PRE 1 - GUS 융합 단백질 을 구축 하 기 위하 여 , 잎 RNA 유래 의 cDNA 라이브러리 를 이용 하 여 교정 능력 이 있 는 PWO 중합효소 ( Boehringer Mannheim ) 로 PRE 1 cDNA 를 증폭 한 후 , pBI 221 벡터 ( Clontech ) 의 BamHI 부위 에 클로닝 하 였 다 . 다음 의 프라이머 세트 를 이용 하 였 다 : 5 '- G A G G G A T C C A TGTCGAACAGAAGATCAAGGCAATC - 3 '( 개시 코돈 의 업 스트림 ) ; 및 PRE 1 의 3 ' 부분 ( 종 결코 돈 대체 ) 의 증폭 을 위한 5 '- G A G G G A T C CCATGAGTAGGCTTCTAATAACGGC - 3 '. 밑줄 은 도입 된 BamHI 부위 를 나타낸다 . Shieh et al . ( 1993 ) 의 방법 에 따라 , 헬륨 바이 오리 스틱 입자 운반 시스템 ( BIO - RAD ) 을 이용 하 여 PRE 1 - GUS 및 pBI 221 플라스미드 를 양파 표피 세포 에 도입 시켰 다 . 23 ℃ 에서 24 시간 동안 반응 시킨 후 , 광학 현미경 ( Olympus ) 을 이용 하 여 X - gluc 로 GUS 활성 을 측정 하 였 다 . 핵 을 관찰 하 기 위하 여 , 1 mg / ㎖ DAPI ( Sigma ) 으로 동일 한 세포 를 염색 하 고 형광 현미경 ( Olympus ) 을 이용 하 여 가시 화 하 였 다 .