PCR . Clonetech 로부터 의 HFII 폴리머 라 아제 로 PCR 을 행하 였 다 . 보존 서열 에 아닐 링 된 5 ' 프라이머 ( EcoRI 포함 ) 를 SMART - RACE 동안 도입 하 였 다 . 2 개 의 3 ' 프라이머 는 IgG ( VH ) 및 카파 쇄 ( VL ) 의 보존 영역 에 각각 아닐 링 되 도록 설계 되 었 다 . 또한 3 ' 프라이머 에 제한 부위 가 존재 하 였 다 ( BsiWI ( VL ) 및 Nhel ( VH ) ) . 모든 VH 및 VL 증폭 에 대하 여 PCR 을 중복 하 여 행하 였 다 ( PCR 도입 된 돌연변이 를 확인 하 기 위해서 ) . 만약 PCR 반응 이 실패 하 였 다면 , Novagen 으로부터 의 열화 5 ' 프라이머 믹스 를 사용 하 여 VL 및 VH 를 증폭 하 였 다 .