Pin et Ilomba est plus sporadique. 

- Epicoccum purpurascens, pratiquement absent sur le Pin, est 

isolé au niveau des derniers prélèvements (42e et 34e jour) sur les éprouvettes de Hêtre et d’Ilomba. 

- Alternaria tenuis : cette espèce est plus souvent rencontrée lors du 1er cycle d’expérience, plus rarement lors des 2e et 3e (cf. Germes cellulolytiques ) . 

- PeniciRRium spl apparaît sur les trois essences et pendant les trois cycles. Il est intéressant de noter que cette espèce exerce un antagonisme vis-à-vis d’Hermenem dematioides. En effet, sur milieux de culture, les souches d ’ Hermenema dematioides sont spontanément” recouvertes par le Penicillium qui empêche alors sa croissance. 

- Sclerophoma pithuophila est isolé exclusivement sur les éprouvettes 

éprouvettes Pin et de Hêtre. S. pithyophila. est la forme pycnidienne d’ Hormonema dematioides , son apparition coïncide avec la 

formation de " pycnides perçant le vernis en surface des éprouvettes. Les isolements faits, soit à partir des pustules soit au niveau des zones sous-jacentes permettent d’identifier sur milieu de culture la forme levure noire ou la forme Phoma. 

Les levures Candida sp. et Rhodotonu£a apparaissent massivement et fréquemment sur les éprouvettes de Hêtre et d'Ilom-ba, moins souvent sur le Pin. Il faut noter que lorsque le Basidio-mycète a envahi l’éprouvette ">" de Hêtre (1er cycle, 84e jour) ces deux espèces ne sont plus isolées. 

Eprouvette de type " plate " 

Pour les germes de la première catégorie, on peut faire les mêmes remarques que celles des éprouvettes en 

Seul, un Basidiomycète est représenté : Conio£usvensi-co£on, mais aucun cas de pourriture n’a été constaté. 

En ce qui concerne les germes appartenant à la deuxième catégorie : 

- Auneobasidium pullulans est toujours bien représenté sur les éprouvettes de Hêtre et d’Ilomba. Hais cette espèce n’est pas toujours isolée; en effet, elle peut apparaître massivement lors d'un prélèvement et ne plus être rencontrée ensuite. Sa présence sur le Pin est plus rare. 

- Cladosporium herbarum est très souvent isolé de façon régulière et continue sur les trois essences. On notera un léger décalage dans son apparition au 3e cycle de prélèvements. 

- Hormonema dematioides présente pratiquement le même comportement qu ' Aureobasidium pullulans. Néanmoins, son isolement sur 

le Hêtre lors des 1er et 3e cycles de prélèvements est très régulier. Il est abser.t aux deux cyles sur l’Ilomba. 

- Botnytis cinerea est isolé sur les trois essences et sa fréquence d'apparition senble plus importante que celle des éprouvettes en " Y ” . 

- Epicoccum purpurascens est surtout présent en fin de cycle sur les éprouvettes de Hêtre et d’Ilomba. 

- Alternaria tenuis montre une fréquence d’apparition irrégulière, mais isolée sur les tris essences. 

L’espèce de Penicillium sp1 est moins souvent rencontrée que dans le cas des éprouvettes en ” Sclerophoma pithyophila 

pithyophila isolé qu’une seule fois, aucune formation de pustules n’a été observée sur la surface des éprouvettes. 

Les levures Candida sp et Rhodotorula sp. ne sont pratiquement pas présentes sur le Pin et leur apparition sur les éprouvettes de Hêtre et d'Ilomba peut être mise en évidence lors d’un prélèvement, mais leur apparition n’est pas toujours régulière. Rhodotorula sp. est plus rare lors du 3e prélèvement et n’est pas rencontré sur l’Ilomba ni sur le Pin. 

Les isolements et déterminations des éléments de la flore fongique permettent de dégager certains aspects du comportement des microorganismes vis-à-vis du substrat, en fonction de l’environnement, de la saison, du type d’éprouvette et de l’essence utilisée. 

Il y a parfaite corrélation entre germes se trouvant dans l’air ou l’eau de pluie et germes fongiques se déposant sur le bois. Les espèces les plus fréquentes dans l’environnement sont les plus représentées sur le bois. 

L’influence des saisons est surtout mise en évidence par la faible quantité d’espèces de champignons présentes sur le bois lors du 2e cycle de prélèvement (Novembre 1980 à Février 1981). En effet, si en été (Juillet à Octobre 1980) les espèces prédominantes sont isolées dès les premiers prélèvements, lors de la saison hivernale elles n'apparaissent qu’au 3e ou 4e prélèvement. Il semble que la température joue un rôle extrêmement important sur le développement des microorganismes. Le seul Basidiomycète ayant provoqué une pourriture pendant la période de trois mois d'exposition a été isolé lors de la première série, de prélèvements. La température moyenne pendant toute la durée de ce cycle était de 23°C ; en hiver, celle-ci varie entre -2° et 1°C et l'activité microbiologique semble être ralentie. 

Le même phénomène se produit au niveau du 3e cycle d’expériences; la température oscillait autour de 15°C. La cause de cette baisse d'activité lors des premiers prélèvements semble être différente. 

En effet, les éprouvettes ont été installées au début d’une période de sécheresse d'une durée de 15 jours, et les conditions d'humidité en surface des échantillons ne permettaient vraisemblablement pas un développement sensible des microorganismes. 

Par conséquent, les facteurs météorologiques agissent directement sur le développement des organismes présents sur le bois. 

Les variations et différences dans la fréquence des microorganismes enregistrées entre les éprouvettes plates et > sont liées à la conception même de celles-ci. Le facteur humidité intervient pour une grande part. 

La plupart des auteurs s'accordent sur le fait qu'en dessous d'un seuil de 22% d'humidité aucun agent de pourriture peut s'installer (SAVORY, 1967; NASH-WORTHAM et SAVORY, 1968; LISKA, 1971; DE GROOT, 1972; SAVORY et al., 1977). 

Ce pourcentage critique est plus facilement atteint au niveau des éprouvettes >, l'eau se répartissant mieux dans le bois. Les éprouvettes de ce type ayant été les seules à être le siège d'une pourriture. 

A l'opposé, certains genres se maintinnent difficilement sur les éprouvettes plates, la surTace d'évaporation y est très importante. Une humidité optimale pouvant permettre un bon développement des microorganismes est plus difficilement atteinte. La présence plus importante et régulière de certaines espèces comme C.henbanum peut être liée au fait qu'elles supportent bien les conditions de sécheresse. C. est connu pour être un 

organisme xérophile (DOMSCH et al., 1930 . 

L'influence de l'essence utilisée sur les populations fongiques est nette en ce qui concerne le Pin. En effet, certains germes se développent plus tardivement sur cette essence; d'autres, présents sur le Hêtre ou l’Ilomba ne sont pas isolés de la surface des éprouvettes en aubier de Pin. Il semble, par conséquent, que cette essence placée dans ces conditions, malgré sa. faible durabilité, offre un milieu moins propice à l' établissement initial des champignons. 

Il apparaît que l'activité de surface est plus importante en fin de cycle sur les éprouvettes. 

622. EVOLUTION DE LA FLORE BACTERIENNE DE SURFACE 

La plupart des auteurs placent les bactéries en première position dans les chaînes de succession qu’ils proposent (BASHAM, 1957, 1958, 1966; SHIGO, 1965, 1969; BANERJEE et LEVY, 1971; CLUBBE, 1980; CAREY et al., 1981). Pour certains, leur rôle dans l’altération du bois est extrêmement important : elles peuvent causer des dégâts importants et augmenter la perméabilité du bois (SUOLATHI et WALLEN, 1958; GREAVES, 1966, 1969, 1971, 1973; B0UTELJE et BRAVERY, 1968; SCHMIDT, 1978). Pour d'autres, leur action lytique est beaucoup plus réduite que celle des champignons et le processus de dégradation est beaucoup plus long (LIESE, 1970). En fait, des attaques importantes ont été observées dans des bois placés dans des conditions spéciales : bois immergés, piles de pont, tours de réfrigération, etc. 

Le rôle des bactéries dans le processus primaire de la dégradation des bois placés hors contact du sol est encore mal connue. 

La microflore totale présente en surface des zones d'étude et est exprimée en nombre de germes par cm 2. 

Les chiffres obtenus sont rapportés dans les tableaux ci-après. 

• Cas des éprouvettes en Hêtre (Y) 

La progression du nombre total de bactéries lors du premier cycle de prélèvement est régulière. Ce nombre passe à 33.000 germes/cm 2 entre le 42e et le 84e jour, époque à laquelle le champignon de pourriture ( Coriolus versicolor ) s'est développé. 

Aux second et troisième cycles, la quantité de qermes est très faible lors des trois et quatre premiers prélèvements. En fait, ce phénomène a déjà été mis en évidence dans le cas de la flore fongique. L'influence de la température pendant la saison d'hiver pour le 2e cycle, et celle d’une période de sécheresse pour le 3e cycle, réduit fortement le nombre de germes présents, et par conséquent l'activité des microorganismes en surface du substrat. 

NOMBRE DE GERMES / CM 2 

• Cas des éprouvettes en Ilomba(Y) 

Au premier cycle de prélèvement, la progression du nombre de bactéries est moins régulière que pour le Hêtre. 

Au 21e jour, aucune bactérie n’est isolée alors que dans le cas du Hêtre une baisse de la quantité de germes est constatée pour le même prélèvement. Cette diminution ou disparition des organismes en surface du substrat pourrait être en rapport avec la période de sécheresse qu’ont subi les éprouvettes pendant dix jours avant le prélèvement. 

L’absence de germes lors des 2e et 3e cycles est également constatée. 

Le nombre maximum de bactéries est enregistré sur cette essence, ceci 84 jours après la mise en place des éprouvettes, soit 64.000 germes au cm2. 

• Cas des éprouvettes en Pin (Y) 

La rareté des germes bactériens sur les éprouvettes en aubier de Pin est particulièrement significative. Ce nombre augmente faiblement en fin de chaque cycle, mais ne dépasse pas les 104 germes au cm 2. 

La présence plus rare des microorganismes à la surface des éprouvettes en Pin, et par rapport aux deux autres essences utilisées a déjà été mise en évidence lors de l’exploitation des résultats de la flore fongique. 

En règle générale, on constate que : 

- le nombre total de bactéries présentes à chaque prélèvement est faible et ne dépasse pas les 65.000 germes au cm 2 

- ce nombre a tendance à augmenter en fin de cycle, au moment où l'activité globale en surface est plus importante (cf. résultat flore fongique) 

- l'augmentation significative de la quantité de bactéries lors de l’infestation par le champignon de pourriture 

- la rareté des germes bactériens en surface des éprouvettes de Pin. 

. Cas des éprouvettes en Hêtre (plate) 

Aucune progression régulière du nombre de germes sur les éprouvettes plates de Hêtre n’est dégagée. Ce nombre reste très faible et ne dépassé pas les 4.700 germes/cm 2. 

Aucun organisme bactérien n’a été isolé lors du 3e cycle d’étude au niveau des 5 premiers prélèvements. 

. Cas des éprouvettes en Ilomba (plate) 

Comme pour le Hêtre, le nombre de bactéries varie de façon très inégale d’un prélèvement à l'autre. 

Si, lors du 3e cycle d’études, pratiquement aucun germe n’est isolé, au 2e ce nombre atteint 32.000 germes/cm 2. 

•. Cas des éprouvettes en Pin (plate) 

La quasi inexistence de germes bactériens en surface des éprouvettes de Pin est ici particulièrement significative. 

La quantité de bactéries, faible ou présente de façon très irrégulière serait en relation avec les conditions hydriques. En effet, ces éprouvettes ne peuvent pas conserver pendant long-une humidité suffisante en raison de la qrande surface d’évaporation. 

Le nombre de bactéries reste faible en surface du bois, par rapport à la quantité de germes isolés d’autres substrats (sol, aliments, etc.). Celui-ci est néanmoins plus important dans le cas des éprouvettes en >, conservant mieux l’humidité que les plates, et l’augmentation de la quantité d’organismes en fin de cycle (42 et 84 jours après mise en place) est en relation avec l’augmentation des espèces fongiques au même moment (. ignificatif en cas d’infestation par une pourriture). Ce nombre, plus grand, serait lié à une activité biologique importante en surface. 

L’influence des saisons, ainsi que des périodes prolongées 

prolongées sécheresse agissent sur la quantité de bactéries en surface. 

En effet, des températures basses en moyenne ou une humidité faible empêcheraient la croissance et le développement des organismes bactériens. 

Eprouvette de type " plate " 

NOMBRE DE GERMES / CM 2 

Evolution quolitotive de lo flore bactérienne 

Les résultats sont exprimés en utilisant le même mode de représentation que celui employé pour les champignons. 

Au total, 24 souches bactériennes ont été isolées de la surface du bois (figures 33 et 34) . Deux familles sont bien représentées : les Bacillacées (9 genres) et Pseudomonacées (8 genres). Quatre autres genres appartiennent à la famille des Micrococcacées. 

La lecture de ces tableaux montre que les bactéries apparaissent très irrégulièrement sur le substrat et on les retrouve rarement d’un prélèvement à l’autre. On pourrait les classer dans la catégorie 1 équivalente de celle des champignons. 

En fait, on constate qu'il n'y a pas de superposition possible entre les prélèvements faits de l'air ou de l'eau de pluie et ceux effectués sur le bois. 

Le passage entre la première phase du phénomène (organismes présents dans l'environnement) et la seconde (dépôts de ces germes sur le bois) est dans le cas des bactéries, plus difficile à mettre en évidence. 

Malgré leur présence sporadique, certaines espaces, si elles ne participent pas directement à la dégradation du bois, peuvent cataboliser des composés démasqués à un moment dorné par d'autres organismes. 

Les bactéries peuvent influencer le développement d'autres agents colonisateurs du substrat en utilisant les substances libérées par les champignons (KILBERTUS et al., 1973 ; REIS.NGER et KILBERTUS, 1975), ou en excrétant des composés pouvant, soit favoriser soit inhiber le développement de certains microorganismes (SHIGO, 1965 ; HENNINGSSON, 1967 ). 

D'autre part, les diverses aptitudes enzymatiques des bactéries leur confèrent la possibilité de dégrader beaucoup de composés pouvant se trouver dans le bois : cellules fongiques sénescentes (FARGUES et al., 1975), grains de pollen (ROHR et KILBERTUS, 1977; PROTH, 1978) ou des substances de réserve (par exemple, l’amidon chez l’Ilomba). 

- Bacillus brevis est très peu rencontré, que ce soit sur les éprouvettes plates ou en Y. Cette bactérie peut décomposer le xylane (SCHiIDT et DIETRICHS, 1976) constituant des parois cellulaires. 

- Bacillus cereus, pratiquement pas isolé des éprouvettes plates, est rencontré en plus grande quantité sur les éprouvettes Y en Hêtre (2e série, 42e jour) et en Ilomba (lière série, 14e jour). Cette bactérie utilise lu pardoxyméthylcellulose (SCHMIDT et DIETRICHS, 1976) et produit des cellulases (GREAVES, 1973), des enzymes protéolytiques (BERGEY, 1974). Elle peut, dans certaines conditions, sur du bois immergé ou des copeaux, occasionner des augmentations de perméabilité du bois : sur Pin, Limquambar, Chêne, etc., (ELLWOOD et ECKLUND, 1959 ; KNUTH, 1964). B. cereus peut provoquer des attaques au niveau des ponctuations. Pin et Sequoia (KVUTH. 1964; KARNOP. 1967). On lui attribue également des activités antagonistes vis-à-vis d’autres organismes, telles les bactéries (BERGEY, 1974). 

- Bacilleus cereus var. mycoïdes. Très fréquente dans la nature, cette espèce a été peu souvent isolée de notre matériel 

- Baccillus circulans. . Cette espèce isolée sur les éprouvettes plates 

en Ilomba et celles en de Pin et de Hêtre peut dégrader diverses substances présentes dans les parois cellulaires du bois, xylane et hololocelluloses (SCHMIDT et DIETRICHS, 1976 ) et celluloses (GREAVES, 1973; BERGEY, 1974). 

- Bacillus megaterium. Cette imposante bactérie est plus souvent rencontrée sur les éprouvettes en >, particulièrement sur Hêtre (3e série, 42e jour). Elle utilise le xylane (SCHMIDT et DIETRICHS, 1976), et peut provoquer des pertes de perméabilité et des attaques au niveau des torus (Séquoia, tours de réfrigération) (K\UTH, 1964). Elle produit des cellulAses (CREAlES. 1973 ) et peut également hydrolyser l’amidon. 

- Bacillus pumilus utilise le xylane (SCHMIDT et DIETRICHS, 1976 ). Il a été signalé comme occasionnant sur du Pin (piles ce ponts) des augmentations de perméabilité et des attaques au niveau des torus (KNUTH, 1964). Certaines souches peuvent sécréter un antibiotique : la pumiline. 

- Bacillus subtilis dégrade le xylane SCHMIDT et DIETRICHS, 1976) et possède des activités pectinolytiques (pectines, présentes 

dans la membrane primaire) (KARNOP, 1977) et peut décomposer plusieurs polysaccharides, tel l’amidon (BERGEY, 1974). 

Cette espèce libère des substances antibiotiques et lytiques vis-à-vis de certaines bactéries (BERGEY, 1974). Les effets antagonistes vis-à-vis de Coriolus versicolor, Lenzitestnabeum et Chaetomium globosum ont été démontrés par GREAVES (1970). 

En effet, son action sur C. versicolor. par libération d’antibiotiques (subtiline, subténoline, bacilomycine ) est particulièrement nette. Ce genre a été isolé lorsque le Basidiomycète, C. versicolor a envahi l’éprouvette de Hêtre lors du 1er cycle de prélèvement. 

- Bacillus sp1 et sp2. La première espèce est le plus souvent isolée sur les éprouvettes en , particulièrement sur l’Ilomba, les tests ont montré que la souche hydrolyse l'amidon. La souche sp2 n’apparaît pratiquement pas. 

