본 실시 예 에서 , ADP - 글루코스 를 사용 한 스 테 비올 글리코시드 의 개선 된 글 루 코 실화 에 대한 서열 번호 8 로부터 유래 된 GT 폴리펩티드 의 진화 및 스크리닝 을 위한 실험 을 설명 한다 . 서열 번호 7 에 의해 코딩 된 GT ( 즉 , 서열 번호 8 ) 의 유도 진화 를 , 라운드 1 에서 의 개선 된 활성 과 관련 된 돌연변이 가 재조합 된 변이체 유전자 의 라이브러리 를 구축 함 으로써 수행 하 였 다 . 이어서 , 이 들 라이브러리 를 도말 하 고 , 성장 시키 고 , 실시 예 2 에서 설명 된 고 처리 량 ( HTP ) 검정 을 사용 하 여 스크리닝 하 여 , " ADP - 글루코스 및 스 테 비올 글리코시드 에 대해 글 루 코 실트 랜스 퍼라 제 활성 을 갖 는 20 개 의 조작 된 GT 변이체 폴리펩티드 의 제 2 라운드 ( "" 라운드 2 "") 를 제공 하 였 다 . 조작 된 폴리펩티드 는 표 3 . 1 에 열거 되 어 있 다 . 모체 및 변이체 구축물 은 친화도 정제 를 위해 N - 말단 히스티딘 태그 를 함유 하 지만 ", 돌연변이 를 명확 성 을 위해 태그 가 부착 되 지 않 은 참조 서열 에 대해 넘버링 하 였 다 . 진탕 플라스크 규모 배 양물 을 실시 예 1 에서 설명 된 바 와 같 은 단백질 정제 를 위해 성장 시켰 다 . 아래 에 나타낸 바 와 같이 , 서열 번호 8 에 대해 표 3 . 1 에 제시 된 아미노산 돌연변이 를 갖 는 변이체 를 분석 하 였 다 .