하이브리도마 상청 액 을 1 회 한계 희석 한 후 에 이 에 대해 세포 ELISA 검정 법 에서 표적 세포 들 에 결합 한 항체 들 이 있 는지 시험 하 였 다 . 하 기 2 가지 인간 난소암 세포주 및 1 가지 인간 비 ( 非 ) - 암 피부 세포주 를 시험 하 였 다 : 각각 , OCC - 1 , OVCAR - 3 및 CCD - 27 sk . 모든 세포주 들 은 American Type Tissue Collection ( ATCC ; Manassas , VA ) 로부터 입수 하 였 다 . 상기 플 레이팅 한 세포 들 을 사용 전 에 고정 시켰 다 . 상기 플레이트 들 을 MgCl 2 및 CaCl 2 를 함유 한 PBS 로 실온 에서 3 회 세척 하 였 다 . PBS 에 희석 한 2 % 파라포름알데히드 100 마이크 로 리터 를 각 웰 에 실온 에서 10 분 간 첨가 한 후 , 버렸 다 . 상기 플레이트 들 을 다시 MgCl 2 및 CaCl 2 를 함유 한 PBS 로 실온 에서 3 회 세척 하 였 다 . 세 척 완충액 ( PBS + 0 . 05 % Tween ) 중 의 5 % 우유 100 마이크 로 리터 / 웰 로 실온 에서 1 시간 동안 차단 을 수행 하 였 다 . 상기 플레이트 들 을 세척 완충액 으로 3 회 세척 하 고 , 하이브리도마 상청 액 을 75 마이크 로 리터 / 웰 로 실온 에서 1 시간 동안 첨가 하 였 다 . 상기 플레이트 들 을 세척 완충액 으로 3 회 세척 하 고 , 양 고추냉이 과산화 효소 에 접합 시킨 염소 항 - 마우스 IgG 또는 IgM 항체 의 1 / 25 , 000 희 석물 ( 5 % 우유 를 함유 한 PBS 중 에 희석 시킴 ) 100 마이크 로 리터 / 웰 을 첨가 하 였 다 . 실온 에서 1 시간 인 큐 베이 션 후 , 플레이트 들 을 세척 완충액 으로 3 회 세척 하 고 , 100 마이크 로 리터 / 웰 의 TMB 기질 을 실온 에서 1 - 3 분 간 인 큐 베이 션 하 였 다 . 상기 반응 을 50 마이크 로 리터 / 웰 의 2 M H 2 SO 4 로 종결 시키 고 , 플레이트 들 을 Perkin - Elmer HTS 7000 플레이트 판독기 로 450 nm 에서 판독 하 였 다 . 도 1 에 표 로 나타나 있 는 결과 는 이전 에 상기 시험 된 세포주 들 에 결합 하 지 않 는 것 으로 나타난 자체 제조 ( in - house ) IgG 아이 소타 입 대 조군 과 비교 하 여 바탕 값 ( background ) 에 대한 배수 로 표현 되 었 다 . 하이브리도마 AR 51 A 630 . 3 으 로부터 의 항체 들 은 시험 된 세포주 들 에 대해 검출 가능 한 결합 을 나타내 었 고 , OCC - 1 난소암 세포주 에 대해서 는 가장 큰 검출 가능 한 결합 을 나타내 었 다 .