상기 실시 예 1 에서 정제 한 단백질 을 활용 하 여 KRAS 야생 형 단백질 은 50 mM 트리스 - HCl ( pH 8 ) , 1 mM DTT , 및 2 mM MgCl 2 을 포함 하 는 GDP 교환 버퍼 로 투석 한 이후 , 45 배 의 GDP 와 약 20 mM 의 EDTA 를 첨가 한 뒤 30 ° C 에서 30 분 간 인 큐 베이 션 하 고 50 mM 의 MgCl 2 을 추가 로 첨가 한 후 에 4 ° C 에서 30 분 간 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이후 25 mM 트리스 - HCl ( pH 7 . 5 ) , 100 mM NaCl , 2 mM MgCl 2 , 1 mM DTT , 및 10 % 글리세롤 을 포함 하 는 완충 용액 으로 투석 하 였 다 . KRASG 12 D 단백질 은 40 mM 트리스 - HCl ( pH 7 . 5 ) , 200 mM ( NH 4 ) 2 SO 4 , 10 μ M ZnCl 2 , 및 5 mM DTT GMPPNP 를 포함 하 는 교환 버퍼 로 투석 한 후 , 45 배 의 GMPPNP 와 알 칼라인 포스 페이트 비드 를 첨가 하 여 25 ° C 에서 90 분 간 인 큐 베이 션 하 고 , 이후 비드 를 제거 한 뒤 KRAS 야생 형 단백질 과 동일 한 완충 용액 으로 투석 하 였 다 .