LAG - 3 를 활성 화 된 또는 기능 소실 된 T 세포 에서 발현 시켰 다 . CD 4 + T 세포 를 CD 4 마그네 틱 비드 를 사용 하 여 분리 하 였 다 . 정제 된 인간 CD 4 + T 세포 를 72 hr 동안 Dynabeads ® 인간 T - 활성화제 CD 3 / CD 28 로 자극 하 였 다 . 실시 예 1 의 항체 를 FACS 버퍼 로 단계 희석 하 였 다 . 결합 을 평가 하 기 위해서 , LAG - 3 항체 를 다양 한 농도 ( 10 μ g / ml , 3 . 333 μ g / ml , 1 . 111 μ g / ml , 0 . 370 μ g / ml , 0 . 123 μ g / ml , 0 . 041 μ g / ml , 0 . 014 μ g / ml 및 0 . 005 μ g / ml ) 로 마우스 항 - 인간 LAG 3 PE 항체 ( eBioscience , 클론 : 3 DS 223 H ) 의 존재 하 에 얼음 위 에서 30 분 동안 활성 화 된 인간 CD 4 T 세포 에 추가 하 였 다 . 라벨 링 된 세포 를 FACS 버퍼 로 세척 하 였 고 그 이후 APC - 컨 쥬게 이 션 된 항 - 인간 IgG 항체 로 얼음 위 에서 30 분 동안 라벨 링 하 였 다 . 그 결과 의 세포 를 FACS 버퍼 로 1 회 세척 하 였 다 . 라벨 링 된 세포 를 BD FACSCalibur ™ 중 에서 유동 세포 분석법 으로 형광 강도 에 대하 여 평가 하 였 다 . 도 3 에서 나타난 바 와 같이 , S 27 , S 31 , T 99 및 S 119 항체 는 활성 화 된 인간 CD 4 + T 세포 상 에서 발현 된 LAG 3 에 용량 의존 적 으로 결합 할 수 있 다 .