잎 부분 을 4 ℃ 의 PBS - 완충 용액 포름알데히드 ( 4 % 포름알데히드 w / v ) 로 고정 시킨 다음 기존 에 보 고 된 방법 ( Kim et al . Proteomics , 2004 , 4 , 3569 - 3578 ) 으로 분석 하 였 다 . 조직 에 포함 된 에탄올 은 수 송체 인 크실렌 을 사용 하 여 Paraplast Plus ( Sigma ) 로 침투 시키 기 전 에 100 % tert - 부탄올 및 크실렌 속 에서 흔들 어 제거 하 고 , 핸드 마이크로톰 으로 절단 하 여 poly - L - lysine 이 코팅 된 현미경 슬라이드 로 옮겼 다 . 면역 조직 화학 적 염색 을 위해 , 이 부분 을 0 . 02 % 소듐 아지드 및 0 . 05 % 트윈 - 20 이 포함 된 PBS 에 2 % BSA 가 포함 된 차단 완충액 에서 1 시간 동안 상온 에서 배양 시켰 다 . 이 부분 을 정제 된 0 . 1 % 트윈 - 20 및 차단 완충액 ( 1 : 1 , v / v ) 이 포함 된 희석 된 완충액 에서 일차 항체 와 2 시간 동안 배양 시켰 다 . 조직 표본 은 각각 10 분 동안 PBS - T 로 3 회 헹군 다음 1 시간 동안 알칼리 인산화 효소 와 공유 결합 된 anti - rabbit IgG 항체 ( 1 : 300 ) 와 반응 시킨 후 PBS - T 로 10 분 동안 헹군 다음 시료 를 가시 화 하 기 위해 NBT / BCIP 용액 에서 20 분 동안 배양 시켰 다 .