각 웰 에서 총 DNA 당 칼슘 수준 을 측정 함 으로써 , 상기 배양 물 에서 웰 당 무기질 의 총 농도 를 평가 하 였 다 . 세포 배 양물 은 Ca + 및 Mg + 이 없 는 PBS 로 3 회 세척 하 고 , 0 . 6 M 염산 ( 웰 당 100 ㎕) 중 에 가용화 되 도록 밤새 두 었 다 . 산 - 가용화 무기질 23 을 새로운 96 - 웰 플레이트 에 옮기 고 , o - 크레졸 - 프탈 레인 - 컴 플렉 손 ( complexone ) ( Thermal Electron Corporation , USA ) 과 반응 시켜 , EL 808 울트라 마이크 로 플레이트 리더 로 570 nm 에서 측정 되 는 , 보라색 염료 를 형성 하 였 다 . 보라색 염료 의 강도 는 각 웰 의 칼슘 농도 에 직접 비례 한다 . 제조자 의 권고 에 따라 , 칼슘 표준 곡선 으로부터 절대 칼슘 농도 를 외삽법 에 의해 추정 하 였 다 . 이후 , 산 - 가용화 배 양물 을 Ca + 및 Mg + 이 없 는 PBS 로 3 회 세척 하 고 , 2 시간 동안 37 ℃ 에서 100 μ g / mL 단 백 분 해 효소 K 의 용액 100 ㎕ 에서 인 큐 베이 션 시켰 다 . 소화 된 시료 는 격렬 하 게 피펫 으로 재고 , 각 웰 에서 50 ㎕ 씩 을 , DNA 분석 완충액 ( 2 M NaCl 및 50 mM 인산염 나트륨 ) 중 의 희석 된 훽 스 트 ( Hoechst ) 33258 ( 2 μ g / mL ) 150 ㎕ 를 함유 하 는 , 비 형광 성 분석 플레이트 의 웰 에 이동 시켰 다 . LS 55 형광 분광 광도계 ( Perkin Elmer ) 를 사용 하 여 350 nm 에서 일련 의 표준 DNA 에 대해 절대 흡광도 를 측정 하 였 다 .