b'\n_START_ARTICLE_\nCromatografia\n_START_SECTION_\nTeoria da cromatografia\n_START_PARAGRAPH_\nCromatografia \xc3\xa9 uma t\xc3\xa9cnica de separa\xc3\xa7\xc3\xa3o de misturas e identifica\xc3\xa7\xc3\xa3o de seus componentes. Esta separa\xc3\xa7\xc3\xa3o depende da diferen\xc3\xa7a entre o comportamento dos analitos entre a fase m\xc3\xb3vel e a fase estacion\xc3\xa1ria. A intera\xc3\xa7\xc3\xa3o dos componentes da mistura com estas duas fases \xc3\xa9 influenciada por diferentes for\xc3\xa7as intermoleculares, incluindo i\xc3\xb4nica, polar apolar, e espec\xc3\xadficos efeitos de afinidade e solubilidade.\n_START_SECTION_\nAnalogia\n_START_PARAGRAPH_\nUma analogia que \xc3\xa9 \xc3\xa0s vezes \xc3\xbatil \xc3\xa9 a suposi\xc3\xa7\xc3\xa3o da mistura de abelhas e moscas passando sobre uma flor. As abelhas ser\xc3\xa3o atra\xc3\xaddas pela flor e ser\xc3\xa3o separadas das moscas por esta atra\xc3\xa7\xc3\xa3o. Se observarmos esta passagem sobre a flor, as moscas ir\xc3\xa3o passar antes seguidas pelas abelhas. Nesta analogia, as abelhas e as moscas s\xc3\xa3o os analitos, as flores representariam a fase estacion\xc3\xa1ria e o ar onde as duas esp\xc3\xa9cies passam seria a fase m\xc3\xb3vel. A chave da separa\xc3\xa7\xc3\xa3o est\xc3\xa1 na diferen\xc3\xa7a de afinidade entre o analito, a fase m\xc3\xb3vel e a fase estacion\xc3\xa1ria. O observador seria representado pelo detector usado em uma s\xc3\xa9rie de formas de cromatografia. Todavia os valores determinados podem sofrer mudan\xc3\xa7as._NEWLINE_Pode se ter dois tipos a fase estacionaria e a fase de absor\xc3\xa7\xc3\xa3o do procedimento citado.\n_START_SECTION_\nHist\xc3\xb3ria\n_START_PARAGRAPH_\nFoi o bot\xc3\xa2nico russo, Mikhail Semenovich Tswett quem inventou a primeira t\xc3\xa9cnica cromatogr\xc3\xa1fica em 1900 durante suas pesquisas sobre a clorofila. Ele usou uma coluna de absor\xc3\xa7\xc3\xa3o l\xc3\xadquida contendo carbonato de c\xc3\xa1lcio para separar pigmentos de folhas de plantas. O m\xc3\xa9todo foi descrito em 30 de dezembro de 1901 no 11o Congresso de M\xc3\xa9dicos e Naturalistas em S\xc3\xa3o Petersburgo. A primeira publica\xc3\xa7\xc3\xa3o feita foi em 1903. Ele usou pela primeira vez o termo cromatografia em uma publica\xc3\xa7\xc3\xa3o em 1906 no jornal de bot\xc3\xa2nica alem\xc3\xa3o, Berichte der Deutschen Botanischen Gesellschaft. Em 1907, demonstrou sua cromatografia para a Sociedade Bot\xc3\xa2nica Alem\xc3\xa3._NEWLINE_Os pesquisadores brit\xc3\xa2nicos Archer John Porter Martin e Richard Laurence Millington Synge trabalhavam para a Wool Industries Research Association na cidade de Leeds e em 1941 publicaram um artigo intitulado "A New Form of Chromatogram Employing Two Liquid Phases" (Uma Nova Forma de Cromatograma Empregando Duas Fases L\xc3\xadquidas), que serviu como base para a cromatografia amplamente utilizada atualmente, e, devido \xc3\xa0 "inven\xc3\xa7\xc3\xa3o deles de cromatografia de parti\xc3\xa7\xc3\xa3o" receberam em 1952 o Pr\xc3\xaamio Nobel de Qu\xc3\xadmica._NEWLINE_O aparato pode ser visualizado como um tubo de part\xc3\xadculas de