상기 표 1 에 기재 된 것 과 같이 , 본 발명 의 일 실시 예 에서 는 IL - 10 단백질 의 N - 말단 에 Fc 도메인 이 연결 하 였으며 , 이 를 통해 이량체 가 형성 되 고 융합 단백질 의 분리 정제 단계 를 용이 하 게 할 수 있 는 형태 로 IL - 10 변이체 단백질 을 고안 하 였 다 . 여기 에 사용 된 Fc 단백질 은 IgG 1 의 힌지 부분 과 IgD 및 IgG 4 의 하이브리드 단백질 인 CH 2 및 CH 3 부분 으로 구성 된 Fc 변이체 ( 서열 번호 8 및 9 ) 로 국제 특허 출원 PCT / KR 2020 / 006346 에 기재 되 어 있 는 것 과 동일 한 것 을 사용 하 였으며 , " 본 문서 에서 는 상기 Fc 변이체 를 편의 상 "" NTIG "" 로 명명 하 였 다 . 상기 PCT 출원 을 본 문서 에 참조 로 삽입 하 는 바 이 다 . 상기 Fc 변이체 단백질 과 본 발명 의 일 실시 예 에 따른 IL - 10 변이체 단백질 사이 에 는 서열 번호 2 또는 3 의 아미노산 서열 로 구성 되 는 링커 펩타이드 ( linker 1 ) 을 삽입 하 도록 고안 하 였 다 . 비 교예 1 에서 사용 된 IL - 10 단백질 은 야생 형 인간 IL - 10 단백질 의 87 번 째 아미노산 인 이소류신 을 알라닌 으로 치환 함 으로써 면역 활성 증진 작용 을 억제 한 변이체 단백질 ( 서열 번호 10 ) 로 실시 예 2 내지 3 역시 동일 하 게 87 번 째 아미노산 의 치환 을 포함 하 고 있 다 . 한편 ", 실시 예 1 및 2 그리고 비 교예 2 에서 사용 된 IL - 10 단백질 ( 서열 번호 1 및 11 ) 은 116 번 째 아미노산 인 아스파라긴 ( N ) 과 117 번 째 아미노산 인 라이신 ( K ) 사이 에 펩타이드 가 삽입 된 것 으로서 , 상기 펩타이드 로 는 서열 번호 4 또는 5 로 구성 되 는 아미노산 서열 을 갖 는 스 페이서 펩타이드 를 사용 하 였으며 , 특히 비 교예 2 의 서열 번호 5 로 기재 되 는 아미노산 서열 로 구성 되 는 링커 펩타이드 를 포함 하 는 IL - 10 단백질 ( 서열 번호 11 ) 은 Josephson 등 이 고안 한 단량체 성 IL - 10 단백질 과 동일 한 구조 를 갖 는 단량체 성 IL - 10 을 포함 한다 ( Josephson et al . , J . Biol . Chem . 275 ( 18 ) : 13552 - 13557 , 2000 ) . 상기 와 같이 고안 된 각각 의 융합 단백질 의 구성 요소 들 을 암호 화 하 는 폴리 뉴클레오타이드 들 을 PCR 증폭 및 올리 고 뉴클레오타이드 합성 을 통해 제조 한 후 , 이 를 Bsa I 제한 효소 와 T 4 ligase 를 이용 하 여 NTIG sub - vector 및 , IL - 10 Vm sub - vector 및 골격 벡터 ( pBispecific vector , Genexine , Inc . ) 에 서브 클로닝 한 후 , 한 tube 에서 반응 시켜 최종 벡터 컨스 트럭 트 를 제조 하 였 다 .