HEK 293 현 탁 세포 ( 293 Expi , Invitrogen ) 의 일시 적 형질 감염 을 제조 업체 의 지침 을 엄격 하 게 따라 사용 하 여 항체 및 항체 Fab 단편 을 발현 하 였 다 . 293 Expi 세포 는 1 % P / S ( GIBCO 카탈로그 번호 15140 - 122 ) 로 보충 된 Expi 293 F 발현 배지 ( Invitrogen , 카탈로그 번호 A 1435104 ) 에서 3 내지 4 일 마다 전형 적 으로 계대 배양 하 였 다 . Expifectamine 을 사용 하 여 Expi 293 F 세포 를 2 . 5 ~ 3 밀 / mL 의 세포 밀도 로 형질 감염 시켰 다 . Expi 293 F 세포 의 각 1 리터 에 대해 , 총 1 mg 의 플라스미드 DNA ( VH - CH 1 ( Fab 의 경우 ) 또는 VH - CH 1 - CH 2 - CH 3 ( mAb 의 경우 ) 및 LC 플라스미드 1 : 1 비율 ) 를 50 mL Optimem ( GIBCO , 카탈로그 번호 51985 - 026 , 희석 물 A ) 에 희석 시키 고 2 . 7 mL Expifectamine 을 50 mL Optimem ( 희 석물 B ) 에 희석 하 여 형질 감염 을 수행 하 였 다 . 공 - 감염 물 을 생산 하 는 Fab 및 mAb 의 경우 , VH - CH 1 및 LC 플라스미드 ( Fab ) 와 VH - CH 1 - CH 2 - CH 3 및 LC 플라스미드 ( mAb ) 를 각각 1 : 1 비율 로 사용 하 였 다 . 희 석물 A 및 B 를 혼합 하 고 실온 에서 10 ~ 20 분 동안 배양 하 였 다 . 여기 서부터 , 형질 감염 혼합물 을 Expi 293 F 세포 에 첨가 하 고 , 세포 를 37 ℃ 의 습윤 된 인큐베이터 내 에서 궤도 회전 ( 85 ~ 125 rpm ) 시키 면서 배양 하 였 다 . 형질 감염 후 1 일 차 에 , 형질 감염 세포 를 5 ml 의 ExpiFectamine 293 Transfection Enhancer 1 및 50 ml 의 ExpiFectamine 293 Transfection Enhancer 2 로 보충 하 였 다 . 세포 배양 상청 액 은 통상 적 으로 형질 감염 후 4 ~ 5 일 차 에 원심 분리 후 여과 에 의해 수확 하 였 다 .