완충 용액 은 세 척 용액 ( 25 mM HEPES pH 7 . 4 , 5 mM MgCl 2 , 1 mM CaCl 2 ) 과 실험 용액 ( 세척 용액 에 BSA 를 0 . 5 % 가 되 도록 첨가 ) 의 두 종류 를 준비 하 고 , MCH R 1 ( Melanin Concentration Hormone receptor - 1 ; Euroscreen , Gosselies , Belgium ) 과 1 μ M 유로 피움 으로 표지 된 멜라닌 농축 호르몬 ( Europium - labeled MCH ( Eu - MCH ) , PerkinElmer , Turku , Finland ) 및 1 mM 멜라닌 농축 호르몬 ( MCH , # 070 - 47 , Phoenix , Belmont CA , USA ) 을 4 ℃ 에서 준비 하 였 다 . 1 μ M 의 Eu - MCH 와 1 mM MCH 를 각각 8 nM ( 최종 반응 농도 : 2 nM ) 과 2 μ M ( 최종 반응 농도 : 0 . 5 μ M ) 이 되 도록 희석 하 였 다 . 모든 희석 과 준비 과정 에서 사용 되 는 완충 용액 은 실험 용액 이 며 , 세 척 용액 은 마지막 에 플레이트 를 씻 어 줄 때 만 사용 하 였 다 .