도 4 . CD 20 및 Fc γ RIIb 코 - 라 이게 이 션 ( co - ligation ) 은 대부분 시스 형태 로 일어나 며 , Fc γ RIIb 의 활성 화 를 이 끈다 . A ) Raji 세포 를 상기 명시 된 mAB ( 10 μ g / ml ) 로 2 시간 동안 37 ℃ 에서 배양 한 다음 , 수거 , 용해 하 고 후속 적 으로 인산화 Fc γ RIIb 에 대해 면역 블롯 팅 을 수행 하 였 다 . B ) 좌측 패널 ; PKH 26 - 표지 Ramos 세포 ( Fc γ RIIb - ve , R 1 ) 를 ( 도 3 a 에 기재 된 ) 선별 된 고 Fc γ RIIb - 발현 Ramos 트랜스 펙 턴 트 ( R 2 ) 와 1 : 1 로 혼합 하 였 다 . 우측 패널 ; Ritux - 488 과 함께 6 시간 배양 한 후 , Fc γ RIIb + ve 및 Fc γ RIIb - ve 세포 에서 CD 20 의 모듈레이션 . 또한 , 대 조구 로서 , 양 집단 은 단독 으로 배양 되 었 다 . 데이터 는 3 회 의 독립 적 인 실험 으로부터 모듈레이션 의 평균 수준 +/- SD 을 나타낸다 . C ) 유사 한 실험 으로 , 저 Fc γ RIIb - 발현 CLL 을 PKH 26 - 표지 한 다음 , 보다 높 은 Fc γ RIIb - 발현 CLL 과 1 : 1 혼합 하 였 다 . 실험 을 3 회 수행 하 였 고 , 매회 다른 고 Fc γ RIIb - 발현 CLL 으로 수행 하 였 다 . Fc γ RIIb 수준 ( Geo MFI ) 은 42 ( 저 ) 이 고 , 그리고 고 발현자 에 대해 275 , 306 및 165 이 었 다 . 그 다음 , 내재 화 어 세이 를 4 b 에서 와 같이 수행 하 였 다 . 데이터 는 모듈레이션 의 평균 수준 +/- SD 를 나타낸다 . D ) 다른 CLL 시료 를 20 , 4 및 1 x 105 cells / ml 로 Ritux - 488 과 함께 6 시간 동안 배양 하 고 , 내재 화 어 세이 를 상기 한 바 와 같이 수행 하 였 다 . E ) Raji 세포 를 명시 된 mAb ( 10 μ g / ml ) 과 함께 2 시간 동안 37 ℃ 에서 20 , 4 및 1 x 105 cells / ml 로 배양 하 였 다 . 이미지 를 세포 근접 성 의 차이 를 나타내 기 위해 명 시야 현미경 ( bright field microscopy ) 으로 촬영 하 였 다 . 그 다음 , 세포 를 수거 하 고 , 4 a 에 나타낸 바 와 같이 인산화 Fc γ RIIb 에 대해 면역 블롯 팅 으로 평가 하 였 다 .