- Cellulomonas sp1 et sp2. Ces Pseudomonacées sont isolées plus fréquemment sur les éprouvettes en Hêtre. Elles se caractérisent par leur aptitude à dégrader les celluloses (BOUTELJE et GÖRANSSON, 1971; BERGEY, 1974; SCHMIDT et al., 1976; PROTH, 1978). Ces germes peuvent avoir une grande importance au niveau de l’écologie du bois. Hais en aucun cas, ils peuvent dégrader le bois sans que celui-ci ait subi un traitement chimique ou une modification profonde au niveau de la constitution chimique des parois cellulaires (L1ESE et GREAVES, 1975 ; SCHMIDT, 1980 . Ces espèces ne sont pas apparues en surface lorsque C. versicelor A avait colonisé le Hêtre, et elles n’ont été mises en évidence que très rarement sur le milieu approprié (cellulolytique) . 

- Flavobacterium sp. Certaines espèces peuvent hydrolyser l’amidin et produire des cellulases (GREAVES, 1973) et leurs activités sur des parois cellulaires délignifiées du parenchyme des rayons et des cellules bordantes des canaux secréteurs ont été démontrées par LIESE et GREAVES (1975). 

- Micrococcus luteus. SCHMIDT et DIETRICHS (1976) montrent que cette espèce ne peut pas se développer sur le bois, et ne peut utiliser des composés isolés et purifiés du bois comme cellules, holocellulose, pectine, xylane, mannane. 

- Micrococcus roseus. . De la même famille que l'espèce précédante, nous disposons de peu de renseignements re sa présence sur le 

bois. Espèce très fréquemment isolée des poussières, elle oxyde quelques sucres. 

- Micnococcusvanians. Cette espèce peut secréter des celluloses (GREAVES, 1973). Elle est d’ailleurs très peu rencontrée dans nos expériences. 

- Pseudomonas aeruginosa ne semble pas avoir une action directe sur les parois lignifiées et ne dégrade pas des composés isolés et purifiés de celles-ci (SCHMIDT et DIETRICHS, 1976). Cependant, cette bactérie peut exercer de forts effets antagonistes vis-à-vis de C. versicolor (GREAVES, 1970). Elle est isolée massivement et en fin du 2e cycle sur les éprouvettes en Y et sur les trois essences, alors qu'elle n'est pas rencontrée sur les éprouvettes plates. 

- Pseudomonas alcaligenes n'est présent en surface que sur les éprouvettes Y en Hêtre. C’est un aérobie strict. Nous ne disposons pas de renseignements bibliographiques intéressants sur son éventuelle action,sur le bois. 

- Pseudomonas sp1 et sp2 sont représentés exclusivement sur les éprouvettes en Y . Certaines espèces de Pseudomonas peuvent produire des cellulases (GREAVES, 1973) ou exercer de faibles actions sur le bois (augmentation de la perméabilité du bois de Pin stocké sous l'eau (ELLWOOD et ECKLUND, 1969). 

- Xanthomonas sp. Cette espèce a été très peu souvent isolée de la surface des éprouvettes. Ce genre est connu pour causer diverses altérations sur du matériel végétal frais (BERGEY, 1974). 

- Sancina sp. est isolé une fois à la surface d’une éprouvette plate du Hêtre. Cette espèce ne pourrait pas jouer un rôle déterminant au niveau du phénomène de dégradation du bois. 

- Serratia marcescens. Cette espèce (isolée une seule fois de l’Ilomba) peut dégrader le xylane (SCHMIDT et DIETRICHS. 1976) et causer des altérations au niveau des parois des trachéides de Pinus radiata (GREAVES, 1973). 

Nous avons déterminé la présence ou l'absence de ces organismes sur le bois à un moment précis. En fait, et cela a été démontré par SCHMIDT (1978 ; 1980), aucune bactérie ne peut dégrader le bois à l’état naturel, mais si celui-ci est l'objet d'une dégradation importante une perte de lignine peut être occasionnée par ces germes. 

Les bactéries sont présentes lors des tous premiers stades de la biodétérioration des bois placés hors contact du sol. Elles ne participent pas directement à la destruction des parois lignifiées. Pourtant, les grandes possibilités métaboliques, en particulier la production d’enzymes, leur confèrent le pouvoir de dégrader des substances très variées et d'apparaî-tre à n’importe quel moment du cycle de dégradation. 

Leur structure procaryotique fait qu’ils sont classés parmi les bactéries (KING et al., 1978). Le peu de littérature dont on dispose montre que ces organismes sont très souvent isolés du sol (ALEXANDER, 1961 ; WAKSMAN, 1961, 1967 ; GOTTLIEB, 1973 ; LACEY, 1973.) ou d’un environnement aquatique (WEYLAND, 1969 ; BURMAN, 1973 ; WILLOUGHBY, 1976). Plusieurs auteurs ont détecté la présence d'Actinomycètes dans le bois à différents stades de sa décomposition, principalement lorsqu’ils se trouvent en contact avec les deux milieux précités ( HARMSEN et VINCENTS-NISSEN, 1965 ; ESLYN, 1967 ; HOWARD, 1968 ; SHARP, 1970 ; GREAVES, 1972 ; EATON et DICKINSON, 1976 ; LEIGHTLEY et EATON, 1977 ). 

Nous disposons de peu de renseignements sur leur fréquence dans l'air ou sur le bois placé hors contact du sol. Bien que ces organismes aient les possibilités de dégrader le bois (BUTCHER, 1968; GREAVES, 1970; BAECHLER et KING, 1978) et d'utiliser des matériaux complexes: chitine, lipides, stéroides, hydrocarbures (WILLIAMS, 1966), cellulose (JONES et BRADLEY, 1964; JOHNSTON, 1972), nous n'avons pratiquement jamais isolé d'Actinomycètes en surface du bois, tout comme nous n'en rencontrons que rarement dans le milieu ambiant. Cette constatation est en accord avec les travaux de SMITH et SWANN (1975) qui portaient sur l'étude de la colonisation et de la dégradation de tuiles de Cèdre (Thuja plicata Don) sur une période allant de 14 à 25 ans. 

- Les bactéries interviennent tout au long du cycle et renforcent, grâce à leurs pouvoirs enzymatiques, l’action des autres organismes. Si elles ne dégradent pas directement le bois, elles exercent diverses influences (antagonisme, utilisation de déchets, etc.). 

- Si le rapport entre la rareté des Actinomycètes dans l’air ou l’eau de pluie et la faible fréquence enregistrée sur le bois est net comme dans le cas des champignons, celui-ci l’est moins dans le cas des bactéries. 

63. FLORE A CAPACITE DE PENETRATION 

Le passage en profondeur est lié à l’aptitude que possèdent certains microorganismes à coloniser le substrat lui convenant. Par conséquent, ces microorganismes sont plus aptes à provoquer des modifications du bois en profondeur. 

Il faut rappeler, avant exploitation des résultats, que nous considérons qu'un organisme n’est plus strictement superficiel à partir du moment où sa pénétration dans le bois atteint le niveau -0,2 mm à la précision d’usinage près (figure 27). En effet, l’objet de cette étude est d’examiner les premiers stades de colonisation du bois, car les périodes d’exposition volontairement assez courtes ne permettaient pas a priori, et sauf exceptions, des propagations réellement profondes des microorganismes intéressants. 

Le mode de représentation n’exprime pas comme dans le cas de la flore de surface un ordre de grandeur, mais montre la présence de tel ou tel microorganisme dans le bois : c'est pourquoi, les cases sont soit entièrement blanches (absence) soit entièrement noires (présence). 

D'une façon générale, on constate que les espèces pouvant réaliser une certaine pénétration dans le bois sont précisément celles rencontrées le plus fréquemment en surface des éprouvettes et dans le milieu environnant, Mais le nombre de microorganismes possédant cette faculté est réduit par rapport au nombre total d’espèces isolées en surface. 

L'activité, à partir de ce niveau -.2, est plus prononcée vers la fin des cycles entre le 20 et le 84e jour. période au cours de laquelle on observe d'ailleurs une activité de surface également plus importante. 

Comme nous venons de le préciser, seules quelques espèces parviennent à pénétrer dans le substrat : A. pullulans , S. cinerea, C. herbarum, H. demnaticides, F. ourourascens, Penicillium sp1, Candida sp., Rhodotorula sp. C'est aussi le fait de champignons plus rarement rencontrés en surface : Phoma herbanum, sp., Scytalidium lignicola et Cericlus versicolor. 

Eprouvette de type " Y " 

Des espèces, et plus particulièrement des levures 

telles Rhodotorula sp. et Candida sp., apparaissent très rapidement dans les zones situées à -0,2 mm de la surface; 

- Candida sp. infeste le bois en profondeur à partir du 21e jour chez le Hêtre et du 14e jour chez l’Ilomba lors du 1er cycle d’expérimentation. Sa présence en profondeur chez le Pin n’est que discrète et si elle ne se manifeste pas au 1er cycle, elle est tardive lors des 2e et 3e (84e jour). 

- Rhodotorula, sp. n'apparaît pas dans le Pin et pratiquement pas dans l’Ilomba, mais cette levure infeste massivement le Hêtre au bout du 8e jour, lors du 1er cycle de prélèvements. Il est intéressant d'observer que ces deux espèces ne sont pas retrouvées dans le bois lorsque celui-ci a été envahi par le Basidio-mycète (1er cycle, 84e jour) : cette absence est également constatée en surface. 

- Aureobasidium pullulans est bien représenté chez le Hêtre et l’Ilomba, mais ne colonise pas le Pin en profondeur, ce dernier phénomène étant en relation avec la rareté enregistrée en surface de cette essence. Dans le cas du Hêtre et de l’Ilomba, à plusieurs reprises A. pullulans est isolé au niveau -0,2 alors qu’il ne l’est pas en surface au même moment ( Hêtre : 2e cycle 84e jour, 3e cycle 84e jour; Ilomba : 1er cycle 42e et 84e jours, 2e cycle 41e jour. Cela peut être en relation avec les conditions d’humidité régnant dans ce type d’éprouvette. Le fait qu'A. pullulans pénètre dans le bois de Hêtre a déjà été signalé (SHARP, 1975), ainsi que sa possibilité dans certains cas de causer une altération du type pourriture molle, l'est également (SAVORY, 1954). Ce champignon possède diverses activités enzymatiques lui permettant d’hydrolyser un grand nombre de substances Les meilleures sources de carbone sont les polysaccharides, tels dextrine et amidon (DEMIS et BUHAGIAP, 1973, LINGAPPA et al. 1963). Cette aptitude à dégrader l’amidon est en contradiction avec le fait qu’on ne le retrouve pas très fréquemment chez l’Ilomba, alors que cette essence possède des cellules de rayons bourrées de grains d'amidon (voir figure 19 et 48). A. pullulans dégrade les composés pectiniques (SMIT, 1953; LOUB, 1960) situés 

dans la lamelle moyenne, produit diverses enzymes déqradant les osides, des cellulases et des xylanases (ROESCH et al., 1969 ; FLANNIGAN, 1970; BERNT et LIESE, 1971; R0E5CH et LIESE, 1971). La grande variété dans la production enzymatique peut conférer à cette espèce la possibilité de coloniser divers substrats, et en particulier le bois. 

- Botnytiscinenea est présent au-delà de -0,2 mm en fin de cycle chez le Hêtre et l’Ilomba, mais non chez le Pin (comme nous l'avons déjà précisé, c’est un colonisateur de surface et son rôle sur et dans le bois est mal connu). Néanmoins, ce champignon peut cataboliser un certain nombre de composés: des sucres et des glycosides (MAAS et POWELSON, 1972; JARVIS, 1977). Il possède de fortes activités pectinolytiques, amylolytiques, protéolytiques; il produit des cellulases capables de dégrader la cellulose du bois (JANKE, 1949; KOHLMEYER, 1956, DOMSCH, I960; BASU et GHOSE, 1960; HANCOCK et al., 1964; KAJI et al., 1966; DOMSCH et GANS, 1969). 

- Cladosporium herbarum n'est pratiquement pas rencontré dans ces zones (profondeur > 0,2 mm), sauf chez l'Ilomba et le Pin en fin de cycle. Ce champignon xérophile ne semble pas pénétrer en profondeur dans ce type d'éprouvette qui, après une pluie, est facilement gorgé d'eau. C, herbarum est un colonisateur de surface et peut dégrader pectine, amidon et cellulose (MARSH et al., 1949; DOMSCH, 1960; LOUB, 1960; DOMSCH et GAMS, 1969). 

- Epicoccum purpurascens qu'on a rencontré seulement chez le Hêtre et l'Ilomba n'apparaît à la profondeur étudiée qu'en fin de cycle. La relation activité de surface-activité en profondeur est bien marquée. Nous verrons que ce champignon peut pénétrer très profondément dans les branches de l’éprouvette chez l'Ilomba. Cette espèce produit un pigment orange et peut cataboliser : pectines (HAMILTON et JOHNSTON, 1961) cellulose: et le xylane (DOMSCH, 1960 ; MOREAU et al. 1965 ; FLANNIGAN, 1970 . 

- Hormorema dematioides colonise invariablement les trois essences au niveau de profondeur examiné, en fin de cycle et de façon parfois précoce chez le Pin (14e jour) où il pénètre très profondément dans les branches et provoque un noircissement du bois. Malheureusement, nous ne disposons que de peu de renseignements sur ses acti¬ 

vités métaboliques ou cataboliques. Au niveau étudié, H. dematioides est isolé en même temps qu’un Penicillium dont l'espèce n’a pas pu être déterminée. 

- Phoma herbarum n’a été isolé qu'une seule fois et à la même époque, aussi bien sur que dans le bois, mais exclusivement à partir des éprouvettes de Hêtre. En fait, malgré ses activités pectinolytiques et amilolytiques (FLANNIGAN et SCARBOROUGH, 1974) sa capacité à hydrolyser la carboxymethylcellulose et le xylane (DOMSCH et GAMS, 1969) et à provoquer des cas de pourriture molle (DUNCAN et ESLYN, 1966), il ne semble pas se maintenir sur ce substrat (Hêtre). 

- Scytalidium lignicola pénétre le bois d’Ilomba mais, comme P. herbarum, son activité ne lui permet pas de survivre longtemps, ni dans le bois ni en surface. Sa capacité d’agent de pourriture molle est connue (KAARIK, 1980). 

- Le Basidiomycète Coriolus versicolor colonise très profondément le bois de Hêtre et se développe loin dans les branches de l'éprouvette. Il cause une pourriture blanche en dégradant préférentiellement la lignine. Dans le cadre de notre étude, consacrée aux phases initiales de la biodétérioration du bois, l'arrivée d'un lignivore, notamment lorsqu'il est caractérisé et aussi actif que C. versicolor marque bien le terme de nos investigations. En effet, par la rapidité et l’ampleur de son développement et par sa puissante action enzymatique, il enclenche le processus de pourriture à proprement parler qui, modifiant consi dérablement le substrat, va induire des modifications extrêmement importantes dans le comportement des populations microbiennes, qu'il s’agisse des microorganismes antérieurement présents (infestants primaires) ou des microorganismes intervenant postérieurement (infestants secondaires). Seules, quatre espèces sont alors encore isolées des zones étudiées, parallèlement à C. versicolor : pullulans, H.dematicides, S. cinerea et 

Penicillium sp1 . A ce moment, les levures ne se retrouvent ni en surface ni en profondeur. 

En résumé, dans le cas des éprouvettes Y , seule, une petite fraction de la microflore de surface pénètre au niveau de profondeur étudié : A.pulluans, H. dematioides, penicillium 

sp., Candida sp., Rhodotorula sp. et C.vensicolor. 

Ces champignons, pour la plupart, possèdent des activités enzymatiques leur permettant d'utiliser le substrat bois. 

Le Pin, comme nous l'avions déjà précisé, semble moins propice, dans les limites de durée de notre expérience, à une colonisation en profondeur, excepté par H. dematioides.. 

• Eprouvette de type " plate " 

La mycoflore de pénétration est très réduite chez ce type d’éprouvette, en relation avec les conditions d’humidité très variables. 

Il apparaît cependant que ces conditions conviennent au développement de C. herbanum qui se retrouve dans le bois au niveau étudié (-0,2) et de façon précoce, aussi bien dans le Pin que le Hêtre ou l'Ilomba. Cette espèce n'est pratiquement pas isolée au même niveau des éprouvettes de type " Y ". Inversement, lés espèces apparaissant fréquemment dans ces zones chez les éprouvettes " Y " ne sont isolées que sporadiquement chez les éprouvettes plates. 

La plupart des espèces ont été décrites lors des examens de surface, et leurs aptitudes enzymatiques sont connues. 

• Eprouvette de type " Y " 

En général, on constate que les bactéries ne se maintiennent pas sur le substrat pendant une longue période, ceci aussi bien en surface qu’en profondeur. 

Dans les zones situées au-dessous de 0,2 mm, le genre Bacillus est bien représenté. Une grande majorité de bactéries est mobile, ce caractère étant susceptible de faciliter une pénétration plus avant. 

Il faut remarquer que les espèces B. subtilis et Flavobac sp. accompagnent C. versicolor en profondeur. B. subtilis, 

on l'a précisé auparavant, est connu pour l'antagonisme qu'il exerce vis-à-vis de cet agent de pourriture. 

Pratiquement, aucune bactérie ne pénètre dans les éprouvettes de ce type (-0.2 mm). Il semble donc que l'activité de ces organismes reste purement superficielle. 

Cette partie de l'étude nous permet de faire plusieurs constatations : 

- En général, et pour les champignons imparfaits, les germes les plus fréquents en surface du bois sont ceux qui pénètrent dans le substrat. Mais le nombre d’espèces ayant cette possibilité est réduit, ceci étant lié aux possibilités enzymatiques spécifiques à certains germes. 

- Le nombre d’espèces colonisant le bois en profondeur est plus élevé dans le cas des éprouvettes que dans celui des éprouvettes plates. L’activité microbienne ne se manifeste généralement qu'en surface sur ces dernières. CORBETT, en 1965, distingue divers degrés d'attaque suivant la nature de la face des blochets de bois mis en contact avec la culture du champignon utilisée dans ses expériences : la face la plus rapidement attaquée est la face transversale, la plus poreuse. Ensuite, vient la face tangentielle et, enfin, la face radiale qui montre le phénomène de destruction le plus lent. Par conséquent, le fait que les organismes pénètrent plus ou moins facilement dans le bois est en relation directe avec l’architecture des éprouvettes. Les éprouvettes de type " Y ", et plus particulièrement 

le tenon et la mortaise, présentent de larges surfaces transversales, tandis qu’à l’opposé, la surface d'exposition des éprouvettes plates correspond pour une grande part à une face radiale. 

