인간 , 마우스 또는 시노 몰구 스 NKG 2 D 엑 토 도메인 의 핵산 서열 을 인간 IgG 1 Fc 도메인 을 코딩 하 는 핵산 서열 과 융합 하 고 , 발현 시키 고자 하 는 포유 류 세포 에 도입 하 였 다 . 정제 후 에 , NKG 2 D - Fc 융합 단백질 을 마이크 로 플레이트 의 웰 에 흡착 시켰 다 . 웰 을 소 혈청 알부민 으로 차단 하 여 비 - 특이 적 결합 을 방지 한 후 에 , NKG 2 D - 결합 도메인 을 적정 하 고 , NKG 2 D - Fc 융합 단백질 로 미리 흡착 된 웰 에 첨가 하 였 다 . 서양 고추냉이 퍼 옥시 다제 에 접합 되 어 있 고 , Fc 교차 - 반응 성 을 피하 기 위해 인간 카파 경쇄 를 특이 적 으로 인식 하 는 이 차 항체 를 이용 하 여 일차 항체 결합 을 검출 하 였 다 . 서양 고추냉이 퍼 옥시 다제 에 대한 기질 인 3 , 3 ', 5 , 5 '- 테트라메틸 벤지딘 ( TMB ) 을 결합 신호 를 가시 화 하 기 위해 웰 에 첨가 하 였 고 , 흡광도 를 450 nM 에서 측정 하 고 , 540 nM 에서 보정 하 였 다 . NKG 2 D - 결합 도메인 클론 , 이소 타입 대 조군 또는 양성 대 조군 ( SEQ ID NO : 47 - 50 , 또는 이 바이오 사이언스 ( eBioscience ) 에서 입수 가능 한 항 - 마우스 NKG 2 D 클론 MI - 6 및 CX - 5 로부터 선택 됨 ) 을 각각 의 웰 에 첨가 하 였 다 .