BxPC - 3 세포 에 옵소닌 화 된 항 - DR 5 항체 IgG 1 - CONA - C 49 W 의 효능 제 활성 에 대한 , C 1 q 결합 치환 K 326 W / E 333 S 와 Fc - Fc - 증진 돌연변이 E 345 K , E 345 R 또는 S 440 Y 와 의 조합 의 효과 를 연구 하 기 위해 생존 율 검정 을 수행 하 였 다 . 생존 율 검정 을 본질 적 으로 실시 예 2 에 기재 된 바 와 같이 수행 하 였 다 . 간략 하 게 , 100 μ L BxPC - 3 단세포 현탁액 을 폴리스티렌 96 - 웰 편평 - 바닥 플레이트 내 완전 배양 배지 ( 10 % DBSI 를 함유 하 는 RPMI ) 에 ( 웰 당 5 , 000 개 세포 ) 시 딩 하 고 , 37 ℃ 에서 밤새 부착 되 도록 하 였 다 . 이어서 , 50 μ L 의 일련 의 연속 희석 항체 제제 ( 5 배 희석 으로 범위 0 . 0003 내지 20 μ g / mL 최종 농도 ) 를 첨가 하 고 , 37 ℃ 에서 3 일 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 셀타 이터 - 글 로 검정 을 사용 하 여 세포 생존 율 을 결정 하 였 다 . 엔 비전 멀티 라벨 판독기 ( 퍼킨 엘머 ) 상 에서 발광 을 측정 하 였 다 . 그래프 패드 프리즘 소프트웨어 를 사용 하 여 비 - 선형 회귀 ( 가변 기울기 를 갖 는 S 자형 용량 - 반응 ) 를 사용 하 여 로그 - 변환 된 농도 축 을 갖 는 데이터 를 분석 하 고 플롯 팅 하 였 다 . 도 15 A 는 IgG 1 - CONA - C 49 W 에 의한 BxPC - 3 세포 의 사멸 이 E 345 R 돌연변이 의 도입 에 의해 강 하 게 유도 되 었 고 , E 430 G 또는 E 345 K 돌연변이 에 의해 약간 유도 된 반면 , S 440 Y 는 효과 를 나타내 지 않 았 다는 것 을 보여준다 . 도 15 B 는 IgG 1 - CONA - C 49 W - K 326 W / E 333 S 변이체 에 의한 BxPC - 3 세포 의 사멸 이 E 430 G , E 345 K 또는 E 345 R 돌연변이 의 도입 에 의해 증가 된 반면 , S 440 Y 돌연변이 의 도입 에 의해서 는 추가 로 증진 되 지 않 았 다는 것 을 보여준다 . 종합 하 면 , 이 들 데이터 는 C 1 q 결합 - 증진 K 326 W / E 333 S 돌연변이 가 상이 한 Fc - Fc - 증진 돌연변이 , 예컨대 E 430 G , E 345 K 또는 E 345 R 을 갖 는 항 - DR 5 효능 제 IgG 1 항체 의 효능 을 증진 시킬 수 있 다는 것 을 나타낸다 .