CD 137 x TA 결합 분자 , DART - B , DART - D , DART - G 및 대 조군 분자 DART - 3 및 DART - 6 을 추가 적 으로 N 87 세포 ( 도 13 A ) 및 JIMT - 1 세포 ( 도 13 B ) 상 에 발현 된 HER 2 / neu 에 결합 하 는 능력 에 대하 여 평가 하 였 다 . 이러 한 평가 를 위하 여 , 100 μ L 의 HER 2 / neu 발현 표적 세포 ( 1 . 0 x 106 세포 / mL ) 및 100 μ L 의 일련 적 으로 희석 된 ( 5 - 또는 10 - 배 희석 ) 테스트 물품 ( 이중 특이 적 디아 바디 ) 을 미세 역가 검정 플레이트 ( 들 ) 의 각 웰 에 첨가 하 고 , 혼합 하 고 실온 에서 45 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세포 를 FACS 완충액 으로 세척 한 후 이 차 항체 ( 항 - 인간 - Fc 영역 - APC ) 를 각 웰 에 첨가 하 고 ; 혼합 하 고 실온 에서 30 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세포 를 세 척하 고 100 μ L 의 FACS 완충액 에 재현 탁하 고 유동 세포 분석 ( BD LSR Fortessa 또는 FACSCanto ll ) 에 의하 여 세포 사건 집단 에 대해 분석 하 였 다 . 데이터 분석 을 FloJo v 10 을 통해 수행 하 였 다 . 도 3 B 에 제공 된 구조 를 가지 는 HER 2 x CD 137 결합 분자 는 도 5 A 내지 5 C ( DART - B / DART - D 와 비교 ) 에 제공 된 구조 를 가지 는 분자 들 보다 HER 2 / neu 에 대해 약간 더 나 은 결합 을 나타냈 다 . RSV x CD 137 대 조군 분자 ( DART - 6 ) 는 어떠 한 결합 도 나타내 지 못하 였 다 . 쥐과 또는 인간 화 된 CD 137 결합 부위 를 가지 는 CD 137 x TA 이중 특이 적 디아 바디 는 HER 2 / neu 에 대해 유사 한 결합 을 나타냈 다 ( DART - D / DART - G 와 비교 ) .