파이로 시퀀싱 ( pyrosequencing ) 을 위해 추출 한 DNA 를 16 S rRNA 유전자 의 V 1 - V 3 영역 을 표적 으로 하 는 바코드 프라이머 [ Forward : 5 '- barcode - AGAGTTTGATCMTGGCTCAG - 3 '( 서열 번호 1 ) , Reverse : 5 '- ATTACCGCGGCTGCTGG - 3 '( 서열 번호 2 ) ] 를 사용 하 여 증폭 하 였 다 . DNA 증폭 은 94 ℃ 에서 5 분 간 변성 후 , 30 cycles 의 94 ℃ 에서 30 초 동안 변성 , 55 ℃ 에서 30 초 동안 어닐링 , 72 ℃ 에서 30 초 동안 신장 후 마지막 신장 72 ℃ 에서 7 분 동안 이루 어 졌 다 . 증폭 산물 은 AMPure XP bead kit ( Agencout Bioscience , Beverly , MA , USA ) 를 이용 하 여 정제 하 였 다 . 시퀀싱 은 Roche / 454 FLX Titanium system ( Roche , Mannheim , Germany ) 를 이용 하 여 진행 하 였 다 .