시스테인 - 도입 G - CSF 변이체 의 리폴 딩 ( refolding ) 시료 를 pH 4 . 5 되게 HCl 로 적정 한 후 , 원심 분리 하 여 침전물 을 제거 하 였 다 . 활성 을 갖 는 시스테인 - 도입 G - CSF 변이체 를 정제 하 기 위하 여 20 mM sodium phosphate pH 4 . 0 로 평형 된 SP - sepharos fast flow column 에 주입 후 , 평형 버퍼 로 세척 하 는 과정 을 거친 후 , 100 ~ 5000 mM NaCl 염 농도 구배 용출 로 분리 하 였 다 . SP - sepharos 로부터 용출 된 시스테인 - 도입 G - CSF 변이체 시료 의 pH 를 6 . 8 로 조정 후 , 평균 분자량 이 각각 20 kDa 또는 30 kDa 인 메 톡 시 - PEG - 말레 이미드 ( Shearwater 사 , 미국 ) 를 시스테인 - 도입 G - CSF 변이체 : 메 톡 시 - PEG - 말레 이미드 의 몰 비 가 1 : 2 가 되 도록 상기 용액 에 각각 첨가 하 고 4 ℃ 에서 18 시간 동안 서서히 교반 시키 면서 반응 시켰 다 .