항 - PD - L 1 항체 ( aPD - L 1 ) ( 래트 IgG 2 b ) 를 표 4 에 기재 된 상이 한 반응 조건 하 에서 적혈구 세포 에 커플링 시켰 다 . 반응 을 수행 하 기 위해 , 적혈구 세포 를 0 . 1 mM AS 의 표지 화 농도 를 위해 0 . 1 mM 3 - 아지 도 프로피온산 술포 - NHS 에스테르 ( AS ) ( DMSO 에 재현 탁 됨 ) 로 표지 하 였 다 . aPD - L 1 을 10 x 과량 의 DBCO - 술포 - NHS 에스테르 ( DS ) ( 20 ul 의 10 mM DS ) 로 표지 하 였 다 . 표지 된 세포 를 표 4 에 나타낸 농도 , 부피 및 양 의 표지 된 aPD - L 1 과 함께 25 ℃ 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 세포 를 PBS 로 세척 하 고 , 형광단 ( PE ) 에 연결 된 항 - 래트 카파 경쇄 항체 로 염색 하 였 다 . 이어서 , 세포 를 유동 세포 분석법 을 통해 분석 하 여 단백질 표지 화 효율 을 결정 하 였 다 . 표 4 에 나타낸 바 와 같이 , 단백질 표지 화 효율 은 99 . 7 내지 99 . 9 % 의 범위 인 것 으로 결정 되 었 다 . 세포 는 그 의 형광 이 다른 점 에서 는 유사 한 비 표지 된 세포 의 99 % 보다 높 은 경우 형광 에 대해 양성 으로 간주 된다 . 세포 당 존재 하 는 aPD - L 1 분자 의 수 가 결정 되 었 고 , 이 는 세포 당 7000 내지 15000 개 분자 의 aPD - L 1 인 것 으로 밝혀졌 다 . 세포 당 클릭 된 단백질 의 양 ( ng ) 을 또한 결정 하 였 고 , 이 를 표 4 에 나타낸다 . 일반 적 으로 , 더 높 은 농도 의 단백질 을 첨가 하 면 , 변형 되 는 세포 의 백분 율 이 더 높 아 지 고 세포 당 컨 쥬게 이 션 된 분자 의 수 가 더 많 아 졌 다 . 이 실험 은 단백질 을 사용 한 매우 높 은 표지 화 효율 을 갖 는 세포 집단 의 생 성 을 입증 하 며 , 예 를 들 어 , 세포 당 7000 내지 14 , 000 개 분자 의 범위 에서 세포 당 평균 분자 수 를 달성 한다 . 이 실험 은 다량체 가 세포 에 연결 될 수 있 음 을 또한 입증 하 는데 , 이 는 항체 가 2 개 의 중쇄 와 2 개 의 경쇄 를 가지 고 있 기 때문 이 다 . 실험 은 , 예 를 들 어 , 1 E 8 또는 1 E 9 개 의 적혈구 세포 를 갖 는 , 큰 세포 집단 이 표지 될 수 있 음 을 또한 나타내 는데 , 높 은 백분율 의 세포 가 표지 되 고 세포 당 요망 되 는 양 의 단백질 이 달성 된다 .