GPRC 5 D 를 발현 하 고 있 는 인간 다발 성 골수종 세포주 KMS - 34 세포 를 5 % FBS 함유 PBS 로 2 × 106 세포 / mL 의 농도 로 조제 하 고 , 100 μ L / well 로 96 - well U 바닥 마이크 로 플레이트 에 파종 하 고 , 원심 후 상청 을 제거 하 였 다 . 7 . 5 μ g / mL 로 실시 예 1 ) - 7 에서 조제 한 래트 항 - GPRC 5 D 항체 ( 2 A 4 , 2 B 1 , 및 7 B 4 ) 또는 Rat IgG 2 b isotype control 항체 ( MBL 사 ) 를 100 μ L / well 첨가 하 고 , 실시 예 2 ) - 2 - 1 에서 사용 한 2 종류 의 펩티드 를 PBS 로 17 ng / mL 내지 34 μ g / mL 로 조제 하 고 , 항체 희석 액 이 들 어 있 는 well 에 100 μ L / well 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 1 시간 정치 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 2 회 세정 한 후 , 5 % FBS 함유 PBS 로 100 배 희석 한 PE Goat Anti - Rat Ab ( BD 사 ) 를 100 μ L / well 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 1 시간 정치 하 였 다 . 5 % FBS 함유 PBS 로 2 회 세정 한 후 , 5 % FBS 함유 PBS 로 재현 탁 시키 고 , 플로 사이토 미터 ( FACSCanto ( 상표 ) II ; BD 사 ) 로 검출 을 행하 였 다 . 데이터 해석 은 Flowjo ( Treestar 사 ) 로 행하 였 다 . 세포 획 분 의 PE 형광 강도 의 히스토그램 을 작성 하 여 , 평균 형광 강도 ( MFI ) 를 산출 하 고 , GPRC 5 D 항체 의 MFI 값 으로부터 control 항체 의 MFI 값 을 빼 서 MFI 값 의 상대 치 ( rMFI ) 를 산출 하 였 다 . 도 4 ( 분자 내 다 이 설파이드 결합 있 음 ( A ) 또는 없 음 ( B ) ) 에 나타내 는 바 와 같이 , 다 이 설파이드 결합 의 유무 에 관계없이 , 2 B 1 은 인간 GPRC 5 D 아미노 말단 펩티드 를 첨가 하 면 결합 이 저해 되 는 것 이 나타났 다 . 한편 , 2 A 4 및 7 B 4 항체 는 인간 GPRC 5 D 의 아미노 말단 펩티드 의 첨가 로 는 결합 이 저해 되 지 않 는 것 이 나타났 다 . 이상 의 결과 로부터 , 2 B 1 항체 의 에 피토프 는 인간 GPRC 5 D 의 아미노 말단 영역 에 존재 하 고 , 2 A 4 및 7 B 4 항체 의 에 피토프 는 아미노 말단 이외 의 영역 에 존재 하 는 것 이 시사 되 었 다 .