2 시간 후 , 비오틴 이 표지 된 마우스 항 - MCPT - 1 항체 를 넣 고 1 시간 동안 반응 시켰 다 . 워싱 버퍼 로 세척 한 후 , HRP ( horse radish peroxidase ) 가 표지 된 아 비딘 ( Avidin - HRP ) 을 넣 고 30 분 동안 반응 시켰 다 . 워싱 버퍼 로 세척 한 후 , 기질 용액 ( Substrate Solution ) 을 넣 고 빛 을 차단 한 상태 로 20 분 간 반응 시킨 후 , 정지 용액 ( Stop solution , 1 M H 2 SO 4 ) 을 넣 어 반응 을 중단 시켰 다 . 그 후 , 마이크 로 플레이트 리더 ( Epoch Microplate Spectrophotometer ) 로 450 nm 파장 에서 570 nm 파장 을 제외 한 흡광 도 값 을 측정 하 여 농도 를 계산 하 였 다 .