IL - 3 - 유도 STAT 5 인산화 반응 의 측정 을 위하 여 , TF - 1 세포 ( ATCC ) 를 10 % FBS RPMI - 1640 배지 에서 37 ℃, 5 % CO 2 에서 3 시간 동안 웰 당 1 × 104 세포 로 96 웰 플레이트 에 둔다 . 세포 를 다양 한 농도 의 희석 된 화합물 의 존재 하 에 또는 없이 37 ℃ 에서 5 % CO 2 로 30 분 동안 배양 하 였 다 . 세포 를 각 웰 에 10 ng / ml 인간 재조합 IL - 3 을 첨가 함 으로써 37 ℃, 5 % CO 2 로 30 분 동안 자극 하 였 다 . 그 다음 에 , 세포 를 실온 에서 45 분 동안 2 % 파라포름알데히드 에 고정 하 고 30 분 동안 얼음 처럼 차가운 메탄올 에 배양 하 였 다 . PBS 에서 세정 한 후 , 세포 를 rabbit anti - phospho - STAT 5 ( Y 694 ) ( Cell Signaling Technologies , 항체 희석 용액 에서 1 : 1000 ) 1 차 항체 로 4 ℃ 에서 하룻밤 동안 배양 하 였 다 . PBS 세정 90 분 전 에 Goat anti - rabbit IgG Alexa 488 ( Invitrogen , PBS 에서 1 : 1 , 000 희석 ) 2 차 항체 를 첨가 한다 . 세포 를 7 . 5 uM 프로 피디 움 요오드화물 , 100 ㎍/ ml RNaseA , PBS 용액 의 하 기 배양 에서 어둠 속 에서 60 분 동안 배양 한다 . 플레이트 를 Acumen X 3 instrument ( TPP Labtech ) 에 읽힌다 .