다 형성 부위 지노 타이핑 을 위해 , TaqMan 에 대한 증폭 프라이머 및 프로브 를 디자인 했 다 . 프라이머 익스프레스 ( Applied Biosystems ) 를 사용 하 여 PCR 프라이머 및 MGB TaqMan 프로브 를 디자인 하 였 다 ( 표 3 참조 , 서열 번호 : 63 내지 서열 번호 : 93 ) . 하나 의 대립 유전자 프로브 를 FAM ( 5 - carboxy fluorscein ) 염색 으로 표지 하 고 다른 대립 유전자 는 형광 VIC ( 등록 상표명 ) 염색 으로 표지 하 였 다 . 우라실 - N - 글 리코 실라 제 ( uracil - N - glycosylase ) 가 없 는 TaqMan Universal Master mix ( Applied Biosystems ) 를 사용 하 고 900 nM 의 PCR 프라이머 및 200 nM 의 TaqMan MGB - 프로브 를 사용 하 여 PCR 반응 을 수행 했 다 . 반응 은 20 ng 의 유전자 DNA 를 사용 하 고 총 5 L 양 으로 384 - 웰 에서 수행 했 다 . 다음 , 플레이트 를 써 멀 사이클 러 ( PE 9700 , Applied Biosystems ) 로 옮기 고 50 ℃ 에서 2 분 및 95 ℃ 에서 10 분 가열 한 후 , 95 ℃ 에서 15 초 및 60 ℃ 에서 1 분 씩 가열 하 는 것 을 40 회 반복 수행 했 다 . TaqMan 어세 이 플레이트 를 Prism 7900 HT 장비 ( Applied Biosystems ) 로 옮겨 각 웰 의 형광 강도 를 측정 했 다 . 각 플레이트 로부터 수득 한 형광 데이터 파일 을 자동 화 된 소프트웨어 ( SDS 2 . 2 ) 를 사용 하 여 분석 하 였 다 ( 도 2 a 내지 도 2 d ) .