La présence des bactéries dans le bois se manifeste sporadiquement sans que, pour l’instant, leur rôle puisse être clairement analysé. 

Ces observations ont une grande importance dans la mesure où elles permettent, dans certains cas, de détecter l’action d’un ou plusieurs organismes sur ou dans le bois. Cette action se traduit généralement par des variations de teinte et, éventuellement, de consistance du bois. Ces examens permettent, en outre, de choisir avec précision les endroits où seront faits les prélèvements nécessaires à l’isolement et à la détermination des organismes présents. 

Dans notre expérimentation, nous avons installé sur les supports prévus à cet effet une éprouvette de chaque type et de chaque essence le premier de chaque mois. Les examens sont effectués tous les dix jours et permettent pour chaque combinaison de déterminer le délai d’apparition de telle ou telle modification d’aspect au long d’une période s’étendant pratiquement sur un an. 

Un grisaillement ou noircissement au niveau de l’assemblage des éprouvettes en apparaît généralement 20 à 30 jours après la date d’installation. 

Ces changements de teinte sont provoqués par les organismes les plus fréquemment isolés de l’air ou en surface du bois : C. herbarum, P. dematioides, A. pullulans, B. cinerea. La plupart de ces champignons développent un mycélium coloré (vert, gris ou brun plus ou moins foncé). 

Le symptôme le plus perceptible est sans doute la présence de ” pusrules ” noires perçant le film de vernis des éprouvettes Y de Pin et de Hêtre. Elles sont l’oeuvre de S. pithyophila (figure 34), forme pycnidienne d'H.dematicides. Sur les éprouvettes en Ilomba, cette forme n’a jamais été isolée ni observée . 

On constate, après découpe de certaines éprouvettes, que celles en Pin présentent de larges zones noires s’étendant profondément à l’intérieur des grandes et petites branches (2,5 à 4 cm). Ces plages sont en correspondance directe avec les zones 

pustulaires de surface. Les isolements faits à partir de ce noircissement interne permettent d’identifier les deux formes : H, dematioides et S.pithyophila. Sur le Hêtre, ces noircissements ne pénètrent pas profondément dans les branches de l’éprouvette, mais restent très superficiels (moins de 2 mm de profondeur). 

La troisième modification importante apparaissant sur ce type d'éprouvette est certainement due à l'action des Basidiomycètes. Elle se manifeste, soit par des décolorations soit par la présence de touffes mycéliennes présentes sur le tenon, et généralement aussi au point de correspondance de la mortaise. Il n'est pas rare que ces deux symptômes soient observés simultanément. 

En fait, seules les éprouvettes Y de Hêtre ont subi des altérations, de ce type. Une seule espèce a été isolée : C..vensicolor. Ceci est en accord avec la grande fréquence de cette espèce dans l'environnement immédiat des éprouvettes. 

Aucune éprouvette de Pin ou d’Ilomba n'a été le siège d’une pourriture, et ceci après neuf mois d’exposition. 

Une quatrième altération, qui n'a été observée que chez l’Ilomba, et assez tardivement, se caractérise par la formation, en surface du vernis, de petites ” cloques ” blanchâtres, et la présence d'amas mycéliens de teinte orangée au niveau de l’assemblage. Une découpe de l'éprouvette dans le sens longitudinal montre que l’altération, qui se traduit par une coloration orange des zones envahies, peut pénétrer profondément dans les branches (2,5 à 3 cm dans le sens du fil du bois) et atteindre la surface vernie en divers points au niveau desquels se forment les cloques. Les isolements effectués à partir de ces zones permettent d’identifier Epi-coccum purpurascens. Les hyphes sont oranges et, ainsi, la délimitation des zones envahies est bien nette. Par ailleurs, on note dans ces zones un ramollissement du bois. 

D'autres modifications se traduisent par l’apparition de plages de teintes différentes de celle d témoin. Elles sont observées sur les éprouvettes Y à travers le vernis. De teinte brune ou blanchâtre chez le Hêtre, grisâtre chez le Pin, rosâtre ou grise chez l’Ilomba, elles s'étendent dans les branches de l'éprouvette à partir de l'assemblage. Ces modifications n’ont pas une origine biologique, les prélèvements effectués au niveau 

Figure 34 - Eprouvette , de Pin, zone postulaire. S. pithyophila 

Figure 35 - Grisaillement, éprouvette plate. Hêtre, Ilomba e t Pin . 

de ces plages n’ayant pas permis d’isoler des organismes lignicoles ou lignivores. 

Il semblerait que ces changements d'aspect du bois aient pour origine des migrations d'eau dans l'éprouvette. La composition, la perméabilité de l'essence utilisée expliqueraient les différentes teintes observées. 

Les éprouvettes "plates" sont exposées à deux types de modifications. La première, d'origine physico-chimique, est due à la photo-oxydation. Elle se manifeste par un grisaillement généralisé du bois en surface. Le Hêtre est plus sensible à ce type de modification que les deux autres essences utilisées. La deuxième est d’origine biologique et se caractérise par la présence sur la face de l’éprouvette exposée aux intempéries de zones lancéolées noires ou de couleur vert-foncé. Cette altération est provoquée par Cladosporium herbarum isolé, soit seul dans la plupart des cas, soit avec Hormonema dematioides (figure 35). Les observations microscopiques montrent que C. se développe 

dans les rayons du bois, d'où la forme en " flammes " de ces noircissements. Ce type de modification est plus prononcé sur l’Ilomba que sur le Hêtre ou le Pin. 

Notons qu'un deuxième type d'altération peut apparaître sur la face inférieure des éprouvettes plates. Cette face est moins sujette à la photo-oxydation, mais l'humidification superficielle et intermittente due à des condensations ou, parfois, à l'accès d’eau de pluie à partir des écoulements latéraux favorisent le développement d‘Aureobasidium pullulans (visible par de petites touffes mycéliennes vertes). 

712. DELAIS D'APPARITION DES MODIFICATIONS LES PLUS SIGNIFICATIVES EN FONCTION DE LA DATE D'INSTALLATION DES EPROUVETTES. INFLUENCE DES SAISONS. 

La figure 36 représente les délais d'apparition, sur les éprouvettes Y, des " pustules " noires (provoquées par Sclerophoma pithyophila). Cette figure permet de dégager l'influence des saisons sur l'activité de cet organisme. En effet, on constate que le délai d’apparition des pustules est le plus long au fur et à mesure que l'on se rapproche de la période hivernale, et décroît plus on se rapproche de la saison estivale. Le temps maximum (130 jours) d'apparition de ce phénomène est enregistré sur les éprou¬ 

Délais d'apparition des modifications provoquées par : Sclerophoma pithyophila (HETRE, PIN-Y-) 

vettes installées le 1er Décembre 1980. Le minimum (30 jours) est enregistré lorsque celles-ci sont mises en place le 1er Juin. Il faut rappeler que ces observations sont faites sur les éprouvettes de Pin et de Hêtre, les pustules ne se formant pas chez l’Ilomba. Elles apparaissent plus rapidement sur l'aubier de Pin que sur le Hêtre, ceci avec un décalage de 5 à 10 jours. 

La figure 37 montre, pour le Hêtre attaqué par Coriolus venscolor, seul cas de pourriture observé jusqu'à présent, comment varie les temps d'installation de ce champignon en fonction du moment de l'année où les éprouvettes sont mises en place. Les indications en pointillé correspondent aux isolements les plus récents qui sont des agents de pourriture blanche et dont l'identification par formation de carpophores est en cours. Il existe cependant une forte présomption pour qu'il s'agisse de C. versicolor. 

La forme générale de la distribution est moins régulière que celle rencontrée dans le cas des " pustules mais la même tendance peut être dégagée. En effet, les éprouvettes mises en place en Juin 1981 sont le siège d'une pourriture après 40 jours d'exposition seulement, alors que celles installées en hiver ne le sont qu’après un délai de 180 jours. 

La figure 38 représente les délais d'apparition des noircissements provogués par Cladosporium herbarum en surface des éprouvettes plates. 

Pour les trois essences, les distributions ont la même allure générale. Les délais sont maxima en hiver et atteignent leurs minima sur les éprouvettes disposées en Mai, Juin et Juillet. Cette influence de la saison est très nette. Il faut toutefois indiquer que les conditions de température, et surtout d'humidité dans les premiers temps de l’exposition peuvent influer sur le délai d'apparition des modifications. Les deux mises en place de fin rlars illustrent ce phénomène; en effet, les délais sont plus longs que celui de l'installation en Février ou en Avril, ceci consécutif à une période de sécheresse pendant une quinzaine de jours. 

C'est chez l’Ilomba que les temps d'apparition sont les plus courts (minimum 10 jours, maximum 70 jours). 

Le Hêtre paraît être moins sensible avec des délais se situant entre 15 et 90 jours. 

Délais d'apparition des modifications provoquées par: Coriolus versicolor (HETRE-Y-) 

Délais d'apparition des modifications provoquées par ; Cladosporium herbarum (EPROUVETTE: PLATE) 

Enfin, le Pin semble être le moins ” réceptif " à cette altération, les temps d’apparition étant compris dans un intervalle de 30 à 140 jours. 

1°) On a posé comme hypothèse de départ que les altérations qu'on observait au cours de l'expérience présenteraient entre elles probablement certaines similitudes, comme aussi certaines différences. Cela est effectivement confirmé dès les observations macroscopiques des symptômes externes décelables au niveau des zones d'examen préalablement définies. Les tableaux ci-après traduisent les résultats de ces observations et montrent que certains phénomènes sont communs aux trois essences pour un type d’éprouvette donné (exemple, le grisaillement fongique dans l'assemblage des Y, dû à une population microbiologique de surface probablement identique d'une essence à l'autre), et qu'à l'inverse d'autres phénomènes témoignent d’une spécificité liée à la nature de l'essence (exemple, E.punpunascens dans les Y d' Ilomba) ou au type de l'éprouvette (exemple, C. herbanum sur les éprouvettes plates des trois essences indistinctement). Entre ces deux extrêmes, on observe divers cas intermédiaires. 

Il convient bien de préciser que ce qui précède a trait aux altérations dans leur aspect macroscopique; le signe (-) dans un tableau ne signifie pas qu'au niveau examiné l'agent biologique correspondant n'était pas présent, mais que sa présence, lorsqu'elle était contrôlée microbiologiquement, ne se traduisait pas macroscopiquement par une altération décelable du bois. 

2°) Autre hypothèse de départ : l'influence des saisons. Celle-ci est manifeste et agit, non seulement sur la nature des phénomènes mais sur leur cinétique. Cette influence correspond à l'action combinée de multiples facteurs parmi lesquels on n’a eu la possibilité de prendre en compte que la température et la pluviométrie. Le facteur saison, même réduit à ces deux simples paramètres, joue non seulement un rôle sur l'évolution du phénomène en surface des éprouvettes, mais également au niveau des sources émettrices de germes. La saison n'agit pas exclusivement comme facteur physique, mais également, bien entendu, comme facteur biologique indirect. 

APPARITION DES MODIFICATIONS MACROSCOPIQUES EN FONCTION DU TYPE DE L’EPROUVETTE ET DE L’ESSENCE 

L'étude microbiologique fournit de précieuses données sur les microorganismes isolés quant à leur nature et à leur fréquence. Les examens directs permettent de préciser le rôle de certains de ces germes, surtout au niveau des modifications macroscopiques. 

Ces techniques ne donnent que peu d'informations sur le mode d'action, sur la physiologie et sur les associations de ces microorganismes. De plus, l'utilisation de milieux de culture plus ou moins sélectifs ne permet d'isoler qu'une fraction des germes présents sur le bois ; les organismes n'apparaissant pas sur ces milieux peuvent cependant jouer un rôle important dans le processus de dégradation. C'est pourquoi, il nous est apparu nécessaire, en parallèle à ces méthodes, d'utiliser des techniques permettant de visualiser les germes sur et dans le bois. 

La microscopie électronique étant particulièrement bien adaptée à cette étude, les microscopes électroniques à balayage et à transmission apportent des éléments complémentaires à la compréhension du phénomène. 

Les populations monospécifiques sont rares dans la nature (AETH, 1939) et, de ce fait, il convient de préciser qu'il est difficile lorsqu'on utilise les techniques électroniques d'affirmer qu'un organisme déterminé est responsable d'une action donnée. Seules, quelques caractéristiques significatives peuvent permettre une approche dans l'identification de l'organisme observé; présence de propagules, conidies en place, forme et ornementation du mycélium, présence de boucles (Basidiomycètes )., de cloisons intercellulaires caractéristiques (Ascomycètes, Basidiomycètes) ou de cellules bourgeonnantes (cas de certaines levures). Ce n'est donc qu'en prélevant l'échantillon à observer au niveau d'une zone altérée et en relation avec l'isolement microbiologique qu'il est possible de soupçonner qu'un agent déterminé est la cause de cette modification. 

721 . DEVELOPPEMENT ET MODE DE C0L0MSATI0\ DU BOIS PAR LES CHAMPIGNONS 

La microscopie électronique à balayage est une bonne technique pour l'étude de l'anatomie et des processus de dégrada¬ 

tion du bois (BRAVERY, 1971; LIESE. 19 70; JUTTE et ZABEL, 1974; DIROL. 19 7 6 ; etc.). 

Les éléments fongiques de la microflore se déposent sur le bois, principalement sous forme de spores (figure 3 9). Ces propagules sont présentes dès l'installation des éprouvettes après usinage et stockage (donc avant mise en place). Ces formes de résistance sont, par conséquent, continuellement présentes sur le bois, et lorsque les conditions régnant sur le substrat le permettent ces spores vont germer (figure 40) et former un mycélium plus ou moins dense en surface du bois (figure 41). Les hyphes envahissent alors le matériel ligneux. Dès la germination des spores, le tube germinatif est apte à pénétrer dans le bois par les différentes voies qui lui sont offertes (figure 40). La propagation du champignon s'effectue par les voies royales de passage que représentent les lumières cellulaires des rayons, vaisseaux, trachéides ou fibres (figures 42 et 44). La progression de cellule à cellule peut s'effectuer de différentes manières : 

- le plus fréquemment par l'intermédiaire d'orifices naturels, telles les ponctuations : scalariformes (figure 43), simples (figure 44), ou aréolées (figure 40), avec (figure 46) ou sans (figure 44) altérations structurelles. 

- moins fréquemment par perforation des parois; la figure 45 montre un hyphe perforant la paroi cellulaire d'un élément conducteur chez l’Ilomba sans passer par la ponctuation voisine. 

Ces modes d'extension des champignons dans le bois exposé aux conditions naturelles (hors contact du sol) correspondent exactement à ceux observés lors d'études " in vitro " : BAYLISS, 1908; FALK, 1926; MEIER, 1955; GREAVES et LEVY, 1965, WILCOX, 1968, 1973; RADTKE et al., 1981; etc.). 

Figure 39 - Amas de spores en surface d'une éprouvette plate 

en Hêtre. 1er cycle. 6e prélèvement; M.E.B. 

Figure 40 - Germination des spores et début de colonisation du 

bois par passage par les ponctuations aréolées : Pin, plate, surface. 1er cycle, 6e prélèvement ; M.E.B. 

Figure 41 - Réseau mycélien en surface du tenon d'une éprouvette 

éprouvette >" d’Ilomba. 1er cycle, 6e prélèvement; M.E.B. 

Figure 42 - Cheminement des hyphes dans la lumière cellulaire 

des vaisseaux. Hêtre, plate, 500 µm de profondeur. 1er cycle, 5e prélèvement; M.E.B. 

(les échelles sont données en µm) 

Figure 43 - Passage d’un hyphe par une ponctuation scalariforme. 

scalariforme. Y, 400 um de profondeur. 1er cycle, 5e prélèvement; M.E.B. 

Figure 44 - Passage par les ponctuations simples vaisseau-rayon. Hêtre, plate, 100 µm de profondeur. 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 45 - Perforation d’une paroi cellulaire par une hyphe. Ilomba, Y, grande branche, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 46 - Passage par une ponctuation et altération de celle-ci. Hêtre, ¥, Coriolus versicolor. 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

(les échelles sont données en µm) 

722. DETERMINATION PAR DES OBSERVATIONS EN M.E.B. DU PASSAGE DE L'ETAT DE SPORE A CELUI DE MYCELIUM EN SURFACE DU BOIS (figure 47 ) 

La germination des spores fongiques entraîne la formation d'un mycélium qui s'étend plus ou moins loin sur le substrat ligneux. Si les conditions du milieu sont propices, le champignon peut alors coloniser le matériel en profondeur. 

Les observations de surface permettent d'apprécier le rapport spore/mycélium à un moment précis. 

Les résultats sont consignés figure 47; la partie hachurée représente la période pendant laquelle les spores ont germé, les cases noires signifiant qu'un ou plusieurs champignons ont développé un mycélium en surface. 

L'examen de cette figure montre : 

- que les temps d'apparition de mycélium en surface des éprouvettes sont les plus courts lors du 1er cycle d'étude (Juillet à Octobre 1980). Un ou plusieurs mycéliums apparaissent entre le 8e et le 14e jours après mise en place du matériel. Les délais les plus longs sont enregistrés au niveau des second et troisième cycles expérimentaux. Ceci est conforme aux remarques faites lors de l’exploitation des résultats microbiologiques (influence de la température et de la sécheresse). 

- qu’en général, on constate qu’après 42 jours d’exposition un ou plusieurs champignons colonisent la surface du bois, indépendamment du type d’éprouvette et de l’essence utilisés. Il semble que la Conception de l'éprouvette ( ou plate) n'influe guère sur le passage spore-mycélium, mais sur la nature et la cinétique des développements mycéliens, le Pin offrant malgré tout un milieu moins propice à la croissance des hyphes. 

723.. DETERMINATION DE LA PROFONDEUR DE PENETRATION DE LA FLORE FONGIQUE DANS LE BOIS (figures 42, 43, 44 et 45) 

La technique exposée page 49 permet de déterminer la profondeur de pénétration des organismes dans le substrat à partir des couches supérieures. 

En fait, les résultats montrent qu’en général très peu de microorganismes colonisent le bois en profondeur, leur activité se situant essentiellement en surface. Au niveau des éprouvettes plates, aucune activité mycélienne n'a été observée en dessous de 500 um. Bien que les éprouvettes de type Y offrent des conditions d'attaque meilleures, ainsi que des surfaces poreuses (transversales) plus grandes, peu de champignons pénètrent profondément. Seul, C.vensico£o, H.dematioides et E.punpunascens y parviennent. 

