b'\n_START_ARTICLE_\nBakulovirukset\n_START_SECTION_\nBakulovirus ja sen elinkaari\n_START_PARAGRAPH_\nBakulovirukset koostuvat kahdesta suvusta, Nuclear polyhedrosis- viruksista (NPV) ja Granulosis- viruksista (GV). NPV:t tuottavat hy\xc3\xb6nteissoluissa infektion my\xc3\xb6t\xc3\xa4 suuria polyhedriini-proteiinimatrikseja, joiden sis\xc3\xa4ll\xc3\xa4 on useita viruksia ja GV:t partikkeleita, joiden sis\xc3\xa4ll\xc3\xa4 on vain yksi virioni._NEWLINE_Bakulovirukset ovat hy\xc3\xb6nteissoluja infektoivia viruksia ja varsin lajispesifisi\xc3\xa4. AcMNPV infektoi spesifisesti yli 30:t\xc3\xa4 lepidoptera \xe2\x80\x93suvun hy\xc3\xb6nteislajia. T\xc3\xa4m\xc3\xa4 suuri is\xc3\xa4nt\xc3\xa4lajien m\xc3\xa4\xc3\xa4r\xc3\xa4 on kuitenkin poikkeuksellista bakulovirusten keskuudessa. Infektoidessaan hy\xc3\xb6nteissoluja bakulovirukset esiintyv\xc3\xa4t kahdessa erilaisessa muodossa: niin sanottuna okluusioper\xc3\xa4isen\xc3\xa4 viruksena (ODV: occlusion derived virus, joskus my\xc3\xb6s nimell\xc3\xa4 PDV eli polyhedron derived virus), joka sis\xc3\xa4lt\xc3\xa4\xc3\xa4 useita viruskapsideita polyhedriinimatriksiin ymp\xc3\xa4r\xc3\xb6ityn\xc3\xa4, joka taas on p\xc3\xa4\xc3\xa4llystynyt vaipalla. Toinen muoto on silmikoituva virus (budded virus, lyhyemmin BV, joskus my\xc3\xb6s extra-cellular virion eli ECV, ekstrasellulaarinen virus), jolloin yksitt\xc3\xa4ist\xc3\xa4 viruskapsidia ymp\xc3\xa4r\xc3\xb6i oma vaippa proteiineineen. Edell\xc3\xa4 mainittu ODV-muoto on tarpeen suojaamaan fyysisesti viruksia luonnossa, esim. puiden lehdill\xc3\xa4. ODV-muodon polyhedriinimatriksi suojaa viruksia hyvin tehokkaasti ymp\xc3\xa4rist\xc3\xb6n vaikutuksilta ja lis\xc3\xa4\xc3\xa4 siten virusten infektiivisyytt\xc3\xa4 ekosysteemiss\xc3\xa4. Joutuessaan hy\xc3\xb6nteisen ruuansulatuksen alkaaliseen ymp\xc3\xa4rist\xc3\xb6\xc3\xb6n polyhedriinimatriksi hajoaa vapauttaen ODV-virionit. N\xc3\xa4m\xc3\xa4 ensimm\xc3\xa4isen aallon virionit ovat hyvin tehokkaita tartuttamaan suoliston epiteelisoluja, mutta ne eiv\xc3\xa4t ole juurikaan tehokkaita levitt\xc3\xa4m\xc3\xa4\xc3\xa4n infektiota ymp\xc3\xa4rilleen._NEWLINE_Silmikoituva virus -tyyppi on taas tarpeen kun prim\xc3\xa4\xc3\xa4rinen infektio hy\xc3\xb6nteisen ruuansulatuselimist\xc3\xb6n soluihin on saavutettu. BV-virukset ovat erikoistuneet solusta-soluun infektioon, jonka tarkoituksena on levitt\xc3\xa4\xc3\xa4 systeemist\xc3\xa4 infektiota ymp\xc3\xa4ri hy\xc3\xb6nteisen elimist\xc3\xb6\xc3\xa4. Solujen lyysautumisen alkaminen johtaa ODV- muodon tuotannon k\xc3\xa4ynnistymiseen infektion my\xc3\xb6h\xc3\xa4isess\xc3\xa4 vaiheessa ja pian is\xc3\xa4nn\xc3\xa4n kuolemaan. Polyhedriinin suojaamat ODV- virukset jatkavat infektion levitt\xc3\xa4mist\xc3\xa4 ekosysteemiss\xc3\xa4. Kahden erilaisen muodon k\xc3\xa4ytt\xc3\xb6 viruksen lis\xc3\xa4\xc3\xa4ntymisess\xc3\xa4 lienee syy sen hyv\xc3\xa4\xc3\xa4n menestykseen luonnossa.