Fv 단편 은 이 들 의 2 개 의 쇄 의 상호 작용 에너지 가 Fab 단편 보다 더 적 은 것 으로 여겨진다 . VH 와 VL 도메인 의 결합 을 안정 화 시키 기 위해 , 이 들 도메인 은 펩티드 ( Bird et al , ( 1988 ) Science 242 , 423 - 426 , Huston et al , PNAS , 85 , 5879 - 5883 ) , 이 황화물 다리 ( Glockshuber et al , ( 1990 ) Biochemistry , 29 , " 1362 - 1367 ) 및 "" 놉 인 홀 ( knob in hole ) "" 돌연변이 ( Zhu et al ( 1997 ) ", Protein Sci . , 6 , 781 - 788 ) 를 사용 하 여 연결 되 었 다 . ScFv 단편 은 당업자 에게 널리 공지 된 방법 들 에 의해 생성 될 수 있 다 ( 참조 : Whitlow et al ( 1991 ) Methods companion Methods Enzymol , 2 , 97 - 105 and Huston et al ( 1993 ) Int . Rev . Immunol 10 , 195 - 217 ) . ScFv 는 E . Coli 와 같 은 세균 세포 에서 생성 될 수 있 지만 , 보다 전형 적 으로 는 진 핵 세포 에서 생성 된다 . ScFv 의 한 가지 단점 은 생성물 이 1 가라 는 점 ( 이 는 다가 결합 으로 인한 증가 된 결합력 ( avidity ) 을 배제 시킴 ) 과 반감기 가 짧 다는 것 이 다 . 이러 한 문제점 들 을 극복 하 기 위한 시도 로 는 화학 적 커플링 ( Adams et al ( 1993 ) Can . Res 53 , 4026 - 4034 and McCartney et al ( 1995 ) Protein Eng . 8 , 301 - 314 ) 에 의하 거나 쌍 을 이루 지 않 은 C 말단 시스테인 잔기 를 함유 하 는 ScFv 의 자발 적 인 부위 - 특이 적 ( site - specific ) 이 합체 화 ( 참조 : Kipriyanov et al ( 1995 ) Cell . Biophys 26 , 187 - 204 ) ) 에 의해 추가 의 C 말단 시스테인 을 함유 하 는 ScFV 로부터 생성 된 2 가 ( ScFv ') 2 를 포함 한다 . 또한 , " ScFv 는 펩티드 링커 를 3 개 내지 12 개 의 잔기 로 축소 함 에 의해 다 합체 를 형성 하 도록 함 으로써 "" 디아 바디 ( diabody ) "" 를 형성 할 수 있 다 ( 참조 : Holliger et al PNAS ( 1993 ) ", 90 , " 6444 - 6448 ) . 링커 를 추가 로 감소 시키 면 ScFV 삼합체 ( "" 트리 아 보디 ( triabody ) """, 참조 : Kortt et al ( 1997 ) Protein Eng , 10 , " 423 - 433 ) 및 사 합체 ( "" 테트라 보디 ( tetrabody ) """, 참조 : Le Gall et al ( 1999 ) FEBS Lett , 453 , 164 - 168 ) 가 생성 될 수 있 다 . 2 가 ScFV 분자 의 작 제 ( construction ) 는 , " "" 미니 안티 보디 ( miniantibody ) "" ( 참조 : Pack et al ( 1992 ) Biochemistry 31 "," 1579 - 1584 ) 및 "" 미니 보디 ( minibody ) "" ( 참조 : Hu et al ( 1996 ) ", Cancer Res . 56 , 3055 - 3061 ) 를 형성 하 도록 단백질 이 합체 화 모티프 를 사용 하 는 유전자 융합 ( genetic fusion ) 에 의해 또한 달성 될 수 있 다 . 또한 , 2 개 의 ScFv 단위 를 제 3 의 펩티드 링커 에 의해 결합 시킴 으로써 ScFv - Sc - Fv 탠덤 ( tandem ) ( ( ScFV ) 2 ) 이 생성 될 수 있 다 ( 참조 : Kurucz et al ( 1995 ) J . Immol . 154 , 4576 - 4582 ) . 이중 특이 적 디아 보디 는 짧 은 링커 에 의해 또 다른 항체 의 VL 도메인 에 연결 된 하나 의 항체 로부터 의 VH 도메인 으로 구성 된 2 개 의 단일 쇄 융합 생성물 의 비 공유 결합 을 통해 생성 될 수 있 다 ( 참조 : Kipriyanov et al ( 1998 ) , Int . J . Can 77 , " 763 - 772 ) . 이러 한 이중 특이 적 디아 바디 의 안정 성 은 상기 기재 된 이 황화물 다리 또는 "" 놉 인 홀 "" 돌연변이 의 도입 에 의해 또는 2 개 의 하이브리드 ScFv 단편 이 펩티드 링커 를 통해 연결 된 단일 쇄 디아 보디 ( ScDb ) 의 형성 에 의해 향상 될 수 있 다 ( 참조 : Kontermann et al ( 1999 ) J . Immunol . Methods 226 179 - 188 ) . 예 를 들 어 ScFv 단편 을 힌지 영역 을 통해 IgG 분자 의 CH 3 도메인 또는 Fab 단편 에 융합 시킴 으로써 4 가의 이중 특이 적 분자 가 이용 가능 하 다 ( 참조 : Coloma et al ( 1997 ) Nature Biotechnol . 15 ", 159 - 163 ) . 또한 , 이중 특이 적 단일 쇄 디아 보디 들 의 융합 에 의해 4 가의 이중 특이 적 분자 가 생성 되 었 다 ( 참조 : Alt et al , ( 1999 ) FEBS Lett 454 , 90 - 94 ) . 또한 , 헬 릭스 - 루프 - 헬 릭스 ( helix - loop - helix ) 모티프 를 함유 하 는 링커 를 사용 하 는 ScFv - ScFv 탄 뎀 ( DiBi 미니 안티 보디 , 참조 : Muller et al ( 1998 ) FEBS Lett 432 , 45 - 49 ) 의 이 합체 화 에 의해 또는 분자 내 쌍 형성 을 방지 하 는 배향 으로 4 개 의 항체 가변 도메인 ( VH 및 VL ) 을 포함 하 는 단일 쇄 분자 ( 탠덤 디아 보디 , 참조 : Kipriyanov et al , ( 1999 ) J . Mol . Biol . 293 , 41 - 56 ) 의 이 합체 화 에 의해 보다 작 은 4 가의 이중 특이 적 분자 가 형성 될 수 있 다 . Fab ' 단편 의 화학 적 커플링 에 의해 또는 류신 지퍼 ( zipper ) 를 통한 이종 이 합체 화 ( heterodimerization ) 에 의해 이중 특이 적 F ( ab ') 2 단편 이 생성 될 수 있 다 ( 참조 : Shalaby et al , ( 1992 ) J . Exp . Med . 175 , 217 - 225 and Kostelny et al ( 1992 ) , J . Immunol . 148 , 1547 - 1553 ) . 또한 , 분리 된 VH 및 VL 도메인 이 이용 가능 하 다 ( 참조 : US 6 , 248 , 516 ; US 6 , 291 , 158 ; US 6 , 172 , 197 ) .