하 기 설명 되 는 각종 융합 단백질 상 에서 ELISA 를 수행 하 였 다 . 간략 하 게 는 , 96 개 의 웰 플레이트 ( Pierce , Cat # 15041 ) 를 , 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 pH 9 . 5 의 0 . 1 M 탄산염 내 1 . 0 ㎍/ ml 시약 으로 코팅 하 였 다 . 이후 , 플레이트 를 RT 에서 1 시간 동안 TBS ( 200 ㎕/ 웰 ) 중 0 . 3 % 탈지 분유 ( NFD ) 로 차단 시켰 다 . 플레이트 를 이후 세척 완충액 ( 1 × TBST : 0 . 1 M Tris , 0 . 5 M NaCl , 0 . 05 % Tween 20 ) 으로 3 회 세척 하 였 다 . 희석 하 지 않 은 세포 배양액 상등 액 으로부터 또는 연속 3 × 희석 하 여 1 . 0 ㎍/ ml 로 정제 된 단백질 로부터 적정 을 웰 당 100 ㎕ 로 수행 하 고 , RT 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 희석 완충액 은 1 × TBS ( 0 . 1 M Tris , 0 . 5 M NaCl ) 중 1 % BSA 로 , 이어서 세 척 완충액 으로 3 회 세척 하 였 다 . 2 차 시약 , 예컨대 비오티 닐 화 - 시약 을 1 ㎍/ ml 농도 로 RT 에서 1 시간 동안 첨가 하 였 다 ( 필요 한 경우 ) . HRP - 컨 쥬 게이트 된 시약 을 1 : 2000 으로 첨가 하 고 , 웰 당 100 ㎕ 적용 하 고 , 암소 에서 1 시간 동안 RT 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 웰 당 100 ㎕ 1 - Step Ultra TMB - ELISA ( Thermo Fisher , Prod # 34028 ) 를 첨가 하 였 다 . 색상 이 전개 되 면 , 플레이트 를 405 nm 에서 판독 하 였 다 .