하위 메 발론 산 경로 를 클로닝 하 기 위한 전략 은 하 기 와 같 다 . 메 발론 산 생합성 통로 의 네 가지 유전자 ; 메 발로 네이트 키나아제 ( MVK ) , 포스 포 메 발 로 네이트 키나아제 ( PMK ) , 디 포스 포 메 발 로 네이트 데 카르복실라아제 ( MVD ) 및 이소 펜테 닐 디 포스 페이트 이성화 효소 유전자 를 S . 세레 비지 에 염색체 DNA 로부터 PCR 로 증폭 하 고 pCR BluntII TOPO 플라스미드 ( Invitrogen ) 내 에 개별 적 으로 클로닝 하 였 다 . 일부 경우 에서 , idi 유전자 를 대장균 염색체 DNA 로부터 증폭 하 였 다 . 대장균 공통 RBS ( AGGAGGT ( SEQ ID NO : 80 ) 또는 AAGGAGG ( SEQ ID NO : 81 ) ) 가 5 ' 말단 에 삽입 되 고 , 시작 코돈 의 8 bp 상류 및 PstI 위치 가 3 ' 말단 에 첨가 되 도록 프라이머 를 설계 하 였 다 . 이후 , 전체 경로 가 어 셈 블링 될 때 까지 유전자 를 하나 씩 pTrcHis 2 B 벡터 에 클로닝 하 였 다 .