HEK 293 세포 가 렌 티 바이러스 형질도입 에 의해 높 은 수준 의 인간 , 생쥐 또는 시노 몰구 스 원숭이 TIGIT 를 안정 되게 발현 하 도록 가공 되 었 다 . 200 , 000 개 의 293 - TIGIT 세포 가 10 - 포인트 , 3 - 배 적정 ( 30 내지 0 . 002 μ g / mL ) 의 각 항 - TIGIT 항체 와 함께 4 ℃ 에서 30 분 동안 염색 되 었 다 . 이 들 항 - TIGIT 항체 는 PE 에 접합 된 다중 클론 염소 항 인간 IgG ( Jackson ImmunoResearch 109 - 116 - 098 ) 로 검출 되 었 다 . 표본 은 CytoFLEX 유세포 분석기 에서 분석 되 었 다 . FSC / SSC 게이팅 된 개체군 의 중앙 형광 강도 가 각 항체 농도 에 대해 결정 되 었 다 . 로그 ( X ) 변환 된 데이터 의 비 선형 회귀 가 GraphPad Prism 6 에서 EC 50 값 을 산출 하 는 데 이용 되 었 다 . 이 들 항 - TIGIT 항체 중 에서 어느 것 도 부모 HEK 293 세포 ( TIGIT -) 에 결합 을 보여 주 지 않 았 다 ( 데이터 제시 되 지 않 음 ) . 도 3 a - c 는 결합 적정 을 보여 주 고 , 그리고 도 3 d 는 HEK 293 세포 에서 발현 된 인간 , 시노 몰구 스 원숭이 및 생쥐 TIGIT 에 8 개 의 항 - TIGIT 항체 클론 ( 클론 2 , 클론 5 , 클론 13 , 클론 16 , 클론 17 , 클론 20 , 클론 25 및 클론 54 ) 의 결합 의 EC 50 을 보여준다 .