그 후 , 상기 발견 을 내인성 로커스 를 타 겟 팅 함 으로써 추가 로 검증 하 였 다 . 따라서 , evoCas 9 의 절단 활성 을 각각 의 로커스 에서 의 야생 형 SpCas 9 의 그것 과 비교 하 기 위해 이전 에 시험 된 게놈 타 겟 부위 의 군 을 선택 하 였 다 . 또한 , SpCas 9 - HF 1 을 또한 추가 의 기준 으로서 비교 에 도입 하 였 다 . 상이 한 로커스 를 타 겟 팅 하 는 sgRNA 와 함께 각각 의 SpCas 9 변이체 의 293 T 세포 에서 의 형질 감염 후 , indel 형성 을 각각 의 타 겟 부위 에 비해 생어 - 시퀀싱 된 앰 플리 콘 상 의 분해 에 의한 indel 의 추적 ( TIDE : Tracking of Indels by Decomposition ) 소프트웨어 패키지 를 사용 함 으로써 분석 하 였 다 ( Brinkman EK et al . , Nucleic Acids Res . 2014 , 42 ( 22 ) : e 168 ) . 로커스 의 대다수 에 대해 , 본 발명자 들 은 야생 형 SpCas 9 및 evoCas 9 사이 의 타 겟 팅 효율 의 임의 의 주요 한 차이 를 관찰 하 지 않 았 으며 , 후자 는 야생 형 단백질 의 그것 의 80 % 인 전체 평균 활성 을 갖 는 일반 적 으로 약간 덜 활성 이 었 다 ( 도 7 a 및 도 7 b ) . 한 타 겟 부위 인 ZSCAN 2 로커스 에 대해 , 본 발명자 들 은 매우 비약 한 절단 효율 을 관찰 하 였으며 , 이러 한 거동 에 대한 자명 한 설명 은 없 다 ( 도 7 a ) . SpCas 9 - HF 1 변이체 는 야생 형 에 비해 60 % 인 전체 평균 활성 으로 전체 적 으로 더 낮 은 절단 효율 을 제시 하 였 다 ( 도 7 a 및 도 7 b ) . 이 는 이전 에 공개 된 관찰 ( Kleinstiver BP et al . , Nature . 2016 , 529 ( 7587 ) : 490 - 5 ) 에 따른 것 은 아니 며 , 이러 한 불 일치 는 상이 한 실험 절차 에 기인 할 수 있 었 다고 추측 하 는 것 이 가능 하 다 . 이 들 데이터 는 evoCas 9 가 시험 된 실험 조건 에서 이전 에 보 고 된 SpCas 9 - HF 1 변이체 를 능가 하 는 내인성 로커스 의 패널 에 대한 거의 야생 형 수준 의 온 - 타 겟 활성 을 보유 함 을 입증 한다 .