증식 분석 : B 세포 는 항 - CD 40 및 IL - 21 과 의 공동 배양 에 반응 하 여 증식 한다 . 항 - IL - 21 mAb 의 중화 활성 을 측정 하 기 위하 여 , B 세포 를 96 - 웰 U - 바닥 조직 배 양물 로 처리 된 플레이트 ( Becton Dickinson , Franklin Lakes , NJ ) 에 40 , 000 내지 50 , 000 세포 / 웰 로 플 레이팅 하 였 다 . 그런 다음 세포 를 0 . 1 ㎍/ mL 항 - CD 40 ( 염소 항 - 사람 CD 40 다 클론 성 ; R & D Systems , Minneapolis , MN ) , 50 ng / mL ( 3 . 21 nM ) 의 재조합 IL - 21 ( ZymoGenetics , A 1207 F ) 로 처리 하 고 , IL - 21 길 항체 ( 시험 항체 또는 대조 표준 ) 로 적정 하 였 다 . 그런 다음 세포 플레이트 를 3 일 동안 가습 된 인큐베이터 에서 37 ℃ 및 5 % CO 2 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 3 일 후 에 , 세포 를 1 μ Ci / 웰 의 [ 3 H ] - 티미 딘 ( Amersham Biosciences , Piscataway , NJ ) 으로 펄스 하 였 다 . 16 시간 후 에 , 세포 를 유리 - 섬유 필터 상 에서 수득 하 고 , [ 3 H ] - 통합 의 양 을 베타 카운터 ( Topcount NXT , Packard ) 를 사용 하 여 정량 하 였 다 . IL - 21 유도 된 증식 의 효과 적 인 중화 를 측정 하 는 IC 50 곡선 을 계산 하 고 , 몰 농도 로서 표시 하 였 다 . 본원 에 기술 된 상부 중화 mAb 에 대한 IC 50 값 은 0 . 71 nM 내지 6 . 55 nM 의 범위 였 고 , 결과 를 아래 의 표 11 에 나타낸다 .