s\xc3\xadlica com \xc3\xa1gua na fase estacion\xc3\xa1ria, e um l\xc3\xadquido imisc\xc3\xadvel (clorof\xc3\xb3rmio) na fase m\xc3\xb3vel que percorre a coluna. A amostra quando injetada tem as diferentes mol\xc3\xa9culas sofrendo um caminho diferencial dependendo da afinidade que essas mol\xc3\xa9culas possam ter com as fases do instrumento, e portanto, sendo detectadas em tempos diferentes. Esse \xc3\xa9 um ponto no qual o trabalho se diferencia de outros: a separa\xc3\xa7\xc3\xa3o independe da adsor\xc3\xa7\xc3\xa3o das subst\xc3\xa2ncias \xc3\xa0 fase s\xc3\xb3lida, mas sim no equil\xc3\xadbrio de parti\xc3\xa7\xc3\xa3o estabelecido. No artigo, os pesquisadores fizeram a separa\xc3\xa7\xc3\xa3o de amino\xc3\xa1cidos e prote\xc3\xadnas hidrolisadas utilizando esse m\xc3\xa9todo de cromatografia l\xc3\xadquido-l\xc3\xadquido ou cromatografia de parti\xc3\xa7\xc3\xa3o (a amostra fica particionada entre as duas fases l\xc3\xadquidas)._NEWLINE_A detec\xc3\xa7\xc3\xa3o visual, comum \xc3\xa0 \xc3\xa9poca, poderia ser feita adicionando-se um indicador em uma das fases para subst\xc3\xa2ncias incolores, como, por exemplo, um indicador \xc3\xa1cido-base na separa\xc3\xa7\xc3\xa3o de \xc3\xa1cidos (formando bandas coloridas). A teoria generalizada da t\xc3\xa9cnica poderia ser aplic\xc3\xa1vel para uma s\xc3\xa9rie de subst\xc3\xa2ncias com isotermas lineares de distribui\xc3\xa7\xc3\xa3o (posi\xc3\xa7\xc3\xa3o na coluna versus tempo de elui\xc3\xa7\xc3\xa3o). Foi estabelecido um conceito de altura equivalente \xc3\xa0 um prato te\xc3\xb3rico, numa analogia \xc3\xa0s destila\xc3\xa7\xc3\xb5es e extra\xc3\xa7\xc3\xb5es fracionadas, e desenvolvido uma metodologia matem\xc3\xa1tica que permite compreender a efici\xc3\xaancia da instrumenta\xc3\xa7\xc3\xa3o devido \xc3\xa0 maior quantidade de pratos te\xc3\xb3ricos ou menor altura de prato. A teoria de Martin e Synge traz uma explica\xc3\xa7\xc3\xa3o para a concentra\xc3\xa7\xc3\xa3o do soluto em qualquer ponto da coluna e determina fatores dos quais s\xc3\xa3o respons\xc3\xa1veis pela resolu\xc3\xa7\xc3\xa3o da instrumenta\xc3\xa7\xc3\xa3o, sendo de vital import\xc3\xa2ncia para o desenvolvimento da cromatografia moderna._NEWLINE_O trabalho desses dois pesquisadores foi um marco para a Qu\xc3\xadmica Org\xc3\xa2nica, em especial, a Qu\xc3\xadmica da Vida: as aplica\xc3\xa7\xc3\xb5es da metodologia permitem estudos muito melhores na compreens\xc3\xa3o de subst\xc3\xa2ncias com atividades bioqu\xc3\xadmicas, farmacol\xc3\xb3gicas e aliment\xc3\xadcias, entre outras, e nas pr\xc3\xb3prias palavras de Synge, "quando os efeitos de pequenas mol\xc3\xa9culas s\xc3\xa3o melhor entendidos, n\xc3\xb3s devemos ser muito mais aptos a compreender a estrutura de grandes mol\xc3\xa9culas e qual \xc3\xa9 a fun\xc3\xa7\xc3\xa3o delas em termos de for\xc3\xa7as intermoleculares".