DUATH 항 - 사람 IgG Fc - 감마 항체 를 사용 한 실험 을 위해 , 포획 항체 를 10 mM 의 아세트산 나트륨 pH 5 . 0 중 에서 50 ㎍/ mL 의 농도 로 희석 한 후 , 아민 결합 화학 ( EDC : NHS ) 을 사용 하 여 CM 4 센서 칩 의 4 개 의 모든 흐름 세포 에 공유 고정 시켰 다 . 항체 를 고정 시킨 후 에 남 아 있 는 흐름 세포 상 의 활성 부위 를 1 M 의 에탄올아민 으로 차단 하 였 다 . 대략 3500 RU 의 포획 항체 밀도 를 얻 었 다 . 항 - IL - 21 항체 362 . 78 - CHO 를 세 개 의 상이 한 밀도 ( 25 에서 150 RU 의 범위 ) 로 CM 4 칩 의 흐름 세포 2 , 3 및 4 위 에 포획 시켰 다 . 고정 된 표면 에 대한 362 . 78 - CHO 의 포획 은 10 μ L / 분 의 유속 으로 수행 하 였 다 . Biacore 기기 는 센서 칩 표면 에 결합 된 단백질 덩어리 를 측정 하 고 , 그 로써 시험 항체 의 포획 을 각 사이클 에 대해 증명 하 였 다 . 사람 재조합 IL - 21 또는 게 잡이 원숭이 재조합 IL - 21 ( ZymoGenetics ) 의 연속 희석 액 을 40 nM 에서 0 . 003 nM ( 1 : 5 연속 희석 ) 로 제조 하 였 다 . 연속 희석 액 을 표면 위 에 주입 하 고 , 센서 칩 상 에 포획 된 362 . 78 - CHO 항체 에 특이 하 게 결합 하 도록 놓 아 두 었 다 . 각각 의 IL - 21 항원 농도 를 2 개 한 벌 로 주사 하 는 것 은 6 . 5 또는 7 분 의 결합 시간 과 10 , 15 , 또는 60 분 의 분해 시간 으로 수행 하 였 다 . 역학 결합 연구 를 50 μ L / 분 의 유속 으로 수행 하 였 다 . 사이클 사이 에 흐름 세포 를 20 mM 의 염산 으로 세척 하 여 표면 을 재생 하 였 다 . 이 세 척 단계 로 포획 된 시험 항체 와 모든 결합 항원 이 둘 다 고정 된 항체 표면 으로부터 제거 되 었 다 . 362 . 78 - CHO 항체 를 계속 해서 다음 사이클 에서 다시 포획 시켰 다 .