CD 34 + HSC 를 해동 하 고 IL 12 , SCF , TPO , Flt 3 L 및 페니실린 / 스트렙토마이신 이 첨가 된 StemSpan SFEM ( StemCell Technologies ) 배지 에서 밤새 ( 약 500 , 000 세포 / ml 로 ) 배양 하 였 다 . 각 RNP 전달 반응 당 대략 90 , 000 개 의 세포 를 분취 하 고 펠 렛 화 하 였 다 . 그 다음 에 , 세포 를 60 ul P 3 핵 감염 ( nucleofection ) 완충제 ( Lonza ) 에 재현 탁하 고 활성 RNP 를 이어서 첨가 하 였 다 . 그 다음 에 , HSC 를 3 회 반복 실험 으로 ( 20 uL / 전기 천공 ) 전기 천공 ( 예 를 들 어 Lonza 뉴 클레오 펙 터 ( Nucleofector ) 상 의 프로그램 CA - 137 을 사용 하 여 핵 감염 ) 하 였 다 . 전기 천 공 직후 에 , StemSpan SFEM 배지 ( IL 12 , SCF , TPO , Flt 3 L 및 페니실린 / 스트렙토마이신 포함 ) 를 HSC 에 첨가 하 였 고 , 적어도 24 시간 동안 배양 하 였 다 . 그 다음 에 , HSC 를 수확 하 고 T 7 E 1 , NGS 및 / 또는 표면 마커 발현 분석 을 하 였 다 .