항원 제시 세포 ( antigen presenting cells ; APC ) 와 나이브 CD 4 + T 세포 를 PBS 로 2 번 세척 해서 혈청 을 완전히 제거 하 였 다 . CFSE 라벨 링 을 위하 여 위 의 펠 렛 을 PBS 1 ml 로 풀 어 주 었 을 때 2 × 107 세포 의 경우 PBS 1 ml 에 5 mM 의 CFSE 0 . 25 ㎕ 의 혼합물 을 1 ml 넣 어 주 어 1 : 1 의 비율 로 혼합 하 였 다 . 단 , 세 포수 가 2 × 107 이 하인 경우 는 PBS 500 ㎕ 로 풀 고 , 상기 CFSE + PBS 혼합물 을 500 ㎕ 로 혼합 하 였 다 . 37 도씨 에서 10 분 간 배양 하 였 다 . APC 분열 을 억제 하 기 위하 여 PBS 1 ml 에 세포 가 5 × 107 으로 있 을 때 미토마이신 C ( mitomycin C ) ( 0 . 5 mg / ml ) 를 100 ㎕ 의 양 으로 넣 었 다 . 37 도씨 에서 20 분 간 배양 하 였 다 . 미리 차갑 게 만든 배지 를 넣 어 15 ml 를 채운 뒤 아이스 에서 5 분 간 보관 하 였 다 . 배양 배지 로 2 번 세척 하 고 세포 를 계수 하 였 다 . APC ( 1 × 105 세포 / 웰 ) , CD 4 + T 세포 ( 5 × 104 세포 / 웰 ) , Treg 세포 는 CD 4 + T 세포 에 대하 여 1 : 1 , 1 : 2 , 1 : 5 의 양 으로 넣 고 , 단백질 및 항 - CD 3 항체 ( 0 . 5 ㎍/ ml ) 를 첨가 한 뒤 3 일 후 CFSE - FL 4 를 이용 하 여 CD 4 + T 세포 의 증식 억제 정도 를 확인 하 였 다 .