\n_START_SECTION_\nCromatografia de adsor\xc3\xa7\xc3\xa3o\n_START_PARAGRAPH_\nNeste processo, o de mais ampla utiliza\xc3\xa7\xc3\xa3o, duas subst\xc3\xa2ncias s\xc3\xa3o ligadas por uma interface onde ocorre solubiliza\xc3\xa7\xc3\xa3o. A fase estacion\xc3\xa1ria \xc3\xa9 s\xc3\xb3lida e a fase m\xc3\xb3vel pode ser l\xc3\xadquida ou gasosa. Baseia-se nas atra\xc3\xa7\xc3\xb5es eletrost\xc3\xa1ticas ou dipolares da superf\xc3\xadcie da fase estacion\xc3\xa1ria pelas mol\xc3\xa9culas da subst\xc3\xa2ncia a separar.\n_START_SECTION_\nCromatografia de parti\xc3\xa7\xc3\xa3o\n_START_PARAGRAPH_\nA fase estacion\xc3\xa1ria \xc3\xa9 l\xc3\xadquida. Este processo \xc3\xa9 baseado na diferente solubilidade dos componentes da mistura nas duas fases l\xc3\xadquidas.\n_START_SECTION_\nCromatografia planar\n_START_PARAGRAPH_\nNa cromatografia planar, tamb\xc3\xa9m chamada de camada fina, ou TLC ("Thin Layer Chromatography"), a fase estacion\xc3\xa1ria, por exemplo alumina ou s\xc3\xadlica, \xc3\xa9 suportada sobre uma placa plana ou nos poros de um papel. Nesse caso, a fase m\xc3\xb3vel desloca-se atrav\xc3\xa9s da fase estacion\xc3\xa1ria, s\xc3\xb3lida e adsorvente, por a\xc3\xa7\xc3\xa3o da capilaridade ou sob a influ\xc3\xaancia da gravidade. \xc3\x9atil em separa\xc3\xa7\xc3\xa3o de compostos polares. Encontra-se bastante difundida devido \xc3\xa0 sua facilidade experimental e ao seu baixo custo.\n_START_SECTION_\nCromatografia em papel (CP)\n_START_PARAGRAPH_\nOu PC, do ingl\xc3\xaas "paper chromatography". \xc3\x89 uma t\xc3\xa9cnica de parti\xc3\xa7\xc3\xa3o, utiliza dois l\xc3\xadquidos, ou misturas de l\xc3\xadquidos, um atuando como fase m\xc3\xb3vel (eluente) e outro, suportado sobre papel, atuando como fase estacion\xc3\xa1ria. Ocorre a reten\xc3\xa7\xc3\xa3o das subst\xc3\xa2ncias devido \xc3\xa0s diferentes afinidades para com as fases estacion\xc3\xa1ria e m\xc3\xb3vel. Utiliza-se papel normal ou papel de filtro (mais utilizado) como suporte da fase estacion\xc3\xa1ria._NEWLINE_Exemplificando: a mistura \xc3\xa9 aplicada no papel e mergulhada na mistura das fases l\xc3\xadquida e estacion\xc3\xa1ria. A tira de papel de suporte \xc3\xa9 colocada em um cuba contendo o eluente. Esta fase m\xc3\xb3vel (solvente) sobe por capilaridade e arrasta a subst\xc3\xa2ncia pela qual tem mais afinidade, separando-a das subst\xc3\xa2ncias com maior afinidade pela fase estacion\xc3\xa1ria. Como a maioria das subst\xc3\xa2ncias separadas s\xc3\xa3o incolores, utiliza-se um revelador._NEWLINE_As manchas podem ser reveladas por meio de luz UV, vapores de iodo, solu\xc3\xa7\xc3\xb5es de cloreto f\xc3\xa9rrico e tiocianoferrato de pot\xc3\xa1ssio, fluoresc\xc3\xaancias, radioatividade, etc.\n_START_SECTION_\nCromatografia em coluna\n_START_PARAGRAPH_\n\xc3\x89 a t\xc3\xa9cnica de separa\xc3\xa7\xc3\xa3o cuja fase estacion\xc3\xa1ria acontece dentro de um tubo. Utiliza-se uma coluna de vidro aberta na parte superior e munida de uma torneira na extremidade inferior, por onde elui  o l\xc3\xadquido. Dentro da coluna encontra-se a fase estacion\xc3\xa1ria constitu\xc3\xadda por um enchimento s\xc3\xb3lido no caso da cromatografia de adsor\xc3\xa7\xc3\xa3o, ou por uma fase l\xc3\xadquida no caso da cromatografia de parti\xc3\xa7\xc3\xa3o. A fase m\xc3\xb3vel \xc3\xa9 l\xc3\xadquida em ambos os casos.A ordem das subst\xc3\xa2ncias depender\xc3\xa1 da sua polaridade.