생물학 적 샘플 , 예 를 들 어 , 기관지 폐포 세척 유체 ( BAL ) 에서 사이 노 몰 구스 원숭이 ( 사이 노 ) 활성 트립 타제 ( 사량 체 ) 의 농도 는 ELISA 검정 으로 결정 되 었 다 . 사이 노 트립 타제 D 1 을 인식 하 는 단 클론 성 항체 는 포착 항체 로서 사용 되 었 다 . 재조합 사이 노 활성 트립 타제 D 1 은 검정 표준 의 제조 용 원료 물질 로서 사용 되 었 다 . 검정 표준 , 대 조군 , 및 희석 된 샘플 은 하 기 로 인 큐 베이 션 되 었 고 : 500 μ g / ml 대두 트립신 억제제 ( SBTI ; Sigma Cat . No . 10109886001 ) 10 분 동안 그 다음 활성 - 기반 프로브 ( ABP ; G 0353816 ) 으로 1 시간 동안 라벨 링 되 었 다 . 참고 Pan 등 Bioorg . Med . Chem . Lett . 16 : 2882 - 85 , 2006 . SBTI 는 단량체 에서 활성 부위 에 결합 하 는 데 사용 되 었 고 , 이 는 특이 적 시험관 내 조건 에서 형성 할 수 있 는 종인 , 활성 단량체 에 의해 야기 된 임의 의 배경 을 감소 시킨다 . SBTI 는 트립 타제 가 사량 체 형태 인 경우 활성 부위 에 결합 할 수 없 다 . 소분 자 트립 타제 억제제 ( G 02849855 ) 는 20 분 동안 첨가 되 어 ABP 라벨 링 을 중단 시켰 다 . 사량 체 - 해리 항체 ( 예 를 들 어 , hu 31 A . v 11 IgG 4 ) 는 10 분 동안 첨가 되 어 양쪽 ABP - 라벨 링 된 및 라벨 링 되 지 않 은 사량 체 를 해리 시켰 다 . 이 혼합물 은 1 시간 동안 포착 항체 를 가진 ELISA 플레이트 에 첨가 되 었 고 , 1 x PBST 로 세정 되 었 고 , SA - HRP 시약 ( 스 트 렙 타비 딘 - 접합 된 홀스 래 디쉬 페록시다아제 , General Electric ( GE ) 카탈로그 번호 RPN 4401 V ) 로 2 시간 동안 인 큐 베이 션 되 었 다 . 비색계 신호 는 HRP 기질 , 테트라메틸 벤지딘 ( TMB ) 를 적용 함 으로써 생성 되 었 고 , 반응 은 인산 첨가 로 중단 되 었 다 . 플레이트 는 기준 흡광도 로 650 nm 및 검출 흡광도 로 450 nm 를 사용 하 는 SpectraMax ® M 5 ( Molecular Devices ; Sunnyvale , CA ) 플레이트 판독기 에서 판독 되 었 다 . 검정 은 20 - 0 . 04 ng / mL ( 인 - 웰 ) 의 보고 가능 한 범위 를 가졌 고 , 검정 최소 정량화 가능 농도 ( MQC ) 는 사이 노 BAL 의 1 : 2 희석 액 에서 0 . 08 ng / mL 인 것 으로 결정 되 었 다 . 각각 의 개별 사이 노 샘플 은 2 중 으로 단일 희석 액 에서 스크리닝 되 었 다 . MQC 아래 로 떨어지 는 최소 희석 액 에서 분석 된 샘플 은 보 고 가능 미만 ( LTR ) 로서 보 고 되 었 다 .