96 웰 Maxi - sorp plate 에 , PBS 로 1 μ g / mL 로 희석 한 NeutrAvidin 을 50 μ L 씩 첨가 하 고 , 4 ℃ 에서 하룻밤 정치 하 여 고상 화 하 였 다 . ELISA 버퍼 로 3 회 세정 후 , PBS 로 1 μ g / mL 로 희석 한 , 실시 예 10 ) - 1 에서 이용한 인간 또는 사이 노 몰 거스 원숭이 비오틴 화 GPRC 5 D 의 아미노 말단 펩티드 를 첨가 하 고 1 시간 실온 에서 진탕 하 였 다 . ELISA 버퍼 로 3 회 세정 후 , Blocker Casein 으로 블로킹 하 고 , ELISA 버퍼 로 3 회 세정 하 였 다 . 그 후 , IgG 를 발현 시킨 FreeStyle 293 F 세포 의 배양액 을 첨가 하 고 , 실온 에서 2 시간 반응 시켰 다 . ELISA 버퍼 로 3 회 세정 후 , ELISA 버퍼 로 2500 배 로 희석 한 Horseradish peroxidase ( HRP ) 표지 항 인간 Fab 항체 ( Jackson ImmunoResearch 사 ) 를 50 μ L 첨가 하 고 , 실온 에서 1 시간 반응 시켰 다 . ELISA 버퍼 로 5 회 세정 후 , SuperSignal Pico ELISA Chemiluminescent substrate 를 첨가 하 고 , 10 분 후 의 화학 발광 을 플레이트 리더 로 측정 하 였 다 .