단계 1 , PCR 프라이머 및 표적 - 적중 및 표적 - 외 서열 QC : 표적 - 적중 및 표적 - 외 부위 둘 다 를 위해 , 20 뉴클레오타이드 gRNA 표적 화 도메인 서열 + PAM 서열 및 표적 특이 적 PCR 프라이머 서열 ( 부가 적 인 Illumina 서열 이 없 는 좌측 및 우측 ) 을 BLAST 서치 ( 버전 2 . 2 . 29 +, 문헌 [ Altschul et al , J Mol Biol . , 1990 , 215 ( 3 ) : 403 - 10 ] , PMID : 2231712 ) 를 사용 하 여 인간 게놈 참조 서열 ( GRCh 38 을 구축함 ) 에 정렬 시켰 다 . 다수 의 게놈 위치 를 갖 는 표적 - 적중 및 표적 - 외 부위 를 플래그 ( flag ) 하 였 다 .