방사성 리간드 결합 분석 을 100 ㎖ 의 세포막 , α 1 , α 2 , α 3 아 단위 에 대해 1 nM 및 α 5 아 단위 에 대해 0 . 5 nM 의 농도 의 [ 3 H ] 플 루 마제 닐 , 및 10 - 10 내지 3 x 10 - 6 M 범위 의 시험 화합물 을 함유 하 는 200 ㎖ 의 부피 ( 96 - 웰 플레이트 ) 에서 수행 하 였 다 . 비 특이 적 결합 은 10 - 5 M 다이아 제 팜 에 의해 정의 되 었 고 , 전형 적 으로 5 % 미만 의 총 결합 을 나타냈 다 . 분석 물 을 배양 하 여 4 ℃ 에서 1 시간 동안 평형 화 시키 고 , 패 커드 ( Packard ) 수확기 를 사용 하 여 여과 하 고 빙 랭 세척 완충액 ( 50 mM 트리스 ; pH 7 . 5 ) 으로 세척 하 여 GF / C 유니 - 필터 ( 패 커드 ) 상 에서 수확 하 였 다 . 건조 한 후 , 필터 - 보유 방사능 을 액체 섬광 계수 에 의해 검출 하 였 다 . Ki 값 은 엑셀 - 피트 ( Excel - Fit ) ( 마이크 로 소프트 ( Microsoft ) ) 를 이용 하 여 계산 하 였으며 , 2 개 의 측정 결과 의 평균 이 다 .