SDS - PAGE 분석 의 경우 , NuPAGE 샘플 환원제 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 중 의 PFF 샘플 을 10 분 동안 가열 블록 ( 70 ℃) 에서 인 큐 베이 션 하 고 , 200 V 의 정전 압 하 에 4 - 12 % 비스 - 트리스 겔 을 사용 하 는 SDS - PAGE ( 1 μ g / 10 μ l / 레인 ) ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 에 의해 MES SDS 구동 완충제 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 를 사용 하 여 분리 하 고 , 이어서 정전 압 50 V 하 에 , 1 . 5 시간 에 10 % 메탄올 을 함유 하 는 트리스 / 글리신 완충제 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 를 사용 하 여 니트 로 셀룰로스 막 ( 0 . 45 um 세공 크기 , 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 으로 옮겼 다 . 네이티브 - PAGE ( Native - PAGE ) 의 경우 , PFF 샘플 을 정전 압 150 V 하 에 3 - 12 % 비스 - 트리스 단백질 겔 을 사용 하 는 네이티브 PAGE ( 1 μ g / 10 μ l / 레인 ) ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 에 의해 네이티브 PAGE 구동 완충제 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 를 사용 하 여 분리 하 고 , 이어서 정전 압 50 V 하 에 , 1 . 5 시간 에 NuPAGE 전송 완충제 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 를 사용 하 여 PVDF 막 ( 0 . 45 um 세공 크기 , 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 으로 옮겼 다 . PVDF 막 을 메탄올 로 30 초 , dH 20 로 2 분 및 전송 완충제 로 10 분 동안 전처리 하 였 다 . 막 을 0 . 1 % 트윈 / TBS 중 의 5 % 탈지 분유 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 월섬 ) 로 RT 에서 2 시간 동안 차단 한 후 , 1 % BSA / 0 . 1 % 트윈 / TBS 중 에 1 : 1000 으로 희석 된 1 차 항체 4 B 12 ( 바이오 레전드 ( BioLegend ) , 캘리포니아주 샌디에고 ) 와 함께 4 ℃ 에서 밤새 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 막 을 0 . 1 % 트윈 / TBS 로 3 회 세척 한 후 ( 각각 5 ~ 10 분 세척 ) , 1 % BSA / 0 . 1 % 트윈 / TBS 중 에 1 : 10 , 000 으로 희석 된 항 - 마우스 IgG ( 잭슨 이 뮤 노리 서 치 , 펜 실베 니 아주 웨스트 그로브 , 퍼 옥시 다제 접합 된 친화 도 정제 된 Fab 2 ) 와 함께 RT 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 이어서 , 막 을 상기 와 같이 3 회 세척 한 다음 , 슈퍼 시그널 웨스트 펨토 맥시멈 ( SuperSignal West Femto Maximum ) 감수성 기질 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 과 함께 5 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 검출 은 GE 아머샴 ( GE Amersham ) 이미 저 600 을 사용 하 여 수행 하 였 다 . 매직 마크 ( MagicMark ) ™ XP 웨스턴 단백질 표준물 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 및 시 블 루 플러스 2 ( SeeBlue plus 2 ) ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 , 매사추세츠주 월섬 ) 를 SDS - PAGE 에 사용 하 였 다 . 네이티브 마크 비 염색 단백질 표준물 ( 인 비트 로 젠 ( Invitrogen ) ) 을 천연 겔 에 사용 하 였 다 . 세 척 완충제 ( TBST ) 는 트리스 완충 염수 중 0 . 1 % 트윈 - 20 으로 이루 어 졌 다 .