실온 에서 면역 조직 화학 을 수행 하 였 는데 , 4 % 파라포름알데히드 내 에 고정 된 눈 으로부터 의 10 μ m 두께 의 동결 절편 ( cryostat section ) 에 대해 수행 하 였 다 . 0 . 3 % Triton X - 100 을 지닌 pH 7 . 4 의 0 . 1 M 포스 페이트 완충 식염수 ( PBS ) 중 의 5 % 정상 당나귀 혈청 중 에서 망막 절편 을 1 시간 동안 차단 시키 고 , 0 . 3 % Triton X - 100 을 지닌 0 . 1 M PBS 중 의 1 % 정상 당나귀 혈청 을 사용 하 여 희석 시킨 1 차 항체 와 인 큐 베이 션 시켰 다 . 각각 의 1 차 항체 의 희석법 은 하 기 설명 하 는 바 와 같 았 다 . 1 차 항체 에 노출 시킨 후 , 세척 하 고 , 필요 한 경우 형광 컨 쥬게 이 션 된 적절 한 2 차 항체 ( Santa Cruz , Biotechnology , Inc . ; 당나귀 항 마우스 sc - 2099 는 0 . 3 % Triton 과 2 % 정상 혈청 을 지닌 PBS 중 에서 구성 됨 ( 1 : 100 희석률 , 1 차 항체 와 동일 한 희석 액 ) ) 와 절편 을 2 시간 동안 노출 시켰 다 ( FITC Santa Cruz , Biotechnology , Inc . , 당나귀 항 마우스 sc - 2099 ) . 네거티브 대조 표준 은 이소 타입 매칭 되 는 관련 없 는 항체 또는 1 차 항체 가 생략 된 것 으로 구성 되 었 다 . 후속 하 여 , 0 . 5 ml 의 4 ', 6 - 디아 미 디노 - 2 - 페닐 인돌 ( 5 ml 의 0 . 1 M PBS 에 대한 1 ㎕ 의 DAPI 스톡 ( stock ) 용액 ; Sigma - Aldrich ) 을 사용 하 여 핵 을 1 분 간 염색 시켰 다 . 그 후 , 0 . 1 M PBS 를 사용 하 여 슬라이드 를 수 회 세척 한 후 , Tris 완충 식염수 ( pH 7 . 4 ) 로 4 회 세척 하 고 , 최종 적 으로 유리 커버 슬립 ( coverslip ) 을 VECTASHIELD ( Vector Laboratories ) 에 마운 팅 하 였 다 .