\n_START_SECTION_\nBakuloviruksen soluunotto\n_START_PARAGRAPH_\nBakuloviruksen soluunotto on t\xc3\xa4rke\xc3\xa4 vaihe niin sen luontaisen kiertokulun kuin erilaisten geeniterapian sovellustenkin takia. Soluunoton kaikkia vaiheita ei toistaiseksi tunneta, eik\xc3\xa4 my\xc3\xb6sk\xc3\xa4\xc3\xa4n olla t\xc3\xa4ysin selvill\xc3\xa4 siit\xc3\xa4, miten viruksen kapsidi p\xc3\xa4\xc3\xa4tyy solun tumaan. Soluunotto hy\xc3\xb6nteisiss\xc3\xa4 on kuitenkin analoginen mekanismeiltaan nis\xc3\xa4k\xc3\xa4ssoluissa tapahtuvaan soluunottoon. Seuraavat mekanismit ovat siis t\xc3\xa4m\xc3\xa4nhetkisen tiedon mukaan yhteisi\xc3\xa4 AcMNPV:n tunkeutumisessa sek\xc3\xa4 hy\xc3\xb6nteissoluihin ett\xc3\xa4 nis\xc3\xa4k\xc3\xa4ssoluihin: tunkeutuminen soluun alkaa sitoutumisella is\xc3\xa4nt\xc3\xa4solun toistaiseksi tunnistamattomaan reseptoriin plasmamembraanilla, reseptorin kuroutumisella sis\xc3\xa4\xc3\xa4np\xc3\xa4in ja endosyyttisen vesikkelin muodostumisella. Endosomin happamoituminen saa aikaan viruksen vaipan ja endosomin membraanin fuusion, joka vapauttaa nukleokapsidin sytoplasmaan. Viruksen kapsidi kuljetetaan t\xc3\xa4m\xc3\xa4n j\xc3\xa4lkeen tumaan replikaatiota varten.\n_START_SECTION_\nBakuloviruksen rakenne\n_START_PARAGRAPH_\nSilmikoituva virus (BV) on rakenteeltaan sauvamainen ja sit\xc3\xa4 ymp\xc3\xa4r\xc3\xb6i membraani, jonka toisessa p\xc3\xa4\xc3\xa4ss\xc3\xa4 on gp64\xe2\x80\x93vaippaproteiineja peplomeerim\xc3\xa4isen\xc3\xa4 rakenteena. Membraanin sis\xc3\xa4lt\xc3\xa4 l\xc3\xb6ytyy viruksen kapsidi, jonka sis\xc3\xa4ll\xc3\xa4 viruksen sirkulaarinen genomi on. Okluusioper\xc3\xa4inen virus (ODV) sis\xc3\xa4lt\xc3\xa4\xc3\xa4 puolestaan useita kapsideita, ilman gp64-proteiinia, yhteisess\xc3\xa4 polyhedriiniproteiinista muodostuvassa matriisissa. AcMNPV:n genomi on 133 894 em\xc3\xa4sparin mittainen ja muodostuu kaksis\xc3\xa4ikeisest\xc3\xa4 DNA:sta. Se koodaa potentiaalisesti 150 proteiinia.\n_START_SECTION_\nPolyhedriini ja sen vaippa\n_START_PARAGRAPH_\nPolyhedriini ja granuliini-proteiini (AcMNPV:n orf8 eli open reading frame 8, luettava geeni 8) ovat 245 aminohapon muodostamia proteiineja. Polyhedriini on my\xc3\xb6s hyvin konservoitunut proteiini eri bakuloviruskantojen keskuudessa. AcMPV:n polyhedriinipromoottori polh on hyvin k\xc3\xa4ytetty proteiiniekspressiossa. T\xc3\xa4m\xc3\xa4 johtuu siit\xc3\xa4, ett\xc3\xa4 jopa puolet solun proteiineista voi infektion aikana