PTX 3 에 있 어서 샌드위치 ELISA 가 수행 되 었 다 . ELISA 플레이트 ( 96 well ; Nunc Immuno Plate , MaxiSorp , Nunc ) 는 코팅 버퍼 ( 15 mM 탄산염 , Na 2 CO 3 + NaHCO 3 , 버퍼 pH 9 . 6 ) 로 희석 된 , 래트 단일 클론 ( rat monoclonal ) 안티 - PTX 3 항체 ( mAb ) MNB 4 의 100 ng / well 로 코팅 되 었 고 , 4 ℃ 에서 밤새 도록 인 큐 베이트 시켰 다 . 상기 플레이트 를 워싱 버퍼 ( 0 . 05 % 트윈 ( Tween ) 20 을 함유 하 는 버퍼 된 Dulbecco ' s 인산염 ) 로 세척 하 였 고 , 5 % 건조 우유 의 300 ㎕ 를 불 특정 결합 부 를 차단 하 도록 첨가 하 였 다 . 50 ㎕ 의 재조합형 인간 PTX 3 스탠다드 ( 100 pg / ㎖ 내지 2 pg / ㎖) 및 공지 의 샘플 을 이중 으로 첨가 하 였 고 37 ℃ 에서 2 시간 인 큐 베이트 하 였 다 . 세 척 버퍼 로 3 회 세척 한 후 에 , 25 ng / well 의 비오틴 결합 PTX 3 친화성 - 정제 된 토끼 IgG 를 37 ℃ 에서 1 시간 동안 첨가 하 였 다 . Well 은 고가 로 세척 시키 고 , 실온 에서 1 시간 동안 1 : 4000 으로 희석 된 덱스트린 백본 ( AmDex , Copenhagen , Denmark ) 에 결합 된 스 트 렙 테이비 딘 - 퍼 옥시다아제 ( streptavidin - peroxidase ) 의 100 ㎕ 를 인 큐 베 이 팅 하 였 다 . 인 큐 베이 션 후 에 , 상기 플레이트 가 4 회 세척 되 었 고 , 100 ㎕ 의 TMB 색원체 ( chromogen , BD , Pharmingen ) 를 첨가 시켰 다 . 자동 ELISA 리더 ( reader ) 의 405 ㎚ 에서 흡수 값 을 읽 어 내 었 다 .