실험 군 은 100 mm 플레이트 에 컨 플 루 언 트 하 게 배양 된 B 16 F 10 세포 에 200 nM α - MSH 를 24 시간 동안 처리 한 후 천마 추출물 을 첨가 하 여 72 시간 동안 배양 하 였 다 . 천마 추출물 이 처리 된 세포 를 RIPA 버퍼 로 용해 ( lysis ) 시켜 WCL ( Whole cell lysate ) 을 제조 하 였 다 . 제조 된 WCL 을 BCA 방법 으로 정량 한 후 20 μ g WCL 는 면역 블 럿팅 ( immunoblotting ) 방법 으로 분석 하 였 다 . 상기 면역 블 럿팅 에 는 10 % SDS - PAGE ( Bio - rad ) , PVDF membrane ( Roche ) , 1 차 항체 ( MITF , tyrosinase , Trp 1 , and Trp 2 or β - actin ; Santa Cruz Biotechnology , Dallas , TX , USA ) , 2 차 항체 ( horseradish peroxidase - conjugated secondary antibody ; Santa Cruz ) 를 사용 하 였 다 . 또한 chemiluminescence 방법 ( SuperSignal ; Pierce Biotechnology , Rockford , IL , USA ) 을 이용 하 여 면역 블 럿팅을 수행 하 였 다 . 면역 블 럿팅 분석 결과 는 β - actin 으로 보정 하 여 단백질 발 현량 을 계산 하 였 다 .