마이크 로 타이 터 플레이트 에 his 또는 his - NDRG 2 항원 을 한 웰 당 각각 50 μ l ( 2 μ g / ml ) 씩 가하 여 플레이트 표면 에 부착 시키 고 , 반응 하 지 않 은 항원 은 세척 하 여 제거 하 였 다 . 하이브리도마 세포 의 배양액 을 각각 웰 에 50 μ l 씩 을 가하 여 1 시간 동안 반응 시킨 후 인산 완충 용액 - 트윈 20 ( PBST ) 용액 으로 충분히 세척 하 여 반응 하 지 않 은 배양액 을 제거 하 였 다 . 여기 에 염소 항 - 마우스 IgG - 호스 래 디쉬 퍼 옥시 다제 ( goat anti - mouse IgG - HRP ) ( Sigma , USA ) 를 가하 여 1 시간 동안 실온 에서 반응 시킨 다음 , PBST 용액 으로 충분히 세척 하 였 다 . 다음 퍼 옥시 다제 의 기질 용액 ( OPD ) 을 넣 어 반응 시키 고 , 그 반응 정도 는 490 nm 에서 흡광도 로 측정 하 였 다 .