단백질 은 Pro - Prep Protein Extraction Solution ( Intron Biotechnology , Gyeonggi - Do , Korea ) 을 사용 하 여 추출 하 였으며 , SDS - PAGE ( sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis ) 를 실시 하 였 다 . 이렇게 분리 된 단백질 을 nitrocellulose membrane ( Amersham Co . , Buckinghamshire , England ) 에 이동 시켜 3 % skim milk 를 함유 한 Tris buffered saline ( in TBS - T : 0 . 1 % Tween - 20 in Tris buffer saline , pH 7 . 5 ) 로 1 시간 동안 blocking 시킨 다음 blot 들 을 HIF - 1 a , VEGF - R 1 , VEGF - R 2 , total AMPK , phospho - Thr 172 AMPK , PGC - 1 α , MCP - 1 , total ACC , phospho - ACC , ChREBP 1 , SREBP 1 , CD 68 , Gr - 1 , Arginase I , Arginase II , iNOS , β - actin 일 차 항체 용액 에 넣 어 반응 시킨 후 세 척 하 고 , 각각 의 1 차 항체 에 대항 하 는 이 차 항체 를 반응 시킨 뒤 ECL ( Pierce , Rockford IL ) 을 통해 감광 하 여 밴드 를 확인 하 였 다 . 각 단백질 의 발현 수준 은 β - actin 에 맞추 어 표준 화 하 였 다 .