계속 해서 , 상기 조효 소액 을 사용 하 여 , 이하 의 방법 에 의해 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 활성 ( 탈염소 활성 ) 을 측정 했 다 . 100 ㎖ 의 활성 측정 용 반응 액 ( 50 mM DCP , 50 mM Tris - 황산 ( pH 8 ) ) 을 조제 하 고 , 온도 를 20 ℃ 로 조정 했 다 . 상기 반응 액 에 , 희석 한 각 형질전환 체 유래 의 조효 소액 을 첨가 하 여 반응 을 시작 했 다 . 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 활성 에 의한 염화물 이온 의 유리 에 수반 하 는 pH 의 저하 를 , pH 자동 컨트롤러 를 사용 하 고 , 0 . 01 규정 의 수산화 나트륨 수용액 을 사용 하 여 , pH 를 8 로 유지 하 도록 연속 적 으로 조정 했 다 . 10 분 간 의 반응 의 사이 에 pH 를 8 로 유지 하 기 위해 투입 된 0 . 01 규정 의 수산화 나트륨 수용액 의 양 으로부터 , 염화물 이온 생성량 을 산출 하 여 , 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 활성 ( 탈염소 활성 ) ( U ) 을 산출 했 다 . 1 U 는 상기 조건 하 에서 DCP 로부터 1 분 간당 1 μ mol 염화물 이온 의 탈리 하 는 효소 량 에 상당 하 는 것 으로 정의 하 고 , 활성 측정 에 사용 한 각 조효 소액 의 활성 , 및 상기 활성 을 활성 측정 에 사용 한 각 조효 소액 의 액량 으로 나눔 으로써 각 조효소 용액 의 액 활성 을 산출 했 다 . 또한 , 상기 초음파 처리 에 의해 균체 가 완전히 파쇄 되 어 있 는 것 으로 가정 하 여 , 상기 액 활성 을 파쇄 전 의 ( 균체 현탁액 시점 에서 의 ) 균 농도 로 나눔 으로써 균체 비활성 을 산출 했 다 . 각 형질 전환 체 에 대한 균체 비활성 의 결과 를 표 1 에 나타내 었 다 . 야생형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 HheB ( 2 nd ) 를 발현 하 는 JM 109 / pSTK 001 및 JM 109 / pSTT 001 과 비교 하 여 , 2 번 째 의 아미노산 잔기 가 아스파라진 으로 치환 된 개량 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 HheB ( 2 nd ) 를 발현 하 는 JM 109 / pSTK 003 및 JM 109 / pSTT 003 은 각각 균체 비활성 이 약 12 배 및 약 5 배 로 향상 되 어 있 고 , 또한 2 번 째 의 아미노산 잔기 가 라이신 으로 치환 된 개량 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 HheB ( 2 nd ) 를 발현 하 는 JM 109 / pSTK 002 및 JM 109 / pSTT 002 는 각각 균체 비활성 이 약 25 배 및 약 17 배 로 향상 되 어 있 는 것 이 확인 되 었 다 . 즉 , 개시 아미노산 잔기 보다 1 잔기 C 말단 측 의 아미노산 잔기 ( 서열 번호 2 로 표시 되 는 아미노산 서열 의 제 2 번 째 의 아미노산 잔기 ) 가 다른 아미노산 으로 치환 된 개량 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 발현 형질전환 체 는 , 형질전환 체당 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 활성 이 야생 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 보다 도 높 은 것 이 확인 되 었 다 .