환자 CSF 는 PrecisionMed 에서 구입 하 였 다 . 단백질 A 비드 ( SureBeads ; Bio - Rad ) 는 2 % BSA 에서 1 시간 동안 24 ℃ 에서 차단 시켰 고 , 그 다음 TBST 에서 3 회 세척 되 었 다 . Tween ® 20 ( 0 . 02 %) 및 EDTA - 없 는 ( free ) 완전 프로테아제 억제제 ( Roche ) 는 모두 항체 와 의 항온 처리 전 에 CSF 에 첨가 되 었 다 . CSF ( 50 μ L ) 는 2 μ g 의 항체 와 함께 , 1 시간 동안 4 ℃ 에서 항온 처리 되 었 다 . CSF / 항체 혼합물 은 100 μ L 의 차단 된 / 세척 된 비드 에 추가 되 었 고 , 18 시간 동안 4 ℃ 에서 항온 처리 되 었 다 . 결합 안 된 분획 을 수집 하 고 , 비드 는 1 mL 의 세 척 완충제 ( 50 mM Tris pH 7 , 100 mM NaCl , 0 . 5 % TritonX - 100 ) 으로 3 회 세 척 후 , 1 mL PBS 로 1 회 세척 되 었 다 . 이어서 결합 된 분획 을 10 분 동안 45 μ L 용리 완충액 ( Pierce ) 과 함께 항온 처리 함 으로써 용리 시키 고 , 5 μ L 의 Tris 완충액 ( pH 8 . 8 ) 를 첨가 하 여 중화 시켰 다 .