본 발명 에서 는 게이트웨이 클로닝 시스템 을 사용 하 여 pFANTA 벡터 를 제작 하 였 다 . PBZ 1 프로모터 ( 서열 번호 3 ) 의 상류 큰 부분 은 ( 1403 bps ) 은 유전자 특이 적 인 프라이머 세트 로 증폭 시켰 다 . 프라이머 세트 중 정 방향 프라이머 로 : 5 ´- G G G G A C A A G T T T G T A C A A A A A A G C A G GCTCCGGTGCATGGTTGCGACCATT - 3 ’( 서열 번호 4 ) , 역방향 프라이머 로 5 ´- G G G G A CCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTC AGCTAGTTGCAACTGATCAC - 3 ’( 서열 번호 5 ) 를 사용 하 였 다 . 플라스미드 는 성숙 된 벼 ( Oryza sativa cv Nakdong ) 종자 로부터 triparental mating 및 배 발생 calli 에 의해 아그로박테리움 튜 머 사피엔스 로 도입 시켜 형질 전환 시켰 다 . 대략 200 개 의 성숙 된 벼 종자 를 이용 하 여 형질 전환 된 아그로박테리움 형질 전환 체 는 gentle shaking 으로 1 분 동안 70 % ( v / v ) 에탄올 로 멸균 하 였 다 . 에탄올 을 제거 하 고 종자 는 시판 되 는 표백제 ( 20 % ( v / v ) ) 100 ml 로 1 시간 동안 더 멸균 시켰 다 . 멸균 된 종자 는 멸 균수 로 여러 차례 헹군 다음 실험 을 진행 하 였 다 .