RT - PCR 을 사용 하 여 인간 MCP - 1 의 전체 - 길 이 cDNA 를 SH - SY 5 Y 세포 로부터 분리 하 였 다 . SH - SY 5 Y 세포 의 총 RNA 를 수퍼 스크립트 II ( Invitrogen ) 에 의해 역전사 한 다음 , Pfu - DNA - 폴리머 라 제 ( Promega ) , 프라이머 hMCP - 1 - 1 ( 센스 ) 및 hMCP - 1 - 2 ( 안티 센스 ) ( 표 11 ) 를 포함 하 는 25 ㎕ 반응 액 중 에 생성 된 cDNA 산물 의 1 : 12 , 5 희석 액 상 에서 인간 MCP - 1 을 증폭 시켰 다 . HindIII 및 NotI 제한 효소 부위 를 사용 하 여 생성 된 PCR - 산물 을 벡터 pcDNA 3 . 1 내로 클로닝 하 고 DNA - 서열 분석 에 의해 서열 을 확인 하 였 다 .