생존 력 에 대한 평가 후 , 면역 염색 을 위해 플레이트 를 준비 하 였 다 . 간략 하 게 , 16 % 파라포름알데히드 ( Electron Microscopy Sciences ) 를 실온 에서 10 분 동안 4 % 의 최종 농도 로 되 도록 각 웰 에 첨가 하 였 다 . 이 시간 후 , 고정 물 을 흡인 시키 고 세포 를 PBS 로 3 회 세척 하 였 다 . 30 분 동안 차단 용액 ( PBS 중 1 % 소 혈청 알부민 ) 을 사용 하 여 세포 를 차단 하 였 다 . 이 시간 후 , 차단 시약 을 흡인 시키 고 면역 염색 시약 을 첨가 하 였 다 . 면역 염색 시약 은 차단 완충액 에서 희석 시킨 비오틴 접합 된 - PD - L 1 항체 ( eBioscience ) 로 구성 되 었 다 . 플레이트 를 밀봉 하 고 밤새 4 C 에서 유지 시켰 다 . 다음 날 , 플레이트 를 PBS 로 3 회 세척 한 다음 실온 에서 1 시간 동안 차단 완충액 에서 희석 시킨 스 트 렙 타비 딘 - 루시퍼 라 제 융합 단백질 ( Invivogen ) 을 첨가 하 였 다 . 이 단계 후 , 플레이트 를 PBS 로 3 회 세척 하 였 다 . 최종 세척 후 , PBS 를 흡인 시키 고 웰 당 30 uL 의 QUANTI - Luc ™ ( Invivogen ) 를 첨가 하 였 다 . 플레이트 를 즉시 플레이트 리더 ( Victor 3 V plate reader , 0 . 1 s ) 에서 판독 하 고 루시퍼 라 제 활성 을 측정 하 였 다 .