( +)- 3 - HM 을 10 mM 의 농도 로 DMSO 에 녹인 후 , 4 ℃ 에서 저장 하 였 다 . MDCK 세포 들 은 ATCC ( American Type Culture Collection , CCL - 34 ) 로부터 얻 었 다 . MDCK 세 포 들 을 1 ×NEAA ( Non - essential amino acids ) , 10 mM HEPES , 100 유닛 페니실린 , 0 . 1 mg / ml 의 스트렙토마이신 및 8 % FBS 를 함유 하 는 DMEM ( Dulbecco ' s MEM with high glucose ) 배지 에서 유지 하 였 다 . 상기 세포 들 을 세포 배양기 내 의 T - 75 플라스크 에서 37 ℃ 에서 배양 하 였 다 . MDCK 세포 들 을 주 2 회 계대 배양 하 였 다 . 세포 가 90 % 컨 플루언스 ( confluence ) 시 , 트랜 스웰 에 1 × 105 / 웰 로 도말 하 였 다 . 상기 세포 들 은 이틀 에 한번 새 배지 에서 배양 하 였 다 . 상기 세포 들 을 5 일 동안 트 렌스 웰 에서 배양 하 였 다 . 세포 들 이 상기 컨 플루언스 에 도달 하 여 분화 되 면 , 전달 실험 을 위하 여 사용 하 였 다 . 각 웰 의 TEER ( transepithelial electrical resistance ) 을 Millicell - ERS system ohm meter 를 이용 하 여 측정 하 였 다 . 전극 은 70 % 에탄올 및 PBS 에 15 분 간 침지 하 였 다 . 그리고 나 서 , 전압 전위차계 ( potentiometer ) 에서 스 크류 드라이버 로 전압 이 0 . 0 을 나타낼 때 까지 조정 하 고 , 각 웰 에 대한 전기 적 저항 을 기록 하 였 다 . 400 Ω 이상 의 TEER 값 을 갖 는 MDCK 단일 층 을 사용 하 였 다 . 각 웰 을 살균 한 HBSS ( hank ' s buffered solution ) 를 이용 하 여 세척 하 고 , (+)- 3 - HM 을 HBSS 중 에서 100 배 희석 한 후 , 상부 웰 들 ( apical wells ) 을 200 μ L 의 시험 화합물 들 로 채웠 다 . 저 측 부 웰 들 ( basolateral wells ) 은 1 mL 의 HBSS 버퍼 로 채웠 다 . 분석 을 조정 하 기 위해 0 . 1 % DMSO 만 으로 처리 된 웰 을 준비 하 였 다 . 상기 세포 들 을 37 ℃ 에서 1 시간 동안 배양 하 였 다 . 전달 기간 ( transport period ) 말기 에 , 상부 웰 ( 150 μ L ) 및 저 측 부 웰 ( 900 μ L ) 로부터 각 시료 들 을 제거 하 였 다 . 실시 예의 대표 적 인 화합물 들 은 동일 조건 에서 수행 되 었 다 .