입양 이송용 종양 반응 T - 세포 의 생성 . B 6 마우스 는 5 x 105 MC 38 암 세포 로 s . c . 접종 되 었 다 . 종양 면적 이 5 x 5 mm 2 를 도달 한 경우 vvDD - IL - 2 ( 1 e 8 pfu / 종양 ) 은 종양 내 주사 되 었 다 . 10 일 후 종양 은 수집 되 었 고 소화 완충제 ( Miltenyl Biotec , San Diego , CA ) 내 37 ℃ 에서 인 큐 베이 션 된 다음 100 μ M 조직 스 트레이너 에 걸쳐 으깨 졌 다 . 적혈구 의 용해 는 ACK 용해 완충제 ( Thermo Fisher Scientific , Waltham , MA ) 를 사용 하 여 수행 되 었 다 . 백혈구 분리 퍼 콜 ( GE , Healthcare Life Science , Marlborough , MA ) 를 위하 여 구배 원심분리기 는 Liu 등 ( Liu , Y . , Chen , K . , Wang , C . , Gong , W . , Yoshimura , T . , Wang , J . M . 및 Liu , M . ( 2013 ) . Isolation of Mouse Tumor - Infiltrating Leukocytes by Percoll Gradient Centrifugation . Bio - protocol 3 ( 17 ) : e 892 . DOI : 10 . 21769 / BioProtoc . 892 ) 에 의해 프로토콜 로부터 사용 적응 되 었 다 . 백혈구 는 자기 분리 ( CD 90 . 2 비드 , Miltenyl Biotec , San Diego , CA ) 이후 40 % 와 80 % 불 연속 퍼 콜 구배 사이 계면 에서 수집 되 었 다 . T 세포 는 4 일 동안 30 IU / ml IL - 2 ( Miltenyl Biotec , San Diego , CA ) 및 5 ng / ml IL - 7 ( Biolegend , San Diego , CA ) 를 가진 RPMI 완전 배지 에서 1 x 1 O 6 / 웰 의 농도 로 24 - 웰 플레이트 에서 배양 되 었 다 . 대 조군 T 세포 로서 , 비 - 종양 보유 미처리 된 마우스 로부터 비장 은 수확 되 었 고 단일 세포 현탁액 으로 향하 고 이어서 자기 분리 되 었 다 ( CD 90 . 2 비드 ) . 비 접촉 T 세포 는 바이러스 유도 된 T 세포 와 동일 한 조건 하 에 배양 되 었 다 . 입양 T 세포 이송 에 앞서 , T 세포 는 공 - 배양 검정 에서 종양 특이 성 에 대하 여 분석 되 었 다 . T 세포 ( 2 x 104 / 웰 ) 은 어느 한쪽 으로 자극 되 지 않 은 채 남 아 있 거나 ( 배지 ) 또는 24 시간 동안 2 중 으로 비 - 종양 - 보유 B 6 마우스 로부터 γ - 조사 된 B 16 종양 세포 ( 2 x 104 / 웰 ) 또는 비 접촉 비장 세포 ( 2 x 104 / 웰 ) 로서 γ - 조사 된 MC 38 종양 세포 ( 2 x 104 / 웰 , 96 - 웰 플레이트 ) 또는 무관 한 표적 세포 로 도전 되 었 다 . 플레이트 셋 업 은 상기 기재 된 바 와 같이 IFN - γ ELISPOT 또는 유세포 측정 분석 을 위하 여 사용 되 었 다 .