서열 번호 6138 변이체 를 발현 하 는 맑 아 진 이 . 콜라 이 배양 용 해물 의 96 웰 플레이트 에서 검정 을 수행 하 였 다 . 펠 렛 을 실시 예 60 에 기재 된 바 와 같이 용해 시키 고 , 용해 물 을 맑 게 만든 후 , 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 6 내 에서 20 - 40 배 희석 하 였 다 . 용해 물 을 열 에 의해 처리 하 기 위해 , 68 . 6 ℃ 에서 15 분 동안 열 순환기 에서 예비 인 큐 베이 팅 하 였 다 . 검정 은 10 mM 스테비오 시드 ( > 95 % 순도 ) 또는 레바 우디 오시드 D 기질 , 0 . 2 mM ADP ( Sigma , > 93 % 순도 ) 보조 기질 , 0 . 1 g / L SUS SFP 서열 번호 1840 , 및 24 mM 수크로스 ( 자당 ) 와 함께 100 μ L 반응물 내 의 10 μ L 예비 인 큐 베이 팅 된 용해 물 을 사용 하 여 수행 하 였 다 . 하 기 반응 조건 을 사용 하 였 다 : 4 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 6 , 60 ℃. 반응물 은 물 에 20 배 희석 하 여 가용화 하 고 , 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 아세 토니 트릴로 5 배 희석 함 으로써 켄 칭 하 고 , 분석 을 위해 물 로 10 배 희석 하 였 다 .