제 2 패닝 라운드 산출물 로부터 의 단일 콜로니 를 선택 하 여 0 . 5 mL 의 2 YTC 배지 를 함유 하 는 96 - 웰 딥 - 웰 플레이트 에 넣 었 다 . 상기 플레이트 는 밀봉 하 여 , 하룻밤 동안 37 ℃ 에서 교반 과 함께 성장 되 었 다 . 세포 형질 Fab 발현 을 유도 하 기 위해 , 하룻밤 동안 배 양물 의 50 μ L 를 자동 - 유도 보충 제 ( EMD Millipore 에서 구함 ) 와 함께 2 YTC 배지 의 웰 당 950 μ L 를 함유 하 는 새로운 96 - 웰 딥 - 웰 플레이트 로 옮겼 다 . 상기 플레이트 는 밀봉 하 여 , 하룻밤 동안 37 ℃ 에서 성장 되 었 다 . 상기 플레이트 를 4 , 000 rpm 에서 10 분 동안 원심 분리 하 여 박테리아 를 펠 렛 화 하 고 , 이 배지 는 폐기 하 였 다 . 상기 펠 렛 을 0 . 1 mL 의 PPB 완충액 ( Teknova 로부터 입수 ) 에 현 탁 시키 고 , 10 ℃ 및 1 , 000 rpm 에서 1 시간 동안 진탕 시킨 후 , 0 . 3 mL 의 물 을 각 웰 에 첨가 하 였 다 . 추가 로 30 분 동안 진탕 시킨 후 , 상기 플레이트 를 10 분 동안 최대 속도 로 회전 시켰 다 . 생성 된 상청 액 은 스크리닝 을 위해 가용성 , 미 정제 ( crude ) 의 Fab 를 함유 하 였 다 .