인간 IgE 유발 된 히스타민 방출 검정 을 위하 여 , LAD 2 세포 는 6 웰 접시 의 2 웰 들 에서 4 x 106 세포 / 4 ml 로 플 레이팅 되 었 다 . 항 - NP IgE ( 100 ng / ml ) 는 하나 의 웰 에 첨가 되 었 고 세포 는 37 ℃ 에서 밤새 인 큐 베이 션 되 어 세포 를 프라이밍 하 였 다 . 다른 웰 에서 , 세포 는 항 - NP IgE 의 첨가 없이 배지 단독 에서 배양 되 어 음성 대 조군 으로서 작용 하 였 다 . 밤새 인 큐 베이 션 후 , 세포 는 세포 배양 배지 로 3 회 세정 되 어 미 결합 된 IgE 를 제거 하 였 다 . 세포 는 4 mL 타이 로드 의 염 ( 세포 밀도 1 x 106 세포 / ml ) 에서 재현 탁 되 었 고 Eppendorf ® 튜브 ( 300 , 000 세포 / 튜브 ) 에 분취 되 었 다 . 샘플 은 100 μ g / mL hu 31 A . v 11 IgG 4 또는 10 μ M G 02849855 로 인 큐 베이 션 되 었 고 , 철저 하 게 혼합 되 었 고 , 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 되 었 다 . 이 인 큐 베이 션 이후 , NP - BSA 는 샘플 에 0 . 1 μ g / mL 의 최종 농도 로 첨가 되 어 세포 탈 과립 화 를 유발 시켰 다 . 샘플 은 철저 하 게 혼합 되 었 고 1 시간 동안 CO 2 인큐베이터 에서 37 ℃ 에 인 큐 베이 션 되 었 다 . 세포 는 그 다음 3000 rpm 으로 5 분 동안 실온 에서 원심 분리 되 었 고 , 상청 액 은 히스타민 측정 을 위하 여 수집 되 었 다 . 탈 과립 화 상청 액 에서 히스타민 은 히스타민 ELISA 키트 를 사용 하 여 정량 화 되 었 다 . 데이터 는 2 중 샘플 의 평균 으로서 제시 되 었 다 .