화합물 과 재조합 STING 단백질 사이 의 물리 적 상호 작용 을 측정 하 는데 DSF 검정 을 사용 하 였 다 . 말단 절단 된 재조합 STING 단백질 ( a . a . 155 - 341 ) ( 서열 식별 번호 : 4 ) 은 하 기 기재 된 바 와 같이 이 . 콜라 이 에서 발현 시켜 검정 을 위해 단리 하 였 다 . 검정 매트릭스 를 384 - 웰 플레이트 에서 1 μ M 재조합 STING 단백질 ( a . a . 155 - 341 ) ( 서열 식별 번호 : 4 ) , 100 mM KCl 이 보충 된 100 mM PBS pH 7 . 4 , 5 X SYPRO 오렌지색 염료 및 50 μ M 화합물 ( 최종 DMSO 농도 0 - 1 %) 로 이루어진 웰 당 10 μ L 의 최종 부피 로 제조 하 였 다 . 검정 은 각각 470 및 586 nm 에서 의 여기 및 방출 필터 및 0 . 05 ℃/ 분 의 속도 로 25 ℃ 에서 95 ℃ 까지 의 온도 구배 를 사용 하 는 퀀트 스튜디오 ( QuantStudio ) 12 K 플렉스 실시간 PCR 시스템 에서 수행 하 였 다 . 어 플 라이드 바이오 시스템즈 ( Applied Biosystems ) ® 프로테인 써 말 시프트 소프트웨어 ( 알고리즘 버전 1 . 3 . ) 에 의해 할당 된 형광 도함수 곡선 에 따라 , 비 결합 및 리간드 결합 재조합 STING 단백질 의 열 융점 ( Tm ) 및 열 융점 의 차 ( dTm D ) 를 계산 하 였 다 .