인간 태아 신장 암세포 유래 HEK 293 H 주 ( Invitrogen ) 를 10 % Fetal Bovine Serum ( Invitrogen ) 을 포함 하 는 DMEM 배지 ( Invitrogen ) 로 현 탁 하 고 , 6 × 105 개 / mL 의 세포 밀도 로 접착 세포 용 디쉬 ( 직경 10 ㎝, CORNING ) 의 각 디쉬 에 10 mL 씩 파종 하 여 CO 2 인큐베이터 ( 37 ℃, 5 % CO 2 ) 내 에서 하루 배양 한 후 에 , 배지 를 흡인 제거 하 고 , CHO - S - SFMII ( Invitrogen ) 배지 6 . 9 mL 를 첨가 하 였 다 . 조제 한 플라스미드 DNA 혼합액 ( 합계 13 . 8 ㎍) 에 CHO - S - SFMII 배지 를 첨가 하 여 700 μ L 로 하 고 , 1 ㎍/ mL Polyethylenimine ( Polysciences Inc . ) 20 . 7 μ L 를 첨가 하 고 혼합 하 여 실온 에서 10 분 간 정치 한 것 을 각 디쉬 의 세포 로 투입 하 여 , 4 ~ 5 시간 , CO 2 인큐베이터 ( 37 ℃ 에서 5 % CO 2 ) 내 에서 인 큐 베이트 하 였 다 . 그 후 , CHO - S - SFMII ( Invitrogen ) 배지 6 . 9 mL 를 첨가 하 여 , 3 ~ 4 일 간 CO 2 인큐베이터 내 에서 배양 하 였 다 . 배양 상청 을 회수 한 후 , 원심 분리 ( 약 2000 g , 5 분 간 , 실온 ) 하 여 세포 를 제거 하 고 , 추가 적 으로 0 . 22 ㎛ 필터 MILLEX ( 등록 상표 ) - GV ( Millipore ) 를 통과 시켰 다 . 각 샘플 은 사용 할 때 까지 4 ℃ 에서 보존 하 였 다 . 이 상청 으로부터 Protein G Sepharose ( Amersham Biosciences ) 를 사용 하 여 항체 를 정제 하 였 다 . 정제 한 항체 는 , Amicon Ultra 15 ( Millipore ) 를 사용 해서 농축 하 고 , 추가 적 으로 PD - 10 Desalting columns ( Amersham Biosciences ) 를 사용 해서 0 . 05 % 의 NaN 3 를 포함 하 는 PBS ( -) 로 용매 를 치환 하 였 다 . 280 ㎚ 의 흡광도 를 ND - 1000 Spectrophotometer ( NanoDrop ) 로 측정 하 고 , Pace 등 의 방법 ( Protein Science ( 1995 ) 4 : 2411 - 2423 ) 으로 농도 를 산출 하 였 다 .