0 . 02 to 0 . 05 의 배양 OD 600 에서 , 85 g / ℓ 글루코오스 , 20 g / ℓ 효모 추출물 , 20 μ M 구연산 철 , 5 . 72 mg / ℓ H 3 BO 3 , 3 . 62 mg / ℓ MnCl 2 · 4 H 2 O , 0 . 444 mg / ℓ ZnSO 4 · 7 H 2 O , 0 . 78 mg / ℓ Na 2 MnO 4 · H 2 O , 0 . 158 mg / ℓ CuSO 4 · 5 H 2 O , 0 . 0988 mg / ℓ CoCl 2 · OH 2 O , 6 . 0 g / ℓ NaHPO 4 , 3 . 0 g / ℓ KH 2 PO 4 , 0 . 5 g / ℓ NaCl , 2 . 0 g / ℓ NH 4 Cl , 0 . 0444 g / ℓ MgSO 4 , 및 0 . 00481 g / ℓ CaCl 2 로 구성 된 개질 된 M 9 배지 40 ㎖ 부피 로 냉동실 스톡 ( 예 를 들 어 이소 부탄올 을 생성 하 도록 변경 된 Escherichia coli ) 에서 꺼낸 미생물 을 넣 고 250 ㎖ 에른 마이어 ( Erlenmeyer ) 플라스크 에서 밤새 배양 을 시작 하 였 다 . 초기 배양액 을 250 rpm 으로 30 ℃ 진탕기 에서 대략 14 시간 동안 배양 시켰 다 . 이어서 초기 배양액 의 일부 를 , 개질 된 M 9 약 200 ㎖ 을 함유 하 는 400 ㎖ DasGip 발효기 용기 로 보내 어 , 약 0 . 1 의 시작 배양 OD 600 에 도달 하 였 다 . 상기 용기 를 컴퓨터 제어 시스템 에 부착 시켜 발효 반응 을 ( 염기 를 적절히 첨가 하 여 ) pH 6 . 5 , 30 ℃ 의 온도 , 용 존 산소 농도 및 교반 으로 모니터 하 고 제어 하 였 다 . 상기 용기 를 200 rpm 의 최소 교반 으로 교반 하 고 , OD 600 이 약 0 . 1 일 때 까지 교반 을 변화 시켜 12 sl / h 공기 살포기 ( sparge ) 를 사용 하 여 약 50 % 포화도 의 용 존 산소 함량 을 유지 하 였 다 . 이어서 , 상기 용기 를 0 . 1 mM IPTG 로 유도 시켰 다 . 대략 8 내지 10 시간 동안 성장 을 계속 한 후 , 용 존 산소 함량 을 200 rmp 최소 교반 및 2 . 5 sl / h 공기 흐름 으로 5 % 포화도 까지 감소 시켰 다 . 실험 동안 내내 GC - MS 분석 에 의한 발효기 용기 오프 - 가스 의 연속 적 인 측정 을 산소 , 이소 부탄올 , 에탄올 , 이산화 탄소 및 질소 에 대하 여 수행 하 였 다 . 샘플 을 발효 공정 을 통해 발효기 용기 로부터 무균 상태 에서 회수 한 후 , 이 를 사용 하 여 브로스 에서 OD 600 , 글루코오스 농도 , 및 이소부탄 올 농도 를 측정 하 였 다 . 이소부탄 올 생산 은 18 g / ℓ 의 적정 농도 ( titer ) 및 최대 이론 치 의 대략 70 % 의 수율 로 약 21 . 5 시간 에서 최대 값 에 도달 하 였 다 . 브로스 를 진공 증류 에 도입 하 여 , 건조 이소 부탄올 을 공급 하 기 위해 필요시 재증류 되 는 84 : 16 이소 부탄올 / 물 혼합물 을 수득 하 였 다 .