억제제 효력 을 형광 원성 판독 과 효소 적 검정 을 사용 하 여 측정 하 였 다 . pH 5 . 3 의 100 mM 아세트산암모늄 , 100 mM NaCl , 1 mM EDTA , 1 mM DTT , 0 . 25 mg / mL BSA 및 1 % DMSO 를 함유 하 는 반응 완충제 에 다양 한 농도 중 하나 로 2 . 5 nM 의 재조합 HIV 프로테아제 및 시험 화합물 을 첨가 하 였 다 . 20 분 사전 - 인 큐 베이 션 후 , 효소 적 반응 을 형광 원성 기질 ( 2 - 아미노벤조 일 ) Thr - Ile - Nle -( p - 니트로 ) Phe - Gln - Arg ( 바 켐 ( Bachem ) ) 의 40 μ M 의 최종 농도 로 의 첨가 에 의해 개시 하 였 다 . 검정 용액 의 총 부피 는 100 μ L 였 다 . 반응물 을 320 nm 의 여기 파장 및 420 nm 의 검출 파장 을 사용 하 여 테칸 인피니트 ( Tecan Infinite ) M 1000 플레이트 판독기 상 에서 20 분 에 걸쳐 측정 하 였 다 . 진행 곡선 의 기울기 는 반응 속도 의 척도 였 다 . 반응 속도 를 억제제 농도 의 함수 로서 플롯 팅 하 고 , 데이터 를 문헌 [ Morrison ( Biochim . Biophys . Acta 1969 , 185 , 269 - 286 ) ] 에 의해 기재 된 치밀 - 결합 방정식 을 사용 하 여 피팅 시켜 Ki 값 을 수득 하 였 다 .