보다 구체 적 으로 설명 하 면 다음 과 같 다 . 먼저 각 HUVEC 을 추출 완충액 ( pH 7 . 9 HEPES 20 mM , 20 %( v / v ) 글리세롤 , 1 %( v / v ) NP - 40 , MgCl 2 1 mM , EDTA 0 . 5 mM , EGTA 0 . 1 mM , PMSF 1 mM , DTT 0 . 1 M 및 프로테아제 억제제 의 혼합물 ) 으로 용해 하 였 다 . 브래드퍼드 방법 ( Bio - Rad 사 , 미국 ) 으로 단백질 농도 가 500 ㎍ 이 되 도록 조절 한 다음 , 암실 실온 에서 1 시간 동안 각각 형광 물질 로 표지 하 였 다 . 이때 , 안 지 오 제닌 이 처리 된 HUVEC ( ( +) ANG 로 표기 ) 및 처리 되 지 않 은 HUVEC ( ( -) ANG 로 표기 ) 의 단백질 을 각각 Cy 5 또는 Cy 3 로 표지 하 였 다 . ( -) ANG - Cy 3 0 . 5 mg 과 ( -) ANG - Cy 5 0 . 5 mg 의 혼합물 을 대 조군 으로 , (-) ANG - Cy 3 0 . 5 mg 과 ( +) ANG - Cy 5 0 . 5 mg 의 혼합물 을 실험 군 정한 다음 표지 하 는 데 사용 되 지 않 은 유리 염료 를 컬 럼 여과 로 제거 하 였 다 . 표지 된 단백질 을 모으 고 , PD - 10 탈염 ( desalting ) 컬럼 ( Amersham Bioscience 사 , 스웨덴 ) 을 사용 하 여 결합 하 지 않 은 유리 염료 로부터 분리 하 였 다 .