본 발명자 들 은 BBB 횡단 을 위한 조직 - 기능 상관 관계 ( structure - function correlate ) 를 확인 하 기 위해 상이 한 캡시드 도메인 의 비교 분석 을 수행 했 다 . 본 발명자 들 은 DNA 셔플 링 을 통해 AAV 1 / rh . 10 도메인 스왑 라이브러리 를 생성 했 다 . 본 발명자 들 은 AAV 1 및 AAVrh . 10 이 BBB 를 통과 하 는 능력 이 현저 하 게 상이 하 고 그 들 의 캡시드 ( Cap ) 유전자 에 의해 공유 되 는 서열 상동성 ( 85 %) 때문 에 이 들 을 DNA 셔플 링 을 위한 모 캡시드 서열 로 선택 했 다 . 그 후 , 36 종 의 키메라 캡시드 서열 을 클론 으로 단리 하 고 ( clonally isolated ) 시퀀싱 했 다 . 이 라이브러리 로부터 생성 된 변이체 는 DNA 및 아미노산 수준 에서 상당 한 다양 성 을 보였 다 . 서열 정렬 은 다양 한 도메인 스왑 ( a spectrum of domain swaps ) 을 밝혔 고 , 본 발명자 들 은 이 들 을 AAV 1 부터 AAVrh . 10 까지 상동성 의 오름차순 으로 구성 했 다 ( 도 4 A , 상단 부터 하단 까지 ) . 이 패널 의 클론 을 근접 - 결합 수 ( neighbor - joining tree ) 를 작성 하 는 것 에 의해 계통 발생 적 으로 더 규명 하 였 고 , 이 는 변이체 들 을 보다 AAV - 1 유사 ( 클레이드 A ) 또는 보다 AAVrh . 10 - 유사 ( 클레이드 E ) 로 광범위 하 게 분류 하 였 다 ( 도 4 B ) . 그 후 , 조립 이나 패 키 징 에 결함 이 있 는 캡시드 를 연구 로부터 배제 시키 기 위한 상대 적 역가 를 확립 하 기 위해 소규모 ( small - scale ) 벡터 생산 을 이용 하 였 다 . 인 비보 에서 최초 스크리닝 ( initial screening ) 을 위한 키메라 캡시드 변이체 의 목록 을 더 축소 하 기 위해 3 - 겹 대칭축 에 있 는 핵심 표면 도메인 / 잔기 들 을 강조 하 는 , 모 및 대표 적 인 키메라 캡시드 삼 량 체의 상동성 - 기반 구조 적 모델 을 생성 하 였 다 ( 도 4 C ) . 구조 분석 에 근거 하 여 10 개 의 키메라 캡시드 변이체 를 선택 하 였 고 , 이 들 중 에 6 개 가 재조합 벡터 ( scGFP 또는 ssLuc 형질전환 카세트 패 키 징 함 ) 를 모 AAV 1 및 AAVrh . 10 벡터 와 유사 한 역가 로 생성 했 다 . 그 후 , 이 변이체 들 을 더 스크리닝 하 였 다 .