Flag - MG 53 융합 단백질 작 제물 및 일련 의 HA - MG 53 융합 단백질 돌연변이 로 트랜스펙션 된 HEK 293 세포 에서 의 공동 - 면역 침전 ( Co - IP ) 실험 . 전체 세포 추 추물 상 에서 의 항 - Flag 항체 , 이후 항 - HA 항체 를 이용한 웨스턴 블롯 에 의해 Co - IP 를 수행 하 였 다 ( 도 28 a ) . 항 - Flag 항체 는 야생 형 MG 53 및 HA 로 태 깅된 모든 보존 된 시스테인 잔기 MG 53 돌연변이 를 감소 시킬 수 있 고 , 이 는 MG 53 단백질 이 결합 하 여 이 합체 를 형성 하 고 , 상기 결합 이 시스테인 잔기 의 산화 에 의존 적 이 지 않 음 을 나타낸다 . Co - IP 실험 은 MG 53 이합체 의 형성 이 코일 드 - 코일 도메인 의 존재 를 필요 로 함 을 나타낸다 ( 도 28 a ) . HEK 293 세포 를 HA - MG 53 융합 단백질 작 제물 , 및 GFP 에 연결 된 MG 53 의 코일 드 - 코일 도메인 만 을 함유 하 는 작 제물 ( GFP - CC ) 을 포함 하 는 일련 의 GFP - MG 53 융합 단백질 돌연변이 와 함께 공동 트랜스펙션 시켰 다 . 전체 세포 추출물 로부터 의 Co - IP 를 위해 항 - HA 항체 를 사용 하 였 고 , 생성 된 단백질 을 항 - GFP 항체 를 이용한 웨스턴 블롯 에 의해 분석 하 였 다 .