라이브러리 단편 들 의 제조 를 위한 PCR 프로토콜 은 하 기 절차 를 포함 하 였 다 : 94 ℃ 에서 5 분 동안 초기 변성 ; 94 ℃ 에서 1 분 , 58 ℃ 에서 1 분 및 72 ℃ 에서 1 분 으로 구성 된 25 주기 ; 및 72 ℃ 에서 10 분 동안 말단 연장 . 조립 PCR 을 위해 , 등 몰 비 의 상기 3 개 의 단편 들 을 주형 으로서 사용 하 였 다 . 조립 PCR 프로토콜 은 하 기 절차 를 포함 하 였 다 : 94 ℃ 에서 3 분 동안 초기 변성 ; 및 94 ℃ 에서 30 초 , 58 ℃ 에서 1 분 및 72 ℃ 에서 2 분 으로 구성 된 5 주기 . 이 단계 에서 , 단편 1 내지 3 외부 의 서열 에 상보 적 인 프라이 머들 을 첨가 하 였 고 , 추가 20 주기 를 수행 한 후 , 72 ℃ 에서 10 분 동안 말단 연장 을 수행 하 였 다 . 충분 한 양 의 전장 무작위 화 된 Fab 구축물 의 조립 후 , 유사 하 게 처리 된 수용체 파지 미드 벡터 와 함께 DP 47 - 3 라이브러리 용 Fab 구축물 을 NcoI / NotI 으로 분해 하 였 고 DP 88 - 3 라이브러리 용 Fab 구축물 을 NcoI / NheI 으로 분해 하 였 다 . DP 47 - 3 라이브러리 를 위해 , 22 . 8 ㎍ 의 Fab 라이브러리 를 16 . 2 ㎍ 의 파지 미드 벡터 와 라 이게 이 션 시켰 다 . DP 88 - 3 라이브러리 를 위해 , 30 . 6 ㎍ 의 Fab 라이브러리 를 30 . 6 ㎍ 의 파지 미드 벡터 와 라 이게 이 션 시켰 다 .