반응 생성물 을 TAE 버퍼 에서 1 . 0 % 아가로오스 겔 전기 이동 에 의해 분리 하 였으며 , Eco RV 라이브러리 로부터 1 . 7 kb 생성물 밴드 ( 상류 영역 ) 및 Stu I 라이브러리 로부터 의 1 . 6 kb 밴드 ( 하류 영역 ) 를 겔 로부터 절제 하 였 고 , 제조 업자 의 설명서 에 따라서 MINELUTE ® Gel Extraction Kit ( QIAGEN Inc . Valencia , CA , USA ) 를 사용 하 여 정제 하 였 다 . PCR 생성물 을 직접 시퀀싱 하 거나 또는 TOPO ® TA Kit 를 사용 하 여 서브 클로닝 한 다음 시퀀싱 하 였 다 .