라이브러리 생성 시 다음 단계 는 양쪽 Lcn 2 라이브러리 에 대해 동일 하 게 수행 되 었 다 . 파지 pIII 융합 단백질 로서 리포 칼린 뮤 테인 의 라이브러리 를 코딩 하 는 phNGAL 102 또는 phNGAL 108 각각 에 기초 한 파지 미드 벡터 로 형질 전환 된 세포 를 포함 하 는 100 mL 의 배 양물 을 멸균 된 엘렌 메이어 플라스크 에 옮기 고 , 항생제 선별 압력 없이 2 YT 배지 에서 37 ℃, 160 rpm 에서 1 시간 동안 배양 하 였 다 . VCS - M 13 헬퍼 파지 로 감염 시키 기 전 에 , 당해 항생제 가 추가 된 상기 배 양물 을 OD 550 이 0 . 1 이 되 도록 2 YT 배지 로 희석 하 며 , OD 550 이 0 . 6 에 도달 할 때 까지 동일 한 조건 하 에서 추가 배양 하 였 다 . 대략 10 의 MOI ( multiplicity of infection ) 에서 VCS - M 13 헬퍼 파지 ( Agilent Technologies , La Jolla , USA ) 로 감염 시킨 후 , 상기 배 양물 을 37 ℃, 100 rpm 에서 추가 로 30 분 동안 진탕 하 였 다 . 그리고 나 서 , 배양기 온도 를 26 ℃ 로 낮추 고 , 진탕기 속도 는 다시 160 rpm 으로 높이 고 , 10 분 후 카나마이신 ( 70 ㎍/ mL ) 를 추가 한 다음 , 안 하이드로 테트라사이클린 ( anhydrotetracycline , ACROS Organics , Geel , Belgium ) 을 25 ㎍/ L ( 배 양물 1 L 당 디 메틸 포름 아마이드 에 녹인 200 ㎍/ mL 의 스톡 용액 의 125 ㎕) 으로 추가 하 여 유전자 발현 을 유도 하 였 다 . 추가 로 26 ℃, 160 rpm 으로 12 - 15 시간 동안 계속 배양 하 였 다 .