상기 실시 예 1 을 통해 생 성 및 유지 된 iPSC 를 Aggrewell 배양액 ( STEMCELL ) 에 재현 탁하 고 현적 배양 ( Hanging drop culture ) 방법 을 이용 하 여 배양 체 ( EB ; Embryonic Body ) 를 형성 하 였 다 . 세포 를 5 % CO 2 , 37 ℃ 에서 하루 동안 배양 하 였 다 . 형성 된 EB 는 수확 하 여 Essential 8 배양액 에 1 ng / ml BMP 4 를 첨가 하 여 유지 하 였 다 . 다음 날 , EB 를 수확 하 여 콜라겐 IV 코팅 플레이트 에 부착 하 였 다 . 분화 기간 동안 배양액 을 2 일 에 한 번 교환 하 였 다 . 배양액 은 케라틴 분화 배양액 1 ( DMEM / F 12 3 : 1 , 2 % fetal bovine serum ( FBS ) , 0 . 3 mmol / L L - ascorbic acid , 5 μ g / mL insulin , and 24 μ g / mL adenine ) 로 교환 하 고 , 3 μ M RA ( Retinoic acid ) , 25 ng / mL BMP 4 , 20 ng / mL EGF 를 첨가 하 여 7 일 간 유지 하 였 다 . 7 일 뒤 ( Day 8 ) , 배양액 은 케라틴 분화 배양액 2 ( defined keratinocyte serum - free medium , 0 . 3 mmol / l L - ascorbic acid , 5 μ g / ml insulin , 10 μ g / ml adenine ) 으로 교환 하 고 , 3 μ M RA ( Retinoic acid ) , 25 ng / mL BMP 4 , 20 ng / mL EGF 를 첨가 하 여 4 일 간 유지 하 였 다 . 4 일 뒤 ( Day 12 ) , 배양액 은 케라틴 분화 배양액 3 ( defined keratinocyte serum - free medium 와 keratinocyte serum - free medium ( 1 : 1 ) ) 으로 교환 하 고 , 10 ng / mL BMP 4 와 20 ng / mL EGF 를 첨가 하 여 분화 된 케라틴 세포 를 유지 확장 하 였 다 ( 도 2 A ) .