Par conséquent, l'essentiel de la flore fongique ne colonise le bois que dans ses couches supérieures (dans des zones situées de 0 à 500 ± 100 um de la surface). 

Nous avons vu précédemment la difficulté de déterminer un organisme en utilisant les techniques électroniques. Pour pallier cet inconvénient, les prélèvements sont effectués au niveau de zones d’altération visibles macroscopiquement (cf. Etude macroscopique). 

Les prélèvements M.E.T. et M.E.B. sont alors très voisins et l’isolement microbiologique autorise une détermination du ou des germes responsables. Les observations correspondant à ce type de prélèvement permettent de soupçonner l’action d'organismes définis microbiologiquement. 

Avant de présenter les résultats obtenus, il convient de préciser le cas particulier que représentent les aubiers ou le bois d'Ilomba. 

Les aubiers sont connus pour contenir diverses substances de réserve allant de composés très simples à des structures moléculaires plus complexes (MARIAUX, 1931). Chez l'Ilomba, ces substances sont principalement représentées par des grains d’amidon de taille variable, localisés dans les cellules parenchymateuses des rayons ou du parenchyme périvasculaire (figures 10 et 48). Nous 

avons vu dans un chapitre précédent (cf. Etude microbiologique) que divers organismes ont la possibilité de cataboliser cet amidon. Les photographies 49 et 51 illustrent quelques-uns des aspects de cette utilisation par les microorganismes : lyse partielle provoquée par des germes levuriformes dans le cas de la figure 49, contact intime de l'apex d'un hyphe avec un grain d'amidon sans zone lytique visible (figure 51). 

En fait, ces substances peuvent créer un appel trophique en attirant certains organismes qui sont susceptibles de cataboliser ces composés sans pour autant avoir une action destructive au niveau des parois lignifiées. La figure 50 montre qu'une importante colonie de levures s'est développée dans un rayon en contact de nombreux grains d'amidon, dont certains sont partiellement lysés. 

Figure 48 - Grains d’amidon de taille variable dans une cellule de rayon chez l'Ilomba. Ilomba témoin. M.E.B. 

Figure 49 - Grain d’amidon partiellement hydrolysé sous l'action d'organismes levuriformes. Ilomba, Y, 2e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 50 - Colonie de levuresdans un rayon d'Ilomba ; grains d'amidon hydrolysés. Ilomba, plate, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 51 - Apex d'un hyphe en contact avec un grain d'amidon Ilomba,, 2e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

(les échelles sont données en um) 

- Etude ultrastructurale dons des zones étudiées simultanément 

simultanément des techniques microbiologiques classiques (isolement et détermination du ou des germes) 

Ces prélèvements permettent de préciser les activités de C. herbarum, H. dematoides - S. pithyophila., E.punpunascens, et C. vensicolor. 

Dans le cas de C.henbanum, les modifications provoquées par les hyphes se caractérisent, sur les éprouvettes plates, par des discolorations verdâtres en forme de flammes dues au mode de colonisation préférentiel de ce champignon au niveau des rayons du bois (figures 52, 54 et 55). 

Ce phénomène est particulièrement bien marqué chez l’Ilomba, plus discret chez le Hêtre et le Pin. 

Cet agent de bleuissement utilise les substances de réserve contenues dans les cellules parenchymateuses (LIESE, 1970). Sa croissance, plus importante chez l’Ilomba, est à mettre en relation avec son pouvoir amilolytique (DOMSCH, 1960; FLANNIGAN et SCARBOROUGH, 1974). Les hyhes cheminent dans les rayons et entrent parfois en contact avec les grains d’amidon (figures 55 et 56). 

Les prélèvements correspondant aux zones altérées mettent en évidence en M.E.T. que certains hyphes dans leur cheminement passent par des ponctuations (figure 57) et peuvent perforer les parois cellulaires (figures 58 et 59). Ces dernières images montrent que lors de cette perforation l'hyphe se rétrécit. Le cytoplasme dense, le réticulum endoplasmique développé dénotent une activité physiologique intense au cours du phénomène. 

Il semble que la lamelle moyenne et la membrane primaire retardent le passage du champignon (figures 58 et 59). C. herbarum est connu pour ses activités cellulolytiques (MARSH et al., 1949; LEVKINA et PILIPOVICH, 1974; DOMSCH et al., 1980). Le pourcentage élevé en lignine de ces couches (allant jusqu’à 90 %) pourrait expliquer cet effet barrière. 

Ces manifestations ont été observées sur des prélèvements réalisés à la surface des éprouvettes plates et sont caractéristiques chez l’Ilomba. Cependant, quelques rares perforations des parois cellulaires ont été mises en évidence chez le Hêtre. 

figure 52 - Développement mycélien de Cladosporium herbarum au niveau des rayons. Surface éprouvette plate. Ilomba, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

figure 53 - Accumulation de conidies échinulées de C.henbartum. Surface éprouvette plate. Ilomba, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

figure 54 - Mycélium en surface d'une éprouvette plate d‘ Ilomba, et pénétration d’hyphes dans les cellules des rayons. Présence de spores échinulées en germination. Surface éprouvette plate. Ilomba, ler cycle, 4e prélèvement. M.E.B. 

figure 55 - Hyphes parcourant la lumière des cellules parenchymateuses des rayons. Contact hyphe-grain d'amidon. Surface éprouvette plate. Ilomba, 1er cycle, 5e prélèvement. M.E.B. 

(les échelles sont données en um) 

Figure 56 - Mycélium en contact avec un composé dense aux 

électrons (amidon ?). Surface éprouvette plate. Ilomba. 5e cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 57 - Hyphe passant par une ponctuation. La lamelle moyen-ne 

Ilomba, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figures 58 - Hyphe perforant la paroi cellulaire et présentant et 59 une constriction au niveau des couches S2 et S1 de 

la paroi. Surface éprouvette plate. Ilomba, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

(les échelles sont données en µm) 

Cas d*Hormonema dematioides - Sclerophoma pithyophila,. 

Comme cela avait été précisé lors des observations macroscopiques, l’activité d’H. dematioides se manifeste par un noircissement des tissus; profond dans les éprouvettes Y en Pin et superficiel sur celles en Hêtre. 

La forme pycnidienne de S. pithyophila apparaît en surface des éprouvettes et se caractérise par des éruptions bulbeuses perçant le film de vernis (figures 60 et 61). 

Les prélèvements effectués au niveau des zones noircies sur le Pin et le Hêtre et observés en M.E.T. indiquent que certains hyphes cheminent le long des parois cellulaires en émettant une substance granuleuse pouvant diffuser vers les ponctuations (figure 64)• 

Les nombreux passages par les ponctuations ne semblent pas provoquer de modifications notables au niveau de la structure de la paroi lignifiée qui se charge parfois d’un composé dense aux électrons (figure 65). 

Aucune perforation des parois n'a été observée lors de ces examens. Les parois cellulaires du Pin peuvent subir des érosions de surface; la figure 66 illustre ce phénomène. L’hyphe est accolé à la paroi qui ne présente plus de contours réguliers. Il s’y forme de petites entailles en ” V ”, observation déjà faite par de nombreux auteurs dans le cas d'attaque par des agents de pourriture molle ( CORBETT, 1965 ; LEVY, 1965 ; LEVY et STEVENS, 1966 ; etc.). Entre l'hyphe et la paroi lignifiée se trouve une substance amorphe résultant probablement de l'activité lytique du champignon. 

Les pustules ou pycnides peuvent induire, en surface des éprouvettes, un appel trophique. En effet, des colonies bactériennes se développent fréquemment sur et autour de ces formations (figures 60 et 63). La photographie 62 montre un autre aspect des relations entre microorganismes et prouve le rapport existant entre Penicillium et H. dematioides mis en évidence lors des examens microbiologiques. Penicillium se développe et fructifie sur le substrat que constituent les pycnides. 

Figure 60 - Formation d'une pycnide de sclerophoma pithyophila. 

perçant le vernis. Surrace éprouvette }. Hêtre, 1er cycle. 6e prélèvement. H.E.B. 

Figure 61 - Même formation chez le Pin. Eprouvette Y . Pin, 

Figure 63- - Développement d'un Penicillium sur une pycnide. 

Eprouvette Y . Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 63 - Colonie bactérienne aux abords des formations pustulaires. 

pustulaires. . Pin, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

(les échelles sont données en µm) 

Figure 64 - Hyphe accolé à la paroi lignifiée, entouré d'une 

substance granuleuse diffusant vers la ponctuation aréolée. Eprouvette . Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 65 - Passage d'un hyphe par une ponctuation. Eprouvette Y. 

Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 66 - Lyse des tissus du Pin aboutissant à des formations 

en " V " dans la paroi. Eprouvette Y. Pin, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

(les échelles sont données en um) 

L’activité d' E. purpurascens s’est manifestée macroscopiquement chez l'Ilomba (éprouvette Y) ; son mycélium de teinte orangée pénètre très profondément dans les branches de l'éprouvette. 

En surface, un réseau mycélien dense recouvre le substrat (figure 67) ; il présente des fructifications caractéristiques au genre (sporodochium) (figure 68). Son extension en profondeur s’effectue de façon identique à celle des autres champignons (cheminement dans les lumières cellulaires des éléments conducteurs, figure 69). Cependant, aucun passage par les ponctuations n'a été mis en évidence. Sa progression de cellule en cellule s'effectue essentiellement par perforation, phénomène illustré par la figure 45. L'équivalent est retrouvé lors des observations en M.E.T. qui précisent les modalités de la traversée (figure 72). L'hyphe s'applique contre la paroi et s'enfle pour former une ampoule à partir de laquelle un appendice plus fin pénètre dans la paroi. Il n'apparaît pas de zone de lyse autour de cette formation, ce qui tendrait à prouver que le passage serait le fait d'une action, soit mécanique soit enzymatique. Dans ce dernier cas, les enzymes ne seraient émis qu'à l'apex de l'hyphe. 

Plusieurs champignons de discoloration ont un mode d'action similaire ; l'hyphe s'enfle pour former un " appressorium " (CARTWRIGHT et FINDLAY, 1943; LIESE et SCHMID, 1962; LIESE, 1963, 1965). A partir de celui-ci, se forme un " transpressorium " tige droite et pointue qui perfore la paroi (LIESE et SCHMID, 1961, 1962, 1964; LIESE, 1965). 

La production d'enzymes au cours de cette action est controversée. Certains auteurs considèrent que cette pénétration est purement mécanique (CARTWRIGHT et FINDLAY. 1943; SCHEFFER et LINDGREN, 1940); d'autres émettent l'hypothèse d’une action mécanique couplée d'une action enzymatique (LIESE, 1965, 1970). Il faut noter que l'activité physiologique lors du passage est très importante (cytoplasme dense, mitochondries nombreuses et réticulum endoplasmique développé). 

Le champignon croît le long des parois cellulaires; les hyphes physiologiquement actifs émettent des substances vers la paroi et provoquent parfois un décollement de la fine couche dense aux électrons (53 ?) (figure 71). 

l'activité d' E. purpurascens est souvent accompagnée par des bactéries généralement proches du filament mycélien qui se développe certainement aux dépens des sous-produits du métabolisme fongique (figures 70 et 73). 

On constate, enfin, que les grains d’amidon présents dans les zones apparemment saines ont disparu des endroits soumis à l'activité fongique. Ceci laisserait supposer qu' E.punpunascens hydrolyse les composés amylacés; mais cette aptitude n'a pas été signalée dans la bibliographie. 

Figure 67 - Réseau mycélien d' Epicoccum purpurascens en surface du tenon d'une éprouvette Y en Ilomba. 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 68 - Sporodochium d' E. purpurascens. Surface éprouvette 

Y. Ilomba. 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 69 - Hyphes cheminant dans les lumières cellulaires 

des fibres. Profondeur éprouvette Y. Ilomba. 3e cycle. 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 70 - Colonie bactérienne au voisinage d'hyphes. Profondeur éprouvette Y. Ilomba, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

(les échelles sont données en µm) 

Figure 71 - Hyphe accolé à la paroi lignifiée et décollement 

de la couche dense aux électrons (S3 ?). Profondeur éprouvette Y. Ilomba, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 72 - Perforation de la paroi. Appressorium émettant un 

transpressorium. Profondeur éprouvette Y. Ilomba, 3e cycle, 6e prélèvement, M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 73 - Colonie bactérienne englobée dans une substance 

granuleuse, hyphe voisin. Profondeur éprouvette Ilomba, 3e cycle, 6e prélèvement, M.E.T. REYNOLDS. 

(les échelles sont données en µm) 

Cet agent de pourriture fibreuse (ou blanche) colonise rapidement le plan ligneux du Hêtre (seule essence où un cas de pourriture a été décelé). 

C. versicolor est connu pour attaquer simultanément lignine et cellulose (SCHEFFER, 1936 ; MEIER, 1955 ; COWLING, 1961 ; LIESE et SCHMID, 1962 ; SCHMID et LIESE, 1964, WILCOX, 1968), mais la dégradation de la lignine est antérieure à celle de la cellulose (SCHEFFER, 1936 ; LUTZ, 1943 ; COWLING, 1961 ; WILCOX, 1968 ; ANDER et ERIKSSON, 1978). 

La microscopie électronique à balayage montre que le Basidiomycète, caractérisé par la présence de boucles (figures 76 et 82), prolifère à la surface du oois en un réseau mycélien abondant (figure 47). Il colonise le substrat dans sa masse (lors du prélèvement, tout le tenon de l'éprouvette était envahi) en empruntant les voies de passage préférentielles que représentent vaisseaux et rayons (figures 75, 77, 83 et 85). De nombreux passages par les ponctuations ont été mis en évidence (figures 46, 78 et 86). En fait, la plupart des champignons de pourriture blanche utilisent ces modes de colonisation (BAYLISS, 1908 ; CARTWRIGHT, 1930 ; GREAVES et LEVY, 1965 ; WILCOX 1968, 1973 ; DIROL, 1976 ; etc.). 

L’action de C. versicolor sur les parois cellulaires se caractérise de différentes manières : 

. par perforation des parois. La figure 79 illustrant ce phénomène montre, en outre, une zone de lyse autour de l’hyphe perforant et de l’hyphe accolé à la paroi (flèches); le diamètre du filament mycélien est d'environ 2 µm. Différents auteurs, en accord avec ces observations, concluent que les enzymes détériorant le matériel ligneux ne sont pas seulement émis à l'extrémité des hyphes, mais tout au long et autour de ceux-ci ( CARTWRIGHT et FINDLAY, 1943 ; LIESE, 1963, 1965 ; LIESE et SCHMID, 1962, 1966 ; FUKUDA et HARAGUCHI, 1974 ; DIROL, 1978). 

. par des attaques d'un type différent. Le mycélium parcourant les éléments conducteurs du bois n’est pas homogène (figures 77, 78 et 80). Il est constitué d'hyphes de taille plus 

importante (1 à 2 µm de diamètre) portant des filaments plus petits (0,2 à 0,5 µm de diamètre). On a vu précédemment que ces gros hyphes peuvent perforer les parois et provoquer des zones de lyse autour d’eux. Les petits attaquent le bois plus localement, principalement à leur extrémité lorsqu'ils parviennent en contact avec la paroi. On observe de très nettes modifications de ces zones, modifications se manifestant par des " coulées " en prolongement des petits hyphes ou perpendiculaires à ceux-ci (figures 77, 78, 80 et 81). Ces expansions ont des tailles variables : 4 à 5 µm de longueur et 1 µm de largeur. 

Ces observations sont en accord avec celles faites par LIESE et SCHMID (1962, 1963, 1966): les hyphes les plus gros envahiraient le bois en utilisant les voies classiques (vaisseaux, rayons, ponctuations, perforations) et les hyphes les plus fins, qualifiés par les auteurs de ” microhyphes ", attaqueraient le bois par voie enzymatique lors de leur pénétration dans la paroi. 

La microscopie électronique à transmission fournit des renseignements plus fins quant à l'activité lignivore du champignon. La figure 82 montre la structure particulière de certaines parois intercellulaires, typiques des Basidiomycètes : le dolipore. 

L'action de C. versicolor sur les parois lignifiées se traduit de diverses façons. 

Il semble, d'après COWLING (1961), que cet organisme puisse émettre des enzymes extracellulaires lui permettant d'agir à distance. Les photographies 84 et 85 confirment cette hypothèse. La figure 84, en particulier, montre un hyphe situé à proximité d'une ponctuation. Cet organisme est entouré d'un matériel granuleux s'étendant jusqu'au niveau de la lamelle moyenne. La paroi de la ponctuation présente des contours déchiquetés, la lamelle moyenne étant manifestement attaquée. 

Les dégradations les plus spectaculaires se caractérisent par un amincissement de la paroi secondaire des cellules (figure 83). En effet, le mycélium de C. versicolor est susceptible d'occuper la plus grande partie de la lumière cellulaire; 

il érode plus ou moins uniformément la paroi aux abords de laquelle il se trouve. Il subsiste alors autour de l’hyphe des composés denses aux électrons résultant certainement de la destruction des composés lignifiés. Il semble que cette altération se fasse à partir de la lumière cellulaire des vaisseaux ou fibres. La figure 85 montre un hyphe de C.vensicokon entouré d’un important matériel granuleux; ce filament semble agir sur la paroi en y provoquant de profondes microfissures. Ceci pourrait correspondre aux tous premiers stades de la décomposition, ces fissures s'élargissant probablement sous l'action des enzymes fongiques pour former des cavités dans la couche S2 (figure 86). 

L'amincissement des parois cellulaires du bois est caractéristique des pourritures blanches et a déjà été signalé par de nombreux auteurs (SCHEFFER, 1936; CARTWRIGHT et FINDLAY, 1943; WATERMAN et HANSBROUGH, 1957; LIESE et SCHMID, 1962, SCHMID et LIESE, 1964; WILCOX, 1968), de même que la formation de cavités dans la couche S2 (LIESE et SCHMID, 1962, 1966). 

Des érosions de la paroi ont pu être mises en évidence (figure 88); l'hyphe est intimement accolé à celle-ci. Les contours de la paroi cellulaire sont alors très irréguliers. L’érosion peut atteindre la couche Sl. 

