150 - 200 g 의 웅성 Sprague . Dawley 쥐 를 희생 한 후 , 대퇴골 과 티비 아스 ( tibias ) 로부터 멸균 피하 주사기 를 사용 하 여 2 % 소 태아 혈청 ( FBS ; Stem Cell Technologies , Vancouver , BC , Canada ) 이 보충 된 Hanks ’ 평형 염액 으로 된 15 ml 버퍼 로 줄기 ( shaft ) 를 플러싱 하 여 rMSCs 를 수집 하 였 다 . 세포 를 버퍼 로 50 ml 까지 희석 하 고 1 , 000 ×g 로 30 분 간 밀도 구배 ( Ficoll - Paque - Plus ; 1 . 077 g / ml ; Pharmacia ) 로 원심 분리 하 였 다 . 단핵 세포 를 수집 하 고 , 저 글루코스 Dulbecco ’ s 변형 이 글 배지 ( DMEM ; Gibco , Rockville , MD , USA ) , 20 % FBS , 100 U / ml 페니실린 , 100 μ g / ml 스트렙토마이신 및 2 mM L - 글루타민 으로 구성 된 배양 배지 에 현 탁 하 고 , 2 × 106 cells / 10 cm 2 의 농도 로 파종 하 였 다 . 배양 은 5 % CO 2 를 함유 하 는 습한 분위기 에서 37 ℃ 로 유지 시켰 다 . 본 실험 에 상용 된 rMSCs 는 시험관 내 ( in vitro ) 에서 3 회 계대 배 양 시켰 다 .