TLR 7 또는 TLR 8 유전자 및 NF - kB / AP 1 - 유도성 SEAP ( 분비 배아 알칼리 성 포스 파 타제 ; 인비 보 젠 , 샌디에고 , CA ) 리포터 유전자 를 공동 - 발현 하 는 대수 적 으로 성장 하 는 인간 HEK - 블루 세포 를 384 - 웰 플레이트 의 개별 웰 에 첨가 하 고 ( 웰 당 20 μ L 당 15 , 000 개 의 세포 ) 37 ℃, 5 % CO 2 에서 24 시간 동안 유지 하 였 다 . 시험 화합물 또는 DMSO 를 음향 액체 취급 기술 을 사용 하 여 다음 날 개별 웰 에 분배 하 고 ( 웰 당 100 nL ) , 세포 를 후속 적 으로 37 ℃, 5 % CO 2 에서 18 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 새로이 제조 된 퀀티 - 블루 ( Quanti - Blue ) 시약 ( 제조 업체 지침서 에 따라 제조 함 ; 인비 보 젠 , 샌디에고 , CA ) 를 HEK - 블루 TLR Nf - kB - SEAP 세포 반응 에 첨가 하 고 30 분 후 , 엔 비전 플레이트 판독기 기기 를 사용 하 여 세포 SEAP 생산 을 측정 하 였 다 . 모든 EC 50 값 ( 반수 최대 유효 농도 ) 를 독점 의 데이터 분석 소프트웨어 를 사용 하 여 결정 하 였 다 . 정규 화 EC 50 값 = 50 μ M 의 참조 표준물 로 처리 된 세포 로부터 의 참조 표준 RLU ( 상대 광 단위 ) 값 을 사용 하 여 100 % Ymax 을 설정 함 으로써 결정 된 절대값 .