형광 펩타이드 는 표준 고상 펩타이드 합성 ( solid phase peptide synthesis , SPPS ) 방법 으로 합성 한다 . 구체 적 으로 고상 추출 ( solid phase extraction , SPE ) 튜브 를 사용 하 여 표준 Fmoc 프로토콜 로 Rink Amide MBHA 레진 LL 상 에서 합성 된다 . Rink Amide MBHA 레진 LL 의 N - 말단 Fmoc 보호기 를 제거 하 기 위하 여 레진 을 20 % 피 페리 딘 ( piperidine ) / N - 메틸 피 롤리 돈 ( N - methyl - 2 - pyrrolidone , NMP ) 에 넣 어 15 분 동안 반응 시킨다 . Fmoc - 아미노산 5 당량 을 NMP 에 용해 시킨 후 , 1 - hydroxybensotriazole ( HOBt ) 4 . 5 당량 , O -( 1 H - 6 - chlorobenzotriazole - 1 - yl ) - 1 , 1 , 3 , 3 - tetramethyluronium hexafluorophosphate ( HCTU ) 4 . 5 당량 및 N , N - diisopropylethylamine ( DIPEA ) 10 당량 을 혼합 하 여 10 분 동안 Fmoc - 아미노산 카르복시기 를 활성 화 시킨다 . 활성 화 된 Fmoc - 아미노산 을 보호기 가 제거 된 레진 이 들 어 있 는 용기 에 넣 고 1 시간 동안 반응 시켜 레진 의 N - 말단 에 아미노산 을 커플링 시킨다 . 반응 종결 후 남 아 있 는 피 페리 딘 및 커플링 시약 을 NMP 및 N , N - dimethylformamide ( DMF ) 로 반복 적 으로 세척 하 여 제거 한다 . 위 와 같 은 방식 으로 레진 상 에 아미노산 을 순차 적 으로 결합 시킨다 . 마지막 아미노산 의 커플링 이 완료 된 후 , 형광 발색단 5 당량 을 위 와 동일 한 조건 및 방법 으로 커플링 시킨다 . 이때 , 형광 발색단 은 레진 에 고정 된 펩타이드 의 N - 말단 에 결합 한다 . 최종 적 으로 펩타이드 의 잔기 를 탈 보호 하 고 레진 으로부터 형광 펩타이드 를 분리 하 기 위하 여 , 레진 에 고정 된 펩타이드 를 cleavage 칵테일 [ 95 % trifluoroacetic acid ( TFA ) / 2 . 5 % triisopropylsilane ( TIS ) / 2 . 5 % water ] 로 3 시간 동안 처리 한다 . 이후 아르곤 을 blowing 하 여 농축 시키 고 , tert - butyl methyl ether ( TBME ) 를 사용 하 여 고체화 ( trituration ) 시킨다 .