Les observations en M.E.T. des perforations de parois confirment celles vues en M.E.B. : le passage s'effectue en effet avec libération d'enzymes (figure 87). Le diamètre de l'hyphe se réduit lors de la pénétration. La perforation s’élargit et son contour est irrégulier. L'élargissement de ces trous de forage (BORE-HOLE) sous l'action de pourritures blanches est en accord avec la bibliographie (SCHEFFER, 1936; PROCTOR, 1941; COWLING, 1961; WILCOX, 1963; LIESE, 1970, etc.). 

Par conséquent, dans les conditions d’exposition du bois dans la nature (hors contact du sol) l'action de C . versicolor sur les parois lignifiées se manifeste de plusieurs façons : 

. la colonisation du plan ligneux s'effectue en utilisant les voies classiques de propagation (lumières cellulaires des éléments conducteurs, passage par les ponctuations ou par perforation). 

. le passage par les ponctuations ou perforation peut s'accompagner de libération d’enzymes provoquant 

. la détérioration des parois est provoquée par une excrétion d'enzymes tout autour de l’hyphe entraînant la formation de cavités dans la couche S2, à partir de fissures probablement induites mécaniquement. La paroi peut être également érodée par le champignon qui s'applique à la surface de celle-ci. 

figure 74 - Réseau mycélien de Coriolus verscolor en surface du tenon d'une éprouvette Y en Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

figure 75 - Mycélium très ramifié dans les lumières cellulaires d'éléments conducteurs. Profondeur éprouvette Y . Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

figure 76 - Mycélium de C. versicolor caractérisé par la présence de boucles. Profondeur éprouvette Y. Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

figure 77 - Mycélium de C. versicolor dans un vaisseau, hyphes plus fins s'adsorbant sur la paroi. Profondeur éprouvette Y. Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

(les échelles sont données en µm) 

Figures 78, - Microhyphes prolongés par des expansions évo80 et 81 quant des " coulées Profondeur éprouvette Y . 

Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 79 - Perfaration d’une paroi et zone de lyse au 

niveau du contact hyphe-paroi lignifiée. Profondeur éprouvette Y. Hêtre, ler cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

(les échelles sont données en µm) 

Figure 82 - Cloison intercellulaire de C.venicoo : dolipore. 

dolipore. éprouvette Y. Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 83 - Hyphe de C. versicolor dans un élément conducteur. 

Erosion de la paroi et matériel granuleux dense aux électrons. Profondeur éprouvette Y . Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 84 - Hyphe entouré par une substance fibrillaire diffusant 

diffusant la lamelle moyenne. Paroi et lamelle moyenne attaquées. Profondeur éprouvette Y. Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

(les échelles sont données en µm) 

Figure 95 - Hyphe émettant une substance fibrillaire et formation 

formation crevasses dans la paroi. Profondeur éprouvette Y . Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 86 - Hyphe formant des cavités dans la paroi secondaire. 

Profondeur éprouvette Y. Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 87 - Perforation d’une paroi et action lytique. Profondeur 

éprouvette Y. Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 88 - Erosion de la paroi lignifiée par C.vensicoCon. 

Profondeur éprouvette Y . Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

(les échelles sont données en µm) 

L’augmentation du nombre de bactéries présentes en surface du bois lors de l'attaque de C. versicolor est confirmée par les observations en microscopie électronique (figures 89, 90, 91, 92, 103 et 104). 

Ces procaryotes sont généralement entourés d’une substance granuleuse, probablement de nature polysaccharidique (figures 89 et 91). Les parois ondulées de nature tripartite, caractéristiques des bactéries ” Gram négatif ” (PROTH, 1978), sont visibles (figure 91). 

Le nombre de bactéries augmente également en profondeur, et ces germes progressent avec le champignon. Les observations montrent que les procaryotes sont souvent à proximité d'enveloppes vides (témoins de l’action antérieure du champignon) (figures 89 et 92); ceci laisse supposer que ces germes se développent aux dépens des cadavres fongiques. D’autre part, ils utiliseraient probablement des substances libérées lors de la dégradation des parois lignifiées (figure 90) ou des composés démasqués par l'action lytique de C. versicolor ( tels que le xylane, la cellulose, les pectines, etc.). 

En fait, lorsque les bactéries sont présentes sur ou dans le bois pendant ou après l'action du champignon de pourriture, les parois apparaissent très érodées et en dents de scie et se chargent d'un liséré noir dense aux électrons (figures 89, 90 et 92). 

Figures 89, - Colonies bactériennes englobées dans une.substan-91 

une.substan-91 92 ce fibrillaire. Paroi végétale présentant un liséré 

dense aux électrons. Enveloppe vide de champignon. Profondeur éprouvette Y . Coriolus versicolor, 1er cycle, 6e prélèvement. Hêtre. H.E.T. REYNOLDS. 

Figure 90 - Paroi végétale dentelée. Présence de bactéries 

englobées dans une substance fibrillaire. Profondeur éprouvette . Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

(les échelles sont données en µm) 

- Etude en microscopie électronique du rôle éventuel des bactéries 

Les observations faites en microscopie électronique apportent des éléments nouveaux sur le rôle des bactéries au niveau du phénomène étudié. 

Nous avons vu que celles-ci accompagnent souvent l’action des champignons responsables d’altérations notoires au niveau des parois lignifiées (C. vensicolor, Epicoccum purpurascens). Ces procaryotes utiliseraient des substances résultant de la dégradation des parois cellulaires, des sous-produits du métabolisme fongique (KILBERTUS, 1981), ou des hyphes morts. 

Divers aspects des relations bactéries-bois ou bactéries-autres organismes ont pu être mis en évidence: 

- certains procaryotes peuvent former des colonies isolées et de petites tailles en surface du bois (figures 93, 94, 95 et 96). Celles-ci sont appliquées contre la paroi des cellules et s'entourent d'un matériel important. Les bactéries en forme de bâtonnets peuvent produire des substances masquant leur forme originelle et les transformant en corpuscules sphériques pourvus de diverticules (figure 93). Ce matériel fibriilaire (figures 98, 99, 100, 101 et 102), probablement de nature polysaccharidique, peut jouer un rôle protecteur vis-à-vis des procaryotes, et en particulier les " Gram négatif " très sensibles aux brusques variations des facteurs externes (GRAY, 1976). Le rôle de ces polymères a été signalé par de nombreux auteurs (RECORD et al., 1962; HEPPER, 1975; KILBERTUS et al. 1977). 

- certaines bactéries peuvent avoir une action lytique sur les parois lignifiées; elles sont alors entourées d'une petite zone de lyse (figure 96). Plusieurs cas similaires ont été rencontrés, mais l'action destructive est toujours très localisée, et mise en évidence lors des derniers prélèvements de chaque cycle, lorsque l'activité en surface des éprouvettes est la plus importante. Leur action sur les parois est visible en M.E.T.; celles-ci se chargent de substances denses aux électrons, et elles présentent parfois des contours irréguliers (figures 100, 101 et 109). 

- les relations avec les autres microorganismes sont très variées. Avec certains champignons, les bactéries peuvent être associées à des hyphes. Elles se développent, soit à proximité du mycélium (figures 103, 107 et 108) soit reliées à ce dernier par l’intermédiaire de fibrilles extracellulaires qui s’appliquent sur le filament mycélien (figure 104). L'examen des surfaces en M.E.T. met en évidence des relations similaires entre colonies bactériennes et champignons (figures 107 et 108). Ces hyphes émettent des composés granuleux, denses aux électrons. 

REISINGER et KILBERTUS (1972) présentent des images identiques du champignon chez Aureobasidium pullulans. Ces granules, de nature mélanique, sont produits lors du vieillissement du champignon ou lorsque ce dernier se développe à l'extérieur du substrat nutritif. 

D'autres images (figure 105) montrent un développement important de coccis (déterminés à l'aide d'un grossissement plus élevé) à la surface d'un hyphe sénescent ou mort. 

Enfin, et essentiellement au niveau des rayons, nous avons pu constater la présence d'associations microbiennes entre bactéries et levures (figure 97). Il faut rappeler que c'est précisément dans les cellules parenchymateuses des rayons que les champignons levuriformes se développent ( et surtout chez l’Ilomba ) . Certains organismes, bactéries, levures, spores, se développent à la surface des filaments mycéliens (figure 106). L'activité des hyphes semble ici libérer une certaine quantité de produits nutritifs favorisait le développement de cette flore secondaire. On parle " d’hyphosphère " (REISINGER, 1981). 

Figure 93 - Colonie bactérienne aux abords d'une ponctuation. 

Production de substances masquant leur forme originelle. Surface éprouvette. Ilomba, 3e cycle, 5e prélèvement. M.E.B. 

Figure 94 - Bactéries plus ou moins engluées dans la paroi 

lignifiée. Surface éprouvette Y . Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 95 - Organismes unicellulaires en surface du bois. Surface 

Surface Y. Hêtre, 2e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 96 - Bactéries provoquant des zones lytiques. Surface 

éprouvette . Ilomba, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 97 - Association bactéries-levures. Surface éprouvette Y. 

Ilomba. 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

(les échlles sont données en µm) 

Figures 98, - Colonies bactériennes entourées d’une substance 

99 et 102 fibrillaire et se développant en surface du bois. 

98 : surface éprouvette Y. Hêtre, 1er cycle, 5e prélèvement. 

99 : Profondeur éprouvette Y , Coriolus versicolor, Hêtre, 4e cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

102 : surface éprouvetteY, Ilomba, 2e cycle, 6e prélèvement. 

Figures 100 - Colonies bactériennes se développant apparemment 

et 101 dans une enveloppe dense aux électrons; localisées 

dans ou à la surface des tissus lignifiés modifiés. Surface éprouvette Y. Hêtre, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

(les échelles sont données en µm) 

Figure 103 - Association bactéries-hyphe. Profondeur éprouvette 

éprouvette . Hêtre, Coriolus versicolor, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 104 - Association bactéries-hyphe. Production de filaments 

extracellulaires par les procaryotes. Profondeur éprouvette Y . Hêtre, Coriolus versicolor, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 105 - Coccis dégradant un hyphe sénescent ou mort. Surface 

éprouvette Y . Pin, 1er cycle, 6e prélèvement, M.E.B 

Figure 106 - Association hyphe, bactéries et spores en germination 

Surface éprouvette Y , Hêtre, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

(les échelles sont données en µm) 

Figure 107 - Bactéries et hyphes, ces derniers produisant des 

granules denses aux électrons. Surface, éprouvette . Hêtre, 3e cycle, 6e prélèvement, M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 108 - Bactéries au voisinage d’hyphes accolés sur une 

paroi. Surface éprouvette y , Hêtre, 2e cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 109 - Bactéries en forme de bâtonnets. La paroi végétale 

ne présente plus de contours réguliers et se charge d'une substance dense aux électrons. Profondeur éprouvette Y. Hêtre, 1er cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

(les échelles sont données en µm ) 

Des prélèvements systématiques ont été effectués (cf. Protocole expérimental) au centre des zones étudiées sans qu’on puisse préjuger de la nature de la population microbienne en place. Les résultats exposés précédemment concernent des parties altérées précises et les champignons responsables sont connus. Nous avons abordé le problème des parties intermédiaires apparemment non colonisées par les agents fongiques (non visibles macroscopiquement) qui a abouti à des résultats contradictoires, certainement en relation avec l'extrême hétérogénéité et la concurrence des associations microbiennes en présence. 

Néanmoins, la microscopie électronique montre différentes altérations des parois généralement chez le Hêtre : 

- tentative de perforation (figure 110) 

- début de pourriture molle (figure 111) sur une éprouvette plate. 

Des cas de pourriture de ce type ont été rencontrées dans des conditions hydriques faibles (DUNCAN et ESLYN, 1966; MORTON, 1975 ). 

- érosion de surface et formation de fissures dans la paroi lignifiée (figure 113). 

- la figure 112 montre un organisme fongique accolé à la paroi qui est ondulée; il ne s'agit probablement pas d'une attaque, mais de la couche véruqueuse qui, chez le Hêtre, se présente sous cette forme. 

Figure 110 - Tentative de perforation. Le champignon est 

sénescent ou mort. Hêtre, éprouvette Y. Surface, 2e cycle, 6e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 111 - Champignon physiologiquement actif produisant au 

niveau de la couche S2 une cavité de type pourriture molle. Hêtre, éprouvette plate, 2e série, 5e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 112 - Champignon accolé à la paroi (couche véruqueuse ?). 

Hêtre, éprouvette Y, surface, 3e cycle, 2e série. M.E.T. REYNOLDS. 

Figure 113 - Hyphe provoquant des fissures dans la paroi. Hêtre, 

éprouvette plate, surface, 2e cycle, 3e prélèvement. M.E.T. REYNOLDS. 

(les échelles sont données en µm) 

Divers éléments d'origine organique peuvent se déposer en surface des éprauvettes : grains de pollen (figure 115), algues (figure 114), spores, déjections d’oiseaux, etc.. Ces éléments constituent une source trophique pour une partie de la microflore qui, prise en compte lors des examens microbiologiques, ne participe pas obligatoirement au phénomène de biodétérioration du bois. 

Les grains de pollen représentent une bonne source alimentaire. La surface de ceux-ci est déjà recouverte, avant germination, d'un important réseau mycélien (figure 116) qui y pénètre et les détériore fortement. Les bactéries participent également à cette dégradation. 

La figure 118 montre un corpuscule (grain de pollen ? ) présentant de nombreuses cavités lytiques. A ce stade de la biodétérioration, le nombre de microorganismes est réduit. 

Le dépôt de ces particules, ainsi que leur biodégradation, ont un caractère écologique évident. Ce phénomène a été étudié par PROTH (1978) en surface de feuilles de Charme. D'après ROHR et KILBERTUS (1977), l'enveloppe des grains de pollen délimite une niche écologique protégeant (au départ) les champignons contre les variations des facteurs édaphiques. Certains auteurs considèrent que l'arrivée de ce substrat sur un biotope donné peut stimuler l'activité globale des microorganismes de ce biotope (DIEM, 1973). 

Par conséquent, le dépôt de composés non inféodés au bois peut jouer un rôle dans la dégradation du substrat ligneux, car il peut exacerber l'activité des microorganismes et même constituer un réservoir de germes qui, lorsque les conditions du milieu seront propices, pourront participer au phénomène de biodétérioration du bois. 

Figure 114 - Algue et grain de pollen (ou spore) en surface d'une éprouvette Y en Pin. 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 115 - Grains de pollen de Gymnosperme en surface d'une éprouvette Y de Hêtre. 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

Figure 116 - Amas de grains de pollen reliés entre eux par un réseau mycélien les dégradant. Surface éprouvette 

Y , 3e cycle. 6e prélèvement. M.E.B. 

Figures 117 - Attaque d'un grain de pollen et stade ultime de la et 118 dégradation. 

117 : surface éprouvette Y, Pin, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

118 ; surface éprouvette Y, Hêtre, 3e cycle, 6e prélèvement. M.E.B. 

(les échelles sont données en µm) 

Cette étude ultrastructurale montre que l’activité des microorganismes induit des modifications du substrat, ceci indépendamment du type de l’éprouvette et de l'essence utilisée : 

- par l'utilisation de substances diverses contenues dans les cellules du bois (composés de réserve, restant de protoplasme, sucres libres, etc.). 

- par l'envahissement du substrat (d'un caractère plutôt passif) par les microorganismes, les passages par les perforations influant sur la perméabilité du bois. 

- par des altérations des parois lignifiées. 

Un champignon peut présenter un comportement différent en fonction du type d'éprouvette où il se trouve : E. purpurascens se développe profondément dans les branches de l’éprouvette Y à la recherche des substances de réserve; au niveau de l’éprouvette plate de la même essence, son développement reste superficiel. En fonction de l’essence, E. purpurascens perfore les parois cellulaires du bois d’Ilomba (éprouvette Y ), mais isolé sur le Hêtre, (éprouvette Y) il ne provoque pas ce genre d’altération. 

Cette étude nous a permis d’élucider le rôle des bactéries. En effet, si celles-ci sont présentes dès le début de la mise en exposition du bois dans la nature leur rôle reste très limité. Ces germes accompagnent l’activité des champignons lignicoles et lignivores et utilisent des sous-produits du métabolisme des agents fongiques. Ils agissent comme des opportunistes. 

Les levures sont surtout localisées au niveau des rayons. Leur rôle n’a pas pu être défini. 

Avant de tirer les principales conclusions de la recherche présentée, il convient de préciser de nouveau qu’elles ne sont relatives qu’à la phase tout à fait initiale du phénomène de biodégradation du bois (hors contact du sol). La durée des expériences ne dépassait pas trois mois, ce qui représente un intervalle de temps extrêmement court par rapport au délai nécessaire à une réelle destruction des bois expérimentés, bien que ceux-ci aient été choisis intrinsèquement non durables. 

Nous nous sommes efforcés de faire un travail original : 

- en tenant compte de l’environnement météorologique (agissant notamment sur la cinétique du phénomène) et de l’environnement biologique 

- en faisant jouer au facteur humidité du bois un rôle prédominant par la conception de deux éprouvettes : l'une favorisant la pénétration et la rétention de l'eau, l'autre présentant à l'opposé une grande surface d'évaporation, en même temps qu'une faible capacité d'absorption. 

Ce travail doit être considéré comme une contribution aux recherches effectuées sur le sujet; à savoir, élucider la phase tout à fait initiale de la colonisation du bois par les microorganismes. Cette phase est essentielle, car elle influe sur le déclenchement et l'évolution du phénomène profond de pourriture causé par les Basidiomycètes. 

Différents schémas de succession ont été proposés par les chercheurs (cf. Introduction). A l'issue de nos propres travaux, nous émettons une certaine réserve quant à la rigueur de ces schémas. Il ne s’agit pas, à notre avis, d’une ” succession ”, au sens strict du terme, de phases relativement indépendantes les unes des autres mais d’un enchaînement de phénomènes liés à la disponibilité des sources trophiques à un moment et à un niveau donnés, chacun de ces phénomènes constituant un maillon plus ou moins important de la chaîne trophique. 

La plupart des auteurs (particulièrement J. CAREY. ” Bois hors contact du sol ") placent les bactéries en tète de leur schéma. Or, nous n’avons pas constaté qu'elles interviennent primairement dans le cycle. Elles participent au phénomène dans sa continuité, et des réponses bactériennes différentes en fonction des sources trophiques différentes font qu'une même espèce n’est pas présente régulièrement. Sans avoir elles-mêmes une action destructive très étendue, elles semblent agir essentiellement comme opportunistes vis-à-vis des autres organismes. 

