실시 예 3 으로부터 의 중복 연장 PCR 생성물 을 키 아 퀵 키트 ( 키아 겐 , 독일 힐 덴 ) 를 포함 된 매뉴얼 에 따라 사용 하 여 정제 하 였 다 . 약 0 . 1 μ g 의 정제 된 PCR 생성물 을 EcoRI 제한 엔 도 뉴클레아제 를 사용 하 여 절단 하 고 EcoRI 절단 부위 를 통해 플라스미드 벡터 pGAPZ A ( 인비 트로겐 ) 에 클로닝 시켰 다 . 프로모터 에 관한 삽 입물 의 정확 한 배향 을 , 예 를 들 면 , NcoI 로 대조 용 절단 을 이용 하 여 조사 하 였 다 . 각 경우 에 , 정확 하 게 배향 된 삽 입물 을 갖 는 클론 을 선별 하 고 서열 화 하 고 보존 하 였 다 . 상응 하 는 플라스미드 는 다음 과 같이 명명 하 였 다 : 문헌 [ Matsushima et al . , FEBS Lett . 293 , 37 - 41 , 1991 ] 에 개시 된 바 와 같 은 공지 된 PLE 서열 을 함유 한 플라스미드 를 pGAPZ A PLE - ER ( HAEL 테트라 펩티드 가 결실 됨 ) 및 pGAPZ A PLE + ER ( HAEL 테트라 펩티드 가 여전히 존재 ) 로 지칭 하 였 다 . 신규 APLE 서열 로부터 유도 된 플라스미드 는 pGAPZ A APLE - ER ( HAEL 테트라 펩티드 가 결실 됨 ) 및 pGAPZ A APLE + ER ( HAEL 테트라 펩티드 가 여전히 존재 ) 로 지칭 하 였 다 .