종양 세포 를 대략 10 % 의 최적 밀도 로 96 - 웰 배양 플레이트 에 접종 하 고 24 시간 동안 부착 및 회복 되 도록 하 였 다 . 이후 , 다양 한 용도 의 상기 약물 을 이 들 의 IC 50 값 ( 50 % 의 세포 생존 을 억제 하 는 농도 ) 을 산출 하 기 위해 각 웰 에 부가 하 였 다 . 플레이트 를 37 ℃ 에서 24 시간 동안 항온 배양 하 였 다 . 처리 종료 시 , NB 4 종양 세포 현 탁 물 에 대해서 , 다음 의 과정 을 수행 하 였 다 : 1600 x g 에서 10 분 동안 원심 분리 하 여 배지 배 양물 을 분리 하 고 상등 액 을 제거 하 였 다 . 250 ㎕ PBS 를 부가 한 후 , 플레이트 를 1600 x g 에서 10 분 동안 원심 분리 하 고 , 상등 액 을 제거 하 였 다 . 10 % FCS 를 함유 하 는 RPMI 1640 배양 배지 200 ㎕/ 웰 을 부가 하 고 플레이트 를 추가 48 시간 동안 37 ℃ 에서 항온 배양 하 였 다 . 플레이트 를 1600 x g 에서 10 분 동안 원심 분리 로 분리 하 여 배양 배지 를 제거 하 고 200 ㎕ PBS 및 50 ㎕ 의 차가운 80 % TCA 를 부가 하 였 다 . 플레이트 를 얼음 상 에서 1 시간 이상 동안 항온 반응 시켰 다 . TCA 를 제거 하 고 , 플레이트 를 증류수 에 3 회 함침 시키 고 종이 상 에서 건조 시킨 후 , 40 ℃ 의 온도 조절 장치 에 위치 시켰 다 . 이어서 , 1 % 아세트산 중 0 . 4 % 설 포 로다민 B 200 ㎕ 를 부가 하 였 다 . 이 플레이트 를 추가 30 분 동안 실온 에서 항온 반응 시켰 다 . 설 포 로다민 B 를 제거 하 고 , 플레이트 를 세정 하 기 위해 1 % 아세트산 에 3 회 함침 시킨 후 , 세정 하 고 종이 상 에서 건조 시켰 다 . 200 ㎕ 트리스 10 mM 을 부가 하 고 , 플레이트 를 20 분 간 교반 시켰 다 . 생존 한 세포 는 540 nm 에서 Multiskan 분광 형광 계 를 통해 광학 밀도 로서 측정 하 였 다 . 부착 된 종양 세포 ( NCI - H 460 및 HCT - 116 ) 에 대해서 , 처리 종료 시 , 원심 분리 하 지 않 고 상등 액 을 제거 하 고 PBS 를 3 회 부가 하 여 플레이트 를 세정 한 것 을 제외 하 고 는 상기 언급 한 과정 을 수행 하 였 다 . 분석 마지막 날 에 도 , 원심 분리 하 지 않 고 상등 액 을 제거 하 였 다 .