Hep 3 B 세포 를 35 ㎜ 배양 접시 에 2 x 105 개 분주 한 후 , 37 ℃, 5 % CO 2 인큐베이터 에서 배양 하 였 다 . Tet - repressor ( TetR ) miR - 122 발현 벡터 1 ㎍ 과 Opti - MEM 100 ㎕ 를 1 . 5 ㎖ 튜브 에 넣 어 섞 고 , Lipofectamin 2000 5 ㎕ 와 무 혈청 배지 100 ㎕ 를 다른 1 . 5 ㎖ 튜브 에 넣 어 혼합 한 후 5 분 동안 상온 에 방치 하 였 다 . 이후 상기 두 튜브 의 내용물 을 혼합 하 고 , 리포 좀 ( liposome ) 형태 의 복합체 를 이룰 수 있 도록 20 분 동안 상온 에서 보관 하 였 다 . 20 분 후 튜브 를 10 초 동안 원심 분리 한 후 각각 의 세포 위 에 뿌려 형질 주입 ( transfection ) 하 고 , 4 시간 후 새로운 배지 로 갈아주 었 다 . 37 ℃, 5 % CO 2 인큐베이터 에서 24 시간 동안 배양 한 후 1 X PBS 로 세포 를 세 척하 고 , 트립신 ( trypsin ) 을 처리 하 여 세포 를 떼 어 낸 후 100 mm 배양 접시 로 옮겨 배양 하 였 다 . 2 일 내지 3 일 에 한 번 씩 항생제 인 블라스티시딘 ( blasticidin ) 을 5 ㎍/㎖ 의 농도 로 포함 하 는 배지 로 갈아주 었 다 . 세포 클론 들 을 선별 하 여 각각 을 키운 후 , RT - PCR 로 TetR 의 발현 을 확인 하 였 다 .