이질 이 합체 dsFv 의 양쪽 성분 을 CH 3 에 계류 ( tether ) 시켰 다 . 부피 가 큰 CH 3 도메인 에 VH 및 VL 의 N - 말단 을 이렇게 동시 부착 해도 Fv 의 구조 는 영향 을 받 지 않 는다 . 그러나 , 항원 에 따라 ( 예 를 들 어 링커 길 이 및 각각 의 항원 구조 에 따라 ) 항원 에 대한 접근성 이 제한 될 수 있 으며 , 그 이유 는 CDR 영역 이 CH 3 가 위치 하 는 방향 을 향하 기 때문 이 다 . 또한 , 2 개 의 연결 점 에서 계류 시키 면 Fv 가 회전 하 거나 CH 3 옆 으로 이동 하 는 자유 가 매우 제한 된다 . 그 때문 에 항원 은 CH 3 과 Fv 사이 를 비집 고 들어가 야 한다 . 이 는 항원 에 의 접근성 에 영향 을 미치 고 친화성 을 감소 시킬 수 있 으며 , 실제로 우리 는 이 를 이중 특이 적 항체 의 이중 - 연결 된 dsFv 모이 어 티 에서 관찰 했 다 ( 표 3 의 SPR 데 이타 참조 ) . 입체 장애 로 인한 항원 접근성 문제 와 일관 되 게 , 친화성 측정 에서 이중 - 계류 된 dsFv 에 대해 유의 하 게 감소 된 결합률 ( on - rate ) 이 밝혀졌 다 . 그럼에도 불구 하 고 , Fv 의 구조 적 완전 성 은 온전 해 보이 며 , 그 이유 는 일단 항원 이 결합 하 면 해리 율 ( off - rate ) 이 비 수식 항체 와 동일 하 기 때문 이 다 . 이중 특이 적 항체 의 IgG - 유사 접근성 팔 의 결합 에 대한 친화성 값 ( 예상 대로 완전 한 친화성 을 가짐 ) , 뿐 만 아니 라 부가 적 이중 - 계류 된 dsFv 에 대한 친화성 값 이 표 3 에 열거 되 어 있 다 . 우리 는 이중 - 계류 후 입체 장애 로 인해 결합률 이 감소 된 dsFv 모듈 에 대해 ' 제한 또는 감소 된 결합 모드 ' 라는 용어 를 사용 한다 .