PCR 튜브 에 , 상기 에서 조제 한 올리 고 뉴클레오티드 용액 10 μ L 와 , 상기 의 5 ’ 말단 비오틴 표식 올리 고 뉴클레오티드 용액 50 μ 와 , 완충액 ( 330 mM Tris - Acetate pH 7 . 9 , 660 mM KOAc , 100 mM MgOAc 2 , 5 mM Dithiothreitol ) 10 μ L 를 첨가 하 고 , 또한 당해 혼합물 에 멸균 초 순수 를 더 해 액량 을 100 μ L 로 하 여 , 혼합 하 였 다 . 다음 에 , 당해 PCR 튜브 를 95 ℃ 로 10 분 간 가열 하 고 , 70 ℃ 까지 급속 하 게 냉각 하 여 , 그 온도 로 10 분 간 보온 하 였 다 . 또한 이것 을 50 ℃ 까지 냉각 하 여 10 분 간 보온 하 고 , 다음 에 37 ℃ 로 10 분 간 보온 한 후 , 실온 으로 되돌림 으로써 , 5 ’ 말단 비오틴 표식 올리 고 뉴클레오티드 와 올리 고 뉴클레오티드 의 결합체 의 형성 을 촉진 하 였 다 .