L’activité des levures, lors des premiers stades de la colonisation des bois (hors contact du sol), a été très peu 

signalée. Pourtant, elles sont intervenues dans nos expériences de façon régulière et massive dès le début et tout au long du phénomène. Toutefois, nous les avons observées en particulier au niveau des cellules des rayons du bois, habituellement assez riches en substances simples. Toutefois, ces observations sont insuffisantes à élucider leur rôle spécifique dans le phénomène étudié. 

Un même champignon présente un comportement différent en fonction de l’essence et du type d’éprouvette où il se trouve. 

Pendant la période d’étude (temps 0 à 3 mois), on observe une activité métabolique qui se situe généralement en surface et qui se traduit par la recherche et l’exploitation des sources trophiques facilement assimilables. Cette activité induit des modifications du substrat bois, quels que soient l’essence et le type d’éprouvette. Mais, seul, le Hêtre en éprouvette Y a été infesté par un Basidiomycète de pourriture. Le temps qui s’est écoulé entre l'installation de l'éprouvette en question et la détection de ce Basidiomycète dans le bois peut sembler, à première vue, anormalement long par rapport au temps correspondant à la détection des autres microorganismes. Le développement plus tardif de ce Basidiomycète serait lié à la compétition s’exerçant entre les champignons glucidophyles ou à la recherche de composés facilement dégradables et l’agent de pourriture. 

Il faut, dans le même ordre d'idée, signaler qu'aucun Basidiomycète n’a été détecté ni chez l’Ilomba, ni dans l'aubier de Pin, intrinsèquement aussi vulnérables à l'attaque des Basi-diomycètes que le Hêtre. Pourquoi cette différence de comportement alors même que dans le cas du Hêtre on a affaire à du bois parfait ? En fait, il semblerait que cette phase soit plus courte chez le Hêtre, le bois parfait contenant beaucoup moins de substances de réserve; par conséquent, celles-ci sont plus rapidement détruites. 

Les modifications du substrat induites par ces organismes primaires et l' amoindrissement de la compétition (chez le Hêtre) permettraient l’installation de la pourriture. 

Dans l’aubier de Pin et l'Ilomba, riches en composés facilement assimilables, cette phase ne serait pas encore achevée (dans les limites de temps fixées par l'expérience). 

1. L’expérience doit se poursuivre. Compte tenu des connaissances acquises, il faut modifier le protocole expérimental : 

- au niveau des cycles de prélèvements pour le Pin et l’Ilomba particulièrement, de façon à déterminer le moment de l’installation de la pourriture. 

- en introduisant de nouvelles essences et en adaptant le protocole expérimental en fonction de celles-ci. 

- en essayant de reproduire ce travail dans les pays tropicaux, ceci pour permettre une étude comparative. 

2. Essayer de savoir si cette phase initiale est une condit ion nécessaire et indispensable pour que l'infestation naturelle par un Basidiomycète puisse s’opérer en mettant au point un protocole expérimental adapté . 

3. Essayer de déterminer le rôle exact des substances facilement assimilables se trouvant dans le bois. Est-ce qu’un bois riche en ces composés est moins sujet, au départ bien sûr, à l’infestation naturelle par Basidiomycètes ? 

ABDEL FATTAH, H.M.; MOUBASHER, A.H. and ABDEL-HAFEZ, S.I. - 1977 - Studies on mycoflora of sait marshes in Egypt. 

1. Sugar Fungi Mycopathologia ; 61 : 19 - 26. 

AHEARN, D.G. and MEYERS, S.P. - 1972 

The role of fungi in the décomposition of hydrocarbors in the marine environment in ; Biodeter. Applied Science Publishers : 12 - 18. 

Dictionary of the fungi - 6ème édition 

Commonwealth Mycological Institute Kew, Surrey : 663 pp. ALEXANDER, N. - 1961 - 

Introduction of a soil microbiology. Ed. Wiley, London : 472.pp. 

ANDER, P. and ERIKSSON, K.E. - 1978 - Lignin dégradation and utilization by microorganisms. Prog. Ind. Microbiol. 14 : 1 - 58. 

ARX, J.A. - 1970 - The genera of fungi sporulating in pure culture. VERLAG von J. GRAMER 3301 LEHRE D. : 288 pp. 

BAECKE, A.A.W. and KING, B. - 1978 - Decay of wood by Actinomycetales. Proceeding 4th Int. Biodeterioration Symposium - 1978 - Berlin PITMANN LINDEN - 980 : 53 - 58. 

BAKER, J.M.; LAIDLAW, R.A.; MILLER, E.R. and SAVORY, J.G. - 1977 fesearch on wood protection at the Princes Risborough LaboIatory 1975 and 1976. Building Research Establishment, Carrent Paper, CP. 37/77 ; 14 pp. 

BAKER, .M.; MILLER, E.R. ; MORGAN, J.W.W. and SAVORY, J.G. - 1975 Research in wood protection nt the Princes Risborough Labo-ra:ory 1973 and 1974. B.W.P.A. annual convention 1975. 

BANERJEE. A.K. and LEVY, J.F. - 1971 - 

Fur gal succession in wooden fence posts. Material und Organismen. Heft 1, Band 6 : 1 - 25. 

BARNETT, H.L. - 1960 - Il ustrated généra of Imperfecti Fungi, second Edition, Burges Publishing Comp. linneapols USA : 225 pp. 

BARRON, » .L. - 1968 - 

The genera of Hyphomycetes from soil. WILLIAM and WILKINS Conp. Baltimore ; 364 pp. 

BASHAM, J.T. - 1957 - The détérioration by fungi of jack, red and white pine killed by fire in Ontario. Can. Botany, 35 : 155 - 172. 

Decay of trembling aspen. Can. J. Botany, 36 : 491 - 505. 

BASHAM, J.T. - 1959 - Studies in forest pathology. XX - Investigation of patholo-gical détérioration in killed balsam fir..Can. J. Botany, 37 291 - 326. 

BASHAM, J.T. - 1966 - Heart rot of jack pine in Ontario. I. The occurrence of Basidiomycetes and Microfungi in defective and normal heartwood of living jack pine. Can. J. Bot, 44 : 275 - 295. 

BASU, S.N. and GHOSE, S.N. - 1960 - The production of cellulase by fungi on mixed cellulosic substrates. Can. J. Microbiol. 6 : 265 - 282. 

BATEMAN, T.Y. - 1980 - Studies in timber mycology. Undergraduate project. Hatfield Polytechnic ; pp. 104. 

BAYLISS, J.S. - 1908 - The biology of Polystictus versicolor (Fries). J. Ec. Biol., 3 : 1-24. BERGEY ’S - 1974 - 

Manual of determinative bacteriology. 8ème édition. ed. WILLIAM and WILKINS Co. Baltimore : 1.246 pp. 

BERNDT, H. et LIESE, W. - 1971 - Untersuchungen über die Enzyme von Bläuepilze 3. Pektintran-seliminase und Mannase bei Aureobasidium pullulans. Ach. Mikrobiol. 79 : 140 - 146. 

An ecological and phys i o 1 ogica 1 study on soil fungi of the northern Negev (Israël). Bull. Res. Coun. Israël 8D : 65 - 80. 

BOUTELJE, J.B. and BRAVFRY A.F. - 1968 - Observations on the bacterial attack of piles supporting a Ilcckholr builcirig. J. Ict. wood Scl., *, NO 20 : 47 - "7. 

BOUTELJE, J.B. and GORANSSON, B. - 1971 - Decay in wood constructions below the ground water table. Biodeterioration of Material. Ed. WALTERS and HUECK London : 311 - 318. 

BRAVERY, A.F. - 1971 - The application of scanning électron microscopy in the study of timber decay. J. Inst. Wood Sci., 30 : 13 - 19. 

BRAVERY, A.F. and MILLER, E.R. - 1980 - The role of pre-treatment in the finishing of exterior softwood. B.W.P.A., Annual Convention, 1980 : 14 - 23. 

Soil fungi of some British sand dunes in relation to soil type and succession. J. Ecol., 46 : 641 - 664. 

BURMAN, N.P. - 1973 - The occurrence and significance of Actiomycetes in Actinomycetales, characteristics and particular importance. Ed. SYKES, G. and SKINNER, F.A., Academic Press, : 219 - 229. 

BUTCHER, J.A. - 1968 - The ecology of fungi infected untreated sapwood of Pinus radiata. Can. J. Bot., 46 : 1577 - 1589. 

BUTCHER, J.A. and HOWARD, M. - 1968 - Outside storage of Pinus radiata wood chips in New Zea-land. Tappi, 51 : 117 - 122. 

Untersuchungen über die Enstehung von Blue auf lasierten Holzoner fläschen. Holz Roh U. Werkst., 19 : 337 - 340. 

BUTIN, H. - 1963 - Uber Sclerophoma pithyophila (Corda) als Blâuepilz an verarteitetem Holz. Phytopath. Z., 48 : 298 - 305. BUTIN, H. - 965 - 

Untersichungen zur Dekologie einiger Bläuepilze an verar-beiteten Holz (Kiefer). Flora, Jena, 155 : 400 - 440. 

CAREY, J.K., 3RAVERY, A.F. and SAVORY , J.C. - 1981 - An appr cach to testing the preservative offect iveness of preservative treatments for wooden joinery. Doc. I . R . G . / W.P./2156. 

CARTWRIGTH, K. 5tG. - 1930 - A decay of sikta spruce timber caused by Trametes serialis. F.F. Prod d. Res. Bull . No 4. 

CARTWRIGTH, K.StG. and FINDLAY, W.P.K. - 1943 - Timber decay. Biol. Rev., 18 (4) : 145 - 148. 

On the succession of microfungi associated with the decay of logs and branches. Trans. Lines. Natl. Union, 126 : 129 - 135. 

CHRISTENSEN, M. and WHITTINGHAM, W.F. - 1965 - The soil microfungi of open bags and conifer swamps in Wisconsin. Mycologia, 57 : 882 - 896. 

The use of sélective media for studying the colonisation of wood in ground contact by microorganisms. Doc. I.R.G./ W.P./No 186. 

The colonisation and succession of fungi in wood. Doc. I.R.G./W.P./No 107. 

COOKE, W.B. - 1959 - An ecological life history of Aureobasidium pullulans (De Barry) Arnaud. Mycopathologia and Mycologia Applicata, 12 : 1 - 45. 

COOKE, W.B. - 1969 - Fungi in soils over wich digested sewage sludge hase bcen spread. Mycopathologia and Mycologia applicata, 39 : 209 229. 

Micro-morphological studies on the dégradation of lignified cell walls by Ascomycètes and Fungi Imperfecti. J. Inst. of Wood Sci., 14 : 18 - 29. 

CORBETT, N.H. and LEVY, J.F. - 1963 a - Ecological studies on the fungi asscciated with wooden fence posts; - I -. B.W.P.A. News sh. N° 27. 

CORBETT, N.H. and LEVY, J.F. - 1963 b - Ecological studies on the fungi associated with wooden fence posts; - II -. B.W.P.A. News sh. N° 28. 

Beitrag zur Frage hol zabbauender Ascomvceten und Funqi Imperfecti. Holzforschung, 17 : 176 - 193. 

COWLING, E.B. - 1961 - Comparative biochemistry of the decay of Sweetgum sapwood by white rot and brown rot fungi. U.S.D.A. - F.S. Tech. Bull. N°1258; 79 pp. 

DE GROOT, R.C. - 1972 - A practical look at wood decay. Economie Bot., 26:85-89. 

DE HOOG, G.S. and HERMANIDES-NIJHOF , E.J. - 1977 - The black yeast and allied Hyphomycetes. Studies in mycology, N° 15 .Centraal bureau voor Schimmelcultures Baarn. Inst. of the Royal Netherlands. Academy of Arts and Sciences. 223pp. DELATOUR, G. - 1976 - Microflore interne des tissus ligneux de l'épicea commun sur pied; - I - Inventaire de la microflore naturelle. Ann. Sci. Forest., 33, (4) : 199 - 219. 

DELATOUR, G. et SYLVESTRE-GUINOT , G. - 1978 - Microflore interne des tissus ligneux de l’épicea commun sur pied; - II - Etude in vitro de la microflore naturelle. Ann. Sci. Forest., 35, (4) : 285 - 298. 

DENNIS, C. and BJHAGIAR, R.W.M. - 1973 - Comparative study of Aureobasidium pullulans » A. prunorum, and Tichosporon pullulans. Trans. Br. Mycol . Soc., 60 : 567 - 575. 

DENNIS, C. and WEBSTER, J. - 1971 - Antagonistic properties of species groups of Trichoderma ; - I - Production of non-volatile antibiotics. Trans. Br. Mycol. Soc., 57 : 25 - 39. 

DICKINSON, C.H. and DOOLEY, M. - 1969 - Fungi associated with irish peat bogs. Proc. R. Ir. Acad. Sect. B. , 63 : 109 - 137. 

DIEM, H.G. - 197 3 - Recherches sur la phyllosphère de l’orge. Thèse Sc. Nat. Nancy. 120p . 

DIROL, D. - 1976 - Etude in vi.ro de la colonisation et de la dégradation du bois de Hêtre par Coriolusversicolor (L.) Quelet. Rev. Mycol.. 40 : 295 - 314. 

DIROL, D. - 1978 - Etude in vitro de la colonisation et de la dégradation du bois d'aubier de Pin sylvestre par la Mérule (Serpula lacrimans Schum. ex Fr. Gray. Rev; Mycol., 42 : 277 - 292. DOMANSKI, S. - 1972 - FUNGI : Polyporaceae I (Resupinateae ) ; Mucronoporaceae I (Resupinateae ). Translated by RADZEW1LL, A.; U.S. Department of Commerce. National Technical Information Service. Springfield. Virginia. 278pp. 

DOMANSKI, S.;ORTOS, H. and SKIRGIETTO, A. - 1973 - FUNGI : Polyporaceae II (Pilateae); Mucronoporaceae II, Ganodermataceae , Bondarzewiaceae, Boletopsidaceae, Fistulinaceae. Translated by RADZEWILL, A.; U.S. Department of Commerce. National Technical Information Service. Springfield. Virginia. 395pp. 

DOMSCH, K.H. - 1960 - Pilzspektrum einer Bodenprobe. III - Nachweis der Einzelpilze. Arch. Mikrobiol ., 35 : 310 - 339. 

DOMSCH, K.H. and GAMS, W. - 1969 - Variability and potentiel of soil fungus population to décomposé pectine, xylan and carboxymethylcellulose . Soil Biol. Biochem., 1 : 29 - 38. 

DOMSCH, K.H., GAMS, W. and ANDERSON, T.H. - 1980 - Compendium of soil fungi. Academic Press, London, Vol. I ; 860pp. 

DOMSCH, K.H.; GAMS, W. and ANDERSON, T.H. - 1980 - Compendium of soil fungi. Academie Press, London; Vol. II, 408pp. 

DUNCAN, C.G. and ESLYN, W.E. - 1966 - Wood decaying Ascomycetes and Fungi Imperfecti. Mycologia, 58 : 642 - 645. 

DWYER, G. and LEVY, J.F. - 1975 - 

The colonisation of wood by micro-organisms : an objective approach. Organismen und Holz : Internat. Symposium, Berlin Dahlem : 13 - 20. 

EATON, R.W. and DICKINSON, D.J. - 1976 - The performance of chrome-copper-arsenic treated wood in the marine environment. Mat. u. Org., 11, Suppl. : 521 - 529. 

ELLIS, M.B. - 1971 - Dematiaceous Hyphomycetes. Commonwealth Institute, Kew, Surrey, England, 608pp. 

More Dematiaceous Hyphomycetes. Commonwealth Mycological Institute, Kew ; England, 506 pp. 

ELLWOOD, E.L. and ECKLUND, B.A. - 1959 - Bacterial attack of pine logs in pond storage. For. Prod. J.; 9 : 283 - 292. 

ERVIOE, L.R. - 1965 - Certain parasites of fungal sclerotia. J. Scient. Agric. Soc.;:37 : 1 - 6. 

ESLYN, W.E. - 1967 - Outside storage of hardwood chips in the north-east. II - Microbiological effects. Tappi; 50 : 297. 

ETHERIDGE, D.E. - 1961 - Factors affecting branch infection in Aspen. Can. J. Bot.; 39 : 799 - 816. 

Uber korrosive urd destruktive Hol zzerset zung und ihre biologische Bedeutung. Beriklite der Deutschen Botanischen Gesellschaft ; 44 : 652 - 664. 

TARGUES, J.; KILBERTUS, l. et REISINGER, 0. - 1975 - Chitinolytic activity in soils. Elect ronmicroscope study and experimental procedure. VII th. Scientific Session of Soil Biology, Kesz:hely; 1975. 

Micromycetes inhabiting the mines of Pridham (Czechoslovakia). Ceska Mycol. ; 24 : 162 - 165. 

FIEDLER, H.J. und KASTNER, C.H. - 1970 - Mikrobiologische e genschaften ciner Gneiss-braunerde unter Laub- und Nadelwald. Zentrb. Bakt. Parasitkde. Abt. 2, 124 : 292 - 300. 

Studies on the physiology of wood-destroying fungi. III - Progress of decay under natural and under controlled conditions. Ann. Bot. (N.S.) ; 4 : 701 - 712. 

FINDLAY, W.P.K. - 1966 - Ecology of wood-destroying and wood-inhabiting fungi. Mat. u. Org., Beih 1, ”Holz u. Organismen" : 199 - 211. 

Dégradation of arabinoxylan and C.M.C. by fungi isolated from barley kernels. Trans..Br. Mycol. Soc.; 55 : 277 - 281. 

FLANNIGAN,. B. and SCARBOROUGH, A.M. - 1974 - Physiological groups of décomposer fungi on tundra plaints remains. In: Soil organisms and décomposition in toundra. Holding and al. (Ed.), Tundra Biom., Stockholm; 159 - 191. 

FOUGEROUSSE, M. - 1976 - Wood preservatives : Field tests out of ground contact; brief survey of principles and methodology. Doc. I.R.G./ W.P./ N° 269. 

FOUGEROUSSE, M. - 1980 - Etude de la dynamique de la biodétérioration du bois par les microorganismes en fonction de la durabilité naturelle et/ou de traitements de préservation. Rapport D.G.R.S.T.; 1980 : 38pp. 

