다음 과 같 은 HTP 효소 결합 검정 을 사용 하 여 라이브러리 를 스크리닝 하 였 다 . 펠 렛 화 된 이 . 콜라 이 배 양물 을 1 mM 황산마그네슘 및 0 . 5 mg / mL 리소자임 및 폴리 믹 신 B 술 페이트 ( PMBS ) 와 함께 400 μ L 의 트리스 - HCl , pH 7 . 5 로 용해 시키 고 , 원심 분리 에 의해 맑 게 하 였 다 . 용해 물 을 인산칼륨 - HCl , pH 6 . 0 으로 20 배 희석 하 고 , 64 ℃( 조합 라이브러리 ) 또는 65 ℃( 포화 돌연변이 유발 라이브러리 ) 에서 15 분 동안 미리 인 큐 베 이 팅 하 였 다 . 이어서 , 10 μ L 의 희석 된 SuS 용해 물 및 0 . 5 - 1 g / L GT ( 각각 서열 번호 3696 또는 3502 ) 를 15 mM 레바 우디 오시드 A ( > 97 % 순도 ) , 0 . 2 mM ADP ( Sigma , > 93 %), 45 mM 수크로스 ( 자당 ) 및 9 mM 프럭토스 와 함께 100 μ L 반응 부피 에 사용 하 였 다 . 하 기 반응 조건 을 사용 하 였 다 : 3 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 6 , 60 ℃. 상기 설명 한 반응물 은 물 에 40 배 희석 하 여 가용화 하 고 , 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 아세 토니 트릴로 10 배 희석 함 으로써 켄 칭 하 고 , 원심 분리 에 의해 침전 시켰 다 . 상청 액 을 물 에 3 . 3 배 희석 한 후 , 스 테 비올 글리코시드 생성물 을 표 31 . 1 에 기재 된 기기 및 파라미터 를 사용 하 여 RapidFire SPE - MS / MS 에 의해 검출 하 였 다 . 분석 후 에 , 레바 우디 오시드 A 에 대해 GT 와 연결 된 개선 된 활성 을 보인 조작 된 SuS 변이체 폴리펩티드 가 확인 되 었 고 , 표 36 . 1 에 열거 되 어 있 다 . 표 36 . 2 에 나타낸 아미노산 돌연변이 를 갖 는 변이체 에 대해 실시 예 31 에서 설명 된 바 와 같 은 단백질 특성 화 를 위해 진탕 플라스크 규모 배 양물 을 성장 시켰 다 .