10 분 인 큐 베이 션 후 에 플레이트 를 얼음 위 에 놓 고 125 μ L 의 빙 냉 세포 세척 완충액 ( BIO - PLEX 세포 용해 키트 , BIO - RAD Laboratories , Hercules , CA ) 을 각 웰 에 첨가 함 으로써 반응 을 중지 시켰 다 . 그런 다음 세포 를 1500 rpm 및 4 ℃ 에서 5 분 동안 회전 시키 고 배지 를 흡인 하 였 다 . 세포 를 용해 하 기 위해 50 μ L / 웰 의 용해 완충액 ( 제조 업체 의 지시 에 따라 제조 됨 , BIO - RAD Labs ) 을 각 웰 에 첨가 하 였 다 . 그런 다음 세포 용해 물 을 얼음 위 에서 피펫 을 5 회 사용 하 여 취하 여 마이크 로 플레이트 플랫 폼 진동기 상 에서 20 분 동안 600 rpm 및 4 ℃ 에서 교반 하 였 다 . 그런 다음 플레이트 를 3000 rpm 및 4 ℃ 에서 20 분 동안 원심 분리 하 였 다 . 상층 액 을 수집 하 여 새로운 마이크 로 역가 플레이트 에 옮기 고 분석 완충액 ( BIO - RAD ) 과 1 : 1 로 혼합 하 여 - 20 ℃ 에서 보관 하 였 다 .