1 에서 44 시간 성숙 된 난자 를 0 . 1 % hyaluronidase 가 첨가 된 TL - HEPES - PVA 에 옮겨 피펫 팅 ( pipetting ) 하 여 확장 된 난구 세포 를 제거 하 였 다 . 난구 세포 가 제거 된 난자 를 TL - HEPES - PVA 에 세척 한 후 , 실체 현미경 하 에서 난자 내 에 극체 ( polar body ) 가 방출 된 것 만 을 선별 하 였 다 . 다시 TL - HEPES - PVA 와 체외 수정 배지 로 각각 두 번 세 척 한 후 500 μ l 체외 수정 배지 에 30 - 40 개 의 난자 를 넣 었 다 . 체외 수정 배지 로 는 Tris - buffered medium ( mTBM ; 113 . 1 mM NaCl , 3 . 0 mM KCl , 10 . 0 mM CaCl 2 , 20 . 0 mM Tris ( hydroxymethyl aminomethane ) , 11 . 0 mM glucose , 5 . 0 mM sodium pyruvate , 1 . 0 mM caffeine , 75 μ g / ml penicillin G , 50 μ g / ml streptomycin , 0 . 57 mM cysteine and 1 mg / ml BSA 포함 ) 을 사용 하 였으며 4 - well multi dish ( Nunc , Denmark ) 에 well 당 500 μ l 씩 분주 하 고 mineral oil 로 피복 하 여 38 . 5 oC , 5 % CO 2 의 항온기 에서 4 시간 이상 평형 시켜 둔 것 을 사용 하 였 다 .