시험관 내 성숙 의 시작 41 시간 후 , COCs 의 난구 세포 외층 을 Hepes - 완충 된 TCM 199 중 의 1 mg / ㎖ 히알루로니다아제 에서 반복 적 인 피펫 팅 에 의해 제거 하 였 다 . 이 시점 에서 ( 달리 나타내 는 경우 를 제외 ) 모든 조작 을 39 ℃ 로 조절 된 가열 단계 에서 수행 하 였 고 , 난모 세포 를 처리 하 기 위해 사용 한 모든 방울 은 미네랄 오일 로 덮인 20 ㎕ 의 부피 였 다 . 난 모세포 를 T 33 ( T 는 Hepes - 완충 된 TCM 199 배지 ; 숫자 는 소 혈청 ( CS ) 보충 제 의 백분율 ( v / v ) 을 의미 하 며 , 여기 서 는 33 %) 에 용해 된 3 . 3 mg / ㎖ 프로 나제 에서 20 초 동안 간단 하 게 배양 하 였 고 , T 2 및 T 20 방울 로 재빨리 세척 하 였 다 . 부분 적 으로 분해 되 었 지만 여전히 눈 에 보이 는 투명대 를 가지 는 난모 세포 를 2 . 5 ㎍/㎖ 시토 칼라 신 B ( CB ) 로 보충 한 T 2 방울 에서 정렬 시켰 다 . 정교 하 게 당겨 지 고 불로 연마 된 유리 피펫 으로 , 난모 세포 를 회전 시켜 표면 에서 극체 ( PB ) 를 찾 고 , 방향 성 을 갖 는 이등분 을 마이크 로 블레이드 ( AB Technology , Pullman , WA , USA ) 로 입체 현미경 조작 하 에서 수동 으로 수행 하 였 다 . 따라서 , 난모 세포 세포질 의 절반 미만 을 ( 배출 또는 PB 에 가까운 ) 남 아 있 는 추정 세포질체 로부터 제거 하 였 다 . 세포질체 를 T 2 방울 로 두 번 세척 하 고 , T 10 방울 에서 수집 하 였 다 .