이 를 위하 여 , 먼저 10 % FBS 가 함유 된 DMEM 배지 ( Dullbecco ' s modified Eagle ' s medium , 미국 Sigma 사 ) 를 사용 하 여 MCF - 7 세포 를 5 % CO 2 , 37 ℃ 조건 하 에서 배양 하 였 다 . 호르몬 유도 하 기 전 에 PBS 완충액 으로 세포 를 세 척하 였으며 , 시료 처리 전 에 모든 에스트로겐 원 ( source ) 을 제거 하 기 위해 10 % CD - FBS ( charcoal - dextran stripped FBS ) 가 함유 된 페놀 레드 가 없 는 DMEM 에서 2 일 동안 세포 를 배양 하 였 다 . 배양 된 세포 는 0 . 25 % 트립신 ( trypsin ) - EDTA 를 처리 하 여 1 , 000 rpm 에서 5 분 간 원심 분리 하 였 고 , 세 포수 를 측정 하 여 5 × 103 세포 / 웰 이 되 도록 96 웰 배 양판 에 0 . 1 ㎖ 씩 분주 하 였 다 . 24 시간 후 시료 를 각각 6 ㎍/㎖ 및 25 ㎍/㎖ 씩 처리 하 고 6 일 ( 144 시간 ) 동안 배양 한 후 MTT 분석 시험 으로 세포 의 증식 정도 를 측정 하 였 다 . 이때 , 시료 는 상기 실시 예 및 비 교예 에서 제조 한 갈근 및 갈화 수추 출물 의 발효 물 과 갈근 및 갈화 의 수추 출물 의 에틸 아세테이트 분획 물 을 최종 농도 가 0 . 1 % 이하 가 되 도록 DMSO 에 녹여 사용 하 였 다 .