이전 RNA - seq 분석 을 통하 여 얻 은 CYP 1 A 서열 을 참고 하 여 유전자 특이 적 프라이머 ( Gene specific primer , GSP ) 를 제작 하 였 다 ( 표 1 ) . 정제 , 절단 및 어댑터 ( adaptor ) 부착 된 gDNA 를 Advantage 2 PCR 키트 ( Clontech ) 와 GSP 1 , adaptor primer 1 ( AP 1 , 표 1 ) 을 이용 하 여 1 차 PCR 을 수행 하 였 다 . 50 배 희석 한 1 차 PCR 산물 , GSP 2 및 AP 2 를 이용 하 여 2 차 PCR 을 진행 하 였 고 , 아가로스 겔 로 산물 확인 후 타 겟 밴드 를 선택 하 였 고 , QIA quick Gel Extraction 키트 ( Qiagen ) 로 DNA 를 추출 하 였 다 ( 도 1 ) . 추출 한 DNA 로 클로닝 ( TOPO ® TA Cloning ® Kit , Invitrogen , Carlsbad , CA ) , 형질전환 ( Transformation ) ( ECOS ™ 101 Competent cells [ DH 5 a ] , Yeastern Biotech Co . , 타이완 ) 을 하 였 고 , 암피실린 선별 ( ampicillin selection ) , 블루 - 화이트 어세 이 ( blue - white assay ) 를 통하 여 형질전환 ( transformation ) 된 콜로니 ( colony ) 를 획득 하 였 다 . 이후 , 콜로니 를 액체 배지 에 배양 하 여 , 플라스미드 ( plasmid ) 를 추출 하 였 고 , 제한 효소 EcoRI 으로 절단 하 여 DNA 삽입 여부 를 확인 하 였 다 . DNA 가 삽입 된 플라스미드 를 제노 텍 ( 대전 , 대한민국 ) 을 통하 여 서열 분석 을 진행 하 였 다 . BLASTn 을 통하 여 분석 한 서열 이 NCBI 에 등록 된 넙치 CYP 1 A 서열 ( XM _ 020080232 . 1 ; AJ 132353 . 1 ) 과 일치 함 을 확인 하 였 다 . 이 후 , 분석 된 서열 을 토대 로 넙치 genome 데이터 로부터 CYP 1 A 유전자 서열 을 찾 았 으며 , 프로모터 서열 을 확보 하 였 다 .