도 72 a 는 구축물 # 33 +# 4 로부터 의 융합 단백질 및 A 4321 세포 와 24 시간 후 10 : 1 이펙터 : 표적 비율 에 대한 요약 XTT - 세포독성 결과 를 보여준다 . 도 72 b 는 구축물 # 33 +# 4 로부터 의 융합 단백질 및 A 4321 세포 와 24 시간 후 2 : 1 이펙터 : 표적 비율 에 대한 요약 XTT - 세포독성 결과 를 보여준다 . 이 들 결과 는 , 융합 단백질 ( 공동 발현 됨 , 구축물 # 33 + # 4 ) 의 첨가 가 CAR 19 T 세포 의 표적 활성 을 항 - EGFR - CD 19 단백질 융합물 을 통해 EGFR - 양성 ( 및 CD 19 - 음성 ) 세포 를 사멸 시키 도록 성공 적 으로 재유 도 되 었 음 을 보여준다 . 도 77 a 는 CD 19 CAR 구축물 ( 서열 번호 71 : FMC 63 CAR - 19 구축물 플래그 - 태그 된 - 1 ) 을 안정 하 게 발현 하 는 형질 감염 된 주 르 카트 ( Jurkat ) 세포 로부터 분비 된 구축물 # 42 융합 단백질 의 발현 및 분비 를 보여준다 . 융합 단백질 의 분비 의 검출 은 본 명세서 에 기재 된 ELISA 절차 에 의해 , 포획 을 위하 여 항체 FMC 63 및 검출 을 위하 여 HRP - 컨 쥬 게이트 된 항 - His 항체 를 이용 하 여 수행 되 었 다 . 도 77 b 는 구축물 # 42 에 의해 암호 화 된 융합 단백질 의 CAR 19 T 세포 분비 에 의해 HER 2 + 세포 로 재 유도 된 CAR 19 - 매개 된 세포독성 을 보여준다 . 1 × 104 HER 2 + BT 474 세포 를 12 개 웰 세포 배양 플레이트 의 각 웰 내 에 플레이트 하 였 다 . 삽입 된 # 42 가 있 거나 또는 없 는 주 르 카트 -# 71 안정 세포주 를 BT 474 세포 를 함유 하 는 웰 에 , XTT 분석 을 이용 하 여 세포독성 분석 을 위해 2 : 1 의 비율 로 첨가 하 였 다 . T 세포 와 BT 474 세포 와 의 공동 배양 24 시간 후 분석 을 수행 하 였 다 . 분석 을 위한 양성 대 조구 는 , 주 르 카트 - 71 와 브릿 징 하 는 구축물 # 42 융합 단백질 로부터 정제 된 융합 단백질 을 이용 하 고 CAR 19 T 세포 ( Promab ) 와 브릿 징 하 는 구축물 # 42 융합 단백질 로부터 의 정제 된 융합 단백질 을 이용 하 였 다 . CAR 19 구축물 # 71 로 안정 하 게 형질 감염 되 고 , 이후 구축물 # 42 로 일시 형질 감염 된 주 르 카트 세포 는 암호 화 된 # 42 융합 단백질 을 분비 할 수 있 었 으며 , HER 2 + BT 474 세포 의 재 유도 된 사멸 을 매개 할 수 있 었 다 .