배지 를 제거 하 고 단백질 용해 버퍼 ( Protein lysis buffer ) 를 이용 하 여 단백질 을 추출 한 후 정량 하 여 , 30 ug 의 단백질 을 SDS - PAGE 겔 ( gel ) 에서 분리 하 였 다 . 단백질 을 멤 브레인 ( membrane ) 으로 옮긴 후 1 차 , 2 차 항체 ( p - jnk ( Cell Signaling Technology , # 9251 S ) , p - p 38 ( Cell Signaling Technology , 9211 S ) , p - ERK ( santa cruz , sc - 7383 ) , Ikbalpha ( Cell Signaling Technology , 9242 S ) , p - p 65 ( Cell Signaling Technology , 3031 S ) ) 를 순차 적 으로 처리 하 여 키트 ( BIO - RAD , ECL solution detection kit ) 로 발현 되 면 기계 ( Chemidoc ) 로 측정 하 였 다 .