BLT 2 mRNA 에 대한 안티 센스 프로브 제작 을 위해 , 인간 BLT 2 발현 플라스미드 pcDNA 3 - BLT 2 를 pcDNA 3 벡터 를 이용 하 여 변형 시켜 pcDNA 3 - 역방향 BLT 2 를 제작 한 후 , DNA 서열 분석 으로 확인 하 였 다 . pcDNA 3 - 역방향 BLT 2 를 아펠 ( Afel ) 제한 효소 ( MBI Fermentas Ltd ) 를 이용 하 여 선형 화 시킨 후 , 선형 화 된 벡터 를 T 7 RNA 중합효소 와 DIG ( digoxigenin ) 가 부착 된 RNA 혼합물 ( Roche , Germany ) 을 이용 하 여 전사 시켰 다 . 전사 된 프로브 를 에탄올 로 침전 시키 고 , 260 nm 에서 흡광도 를 측정 하 여 정량 분석 하 였 다 . Petagen Inc . ( Korea ) 로부터 얻 은 여러 암 조직 샘플 과 이 에 맞 는 다수 의 정상 조직 을 자일렌 ( xylene ) 으로 탈 파라핀 ( deparaffinized ) 한 후 , 원위치 혼성 화 를 제조사 의 프로토콜 에 따라 원위치 혼성 화 키트 ( in situ hybridization detection kit ; InnoGenex , CA ) 를 이용 하 여 수행 하 였 다 . 간단히 , 탈 라파 핀 화 시킨 조직 을 프로테 이나 아제 K 로 처리 한 후 , RNase - 무 첨가 PBS 에서 1 % 포름알데하이드 로 고정 하 였 다 . DIG - 부착 된 프로브 를 37 ℃ 에서 16 시간 동안 혼성 화 시킨 후 , 안티 - DIG 항체 로 반응 시켰으며 , BCIP / NBT ( bromo - chloro - indolyl - phosphate / nitroblue tetrazolium chloride ) 시약 은 발색 을 위해 사용 되 었 다 . 메이어 의 헤마톡실린 은 카운터 ( counter ) 염색 에 사용 하 였 다 . BLT 발현 이 종양 의 병리학 적 전위 와 관계 된 것 인지 평가 하 기 위해 , 카이 - 스퀘어 ( Chi - square ) 테스트 를 이용 하 여 IHC 를 수행 하 고 조사 하 였 다 . 도 4 b 는 유방암 환자 에서 BLT 2 의 발현 이 증가 되 었 음 을 보여준다 .