muodostua t\xc3\xa4m\xc3\xa4n promoottorin alla. Polyhedriini ei ole oleellinen viruksen replikaatiolle tai sen infektiivisyydelle._NEWLINE_ODV-muotoisen viruksen polyhedrarakennetta ymp\xc3\xa4r\xc3\xb6i vaippa (eng. polyhedron envelope eli PE tai polyhedron calyx). T\xc3\xa4m\xc3\xa4n vaipan p\xc3\xa4\xc3\xa4asiallinen rakenneproteiini on PEP (Polyhedron envelope protein, pp34, orf131). Polyhedra-rakenteen toinen oleellinen proteiini on p10 (orf 137), jonka ekspressio tapahtuu my\xc3\xb6hemmin infektion aikana. My\xc3\xb6s se on oleellinen polyhedran stabiiliuden ja rakenteen kannalta.\n_START_SECTION_\nNukleokapsidi\n_START_PARAGRAPH_\nBV:ll\xc3\xa4 ja ODV:ll\xc3\xa4 on hyvin samankaltaiset kapsidit, vain proteiini ODV-EC27:n on osoitettu l\xc3\xb6ytyv\xc3\xa4n yksinomaan okluusiomuodosta. AcMNPV:n proteiini p6,9 (orf100) on DNA:han sitoutuva proteiini, joka on osallisena viruksen DNA:n pakkautumisessa sen kapsidin sis\xc3\xa4\xc3\xa4n. Se toimii spermassa histoneita korvaavien protamiinien tavoin ja on aminohappokoostumukseltaan samankaltainen. Se on oleellinen viruksen DNA:n pakkautumisessa kapsidin sis\xc3\xa4lle._NEWLINE_Mainitsemisen arvoinen kapsidiproteiini AcMNPV:lle on my\xc3\xb6s vp-39 (orf89), jota l\xc3\xb6ytyy satunnaisesti kautta nukleokapsidin. T\xc3\xa4m\xc3\xa4 viittaisi siihen, ett\xc3\xa4 se on kapsidin rakennekomponentti, erikoistuneen rakenteen sijaan. Proteiinin kysteiinit\xc3\xa4hteet ovat konservoituneet eri viruslajien keskuudessa, joka viittaisi niiden olevan oleellisia rakenteen kannalta._NEWLINE_Kapsidin p\xc3\xa4\xc3\xa4dyss\xc3\xa4 oleva ORF1629 (orf9) on erikoistunut kuppimainen rakenne, joka sulkee viruksen kapsidin. Viruksen kapsidin orientaatio infektion ja soluuntunkeutumisen aikana vaikuttaa kytkeytyv\xc3\xa4n ORF1629:n kautta kapsidin sis\xc3\xa4ll\xc3\xa4 olevan DNA:n vapautumiseen kapsidista.\n_START_SECTION_\nVaippa ja sen proteiinit\n_START_PARAGRAPH_\nBakuloviruksia ymp\xc3\xa4r\xc3\xb6iv\xc3\xa4 vaippa koostuu kaksoiskerroksellisesta lipidikalvosta ja siihen liittyneist\xc3\xa4 proteiineista. Olennainen osa bakulovirusten rakennetta ovat niiden vaipan proteiinit, joilla on erilaisia rakennetta stabiloivia tai infektion kannalta olennaisia teht\xc3\xa4vi\xc3\xa4. ODV -ja BV -muotojen v\xc3\xa4lill\xc3\xa4 on havaittavissa selvi\xc3\xa4 eroja vaipan koostumuksen suhteen; ODV:n vaippa sis\xc3\xa4lt\xc3\xa4\xc3\xa4 enemm\xc3\xa4n tyydyttyneit\xc3\xa4 rasvahappoja, kolesterolia ja tihe\xc3\xa4mmin proteiineja kuin BV:n vaippa. ODV:n vaippa koostuu tumakalvosta, kun taas BV:ll\xc3\xa4 vaippa on per\xc3\xa4isin solumembraanista. T\xc3\xa4m\xc3\xa4n lis\xc3\xa4ksi osa eroista johtunee viruksen vaipan proteiinien osallistumisesta selektiivisesti membraanin ottamiseen is\xc3\xa4nt\xc3\xa4solun ulko- tai sis\xc3\xa4pinnalta. BV-muotoinen virus, joka levitt\xc3\xa4\xc3\xa4 infektiota systeemisesti, tarvitsee liikkuvamman vaipan ja erilaisen proteiinikoostumuksen kuin ODV, jonka vaipan proteiinit osallistuvat polyhedriinimatriksin kristallisoitumiseen.