레바 우디 오시드 A 로부터 레바 우디 오시드 D 의 형성 을 용이 하 게 하 기 위한 조작 된 라운드 7 SuS 변이체 의 수크로스 및 ADP 에 대한 활성 을 특성 화 하 기 위해 실험 을 수행 하 였 다 . 진탕 플라스크 분말 ( SFP ) 을 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 6 . 5 , 7 . 5 mM 레바 우디 오시드 A 97 , 30 mM 수크로스 , 0 . 2 mM ADP , 및 1 g / L GT 서열 번호 2884 를 함유 하 는 0 . 02 g / L 농도 의 100 μ L 의 총 반응 부피 에 첨가 하 였 다 . 반응 은 1 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 ℃ 에서 수행 하 였 다 . 반응물 을 물 에 20 배 희석 함 으로써 가용화 하 고 , 10 μ L 의 희석 된 반응물 을 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 90 μ L 아세 토니 트릴 에 첨가 하 여 켄 칭 하 고 , 원심 분리 에 의해 침전 시켰 다 . 상청 액 은 물 에 4 . 4 배 희석 한 후 , 표 31 . 1 에 기재 된 기기 및 파라미터 를 사용 하 여 RapidFire SPE - MS / MS 에 의해 스 테 비올 글리코시드 에 대해 분석 되 었 다 . 적어도 3 개 의 변이체 가 서열 번호 1582 보다 더 높 은 활성 을 가졌 다 . 서열 번호 1582 에 비해 변이체 에 의해 레바 우디 오시드 A 로부터 생성 된 레바 우디 오시드 D 의 수준 이 표 34 . 2 에 열거 되 어 있 다 . 서열 번호 1582 와 비교 하 여 돌연변이 F 160 W , Q 381 S , R 550 Q , L 636 Q , 및 A 681 V ( 서열 번호 1764 ) 를 갖 는 변이체 가 글루코스 를 수크로스 로부터 ADP 로 전달 하 는 재순환 반응 의 촉매 작용 을 위한 추가 의 유도 진화 를 위해 선택 되 었 다 .