CD 33 SS - TNF - 결합 Fn 3 서열 ( 서열 6 ) , CD 33 SS - TNF - 결합 Fn 3 ( R 18 L & I 56 T ) ( 서열 7 ) , CD 33 SS - 야생 형 Fn 3 서열 ( 서열 8 ) 및 CD 33 SS - 야생 형 Fn 3 ( RGD 로부터 RGA 로 의 ) ( 서열 9 ) 에 상응 하 는 DNA 서열 을 포유 동물 세포 에서 발현 을 위해 최적 화 하 고 , 게네 아르트 아 게 ( 독일 ) 에서 제조 하 였 다 . 생성 되 는 DNA 단편 을 BlpI / XbaI 를 사용 하 여 pRS 5 a 내 로 라이 게이팅 하 였 다 ( 적절 한 옆 에 접하 는 DNA 서열 , 예 를 들 어 Kozak 을 벡터 에 첨가 하 였 다 ) . HSA 를 프라이머 1 ( 서열 16 ) 및 2 ( 서열 17 ) ( 프라이머 2 는 His 태그 를 코딩 한다 ) 을 사용 하 여 PCR 에 의해 증폭 시키 고 , RsrII / XbaI 을 사용 하 여 pRS 5 a ( CD 33 - TNF - 결합 Fn 3 서열 ( 서열 6 및 서열 7 ) 또는 CD 33 - 야생 형 Fn 3 서열 ( 서열 8 및 서열 9 ) 내 로 삽입 하 였 다 . RSA 를 프라이머 26 ( 서열 86 ) 및 27 ( 서열 87 ) 을 사용 하 여 벡터 IRBPp 993 CO 328 D ( RZPD ) 로부터 PCR 에 의해 증폭 시킨 후 , RsrII / XbaI 를 통해 pRS 5 a - CD 33 신호 서열 - 야생 형 Fn 3 ( RGD 로부터 RGA 로 의 ) - HSA - His ( 서열 99 ) 내 로 클로닝 하 였 다 . I 431 V 는 프라이머 28 ( 서열 88 ) 및 29 ( 서열 89 ) 를 사용 하 는 부위 지정 돌연변이 유발 에 의해 통합 되 고 , L 262 V 는 프라이머 30 ( 서열 90 ) 및 31 ( 서열 91 ) 을 사용 하 는 부위 지정 돌연변이 유발 에 의해 통합 되 었 다 . VEGFR - 결합 Fn 3 ( 서열 77 ) 에 대한 DNA 서열 을 포유 동물 세포 에서 의 발현 을 위해 최적 화 하 고 , 게네 아르트 아 게 ( 독일 ) 에서 제조 하 였 다 . DNA 를 RsRII / CelII 로 소화 시키 고 , pRS 5 a - CD 33 신호 서열 - 야생 형 Fn 3 ( RGD 로부터 RGA 로 의 ) - HSA - His ( 서열 99 ) 의 대응 하 는 부위 내 로 클로닝 하 였 다 . RSA 를 벡터 pRS 5 a - CD 33 신호 서열 - 야생 형 Fn 3 ( RGD 로부터 RGA 로 의 ) - RSA - His ( 서열 100 ) 으로부터 단리 하 고 , RsrII / XbaI 을 통해 pRS 5 a - CD 33 신호 서열 - VEGFR 결합 Fn 3 - HSA - His ( 서열 101 ) 내 로 클로닝 하 였 다 .