인산 가용화 효소 활성 확인 을 위해 분리 균주 를 5 mL 의 R 2 A broth 배지 에 접종 한 다음 동일 배양 조건 에서 36 시간 배양 하 였 다 . 분리 균주 의 액체 배양액 을 이용 하 여 R 2 A agar 에 획선 도말 을 하 고 동일 조건 에서 36 시간 배양 하 였 다 . 배양 한 분리 균주 는 phosphatase 활성 을 측정 할 수 있 는 phosphatase broth 배지 ( Ca 2 ( PO 4 ) 2 5 g , sucrose 10 g , yeast extract 0 . 5 g , NH 4 NO 3 0 . 27 g , KCl 0 . 2 g , MgSO 4 · 7 H 2 O 0 . 1 g , MnSO 4 0 . 001 g , FeSO 4 · 7 H 2 O 0 . 001 g ) 에서 동일 조건 에서 24 시간 배양 하 였 다 . 배양액 1 mL 을 centrifugation 한 후 , 상등 액 200 μ L 를 취하 였 다 . 상등 액 이 든 tube 에 800 μ L 의 Molybdate reagent ( 6 N H 2 SO 4 : 2 . 5 % ammonium molybdate : 10 % ascorbic acid : H 2 O = 1 : 1 : 1 : 2 ) 를 넣 고 , 50 ℃, 20 분 간 반응 시킨다 . 배지 조성 내 calcium phosphate 가 분해 되 어 생성 되 는 인산 이온 이 Molybdate reagent 와 반응 하 면서 푸른색 을 띄 는 미생물 을 인산 가용화 효소 활성 이 있 는 균주 로 선정 하 였 다 .