TNF - 결합 Fn 3 ( 서열 3 및 서열 4 ) 및 야생 형 Fn 3 ( 서열 1 및 서열 2 ) 서열 에 상응 하 는 상기 설명 된 DNA 서열 을 이 . 콜라 이 에서 의 발현 을 위해 최적 화 하 고 , 게네 아르트 아 게 ( 독일 ) 에서 제조 하 였 다 . C - 말단 앰버 ( amber ) 코돈 의 삽입 을 위해 , 프라이머 12 ( 서열 27 ) 및 13 ( 서열 28 ) 을 사용 하 여 TNF - 결합 서열 ( 서열 3 및 서열 4 ) 를 증폭 시키 고 , 프라이머 12 ( 서열 27 ) 및 14 ( 서열 29 ) 를 사용 하 여 야생 형 서열 ( 서열 1 및 서열 2 ) 을 증폭 시켰 다 . PCR 생산물 을 NdeI / BamHI 로 소화 시키 고 pET 9 a 의 대응 하 는 부위 내 로 클로닝 하 였 다 . 또한 , 프라이머 15 ( 서열 30 ) 및 16 ( 서열 31 ) 을 사용 하 여 TNF - 결합 서열 ( 서열 3 및 서열 4 ) 을 또한 증폭 시키 고 , 프라이머 15 ( 서열 30 ) 및 17 ( 서열 32 ) 을 사용 하 여 야생 형 서열 ( 서열 1 및 서열 2 ) 을 증폭 시켰 다 . PCR 생산물 을 BamHI / HindIII 로 소화 시키 고 , dsbA 신호 서열 을 갖 는 pQE - 80 L 의 대응 하 는 부위 내 로 클로닝 하 였 다 .