각 제한 효소 ( EcoR Ⅰ , Pst Ⅰ ) 에 라 이게 이 션 시키 기 위한 어댑터 ( forward adapter 및 reverse adapter ) 를 절단 된 DNA 단편 말단 에 라 이게 이 션 시키 기 위해 우선 1 가닥 어댑터 를 이중 가닥 어댑터 로 만들 어야 한다 . 이중 가닥 어댑터 의 제작 을 위해 정 방향 어댑터 ( forward adapter ) 와 역방향 어댑터 ( reverse adapter ) 를 각각 50 ㎕ 씩 분주 하 여 같 은 1 . 5 ㎖- 튜브 에 넣 어 총 100 ㎕ 를 준비 하 였 다 . 준비 된 정 방향 어댑터 와 역방향 어댑터 혼합액 을 T - 그래 디언 트 써 모 싸이클 러 ( Gradient thermocycler , 바이오 메트 라 , 독일 괴팅겐 ) 를 이용 하 여 60 ℃ 에서 12 시간 동안 배양 시킨 후 , 분자량 이 작 은 이중 가닥 어댑터 를 확인 하 기 위해 40 % 아크릴아마이드 젤 에서 전기영동 하 였 다 . 이중 가닥 어댑터 5 ㎕ 와 로딩 버퍼 ( loading buffer ) 2 ㎕ 를 혼합 하 고 , 1 가닥 정 방향 어댑터 와 1 가닥 역방향 어댑터 5 ㎕ 를 로딩 버퍼 2 ㎕ 와 각각 혼합 하 여 40 % 아크릴아마이드 젤 에서 1 ×TG 완충액 ( 6 g 트리스 베이스 , 2 . 88 g 글리신 , 100 ㎖ 멸균 증류수 ) 를 사용 하 여 4 ℃ 에서 10 볼트 로 11 시간 동안 전기영동 한 후 에티 디 움 브로마이드 ( ethidium bromide ) 로 염색 하 여 확인 하 였 다 .