재조합 인간 MICA - Fc 단백질 을 마이크 로 플레이트 의 웰 에 흡착 시켰 고 , 비 - 특이 적 결합 을 감소 시키 기 위해 웰 을 소 혈청 알부민 으로 차단 하 였 다 . NKG 2 D - Fc - 비오틴 을 웰 에 첨가 한 다음 , NKG 2 D - 결합 도메인 을 첨가 하 였 다 . 인 큐 베이 션 및 세 척 이후 , MICA - Fc 코팅 된 웰 에 결합 된 채 로 남 아 있 는 NKG 2 D - Fc - 비오틴 을 스 트 렙 타비 딘 - HRP 및 TMB 기질 을 이용 하 여 검출 하 였 다 . 흡광도 를 450 nM 에서 측정 하 고 , 540 nM 에서 보정 하 였 다 . 백그라운드 를 차감 한 후 에 , NKG 2 D - Fc 단백질 에 대한 NKG 2 D - 결합 도메인 의 특이 적 결합 을 MICA - Fc 코팅 된 웰 에 대한 결합 이 차단 된 NKG 2 D - Fc - 비오틴 의 백분율 로부터 계산 하 였 다 . 양성 대 조군 항체 ( SEQ ID NO : 45 - 48 로부터 선택 됨 ) 및 다양 한 NKG 2 D - 결합 도메인 은 MICA 가 NKG 2 D 에 결합 하 는 것 을 차단 한 반면 에 , 이소 타입 대 조군 은 MICA 와 거의 경쟁 하 지 않 는 것 으로 보였 다 ( 도 20 ) .