우선 , HT 22 세포 를 90 mm 배양 접시 에 5 x 105 cells / dish 분주 하 여 24 시간 안정 화 시켰 다 . 그 후 , Myristargenol A 을 1 , 3 , 5 , 7 , 10 μ M 의 농도 와 글 루타 메이트 10 mM 농도 를 HT 22 세포주 에 처리 하 여 24 시간 동안 반응 시켰 다 . 글루 타 메이트 와 약물 처리 후 에 는 cell 을 dish 에서 분리 한 뒤 cell 을 tube 에 모아 준 뒤 , PBS 로 한 번 씻 고 1 X Binding Buffer 에 넣 은 후 , 현 탁 시킨다 . 세포 현탁액 100 μ L 에 fluorochrome - conjugated Annexin V 5 μ L 를 첨가 하 고 15 분 간 배양 한 뒤 , 1 X Binding Buffer 에서 세포 를 세 척하 고 1 X Binding Buffer 200 μ L 에 현 탁 하 고 , Propidium Iodide Staining Solution ( PI ) 5 μ L 를 넣 어 준 뒤 , 어둠 속 에서 2 - 8 ° C 에서 20 분 간 배양 하 고 , 유동 세포 계측 법 으로 분석 하 였 다 .