표준 방법 을 이용 하 여 문헌 ( Sambrook , J . et al . , Molecular cloning : A laboratory manual ; Cold Spring Harbor Laboratory Press , Cold Spring Harbor , New York , 1989 ) 에 기재 된 바 와 같이 DNA 를 조작 하 였 다 . 분자 생물학 시약 을 제조자 의 설명서 에 따라 사용 하 였 다 . 이중 가닥 서열 분석 으로 DNA 서열 을 확인 하 였 다 . 몇몇 경우 , 진아 트 아 게 ( Geneart AG , 독일 레 젠스 버그 소재 ) 가 자동 화 된 유전자 합성 으로 합성 올리 고 뉴클레오타이드 및 PCR 생성물 로부터 원 하 는 유전자 분절 을 제조 하 였 다 . 양 말단 에 단일 제한 엔 도 뉴클레아제 ( endonuclease ) 절단 부위 를 갖 는 유전자 분절 을 pGA 18 ( ampR ) 플라스미드 내 로 클로닝 하 였 다 . 플라스미드 DNA 를 형질 전환 된 세균 으로부터 정제 하 고 농도 를 UV 분광법 으로 측정 하 였 다 . 서브 클로닝 된 유전자 단편 의 DNA 서열 을 DNA 서열 분석 으로 확인 하 였 다 . 각각 의 발현 벡터 내로 의 서브 클로닝 을 허용 하 기 에 적합 한 제한 부위 를 갖 는 유전자 분절 을 디자인 하 였 다 .