제조자 의 지침 에 따라 HEK 293 - F 시스템 ( Invitrogen ) 을 사용 하 여 각각 의 플라스미드 ( 예 를 들 어 , 중쇄 및 개질 된 중쇄 뿐 아니 라 , 상응 하 는 경쇄 및 개질 된 경쇄 를 코딩 하 는 ) 의 일시 적 트랜스펙션 에 의해 이중 특이 적 항체 를 발생 시켰 다 . 간략 하 게 는 , 진탕 플라스크 또는 교반 발효기 에서 , 무 혈청 FreeStyle 293 발현 배지 ( Invitrogen ) 중 의 부유 성장 하 는 HEK 293 - F 세포 ( Invitrogen ) 를 4 개 의 발현 플라스미드 및 293 펙틴 ( fectin ) 또는 펙틴 ( fectin ) ( Invitrogen ) 의 혼합물 로 트랜스펙션 하 였 다 . 2 L 진탕 플라스크 ( Corning ) 의 경우 , HEK 293 - F 세포 를 600 mL 중 1 . 0 E * 6 세포 / mL 의 밀도 로 파종 하 고 , 120 rpm , 8 % CO 2 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 하루 후 , 세포 를 약 1 . 5 E * 6 세포 / mL 의 세포 밀도 에서 A ) 등 몰 비 로 , 중쇄 또는 개질 된 중쇄 를 각각 및 상응 하 는 경쇄 를 코딩 하 는 600 ㎍ 총 플라스미드 DNA ( 1 ㎍/ mL ) 를 함유 하 는 20 mL Opti - MEM ( Invitrogen ) 및 B ) 20 ml Opti - MEM + 1 . 2 mL 293 펙틴 또는 펙틴 ( 2 ㎕/ mL ) 의 약 42 mL 믹스 로 트랜스펙션 시켰 다 . 글루코오스 소비 에 따라 , 글루코오스 용액 을 발효 과정 동안 첨가 하 였 다 . 5 ~ 10 일 후 에 , 분비 된 항체 를 함유 하 는 상청 액 을 수확 하 고 , 항체 를 상청 액 으로부터 직접 정제 하 거나 상청 액 을 동결 및 보관 하 였 다 .