바이오 엔 자 ( Bioenza , Mountain View , CA ) 로부터 의 NS 3 / 4 A 프로테아제 효소 의 1 OX 스톡 및 아나스 펙 ( Anaspec , San Jose , CA ) 으로부터 의 1 . 13 X 5 - FAM / QXLTM 520 FRET 펩타이드 기질 을 50 mM HEPES , pH 7 . 8 , 100 mM NaCl , 5 mM DTT 및 20 % 글리세롤 속 에서 제조 하 였 다 . 각각 의 효소 5 ㎕ 를 코닝 ( # 3573 ) 384 - 웰 블랙 비 처리 미세 역가 플레이트 ( 제조원 ; Corning , NY ) 에서 25 ℃ 에서 30 분 동안 0 . 5 ㎕ 용적 의 50 % DMSO 및 50 % DMSO 에서 제조 한 연속 희석 된 화합물 과 함께 예비 - 항온 처리 하 였 다 . FRET 기질 45 ㎕ 를 첨가 하 여 프로테아제 반응 을 개시 하 고 , 바이 오텍 ( BioTek , Winooski , VT ) 으로부터 의 시너지 플레이트 단 독기 ( Synergy plate reader ) 에서 Quad 4 단색화 장치 ( monochromoter ) 를 통해 λ ex 487 / λ em 514 에서 120 분 동안 모니터링 하 였 다 . 각각 의 분석 의 종료 시 , 각각 의 웰 로부터 의 진행 곡선 을 선형 반응 동 력학 ( linear reaction kinetics ) 및 적합 도 통계 ( fit statistics ) ( R 2 , 제곱 의 절대치 합 ) 에 대해 실험 하 였 다 . 각 반응 으로부터 의 초기 속도 ( 0 분 내지 30 + 분 ) 를 상대 적 형광 단위 대 시간 ( 분 ) 의 플롯 의 기울기 로부터 결정 한 다음 억제제 농도 에 대해 플롯 팅 하 여 그라 패드 소프트웨어 ( GraphPad Software , San Diego , CA ) 로부터 의 그라 패드 프리즘 ( GraphPad Prism ) 에서 log [ 억제제 ] 대 반응 , 변수 기울기 모델 로부터 IC 50 을 추정 하 였 다 .