또한 , 소정 의 gRNA 분자 가 표적 세포 유형 의 게놈 내 의 표적 - 외 서열 ( 예 를 들 어 HBG 1 및 / 또는 HBG 2 프로모터 영역 의 외부 의 표적 - 외 서열 ) 에서 삽입 결실 을 생성 하 지 않 거나 , 표적 부위 에서 의 삽입 결실 생성 빈도 에 비해 표적 - 외 부위 ( HBG 1 및 / 또는 HBG 2 프로모터 영역 의 외부 의 표적 - 외 서열 ) 에서 매우 낮 은 빈도 의 ( 예 를 들 어 집단 내 에서 5 % 미만 의 세포 에서 ) 삽입 결실 을 생산 하 는 것 으로 발견 되 었 다 . 따라서 , 본 발명 은 , 표적 세포 유형 에서 표적 - 외 삽입 결실 형성 을 나타내 지 않 거나 , 5 % 미만 의 표적 - 외 삽입 결실 형성 빈도 , 예 를 들 어 HBG 1 및 / 또는 HBG 2 프로모터 영역 의 외부 에서 임의 의 표적 - 외 부위 에서 5 % 미만 의 빈도 의 삽입 결실 을 생산 하 는 gRNA 분자 및 CRISPR 시스템 을 제공 한다 . 실시 형태 에서 , 본 발명 은 표적 세포 유형 에서 임의 의 표적 - 외 삽입 결실 형성 을 나타내 지 않 는 gRNA 분자 및 CRISPR 시스템 을 제공 한다 . 따라서 , 본 발명 은 추가 로 , 예 를 들 어 본원 에 기재 된 바 와 같 은 세포 , 예 를 들 어 세포 , 예 를 들 어 HSPC 집단 을 제공 하 며 , 이 는 본원 에 기재 된 gRNA 분자 의 표적 부위 에 또는 부근 에 삽입 결실 ( 예 를 들 어 프레임 시프트 삽입 결실 , 또는 예 를 들 어 본원 에 기재 된 바 와 같 은 주어진 gRNA / CRISPR 시스템 에 의해 생산 된 상위 5 개 삽입 결실 중 임의 의 하나 ) 을 포함 하 지만 , gRNA 분자 의 임의 의 표적 - 외 부위 에서 삽입 결실 , 예 를 들 어 HBG 1 및 / 또는 HBG 2 프로모터 영역 의 외부 에서 임의 의 표적 - 외 부위 에서 삽입 결실 을 포함 하 지 않 는다 . 다른 실시 형태 에서 , 본 발명 은 추가 로 , 예 를 들 어 본원 에 기재 된 바 와 같 은 세포 , 예 를 들 어 HSPC 의 집단 을 제공 하 며 , 이 는 본원 에 기재 된 gRNA 분자 의 표적 부위 에 또는 부근 에 삽입 결실 ( 예 를 들 어 프레임 시프트 삽입 결실 , 또는 예 를 들 어 본원 에 기재 된 바 와 같 은 주어진 gRNA / CRISPR 시스템 에 의해 생산 된 상위 5 개 삽입 결실 중 임의 의 하나 ) 을 갖 는 세포 를 적어도 20 %, 예 를 들 어 적어도 30 %, 예 를 들 어 적어도 40 %, 예 를 들 어 적어도 50 %, 예 를 들 어 적어도 60 %, 예 를 들 어 적어도 70 %, 예 를 들 어 적어도 75 % 포함 하 지만 , gRNA 분자 의 임의 의 표적 - 외 부위 에서 삽입 결실 , 예 를 들 어 HBG 1 및 / 또는 HBG 2 프로모터 영역 의 외부 에서 임의 의 표적 - 외 부위 에서 삽입 결실 을 포함 하 는 세포 를 5 % 미만 , 예 를 들 어 4 % 미만 , 3 % 미만 , 2 % 미만 또는 1 % 미만 으로 포함 한다 . 다른 실시 형태 에서 , 본 발명 은 추가 로 , 예 를 들 어 본원 에 기재 된 바 와 같 은 세포 , 예 를 들 어 HSPC 의 집단 을 제공 하 며 , 이 는 HBG 1 및 / 또는 HBG 2 프로모터 영역 내 에 ( 예 를 들 어 gRNA 의 표적 서열 에 적어도 90 % 상동성 인 서열 에서 또는 그 부근 에서 ) 삽입 결실 을 갖 는 세포 를 적어도 20 %, 예 를 들 어 적어도 30 %, 예 를 들 어 적어도 40 %, 예 를 들 어 적어도 50 %, 예 를 들 어 적어도 60 %, 예 를 들 어 적어도 70 %, 예 를 들 어 적어도 75 %, 예 를 들 어 적어도 80 %, 예 를 들 어 적어도 90 %, 예 를 들 어 적어도 95 % 포함 하 지만 , HBG 1 및 / 또는 HBG 2 프로모터 영역 의 외부 에서 임의 의 표적 - 외 부위 에서 또는 부근 에서 삽입 결실 을 포함 하 는 세포 를 5 % 미만 , 예 를 들 어 4 % 미만 , 3 % 미만 , 2 % 미만 또는 1 % 미만 포함 한다 . 실시 형태 에서 , 표적 - 외 삽입 결실 은 유전자 의 서열 내 에서 , 예 를 들 어 유전자 의 코딩 서열 내 에서 형성 된다 . 실시 형태 에서 , 어떠 한 표적 - 외 삽입 결실 도 , 예 를 들 어 본원 에 기재 된 바 와 같 은 관심 세포 에서 유전자 의 서열 내 에서 , 예 를 들 어 유전자 의 코딩 서열 내 에서 형성 되 지 않 는다 .