BxPC - 3 췌장암 세포 에 옵소닌 화 된 K 326 W / E 333 S / E 430 G 치환 을 함유 하 는 1 가 항 - DR 5 항체 의 효능 제 활성 에 대한 효과 를 연구 하 기 위해 생존 율 검정 을 수행 하 였 다 . 실시 예 1 에 기재 된 바 와 같이 IgG 1 - CONA - C 49 W - F 405 L - K 326 W / E 333 S / E 430 G 와 IgG 1 - b 12 - K 409 R - K 326 W / E 333 S / E 430 G 사이 의 제어 된 Fab - 아암 교환 에 의해 1 가 DR 5 항체 를 생성 하 였 다 . BsAb ( IgG 1 - CONA - C 49 W - F 405 L x IgG 1 - b 12 - K 409 R ) - K 326 W / E 333 S / E 430 G 로 지칭 되 는 생성 된 이중 특이 적 항체 는 DR 5 에 특이 적 인 하나 의 아암 및 HIV 당단백질 gp 120 에 대한 하나 의 비 - 특이 적 아암 을 함유 하 여 , DR 5 - 양성 인간 세포 에 대한 1 가 DR 5 결합 을 유발 한다 . 1 - 일 생존 율 검정 을 본질 적 으로 실시 예 8 에 기재 된 바 와 같이 WIL 2 - S SF 세포 에 대해 수행 하 였 다 . 간략 하 게 , 100 μ L WIL 2 - S SF 세포 를 96 - 웰 플레이트 내 무 혈청 배지 에 피펫 팅 하 였 다 ( 50 . 000 개 셀 / 웰 ) . 25 μ L 의 정제 된 C 1 q ( 2 . 5 μ g / mL 최종 농도 ) 및 25 μ L 의 일련 의 농도 희석 물 의 항체 샘플 ( 5 배 희석 으로 범위 0 . 0003 - 20 μ g / mL 최종 농도 ) 을 세포 에 첨가 하 고 , 37 ℃ 에서 1 일 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 실시 예 2 에 기재 된 바 와 같이 셀타 이터 - 글 로 검정 을 사용 하 여 세포 생존 율 을 결정 하 였 다 . 엔 비전 멀티 라벨 판독기 ( 퍼킨 엘머 ) 상 에서 발광 을 측정 하 였 다 . 그래프 패드 프리즘 소프트웨어 를 사용 하 여 비 - 선형 회귀 ( 가변 기울기 를 갖 는 S 자형 용량 - 반응 ) 를 사용 하 여 로그 - 변환 된 농도 축 을 갖 는 데이터 를 분석 하 고 플롯 팅 하 였 다 . 도 17 은 K 326 W / E 333 S / E 430 G 돌연변이 의 존재 하 에 , IgG 1 - CONA - C 49 W 의 1 가 변이체 가 또한 WIL 2 - S SF 세포 의 사멸 을 유도 할 수 있 었 다는 것 을 보여준다 .