( 1 ) CDR - 그래프트 된 주형 의 제조 . 항체 911 의 경쇄 연장 된 CDR ( 즉 , 카바 트 및 코 티 아 CDR 영역 을 둘 모두 포함 ) 을 JK 2 를 이용 하 여 인간 생식 세포 수용체 서열 O 8 에 그 래프팅 시키 고 , JH 4 를 이용 하 여 항체 911 의 경쇄 연장 된 CDR 을 인간 생식 세포 수용체 서열 VH 4 - 59 에 그 래프팅 시켰 다 . 인간 생식 세포 수용체 서열 의 아미노산 서열 은 제 WO 2004 / 058184 호 의 도 1 A 및 도 1 B 에 도시 되 어 있 다 . 아미노산 번호 는 순차 적 이 다 . 상기 언급 된 단백질 프레임워크 를 이용 하 여 쥐과 CDR 를 갖 는 인간 프레임워크 를 인코딩 하 는 합성 유전자 에 대한 DNA 서열 을 고안 하 였 다 . 이 들 인간 화 된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 을 각각 hVH 및 hVL 이 라 부른다 . 코돈 은 이 . 콜라 이 및 햄스터 에 대해 최적 화 되 었 다 . 각각 의 쇄 에 대해 2 개 의 짧 은 옆구리 프라이머 를 갖 는 hVL 및 hVH 의 전체 길이 에 걸친 여러 개 의 겹쳐지 는 올리 고 뉴클레오타이드 ( 69 내지 90 개 염기 길이 ) 를 이용 하 여 [ Prodromou et al , ( 1992 ) Protein Eng 5 ( 8 ) : 827 - 9 ] 에 개시 된 바 와 같 은 순환 PCR 에 의해 2 개 의 유전자 를 별개 로 합성 하 였 다 . 생성 된 정확 한 길이 의 DNA 절편 을 겔 정제 한 후 이 . 콜라 이 바 이시스 트론 발현 플라스미드 ( 앰 피 실린 내성 ) 로 클로닝 하 였 다 . 항체 는 [ Barbas ( 2001 ) Phage display : a laboratory manual , Cold Spring Harbor , NY , Cold Spring Harbor Laboratory Press ( see Vector pComb 3 X , at pg 2 . 10 ) ] 에 개시 된 것 과 유사 한 IPTG 유도 성 lacZ 프로모터 의 제어 하 에서 발현 되 지만 , 개질 은 하 기 의 추가 도메인 의 첨가 및 발현 을 포함 하 였 다 : 인간 카파 경쇄 불변 도메인 ( 진 뱅크 ( GenBank ) 기탁 번호 CAA 09181 ) 및 IgG 2 a 인간 면역 글로불린 의 CHI 불변 도메인 ( 진 뱅크 기탁 번호 P 01859 ) .