\n_START_SECTION_\nCromatografia de leito m\xc3\xb3vel\n_START_PARAGRAPH_\nA cromatografia de leito m\xc3\xb3vel verdadeiro (True moving bed, TMB) \xc3\xa9 uma forma de transformar a cromatografia de leito fixo num processo cont\xc3\xadnuo em contracorrente, e desta forma maximizar as taxas de transfer\xc3\xaancia de massa entre fases. Nesta t\xc3\xa9cnica, o absorvente move-se no sentido oposto ao do eluente com uma velocidade compreendida entre as velocidades de migra\xc3\xa7\xc3\xa3o dos dois componentes.\n_START_SECTION_\nCromatografia por Troca I\xc3\xb4nica\n_START_PARAGRAPH_\nA cromatografia i\xc3\xb4nica (ou cromatografia de troca i\xc3\xb4nica) \xc3\xa9 um processo de separa\xc3\xa7\xc3\xa3o e an\xc3\xa1lise quantitativa de \xc3\xadons (c\xc3\xa1tions e \xc3\xa2nions) \xc2\xa0que se ligam eletrostaticamente com base em sua afinidade com a matriz trocadora de \xc3\xadons._NEWLINE_\xc3\x89 indicada para mol\xc3\xa9culas carregadas, incluindo prote\xc3\xadnas em condi\xc3\xa7\xc3\xb5es distantes do seu ponto isoel\xc3\xa9trico. _NEWLINE_R\xe2\x81\xbaA\xe2\x81\xbb  \xc2\xa0+ B\xe2\x81\xbb \xe2\x87\x86\xc2\xa0 R\xe2\x81\xbaB\xe2\x81\xbb  + A\xe2\x81\xbb_NEWLINE_Sendo R o trocador de \xc3\xadons e A e B os diferentes \xc3\xa2nions._NEWLINE_A cromatografia i\xc3\xb4nica pode ser ani\xc3\xb4nica (troca de \xc3\xa2nions) ou \xc2\xa0cati\xc3\xb4nica (troca de c\xc3\xa1tions). Em prote\xc3\xadnas, a cromatografia de troca cati\xc3\xb4nica quando estiver carregada positivamente, ou seja em pH menor que seu ponto isoel\xc3\xa9trico (PI) e por consequ\xc3\xaancia a fase estar\xc3\xa1 carregada negativamente e vice-versa._NEWLINE_A medida que a coluna vai sendo elu\xc3\xadda (lavada) os \xc3\xadons ou prote\xc3\xadnas em solu\xc3\xa7\xc3\xa3o v\xc3\xa3o sendo transportados \xc2\xa0de acordo com a afinidade pela fase estacion\xc3\xa1ria, assim os \xc3\xadons com menor afinidade pelo trocador de \xc3\xadons movem-se mais rapidamente pela coluna. Esse processo pode ser controlado trocando-se o tamp\xc3\xa3o alterando a concentra\xc3\xa7\xc3\xa3o de sal e/ou pH, tamb\xc3\xa9m chamado de processo de elui\xc3\xa7\xc3\xa3o em gradiente descont\xc3\xadnuo._NEWLINE_O sistema possui um detector no final da coluna mede continuamente a condutividade do eluente quantificando os \xc3\xadons de elui\xc3\xa7\xc3\xa3o em fun\xc3\xa7\xc3\xa3o do tempo ou ainda absorb\xc3\xa2ncia no UV a 280 nm quando amostra cont\xc3\xa9m prote\xc3\xadnas. Esses dados s\xc3\xa3o reunidos em um gr\xc3\xa1fico chamado de cromatograma, no qual a posi\xc3\xa7\xc3\xa3o de um pico \xc3\xa9 caracter\xc3\xadstica de um \xc3\xadon e o tamanho do pico est\xc3\xa1 relacionada a sua concentra\xc3\xa7\xc3\xa3o na amostra._NEWLINE_Os trocadores de \xc3\xadons ou resinas usados para a purifica\xc3\xa7\xc3\xa3o de prote\xc3\xadnas s\xc3\xa3o constitu\xc3\xaddos de materiais espec\xc3\xadficos como celulose (podendo estar associadas dietlaminoetil \xe2\x80\x93 DEAE ou a carboximetil \xe2\x80\x93 CM), poliestireno, g\xc3\xa9is de agarose ou dextrana.'