FOUGEROUSSE, M. - 1980 - Contribution à une méthodologie d’essai de l’efficacité préventive des traitements de préservation du bois contre la pourriture. Centre Technique Forestier Tropical, Nogent/Marne. 36pp. 

Field tests out of ground contact in France : Définition of the test procedure and preliminary results after 18 months. Doc. I.R.G./W.P./ N02161. 

Pflernahr. Bodenk.; 1 : 73 - 87. 

FUKUDA, K. and HARAGUCHI, T. - 1974 - The pattern of dégradation of wood cell wall by Coriolus versicolor, as white rot fungus. F. Agri., Tokyo, Univ. of Agri. and Techn. Fuchu; vol. 21; N°l. 

GAMS, W. and HOLUBOVA-JECHOVA - 1976 - Cloridium and other Dematiaceous Hyphomycetes growing on decaying wood. Centraalbureau voor Schimmelcultures Baarn. Inst, of the Royal Netherlands. Academy of Arts and Sci. 

GARRETT, S.D. - 1963 - Soil fungi and soil fertility. Pergamon-Oxford. 

GERSONDE, M. und KERNER-GANG, W. - 1968 - Untersuchungen an Moderfäulen-pilzen aus Holzstäben nach Freilandversuchen. Mat. u. Org.; 3 : 199 - 212. 

GILLMAN, J.C. - 1966 - A manual of soil fungi. The Iowa State College Press; Iowa, U.S.A.; 45pp. 

GOCHENAUR, S.E. and BACKUS, M.P. - 1967 - Mycoecology of willow and cotton-wood lowland communities in Southern Wisconsin. II - Soil microfungi in the sandbar willow stands. Mycologia ; 59 : 893 - 901. 

GOCHENAUR, S.E. and WHITTINGHAM, W.F. - 1967 - Mycoecology of willom and cotton-wood lowland communities in Southern Wisconsii . I _ Soil microfungi in the willow cottonwood forest. M copathol. Mycol. Appl.. 

GOOD, H.M. and WELSON, J.l. - 1962 - 

Fungi associated with Fomes igniarius var. populinus in living poplartrees ani their probable significance in decay. Can. J. Bot.; 0 : 615 - 624. 

General considerations and implications of Actinomycetes in Actinomycetales chacacteritics and practical importance. Ed. Sykes and Sinner ; Academic Press, London : 1 9. 

Survival of vegetative microbes in soil. In: The survival of vegetative microbes Ed. Gray, Postgate; Cambridge, Univ. Press; 432pp. 

GREAVES, H. - 1969 - Micromorphology of the bacterial attack of wood. Wood Sci. Techn.; 3 : 150 - 166. 

GREAVES, H. - 1970 - The effect of selected bacteria and actinomycets on the decay capacity of some wood-rotting fungi. Mat. u. Org.; Bd. 5, H.4 : 265 - 279. 

The bacterial factor in wood decay. Wood Sci. Techn.; 5 : 6 - 16. 

GREAVES, H. - 1972 - Microbial ecology of untreated and copper-chrome-arsenic treated wood. I - The initial invaders. Can. J. Microbiol. 18 : 1923 - 1931. 

GREAVES, H. - 1973 - Selected wood-inhabiting bacteria and their effect on strengh properties and weights of Eucalyptus regnans F. Mull and Pinus radiata D. Don sapwood. Holzforschung, Bd. 27, H.l : 20 - 26. 

GREAVES, H. and LEVY, J.F. - 1965 - Comparative dégradation of the sapwood of scots pine, beech and birch by Lenzites trabea,, Polystictus versicolor and Chaetomium globosum. J.Inst. Wood Sci.; 15 ; 55 - 63. 

GREAVES, H. and SAVORY, J.G. - 1965 - Studies on the microfungi attacking préservatives treated timber with particular reference to methods for their isolation. J. Inst. Wood Sci.; 3 : 45 - 50. 

HALE, M.D.C. and SAVOPY, J.G. - 1976 - Selective agar media for the isolation of Basidiomycetes from wood. A review. J. Inst. Biodeterior. Bull.; 12 (4) : 112 - 115. 

HAMILTON, I.R. and JOHNSTON, R.A. - 1961 - Studies on cucumber softening under commercial salt-stock conditions in Ontario. II - Pectolytic microorganisms isolated. Appl. Microbiol.; 9 : 128 - 134. 

HANCOCK, J.G.; MILLER, R.L. and LORBEER, J.W. - 1964 - Pectolytic and cellulolytic enzymes produced by Botrytis allii, B. cinerea and B. squamosa in vitro and in vivo. Phythopatology; 54 : 928 - 931. 

HARMSEN, L. and VINCENTS-NISSEN - 1965 - Der Bakterienangriff an Holz. Holz a. Roh u.Werkstoff ; 23 : 389 - 393. 

HAWKSWORTH, D.L. - 1976 - The natural history of slapton ley nature reserve. 10 - Fungi. Fld. Stud.; 4 : 391 - 439. 

HENNINGSSON, B. - 1967 - Microbial decomposition of unpealed birch and aspen pulpwood during storage. Stud. Forest. Suec.; 54 s 1 - 32. 

HENNINGSSON, B. - 1977 - Decay in window joinery in Sweden. Doc. I.R.G./W.P./ N° 390. 

HEPPER, C.M. - 1975 - Extracellular polysaccharides of soil bacteria. In : Soil microbiology. Ed. Walkers ; Lutterworths, London : 93 - 110. 

HOLDING, A.J.; FRANKLIN, D.A. and WATHING, R. - 1965 - The microflora of peatpodzol transitions. J. Soil Sci.; 16 : 44 - 59. 

HUANG, L.H. and SCHMITT, J.A. - 1975 - Soil microfungi of central and Southern Ohio. Mycotaxon ; 3 : 55 - 80. 

HUDSON, H.J. - 1969 - Aspergilli in the air-spora a- Cambridge. Trans. Br. Soc.; 52 : 153 - 159. 

HUNT, R.S. and COBB, F.W. - 1971 - Sélective medium for the isolation of wood rotting Basidiomycetes . Can. J. Bot.; 49 : 2064 - 2065. 

HYDE, H.A. and WILLIAMS, D.A. - 1952 - The incidence of Cladosporium herbarum in the outdoor-air in Cardiff, 1949-50. Trans. B.. Mycol. Soc. ; 36 : 260 - 266. 

Fungal spores, their libération and dispersai Clarendon Press, Oxford ; 302pp. 

Der Abbau der Zellulose durch Mikroorganismen. Oest. Bot. Z.; 46 s 399 - 443. 

Botryatinia and Botrytis species. Taxonomy, Physiology and pathogenicity• Can. Dep. Agric., Harrow Monogra.; 15 : 195pp. 

JARVIS, B. and MOSS, M.O. - 1973 - 

Bioessay methods for mycotoxins. In : The microbiolgy safety of food. Ed. Hobbs and Christian, Academie Press, London; U.K. : 293 - 305. 

JONES, L.A. and BRADLEY, S.G. - 1964 - 

Relationships among Streptomyces, Nocardia, Mycobacteria and other Actinomycetes. Mycologia ; 56 : 505 - 513. 

JONES, P.C. and MOUSSON, J.E. - 1948 - 

A technic for the quantitative estimation of soil microorganisms. J. Gen. Microbiol.; 2 : 54 - 59. 

Actinomycètes in aquatic habitats. Ph. D. Thesis; Univ. of Bradford, U.K.. 

JUTTE, S.M. and ZABEL, R.A. - 1974 - 

Initial wood deçay stages as revealed by scanning electron microscopy. Pages 445 - 452 in Proc., 7th. Scanning Electron Microscopy. Plant Sciences Applications of S.E.M. 8 - 111, April 1974, Illinois. Instrumentation. Technology Research Institution;, Chicago; 1064 pp. 

Colonisation of pine and spruce poles by soil fungi after six months. Mat. u. Org., H.2 : 97 - 108. 

Colonisation of pine and spruce after twelve and eighteen months. Mat. u. Org., H.3 : 185 - 198. 

The succession of fungi on untreated coniferous poles from different locations. (tran. tittle), Mitt. Dt. Gesel. Holz-forschung 57. 

Successions of microorganisms during wood decay. Pages 39 - 51 in ; W. Liese ed.; Biological Transformation of wood by microorganisms. Springer-Verlag, New-York; 203pp. KÄÄRIK, A. - 1980 - 

Fungi causing sap stain in wood. The Swedish University of Agricultural Sciences. Dept. of Forest Products; report N° R 114, Uppsala; 112pp. 

KAJI, A.; TAGAWA, K. and YAMASHITA, M. - 1966 - 

Pectic-enzymes. 22 - Pectic enzyres produced by Botrytis cinerea and relation between enzyme action and maceration of plant tissues. Agric. Biol. Chem., Tokyo ; 40 : 209 - 212. 

Der Befall von wasserbelager ten N delholz durch Bakterien mit besonderer Berücksichtigung des anaerobeb Zellulose-abbaus durch Bacillus amelianskii Diss. Univ., Hamburg. KILBERTUS, G. - 1981 - Communications personnelles. Univ. Nancy I . KILBERTUS,G. ; MANGENOT, F. et RADTKE, D. 1980 - 

L’altération des bois d'oeuvre de Hêtre par Fusarium solani (Mart.) Socc. et Verticiclaciellaprocera Kendrick. Cryptogamie, Mycologie, Tome 1 : 96 - 104. 

KILBERTUS, G.; PROTH, J. et MANGENOT, F. - 1977 - 

Sur la répartition et la survivance des microorganismes du sol. Bull. Soc. Acad. Lorr. Sci.; 1 : 93 - 104. 

KILBERTUS, G.; REISINGER, 0. et DELON, R. - 1973 - Biodégradation et humification. II - Activités de biocénoses dans les racines de luzerne. Etude électronique. Rev. Ecol. Biol. Sol; 11 : 27 - 46. 

KILBERTUS, G.; REISINGER, 0. et KIFFER, E. - 1978 - Documentas de travaux dirigés de mycologie. Univ. Nancy I, Lab. de Microbiologie; 300pp. 

KILBERTUS, G., REISINGER, 0. et MOUREY, A. - 1977 - Documents de travaux dirigés de bactériologie. Univ. Nancy I, Lab. de Microbiologie; 210pp. 

KILBERTUS, G.; ROHR, R. et MANGENOT, F. - 1976 - Etude ultrastructurale de la biodétérioration des tissus lignifiés de Pinus niqra. Holzforschung, Bd. 30,H.4 ; 156 - 163. 

KING, B.; EATON, R.A. and BEACKER, A.A.W. - 1978 - A summary of current information on Actinomycètes on wood. Doc. I.R.G./W.P./ N°177. 

KLINGSTROM, A.E. and JOHANSSON, S.M. - 1972 - Antagonism of Scytalidium isolâtes against decay fungi. Phytopathology, vol. 63 ; 473 - 479. 

KNUTH, D.T. - 1964 - Bacteria associated with wood products and their effect on certain Chemical and physical properties of wood. Dis. Univ. Madisson. 

KOHLMEYER, J. - 1956 - Uber den Zellulosenabbau durch einige phytopathogene Pilze. Phytopathol. Z.; 27 : 147 - 183. 

LACEY, J. - 1973 - Actinomycètes in soils composts and fodders in Actinomycetales charaeteristics and practical importance. Academic Press, London; 231 - 251. 

LAGERBERG, T.; LUNDBERG, G. and MELIN, E. - 1927 - Biological and practical researches into blueing in pine and spruce. Svenska Skogsv. For. Tidskr.; 24 : 145 - 691. 

LEIGHTLEY, L. and EATON, R.A. - 1977 - Mechanisms of decay of timber by aquatic microorganisms. Rec. Arm. Con. Brit. Wood Press Ass.; 26pp. 

LEVKINA, L.M. and PILIPOVITCH, A.I. - 1971 - Cellulase activity in species of the genus Cladosporium. Trudy Vses. Naucho-Issled. Inst. Zasoch. Rast., 29 (2) : 140 - 148. 

LEVY, J.F. - 1965 - The soft rot fungi : their mode of action and significance in the dégradation of wood. Holz u. Org., H.l, Suppl. 

LEVY, J.F, and STEVENS, M.G. - 1966 - The initiation of attack by soft rot fungi in wood. J. Inst, and Wood Sci., 1 (6) : 14 - 25. 

LEVY, J.F. - 1976 - Isolation and identification of the fungal flora in treated wood. Doc. I.R.G./W.P./ N°144. 

LIESE, W. - 1963 - Neue Befunde über den Abbau des Holzes durch Pilze. Holz. Zentralblatt, N°34, mars 1968. 

LIESE, W. - 1964 - The breakdown of lignified cell-walls bv soft rot fungi. Holz Roh u. Werkstoff, 28 (8) : 289 - 215. 

Mikromorphologische Veranderungen beim rolzabbau durch Pilze. Holz u. Org., H.l : 13. 

The action of fungi and bacteria during wood decay. B.W.P.A., Annual Convention 1970. 

LIESE, W. and GREAVES, H. - 1975 - Micromorphology of bacterial attack. In : Liese, Bio-logical transformation of wood by microorganisms ; Berlin, Ed. Springer : 74 - 88. 

LIESE, W. und SCHMID, R. - 1961 - 

Licht und Elekt ronenmi kroskopische Untersuchungen über das Kaschtum von Bläuepilzen in Kiefern nd Fichten Holz. Holz Roh u. Werkstoff, N° 9. 

LIESE, w. and 5CHMID, R. - 1962 - Investigation with électron microscope into the décomposition of wood by fungi. Angew. Bot.; 36 (6) : 291 - 292. 

LIESE, W. and SCHMID, R. - 1962 - Submicroscopical changes of cell wall structures by wood destroying fungi, électron microscopy. Vol. 2, N°5; Academic Press, New-York. 

LIESE, W. and SCHMID, R. - 1964 - The growth of bluestain fungi through lignified cell walls. Phytopathology Z., 51 (4) s 385 - 393. 

LIESE, W..and SCHMID, R. - 1966 - Cell wall breakdown in softwood by Trametes pini. Holz Roh u. Werkstoff; 24 (10) : 454 - 460. 

LINGAPPA, Y.; SUSSMAN, A.S. and BERNSTEIN, I.A. - 1963 - Effect of light and media upon growth and melanin formation in Aureobasidium pullulans (De Barry) Arnaud. 

Mycopath. Mycol. Appl.; 20 : 109 - 128. 

Problems associated with development of use of wood in construction and possible solutions. Unasylva; 25 : 2 - 4, 71 - 79. 

LIZAK, Y.V. - 1975 - Effect on different sources of nitrogen nutrition on cellulolytic activity of dark fungi. Mykrobiol. Z.; 37 : 693 - 699. 

LOUB, W. - 1960 - Die mikrobiologische Charakterisierung von Bodentypen; Bodenkulturen. Ausg. A.; 11 : 38 - 70. 

LOUB, W. - 1967 - Untersuchungen zur mikrobiologische spanischer Böden. An. Edafol. Agrobiol.; 26 : 975 - 1008. 

LUTZ, L. - 1943 - Sur l’attaque des bois par les Hyménomycètes lignicoles. Cas de Daedaleaquercina quercina Pers. . Boissiera; 7 : 293 - 295 . 

MAAS, J.L. and POWELSON, R.L. - 1972 - Growth and sporulation of Botrytis convoluta with various carbon and nitrogen sources. Mycologia; 64 : 897 - 903. 

Recherches méthodiques sur les cha mpignons de certains bois en décomposition. Rev. Gen. Bot.; 59 : 381 - 399, 438 - 471, 477 - 519, 544 - 555. 

MARSH, P.B.; BOLLENBACHER, K.; BUTLER, M.L. and RAPER, K.B. - 1949-The fungi concerned in fiber deterioration. II - Their ability to decomposé cellulose. Text. Res. 19 : 462 - 484. 

Über den Zellwandabbau durch Holzvermorschungspilzen und die sub-mikroskopische Struktur von Fichtentracheiden und Beiken Holzfasern. Holz Roh u. Werkstoff, H.?. 

MELIN, E. and NANNFELT, 3.A. - 1934 - Researches into the blueing of ground wood pulp. Sv. Skogsv. Tidskr.; 32 : 397 - 616. 

MEREDITH, D.S. - 1959 - The infection of pine stumps by Fomes annosus and other fungi. Ann. Bot.; 23 : 455 - 476. 

Further observations on fungi inhabiting pine stumps. 

Ann. Bot.; 24 : 62 - 78. 

Diurnal periodicity and violent libération of onidia in Epicoccum. Phytopathology; 56 : 983 - 990. 

MERRILL, W. and FRENCH, D.W. - 1966 - 

Colonisation of wood by soil fungi. Phytopathology ; 56 : 301 - 303. 

MIRCHINK, T.G. and ZAPROMETOVA, M. - 1970 - Regularities and distribution of dark-colored fungi in soil. Vest. Univ. Ser. 6, Biol. Pochv.; 25 : 99 - 105. 

MOREAU, C. ; MOREAU, M. et PELHATI, J. - 1965 - Comportement cultural de moisissures du blé en relation avec leur écologie sur grains. C.R. Hebd. Senc. Acad., Sci. Paris, Ser. D.; 260 : 1229 - 1322. 

MORGAN, J.W.W. - 1971 - Field tests on preservatives out of ground. Timberlab News 8. 

MORRALL, R.A.A. and VANTERPOOL, T.C. - 1968 - The soil microfungi of upland boreal forest at Candle lake. Saskatchewan. Mycologia; 60 : 642 - 654. 

MORRIS, P.I. - 1979 - Laboratory studies on interactions among wood inhabiting fungi with particular regard to biological control. Rapport interne. 

MORTON, L.H.G. and EGGINS, H.O.W. - 1976 - The influence of insolation on the pattern of fungal succession onto wood. Int. Biodeter. Bull.; 12 (4) : 100 - 105. 

MOUSTAFA, A.F. - 1975 - Osmophilic fungi in the salt marshes of Kuwait. Can. J. Microbiol.; 21 : 1573 - 1580. 

NASH-WORTHAM, J. and SAVORY, J.G. - 1968 - Loss of moisture from painted joinery. Wood, 1968. 

NIETHAMMER, A.E. - 1963 - Mikrobiologische Studien an irischen Bodenproben. Zentrbl. Bakt. Parasitkde. Abt. 2 : 116, 762 - 765. 

OLIVER, A.C. - 1961 - Decay in wood-windows . Timber Development Association Information Bulletin; B/IB/6. 

