결합 분석 은 다음 과 같이 바이오센서 옥 테 트 를 사용 하 여 수행 하 였 다 . 간단히 , 개 IL 31 은 제조 업자 의 지침 에 따라 EZ - LinkTM NHS - LC 비오틴 ( Thermo Scientific , 카탈로그 번호 21336 ) 을 사용 하 는 1 차 아민 그룹 에서 또는 EZ - LinkTM 비오틴 - LC - 하이드 라지드 ( ThermoFisher Scientific , 카탈로그 번호 21340 ) 를 사용 하 여 글리 칸 그룹 에서 비오티 닐 화 했 다 . 유리 미 반응 된 비오틴 은 광범위 한 투석 에 의해 비오티 닐 화 된 IL 31 로부터 제거 했 다 . 비오티 닐 화 된 개 IL 31 을 스 트 렙 타비 딘 센서 팁 상 에서 포획 했 다 . 키메라 및 개 화 M 14 항체 및 인간 및 개 IL 31 ( 아민 - 접합 된 - 비오틴 ) 의 4 개 의 상이 한 농도 ( 400 , 200 , 66 . 6 및 33 nM ) 의 회합 및 100 nM 의 개 화 M 14 항체 및 개 IL 31 ( 글리 칸 - 접합 된 - 비오틴 ) 의 회합 은 90 초 동안 모니터링 했 다 . 해리 는 600 초 동안 모니터링 했 다 . 완충제 전용 블랭크 곡선 을 빼 서 임의 의 드리프트 를 보정 했 다 . 데이터 는 kon , koff 및 Kd 를 결정 하 기 위해 ForteBio ™ 데이터 분석 소프트웨어 를 사용 하 여 2 : 1 결합 모델 에 적합 화 했 다 . 희석 및 모든 결합 단계 를 위한 완충제 는 다음 과 같 다 : 20 mM 포스 페이트 , 150 mM NaCl , pH 7 . 2 .