막 ( 2 μ g 의 단백질 / 반응 ) , 시험 되 는 경쟁자 , 및 [ 125 I ] - MePhe 7 NKB ( 0 . 2 nM ) 를 함유 하 는 0 . 2 ㎖ 의 분석 완충액 ( 50 mM 의 Tris - HCl , 4 mM 의 MnCl 2 , 10 μ M 의 티오 르 판 , pH 7 . 4 ) 내 에서 경쟁 실험 을 수행 하 였 다 . 표지 되 지 않 은 상동 리간드 ( 0 . 5 μ M ) 를 사용 하 여 비 특이 적 결합 을 규정 하 였 다 . 25 ℃ 에서 90 분 동안 인 큐 베이 션 을 수행 하 였 다 . 수용체 - 결합 리간드 를 팩커드 하비 스터 ( Packard Harvester ) 내 에서 의 진공 여과 에 의해 0 . 5 ％ 의 BSA 내 에서 미리 적셔 진 GF / C 플레이트 상 으로 단리 하 였 다 . 플레이트 를 0 . 02 M 의 Tris , pH 7 . 4 로 세척 하 였 다 . 평형 결합 상수 ( KD 및 Ki ) , 수용체 밀도 ( Bmax ) 의 계산 , 및 통계 분석 을 그래프 패드 프리즘 ( GraphPad Prism ) 또는 IDBS XLfit 소프트웨어 를 이용 하 여 앞서 공개 된 바 와 같이 수행 하 였 다 ( Aharony et al . , 1995 ) .