\n_START_SECTION_\nODV-vaipan proteiinit\n_START_PARAGRAPH_\nViruksen membraaniin on assosioitunut useita erilaisia proteiineja, niist\xc3\xa4 ODV-E66:n (orf46) tarkoituksena vaikuttaa olevan proteiinien targetointi, s\xc3\xa4ilytt\xc3\xa4minen ja/tai siirto ODV-muodon vaipalle. Samantapainen rakenne ja teht\xc3\xa4v\xc3\xa4 vaikuttaa olevan my\xc3\xb6s ODV-E25:ll\xc3\xa4 (orf94). p74 (orf138) -proteiinia ekspressoidaan infektion loppuvaiheessa ja geenin deleetio aiheuttaa virukselle kykenem\xc3\xa4tt\xc3\xb6myyden infektoida hy\xc3\xb6nteisi\xc3\xa4 ruuansulatuskanavan kautta.\n_START_SECTION_\nBV-vaipan proteiinit\n_START_PARAGRAPH_\nGp64 (orf128) on ainoa proteiini, joka l\xc3\xb6ytyy yksinomaan BV-muodosta. Proteiini on lukukehyksen ennusteen mukaan 59 kDa:n kokoinen, mutta valmis proteiini on vahvasti glykolysoitu ja asyloitu ollen kooltaan 64 kDa. Geeni\xc3\xa4 s\xc3\xa4\xc3\xa4dell\xc3\xa4\xc3\xa4n aikaisella ja my\xc3\xb6h\xc3\xa4isell\xc3\xa4 (eng. late ja early) promoottorilla ja sen tuottama gp-64 proteiini on t\xc3\xa4rkein pohja fuusioproteiineille peptidin\xc3\xa4ytt\xc3\xb6tekniikassa. Gp64 on rakenteeltaan ja toiminnaltaan parhaiten tutkittu proteiini bakuloviruksissa, johtuen sen sopivuudesta erilaisiin tuotanto- ja n\xc3\xa4ytt\xc3\xb6menetelmiin._NEWLINE_Immunologisten ja biokemiallisten tutkimusten mukaan gp64 ker\xc3\xa4\xc3\xa4ntyy plasmamembraanille infektion alku- ja loppuvaiheissa. Viruksen nukleokapsidit tulevat vaipallisiksi ty\xc3\xb6ntyess\xc3\xa4\xc3\xa4n ulos solusta, jolloin viruksen vaippa muodostuu gp64-modifioidusta solumembraanista ja gp64-proteiineista. Itse viruksessa proteiinit ovat konsentroituneet viruspartikkelin toiseen p\xc3\xa4\xc3\xa4h\xc3\xa4n peplomeeri-rakenteiksi ollen olennaisia viruksen solusta-soluun infektiossa._NEWLINE_Gp64-proteiini sis\xc3\xa4lt\xc3\xa4\xc3\xa4 N-terminaalisen signaalipeptidin ja C-terminaalisen ankkuridomeenin. Baculoviridae-heimon keskuudessa proteiini on eritt\xc3\xa4in konservoitunut. Runsaan glykolysaation lis\xc3\xa4ksi proteiini on asyloity, merkitt\xc3\xa4vimmin palmitiinihapolla. Valmis gp64 trimerisoituu nopeasti disulfidisidosten kautta ja on membraanilla trimeerisess\xc3\xa4 muodossa. Trimerisaatiossa on osallisena proteiinin leusiini-vetoketju (amfipaattinen alfa-heliksi) rakenne.'