서열 번호 562 변이체 를 발현 하 는 맑 아 진 이 . 콜라 이 배양 용 해물 의 96 웰 플레이트 에서 검정 을 수행 하 였 다 . 용해 완충제 부피 는 400 uL 이 었 고 , 용해 물 은 4 배 희석 되 었 다 . 검정 은 100 μ L 반응 에서 10 μ L 용해 물 을 사용 하 고 50 % 에탄올 중 의 20 mM 원액 용액 으로부터 1 mM 스테비오 시드 ( ChromaDex , > 94 % 순도 ) 의 기질 로딩 및 1 mM ADP - 글루코스 ( Sigma , > 93 % 순도 ) 의 보조 기질 로딩 을 사용 하 여 수행 하 였 다 . 하 기 반응 조건 을 사용 하 였 다 : 1 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 mM 인산칼륨 , pH 7 . 5 , 3 mM MgCl 2 , 50 ℃. 반응물 을 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 90 μ L 아세 토니 트릴 에 10 μ L 검정 물 을 첨가 함 으로써 켄 칭 하 고 , 4 ℃ 에서 10 분 동안 원심 분리 하 였 다 . 상청 액 을 물 에 1 : 10 으로 희석 하 고 , 표 9 . 3 에서 설명 한 바 와 같이 RapidFire SPE - MS / MS 에 의해 분석 하 였 다 . 상위 84 개 변이체 를 1 mM 스테비오 시드 ( Chromadex , > 94 % 순도 ) , 1 mM 레바 우디 오시드 A ( > 97 % 순도 ) 또는 레바 우디 오시드 D ( Chromadex , > 93 % 순도 ) 를 사용 하 여 동일 한 조건 으로 재 시험 하 였 다 . 생성 된 조작 된 GT 변이체 폴리펩티드 는 표 12 . 1 에 열거 되 어 있 다 .