상기 준비 된 샘플 들 에 대하 여 500 μ l DNA extraction buffer ( 50 nM Tris , 100 mM EDTA , 10 % sodium dodecyl sulfate ( SDS ) ) 및 10 mg / ml proteinase K ( U 302 B , Promega , Madison , WI , USA ) 50 μ l 를 각각 첨가 하 고 위 아래 로 섞 어 주 었 다 . 55 oC 의 수조 에서 상기 의 각 샘플 들 을 8 - 24 시간 정도 배양 하 여 샘플 들 이 부옇 게 되 었 는지 확인 하 고 , 500 μ l PCI ( phenol : chloroform : isoamylalcohol = 25 : 24 : 1 , Cat . C 9017 , Bioneer , Korea ) 를 넣 어 위아래 로 섞 어 준 후 10 , 000 rpm , 10 분 간 원심 분리 하 였 다 . 원심 분리 된 상층 액 만 을 취하 여 tube 에 넣 고 동량 의 CI ( chloroform : isoamylalcohol = 24 : 1 ( v / v ) ) 를 넣 고 위아래 로 섞 어 준 후 10 , 000 rpm , 10 분 간 원심 분리 하 고 다시 상층 액 만 새 tube 에 넣 었 다 . 3 M sodium acetate ( pH 6 . 0 ) 를 상기 상등 액 의 1 / 10 만큼 넣 고 , 이 혼합 의 두 배 에 해당 하 는 100 % 에탄올 을 넣 고 잘 섞 어 주 었 다 . 상기 혼합물 을 실온 에 5 시간 이상 그대로 두어 침전물 을 완전히 가라앉 게 한 후 10 , 000 rpm , 10 분 간 원심 분리 하 였 다 . Clean bench 에서 상층 액 은 버리 고 pellet 만 취하 여 염 을 제거 하 기 위하 여 100 μ l 70 % ethanol 을 넣 고 잘 흔든 후 버리 기 두 번 , 100 μ l 100 % ethanol 을 넣 고 잘 흔든 후 버리 기 한 번 실시 하 였 다 . 세척 된 pellet 을 실온 에서 5 - 20 분 간 두어 완벽 하 게 말린 후 고체 상태 가 된 pellet 을 20 - 50 μ l 증류수 를 사용 하 여 녹였 다 . 상기 수용액 의 UV 흡광도 를 UV / Visible spectrophotometer ( Ultrospec 2100 pro , Amersham Biosciences , Cambridge , UK ) 를 사용 하 여 260 파장 에서 측정 하 여 optical density ( OD ) 를 얻 은 후 DNA 의 농도 를 계산 하 여 DNA 최종 농도 가 1 μ g / μ l 가 되 도록 하 고 - 20 oC 에서 보관 하 여 사용 하 였 다 .