이 의 IL 31 수용체 에 의 결합 후 , IL 31 은 야누스 키나제 ( Jak ) 1 및 Jak 2 신호 전달 분자 를 활성 화 시킨다 . 차례 로 , 활성 화 된 Jak 는 다운 스트림 신호 전달 STAT - 3 및 STAT - 5 의 인산화 를 자극 한다 . 항 - 포스 포 - Stat 3 면역 - 블롯 분석 을 사용 하 여 무 세포 배양 배지 의 단백질 A - 정제 된 분획 으로부터 항 - IL 31 활성 을 검출 하 였 다 ( 참조 : Gonzales et . al . Vet Dermatol 2013 ; 24 : 48 - e 12 ) . 요약 하 면 , 개 단핵구 DH 82 세포 ( American Type Cu 1 ture Collection , Manassas , VA , USA ) 를 37 ℃ 에서 24 시간 동안 15 % 열 - 불 활성 화 된 태아 소 혈청 , 2 mmol / L GlutaMax , 1 mmol / L 나트륨 피 루 베이트 및 10 ng / mL 개 인터페론 - c ( R & D Systems , Minneapolis , MN , USA ) 를 함유 하 는 MEM 성장 배지 ( Life Technologies ) 에서 웰 당 1 x 105 세포 의 밀도 로 96 - 웰 평저 세포 배양 플레이트 에 플 레이팅 했 다 . 이 실험 에서 , 개 IL 31 - Fc 의 농도 는 5 ng / mL ( 8 nM ) 였 다 . 항 - 포스 포 STAT - 3 및 항 STAT - 3 항체 는 R & D Systems 로부터 구입 했 다 . 항 - 베타 액틴 항체 는 시그마 - 알드리치 ( Sigma - Aldrich ) 로부터 유래 되 었 다 . 도 4 에 도시 된 바 와 같이 , 세포 에 노출 된 개 화 M 14 의 농도 가 증가 함 ( 레인 1 : 항 - IL 31 항체 없 음 ; 레인 2 : 3 . 3 nM ; 레인 3 : 6 . 6 nM ; 레인 4 : 9 . 9 nM ; 및 레인 5 : 13 . 2 nM ) 에 따라 개 IL 31 신호 전달 이 감소 되 었 다 ( STAT - 3 인산화 의 감소 로 증명 됨 ) .