단백질 에 경쟁 적 으로 결합 하 는 테스트 화합물 의 능력 을 측정 하 기 위해 , 예 를 들 면 , 친화성 선택 - 질량 분광 측정 분석 을 수행 한다 . 3 개 화합물 각각 의 400 μ M 저장액 의 2 ㎕ 분취 액 을 14 ㎕ 의 DMSO 와 조합 하 여 성분 당 40 μ M 의 리간드 혼합물 을 제조 한다 . 그 다음 , 상기 성분 당 40 μ M 혼합물 의 1 ㎕ 분취 액 을 적정 제 펩 티 도미 메 틱 거대 고리 ( 10 mM , 5 mM , 2 . 5 mM , . .., 0 . 078 mM ) 의 연속 적 으로 희석 된 저장 용액 의 1 ㎕ DMSO 분취 액 과 조합 한다 . 이 들 2 ㎕ 의 샘플 들 을 38 ㎕ 의 PBS 에 용해 시킨다 . 생성 된 용액 을 반복 된 피펫 팅 으로 혼합 하 고 10 , 000 g 에서 10 분 동안 원심 분리 하 여 정화 한다 . 생성 된 상청 액 의 4 . 0 ㎕ 분취 액 에 4 . 0 ㎕ 의 PBS 중 의 10 μ M hMDM 2 단백질 을 첨가 한다 . 따라서 , 각각 의 8 . 0 ㎕ 실험 샘플 은 PBS 중 의 5 . 0 μ M 농도 로 40 pmol ( 1 . 5 ㎍) 의 단백질 , 0 . 5 μ M 리간드 , 2 . 5 % DMSO 및 다양 한 농도 ( 125 μ M , 62 . 5 μ M , . .., 0 . 98 μ M ) 의 적정 제 펩 티 도미 메 틱 거대 고리 를 함유 한다 . 이 로써 각각 의 농도 점 에 대해 제조 된 중복 샘플 을 실온 에서 60 분 동안 인 큐 베이 션 한 후 , " 2 . 0 ㎕ 주 입물 의 SEC - LC - MS 분석 전 에 4 ℃ 로 냉각 시킨다 . 이 들 방법 및 다른 방법 에 대한 추가 세부 설명 은 문헌 들 ( "" A General Technique to Rank Protein - Ligand Binding Affinities and Determine Allosteric vs . Direct Binding Site Competition in Compound Mixtures . "" Annis ", D . A . ; Nazef , N . ; Chuang , C . C . ; Scott , M . P . ; Nash , H . M . J . Am . Chem . Soc . 2004 , 126 , " 15495 - 15503 ; "" ALIS : An Affinity Selection - Mass Spectrometry System for the Discovery and Characterization of Protein - Ligand Interactions "" D . A . Annis ", C . - C . Chuang , and N . Nazef . In Mass Spectrometry in Medicinal Chemistry . Edited by Wanner K , Hofner G : Wiley - VCH ; 2007 : 121 - 184 ; Mannhold R , Kubinyi H , Folkers G ( Series Editors ) : Methods and Principles in Medicinal Chemistry ) 에 제공 되 어 있 다 .