2 ml 의 B - PER 시약 ( Pierce , USA ) 및 볼 텍 싱 또는 피펫 팅 ( pipetting ) 을 통한 기계 적 균질 화 ( mechanical homogenization ) 를 이용 하 여 가용성 단백질 을 추출 하 였 다 . 그 후 , 이 분획 을 27 , 200 x g 에서 1 시간 동안 원심 분리 를 수행 하 여 분리 하 고 90 % 를 초과 하 는 회수 율 을 얻 었 다 . 5 ml 의 트리클로로아세트산 / 아세톤 ( 5 ml 의 6 N TCA 또는 3 ml TCA , 300 ㎕ 의 TBP 를 첨가 하 고 , 30 mL 의 최종 부피 까지 아세톤 을 첨가 함 ) 을 첨가 하 고 잘 혼합 하 여 - 20 ℃ 에서 보관 하 여 , TCA 침전 을 이용 하 여 상기 가용 성 단백질 을 농축 하 였 다 . 그 후 , 상기 혼합물 을 4 , 600 x g 에서 1 시간 동안 원심 분리 하 여 침전 시키 고 평형 완충액 ( 29 , 700 ㎕ 아세톤 에 300 ㎕ 의 TBP 를 첨가 함 ) 으로 세척 하 였 다 . 펠릿 을 1 % SDS 에 재현 탁 시키 고 , 다시 가열 , 볼 텍 싱 및 초음파 처리 에 의해 촉진 하 였 다 .