MG 53 은 RING 모티프 를 통해 Zn 에 결합 할 수 있 다 . MG 53 은 Zn 결합 모티프 ( Ring ) 및 B 박스 모티프 를 함유 하 는 정준 TRIM 도메인 을 함유 한다 ( 도 23 a ) . 세균 배 양물 을 초음파 분쇄 에 의해 용해 시키 고 , 원심 분리 시키 고 , 4 ℃ 에서 밤새 10 uM 아연 을 함유 하 는 컬럼 완충액 중 에서 아밀로오스 수지 에 결합 시켰 다 ( 도 23 b ) . 이후 , 수지 를 0 . 3 mM 말토오스 를 갖 는 50 ml 의 아연 비 함유 컬럼 완충액 으로 세척 한 후 , 아연 비 함유 컬럼 완충액 으로 세척 하 였 다 . 도시 된 바 와 같이 단백질 수준 및 안정 성 을 SDS - PAGE 겔 에 의해 확인 하 였 다 . 레인 1 ( 마커 ) , 레인 2 ( mMG 53 ) , 레인 3 ( mC 29 L - MG 53 돌연변이 ) , 레인 4 ( mC 29 L / C 105 S 이중 돌연변이 DM 클론 1 ) , 레인 5 ( mC 29 L / C 105 S 이중 돌연변이 DM 클론 2 ) , 레인 6 ( 10 mg / ml BSA ) , 레인 7 ( 5 mg / ml BSA ) , 레인 8 ( 2 . 5 mg / ml BSA ) , 레인 9 ( 1 mg / ml BSA ) . 비드 상 의 단백질 을 먼저 용액 ( 제제 에 따라 0 . 01 내지 0 . 1 uM 또는 ND ) 내 의 유리 아연 의 존재 에 대해 시험 하 였 다 ( 도 23 c ) . 비드 ( 분취 량 ) 를 아연 - 특이 적 프로브 TSQ 로 염색 시키 고 , 현광 현미경 하 에서 형광 을 관찰 하 고 , 상대 형광 강도 를 수득 하 였 다 . 이후 , 단백질 을 5 분 동안 56 ℃ 에서 변성 시키 고 , 볼 텍 싱 ( vortexing ) 시키 고 , 원심 분리 시키 고 , 상기 용액 으로부터 다시 측정 하 였 다 . 상기 검정 은 TSQ ( Mol Probe ) 및 교정 을 위한 아연 의 원자 표준 용액 ( Sigma ) 을 이용 한다 . 차트 는 재조합 야생 형 ( WT ) MG 53 , C 29 L 돌연변이 ( C 29 L ) 및 이중 돌연변이 ( DM ) 에 결합 하 는 Zn 의 양 을 나타낸다 . 둘 모두 의 돌연변이 는 TRIM 도메인 의 Ring 모티프 에 위치 된다 . 데이터 는 평균 ± S . D . 로 제시 된다 . * P < 0 . 05 , ** 야생 형 에 비해 P < 0 . 001 ; n = 4 ~ 5 .