세포 를 수집 하 고 원심 분리 하 여 배지 를 제거 하 였 다 . 펠 렛 화 세포 를 50 mM 의 Tris - HCl ( pH 7 . 4 ) , 120 mM 의 NaCl , 5 mM 의 KCl , 10 mM 의 EDTA 및 프로테아제 억제제 ( 0 . 1 ㎎/ mL 의 대두 트립신 억제제 , 및 1 mM 의 요오 도 아세트아미드 ) 로 이루어진 완충액 내 에서 균질 화 하 였 다 ( 브린크 만 폴리 트론 ( Brinkman Polytron ) , 얼음 상 에서 3 회 15 초 파열 ( burst ) ) . 균질 화물 을 4 ℃ 에서 10 분 동안 1000 xg 에서 원심 분리 하 여 세포 잔해 를 제거 하 였 다 . 펠 렛 을 균질 화 완충액 으로 1 회 세척 하 였 다 . 상청 액 을 합하 고 4 ℃ 에서 20 분 동안 40 , 000 xg 에서 원심 분리 하 였 다 . 막 함유 펠 렛 을 상기 와 같이 폴리 트론 으로 균질 화 하 였 다 . 현탁액 을 4 ℃ 에서 20 분 동안 40 , 000 xg 에서 원심 분리 하 고 , 펠 렛 을 완충액 ( 3 mM 의 MgCl 2 , 30 mM 의 KCl , 및 100 μ M 의 티오 르 판 을 함유 하 는 20 mM 의 HEPES , pH 7 . 4 ) 에 현 탁 시키 고 단백질 농도 를 측정 하 였 다 . 그 후 , 막 현탁액 을 0 . 02 ％ 의 BSA 를 함유 하 는 완충액 을 사용 하 여 3 ㎎/ mL 까지 희석 하 고 , 급속 냉동 하 였 다 . 사용 시 까지 샘플 을 - 80 ℃ 에서 저장 하 였 다 .