a ) BBS aroA 유전자 결손 비 병원 성 변이 주 생산 을 위하 여 , aroA 유전자 부위 중 에서 N - 말단 40 mer 와 C - 말단 40 mer 를 포함 하 는 카나마이신 내성 유전자 ( KanR ) 서열 을 PCR 로 증폭 한다 ( 도 1 참조 ) . 즉 , KanR 유전자 가 삽입 되 어 있 는 헬퍼 벡터 pKD 13 으로부터 KanR 을 증폭 하 는 데 사용 하 는 프라이머 양 말단 에 aroA 유전자 의 N - 말단 40 mer 를 5 '- 프라이머 에 추가 하 여 프라이머 를 합성 하 고 , 반 대로 aroA 유전자 C - 말단 40 mer 를 3 '- 프라이머 에 추가 하 여 합성 한 다음 , 상기 2 개 의 프라이머 를 이용 하 여 PCR 로 KanR 을 증폭 하 면 양 말단 에 각각 40 mer 씩 의 aroA 유전자 부위 를 갖 는 KanR 이 증폭 된다 ( 도 1 참조 ) .