상기 형광 염색 제 를 넣 어 60 분 이상 염색 하 는 과정 중 많 은 수 의 정자 가 과도 한 대사 에너지 소모 로 생존 성 을 잃 게 되 고 , 또한 형광 염색 제 의 NH + 기 도 양전기 를 띄 어 형광 염색 제 의 양전기 와 항상 양전기 를 띄 는 정자 내부 의 양전기 가 만날 시 의 상호 배타 적 인 성질 에 의해 정자 내부 로 의 형광 염색 제 침투 가 어려워 정자 DNA 의 염색 이 균일 해지지 않 고 산도 의 안정 화 도 유지 되 기 어려운데 , 이 에 따라 장시간 의 염색 시간 에 의해 정자 의 생존 성 이 낮 아 지 고 균일 하 지 않 은 정자 염색 에 의해 성 분리 효율 이 낮 아 지 는 문제점 과 이러 한 방법 으로 만들 어 진 성 분리 된 정자 를 냉동 후 인공수정 등 에 이용 하 더라도 정자 의 생존 율 및 생존 정자 의 수 가 적어져 임신 율 이 낮 아 지 는 문제점 이 있 었 다 .