PADY, S.M. and KAPIKA, L. - 1955 - 

Fungi in air over the atlantic ocean. Mycologia; 47 : 34 - 50. 

PEECK, R.D. and LIESE, W. - 1976 - The fungal résistance and treatability of wet-stored Scots pine wood. Forstwissenschaftliches Zentralblatt, 98 (5) : 280 - 288. 

Traité de systématique bactérienne. Tome II; Dunod, Paris; 771pp. 

PROCTOR, Ph. - 1941 - Penetration of wall of wood cells by the hyphae of wood destroying fungi. New-Haven, Yale University. 

PROTH, 3. - 1978 - Evolution de la microflore d’une rendzine forestière privée de ses apports naturels en litière de charme. Etude microbiologique et ultrastructurale. Thèse, Université NancyI ; 300pp. 

PUGH, G.J.F. - 1962 - Studies on fungi in Coastal soils. II - Fungal ecology in a developing salt marsh. Trans. Br. Mycol . Soc.; 45 : 560 - 566. 

PUGH, G.J.H. and BUCKLEY, N.H. - 1971 - Aureobasidium pullulans, an endophyte in sycamorc trees. Trans. Br. Mycol. Soc.; 57 : 227 - 231. 

RADTKE, D. - 1979 - Décomposition du bois de pin et de hêtre par des champignons lignicoles. Standardisation d’une méthode d’étude. D.E.A., Université de Nancy I, Lab. de Microbiolonie ; 71pp. 

RADTKE, D.; KILBERTUS, G. et MANGENOT , F. - 1981 - Les méchanismes de pénétration et de propagation ces hyphes de Xanthochrous pini Brot.) Pat. et d'Ascccoryne sarcoides (Jac. ex Gray) Tul. dans les bois d'oeu re de hêtre et de pin. Holzforschung, Bd. 35, H.3 : 141 148. 

Communications personnelles. Univ. Nancy I, Lab. d Microbiologie . 

REISINGER, 0. et KILBERTUS, G. - 1972 - Biodégradation et humification. I - Biologie de la production de granules noires par Aureobasodium pullulans (De Barry) Arnaud. Bull. Acad. Soc. lorr. Sci.; 2 : 265 - 275. 

REISINGER, 0. et KILBERTUS, G. - 1975 - Dégradation du matériel végétal. Activité in vitro et in situ de quelques microorganismes. Rev. Ecol. Biol.; 12 : 347 - 358. 

The use of lead citrate at high pH as an electron opaque stain in electron microscopy. J. Cell. Biol.; 17 : 176 - 191. 

RICARD, J. - 1974 - Biological control of decay in Douglas fire poles ; seven years perspective. Eur. J. : 1 - 2. 

RICARD, J. - 1975 - Biological control of decay. Doc. I.R.G./W.P./ N° 135. RICARD, J. - 1977 - 

Experience with immunizing commensals. Neth. J. Pl. Path.; 83 (suppl. 1): 443 - 448. 

RICARD, J.; WILSON, M.M. and BOLLEN, C. - 1969 - Biological control of decay in Douglas fire poles. For. Prod. J.; 19 : 41. 

RIFAI, M.A. - 1969 - A revision of the genus T ri choderma. Mycological papers, N° 116. Commonwealth Mycological Institute, Kew, U.K.: 56pp. ROBAK, H. - 1932 - 

Fungal infection in norvegian wood pulp. Nyt. Mag. Natur. 71 : 185 - 330. 

ROBAK, H. - 1952 - Dothichiza pithyophila (Corda) Petr., the pycnidial stage of the Pullularia pullulans (De Barry) Berkhaut. Sydova; 6 : 361 - 362. 

ROESCH, R. and LIESE, W. - 1971 - Untersuchungen über die Enzyme von Blâuepilzen. II - Phenoloxidasen. Arch. Mikrobiol.; 76 : 212 - 218. 

ROESCH, R.; LIESE, W. und BERNDT, H. - 1969 - Untersuchungen über die Enzyme von Blâuepilzen. I - Zel-lulasen, polygalakturonasen, pektinasen und lakasen. Arch. Mikrobiol.; 67 : 28 - 50. 

ROHR, R. et KILBERTUS, G. - 1977 - Dégradation du pollen de Taxus bacata L. par les microorganismes du sol. Naturalist. Can.; 104 : 377 - 382. 

A survey of lignicolous fungi in the area about Blackbury. Virginia. Diss. Polytechnic. 

RYVARDEN, L. - 1976 - The Polyporaceae of north Europe. Fungiflora, Oslo. Vol. 1; 214pp. 

RYVARDEN, L. - 1978 - The Polyporaceae of north Europe. Fungiflora, Oslo. Vol. 2 ; 508pp. 

SASAKI, Y. and SASAKI,H. - 1971 - A taxonomic study on cellulose decomposing fungi. Mem. Fac. Agric., Hokkaido Univ.; 8 : 30 - 39. 

SASAKI, Y. and YOSHIDA, T. - 1971 - Microbiological studies on river pollution. I - On mold in slime of paper mills. Mem. Fac. Agric.; Hokkaido Univ.; 8 : 59 - 70. 

SASAKI, Y. and YOSHIDA, T. - 1971 - A note on the wood rotting. Mem. Fac. Agric., Hokkaido Uriv. 8 : 71 - 76. 

Breakdown of timber by Ascomycètes and Fungi Imperfecti. Ann. Appl. Biol.; 41 : 336 - 347. 

Avoiding détérioration in packaged softwoods during shipment storage. Min. Technol.; F. Princes Risborough Laboratory. 

Current work on decay in doors and Windows. B.R.E. Info. 

SAVORY, J.G. and CAREY, J.K. - 1976 - 

Laboratory assessment of the toxic efficacity of joinery preservative treatments. B.W.P.A.; Annual Convention : 1976. 

SAVORY, J.G. and CAREY, J.K. - 1978 - Decay in external joinery in the United Kingdom. Doc. 

SAVORY, .G.; CAREY, J.K. and STRIBBLING, M.A. - 1977 - Laboratory examination of simulated window joinery after outdoor exposure. Mat. u. Org., Bd.12, H.4. 

Progressive effects of Polyporus versicolor on the physical and Chemical properties of red gum sapwood. U.S. Dept. Agr. Tech. Bull.; 527 : 45pp. 

Microbiological dégradation and causal organisms. Wood détérioration and its prévention by treatments. Vol. 1 ; Syracuse Wood Sciences Series. 

SCHEFFER, T.C. and LINDGREN, R.M. - 1940 - 

Stains of sapwood and sparwood products and their control. U.S.D.A., Tech. Bull.; 714, 123pp. 

On the bacterial decay of the lignified cell wall. Holz-forschung; 32 : 214 - 215. 

Laboratory experiments on the bacterial activity towards the woody cell wall. Proc. 4th. Int. Biodetn. Symp. 1978: 63 - 66. 

Über den bakteriellen Abbau der chemisch behandelten verholzten Zellwand. Mat. u. Org., Bd. 15, H.3 : 207 - 225. 

SCHMIDT, 0 und DIETRICHS, H.H. - 1976 - Zur Aktivitât von Bakterien gegenüber Holzcomponenten. Mat. u. Org. Beih. 3 : 91 - 102. 

SCHMID, R. and LIESE, W. - 1964 - Micromorphological changes in the cell wall structure of beech and spruce wood attacked by Polyporus versicolor. Arch. Mikrobiol., Berlin; 47 : 260 - 276. 

SCHOL-SCHWARZ, M.B. - 1959 - The genus Epicoccum. Trans. Br. Mycol. Soc.; 42 : 149 - 173. 

SEDZIAK, H.P.; SHIELDS, J.K. and KRZYZEWSKI, .J. - 1970 - Effectiveness of brush and dip preservative treatments for above-ground exterior purpose of wood. Int. Biodeter. Bull.; 6 (4) : 149 - 155. 

SEIFERT, E. - 1967 - Wood protection for window manufacturing. Holzforschungs-tatung, 1967, Braunschweig. 

SEWELL, G.W.F. - 1959 - Studies of fungi in a calluna heathland soil. I - Vertical distribution in soil and on root surfaces. Trans. Br. Mycol. Soc.; 42 : 343 - 353. 

Some aspects of the biodeterioration of silicone treated wood by soft rot fungi. Ph. D. Thesis Univ. of Aston in Birmingham. 

Some observations on the pénétration sequences,. effect of the pH and humus formation by soft rot fungi. Mycopatho-logia ; 55 : 41 - 46. 

SHIGO, A.L. - 1962 - Observation on succession of fungi on hardwood pulpwood bolts. Plant Dis. Rep.; 46 : 379 - 380. 

Fungi associated with the discolorations around rot columns caused by Fomes igniarius. Plant Dis. Rep.; 47 : 820 - 823. 

SHIGO, A.L. - 1965 - The pattern of decay and discolorations in northern hardwood. Phytopathology; 55 : 648 - 659. 

SHIGO, A.L. - 1967 - Succession of organisms in discolorations and decay of wood. Int. Rev. For. Res.; 2 : 237 - 299. 

SMIT, J. and WIERINGA, K.T. - 1953 - Microbiological décomposition of litter. Nature, London; 171 : 794 - 795. 

SMITH, G. - 1969 - An introduction to industrial mycology. 6th édition. E.Arnold, Ltd., London; 390pp. 

SMITH, J.E. and BERRY, D.R. - 1974 - The filamentous Fungi; Vol.l. Industrial Mycology. E. Arnold, Ltd., London; 340pp. 

SMITH, R.S. - 1974 - Destructive agencies of woodfungi. Preservers Association. Dep. of Environment Canadian Forestry, Sci . on Western Products Laboratory, Vancouver, British Columbia. 

SMITH, R.S. - 1977 - Protection and préservation of wood against attack by fungi.Fisheries and Environment Canada, Western Products Laboratory, Vancouver, British Columbia ; 14pp. 

SMITH, R.S. and SWANN, W.G. - 1975 - Colonisation and degradation of Western Red Cedar shingles and shakes by fungi. Org. u. Holz, H.3 : 254 - 262. 

STRIMBBLING,M.A. ; CAREY, J.K. and SAVORY, J.G. - 1976 - Examination of simulated joinery after four years exposure. B.R.E. News; Princes Risborough Laboratory; noté 76/76. 

SUOLATHI, 0. und WALLEN, A. - 1958 - 

Dec Einfluss der Nasslagerung auf das Wasseraufnahmavermöger des Kiefernsplintholzes. Holz Roh u. Werkstoff; 16 : 8 - 17. 

Window joinery service. Building, 214 (6516) : 135 - 136. 

TAMBLYN, A. and BEESLEY, J. - 1968 - 

Decay résistance of joints in pressure treated Pinus radiata containing imperméable heartwood. (In coopération with the Radiata pine Association of Australia). Working plan project 25; Dec.68. 

Interaction of mould and decay fungi on wood in laboratory Phytopathology; 6 (1) : 124 - 125. 

Studies on succession of higher fungi on felled logs (Faqus crenata) in Japan. Mat. u. Org., Beih. 1; "Holz u. Organismen"; 325 - 332. 

VAN LOAN, J. - 1964 - 

Investigations on the distribution of moisture in window frames of the blister cabin. Verfkroniek; 37 : 9; 310. 

VAN LOAN, J. - 1965 - 

Further experiments on the distribution of moisture in window frames. Verfkroniek; 38 : 1 - 23. 

Relative importance and seasonal prevalence of wood - staining fungi in Southern States. Phytopathology ; 29 : 1031 - 1051. 

Progressive report on tests of soak and brush preservative treatments for use of wood out of the ground. Lumberman ; 

173 ( 2168) : 36 - 38. 

VERRALL , A.F. - 1949 - 

Decay protection of exterior woodwork.Southern Lumberman; 178 ( 2237) : 74 - 80. 

Brush, dip and soak treatments with water-repellent pre-servatives. For. Prod. J.; 11 (1) : 23 - 26. 

Contribution to knowledge of the genus Cladosporium. Diss. Univ . , Utrecht; reprint J.Cramer, Lehre. 

WAKSMAN, S.A. - 1961 - The Actinomycetes. I.Bailliere, Tindall and Cox lilited, London; 363pp. 

The Actinomycetes. II. Ronald Press. New-York. 280pp. WALCHLI., 0. - 1969 - 

Oberfläsche-Surface, 10 Jahrgang; 1969; H.9: 619 - 622. 

Holzschutz bei Aussenbauten. Holz u. Jiefbau; N°24. 

Preliminary report on the fungus flora of pulp and paper in New-York. Tappi; 44 : 785 - 788. 

Fungi of pulp and paper in New-York. Tech. Pubis. N.Y. St. Coll. For.; 87 : 115pp. 

WANG, H.L.; ELLIS, J.J. and HESSELTINE, C.W. - 1972 - Antibacterial activity produced by molds commonly used in oriental food fermentatior . Mycologia; 64 : 218 - 221 . 

WATERMAN, A.M. and HANSBROUGH, J.R. - 1957 - 

Mi croscopi cal rating of decay in sitka spruce and its relation to toughness. Forest Prod. J.; 7 : 77 - 84. WENDLING, R. - 1932 - 

Trichoderma lignorum as a parasite of other soil fungi. 

Phytopathology; 32 : 837 - 855. 

Studies on lethal principle effective in the parasitic action of Trichoderma lignorum on Rhizoctoniasolani and other soilfungi. Phytopathology ; 24 : 1153 - 1179. 

WENDLING, R. and EMERSON, O.H. - 1936 - 

The isolation of a toxic substance from the culture filtrate of Trichoderma sp.. Phytopathology; 26 : 1068 - 1070. 

WEYLAND, H. - 1969 - Actinomycètes in north Sea and Atlantic Ocean sediments. Nature ; 223 : 5208. 

WICKLOW, D.T. and WHITTINGHAM, W.F. - 1974 - Soil microfungal changes amongthe profiles of disturbed conifer. Hardwood Forest. Ecology; 55 : 3 - 16. 

Changes in wood microstructure through progressive stage of decay. U.S. Forest Service Research Paper, F.P.L. 70. 

Degradation in relation to wood structure. Chapter 3, in Nicholas Ed.; Wood deterioration and protection of wood. Syracuse University Press; 107 - 148. 

WILLEITNER, H. and PEAK, R.D. - 1979 - News from research institute : Colour-reaction for detecting fungal attack in wood. Int. J. of Wood Preservation ; vol. 1 47 - 48. 

The role of Actinomycetes in biodeterioration. Int. Biodet. Bull . ; 2 : 125 - 133. 

WILLOUGHBY, L.G. - 1976 - Freshwater Actinomycètes in recent advance. In : Aquatic Mycology; Ed. Jones, Elek Sciences, London; 673 - 698. 

ZABAWSKI, J. - 1967 - Studies on the microflora of Sphagnum bog. Zieleniec, Zesz. Probl. Postep. Nank. Roln.; 76 : 355 - 400. 

AFFILIATION PAR RAPPORT A LA CLASSIFICATION DE REFERENCE 

. Mucor. sp. Mich. ex Fr. 

. Saccharomyces sp. Meyen em. Reess 

. Aspergillus sp. Mich. ex Fr. 

• Epicoccum purpurascens Ehrenb. ex Schlecht 

. Penicillium spp. Link ex Fr. 

. Sponothnix sp. Hektoen et Perkins 

• Trichoderma viride Pers. ex Gray 

• AEtennariatenuissma (Kunze ex. Pers.) Viltshire 

• Altennaria sp. Ness ex Wallr. 

• Aureobasidium pullulans (De Barry) Arnaud 

. Botrytis cinerea Pers. ex Pers. 

. Cladosporium herbarum (Pers.) Link ex Gray 

• Cladosporium sp. Link ex Gray 

. Hormonema dematioides Lagerberg et Melin 

• Coriolus versicolor ( L . ) Quelet 

• Cellulomonas spp. Bergey et al. 

. FLavobactenium sp. Bergey et al. 

. Bacilus cereus Frankland et Franhland 

. Bacillus cereus var. mycoides (Flügge) Smith 

. Bacillus pumilus Meyer and Gottheil 

- Préparation de la solution de " BENOMYL " 

Dans 50 ml d’éthanol à 50% 

. 0,16 g de benlate fongicide à 50% de benomyl 

Utilisation à la concentration de 5 ml par litre de milieu. 

- Préparation du réactif de pH de WILLEITNER et PEAK 

. 0,4 g de bleu de bromophénol dilué dans 1.000 ml d’éthanol 

Utilisation : badigeonnage de la surface d'étude à l'aide d’un pinceau. 

• Préparation de la résine EPON : 

- Préparation du tampon phosphate Millonig, pH 7,5 

Phosphate monopotassique 0,0556 M : 19,25 ml 

Phosphate bipotassique 0,0556 m : 70,75 ml 

PO4KH2, 3,78 g/500 ml : 0,756 g/100 ml 

P04K2H 4,84 g/500 ml : 0,968 g/100 ml 

- Coloration Gram selon la méthode de BURKE et KOPELOV (Doc. de travaux dirigés de Bactériologie; KILBERTUS et al., 1978). 

. A - Violet de gentiane à 1% dans l’eau 

. B - Bicarbonate de sodium à 5% dans l’eau 

. C - Iode à 5%, iodure de potassium à 1% dans l’eau . D - Mélange acétone (75%) éther (25%) 

. E - Safranine à 0,5% dans l’eau 

Faire un frottis bactérien, fixer en passant deux ou trois fois sous une petite flamme. Couvrir avec A et quelques gouttes de B pendant deux minutes. Rincer. Couvrir avec C : une minute. Différencier avec D et rincer immédiatement à l’eau. 

Couvrir avec E : une minute. Rincer et sécher. Observer à l’immersion . 

Les bactéries Gram + sont violettes, les Gram - sont roses. Tous les intermédiaires entre ces deux teintes existent. 

- Coloration de spores selon WIRTE-SCHAEFFER-FULTON 

. A - Vert de malachite dans l’eau . 8 - Safranine à 0,5% dans l'eau 

Faire un frottis bactérien. Couvrir de vert de malachite et chauffer sous une flamme jusqu'à émission de vapeurs blanches. Laisser agir pendant 5 minutes. Rincer à l’eau et couvrir de safranine pendant une minute. Laver, sécher et observer. Les spores apparaissent bleues ou vertes, le corps bactérien est rose. 

- Système " API " pour la détermination des bactéries 
