인 - STAT 3 중화 분석 및 ELISA 포맷 에 의해 포지티브 결과 를 낳 는 하이브리도마 풀 을 최소한 2 번 제한 희석 에 의해 클론 하 였 다 . 이 들 분석 에서 샘플 을 표준 저밀 도 희석 ( 1 세포 / 웰 미만 으로 ) 을 사용 하 여 적정 하 여 어떤 클론 이 가장 높 은 OD 판독 값 을 유지 할 것 인지 를 보 았 다 . 중화 및 적정 분석 둘 다로 부터 의 결과 를 사용 하 여 각 초기 마스터 웰 로부터 의 두 개 의 특이 적 인 클론 을 선택 하 여 추가 로 분석 하 였 다 . 그것 들 에 대해 추가 회전 의 클로닝 을 수행 하 여 배양 균질 성 을 확인 하 고 , 직접 ELISA 를 사용 하 여 선별 하 였 다 . 한 번 더 적정 분석 한 후 에 , 두 개 의 최종 IL - 21 클론 을 선택 하 였 다 . 하이브리도마 클론 을 2 mM 의 L - 글루타민 , 100 ㎍/ mL 의 페니실린 , 및 100 ㎍/ mL 의 스트렙토마이신 술 페이트 , 및 10 % 의 태아 클론 I 혈청 ( Hyclone Laboratories ) 이 첨가 된 90 % 의 이스코브 변형 둘 베코 배지 의 성장 배지 에서 배양 하 였 다 . 클론 을 2 × 105 세포 / ml 로 배 양물 을 심 고 1 × 105 및 5 × 105 세포 / ml 사이 에서 , 37 ℃ 및 5 내지 6 % CO 2 에서 유지 시킴 으로써 증식 하 였 다 . 세포 를 후속 전달 시 혈청 유리 조건 에 적용 시켰 다 . 세포 를 90 % 혈청 , 10 % DMSO 에서 냉동 시켜서 액체 질소 냉동기 의 증기 상 에서 보관 하 였 다 .