콜로니 는 선별 배지 ( 씨 . 글루 타미 컴 의 경우 BHI , 에스 . 세레비 지아 의 경우 SD - ura ) 를 포함 하 는 95 - 웰 플레이트 에서 강화 시켰 고 포화 까지 2 일 동안 배양 하 였으며 이후 16 . 6 % 글리세롤 을 포함 시켜 - 80 ℃ 에서 저장 을 위해 냉동 시켰 다 . 이후 에 냉동 된 스톡 은 냉동 으로부터 성장 및 회수 를 돕 도록 저 수준 의 아미노산 이 포함 된 최소 배지 중 에서 씨드 단계 를 접종 하 는 데 사용 되 었 다 . 씨드 플레이트 는 1 일 내지 2 일 동안 30 ℃ 에서 성장 시켰 다 . 그리고 씨드 플레이트 는 최소 배지 를 포함 하 는 주요 배양 플레이트 에 접종 하 여 48 시간 내지 88 시간 동안 성장 시키 는 데 사용 되 었 다 . 플레이트 는 바람직 한 시점 에 제거 되 었 고 세포 밀도 ( OD 600 ) , 생존 능 및 포도당 에 대해 시험 되 었 으며 , 상청 액 샘플 은 관심 생성물 에 대한 LC - MS 분석 을 위해 저장 되 었 다 .