표적 - 적중 부위 이외 의 게놈 내 의 부위 에서 삽입 올리고 의 검출 이 Cas 9 의 잠재 적 인 표적 - 외 효과 를 식별 하 긴 하 지만 , 잠재 적 인 표적 - 외 부위 의 표적 화 된 딥 ( deep ) 시퀀싱 을 사용 하 여 , 잠재 적 인 부위 가 진실로 Cas 9 에 의해 절단 되 는 표적 - 외 부위 인지 결정 할 수 있 다 . 이 를 위해 , HEK - 293 _ Cas 9 GFP 세포 를 , 삽입 올리고 가 없이 이전 의 2 개 실험 에서 사용 된 gRNA ( 25 nM crRNA : tracr 에서 ) 로 유사 하 게 형질 감염 시킨 실험 을 수행 하 였 다 . 도 29 및 도 30 에서 도시 된 식별 된 잠재 적 인 표적 - 외 부위 각각 의 앰 플리 콘 딥 시퀀싱 을 사용 하 여 , HEK - 293 _ Cas 9 GFP 세포주 내 의 잠재 적 인 표적 - 외 부위 에 삽입 결실 ( Cas 9 절단 사건 을 가리킴 ) 이 존재 하 는지 식별 하 였 다 . 이러 한 실험 의 결과 는 , 올리 고 삽입 검정 법 에 의해 식별 된 잠재 적 인 표적 - 외 부위 대부분 이 gRNA 의 형질 감염 후 검출 가능 한 삽입 결실 을 갖 지 않 았 으며 , 이때 하 기 표 14 에 제공 된 바 와 같이 몇 가지 예외 가 있 었 음 을 실증 하 였 다 . 주지 하 자면 , 잠재 적 인 표적 - 외 를 검출 하 기 위해 이 들 실험 에 사용 된 HEK - 293 _ Cas 9 GFP 세포 는 Cas 9 를 구성 적 으로 과 발현 하 며 , " 이 는 다양 한 관심 세포 유형 ( 예 를 들 어 CD 34 + HSC ) 에서 일시 적 인 전달 양상 ( 예 를 들 어 RNP 전달 ) 과 비교 하 여 더 높 은 수 의 잠재 적 인 표적 - 외 "" 히트 ( hit ) "" 를 초래 하 는 경향 이 있 다 . "