5 ㎛ 의 기공 크기 를 갖 는 24 웰 트랜 스웰 ( TransWell ) 플레이트 ( Corning ) 를 사용 하 여 주화 성 어 세이 를 수행 하 였 다 . HEK 293 에서 발현 된 인간 MCP - 1 변이체 를 포함 하 는 배지 를 화학 유인물 질 로 사용 하 였 다 . 추가 로 , 600 ㎕ 의 N - 말단 인간 MCP - 1 변이체 의 배양 배지 를 희석 되 지 않 거나 RPMI 1640 에 1 : 3 , 1 : 10 및 1 : 30 으로 희석 된 상태 로 트랜 스웰 플레이트 의 하위 챔버 에 적용 하 였 다 . 또한 , 벡터 대 조군 에 의해 형질 감염 된 HEK 293 세포 의 희석 되 지 않 은 배지 를 음성 대 조군 으로서 하위 챔버 에 적용 하 였 다 . THP - 1 세포 를 수확 하 여 1 * 106 세포 / 100 ㎕ 의 농도 로 RPMI 1640 에 재현 탁 시키 고 상위 챔버 에 100 ㎕ 분취 액 으로 적용 하 였 다 . 37 ℃ 에서 2 시간 동안 세포 가 화학 유인물 질 을 향하 여 이동 하 도록 하 였 다 . 그 후 , 상위 챔버 로부터 의 세포 를 버리 고 하위 챔버 를 50 ㎕ 의 70 mM EDTA PBS 용액 과 혼합 하 고 37 ℃ 에서 15 분 간 배양 하 여 막 에 부착 된 세포 를 방출 시켰 다 . 그 다음 , 하위 챔버 로 이동한 세포 를 세포 계수 시스템 ( Schaerfe System ) 으로 계수 하 였 다 . 음성 대 조군 으로 이동한 세포 로부터 자극 으로 이동한 세포 를 나누 어 주화성 지수 를 계산 하 였 다 .