CTLL - 2 세포 를 증식 생체 분식 배지 ( 2 x 글 루타 맥스 , 10 % FBS , 2 x NaPyr , 1 x B - 메르 캅 토 에탄올 및 20 mM Hepes 가 첨가 된 RPMI 1640 ; Invitrogen , Carlsbad , CA ) 로 3 회 세척 하 고 , 96 - 웰 둥근 바닥 조직 배양 플레이트 ( Becton Dickinson , Franklin Falls , NJ ) 에 50 , 000 세포 / 웰 로 플레이트 하 였 다 . 이 들 세포 에 예정 된 EC 90 용량 의 IL - 2 ( 3 . 0 ng / mL ) 또는 IL - 15 ( 0 . 5 ng / mL ) 를 IL - 21 중화 항체 의 연속 적 인 희석 액 과 함께 첨가 하 였 다 . 사이 토킨 의 항체 에 대한 비율 은 250 배 몰 초과량 부터 1 : 1 비율 까지 의 범위 였 다 . 항 - IL - 21 또는 항 - IL - 15 중화 항체 ( 둘 다 R & D Systems , Minneapolis , MN ) 를 포지티브 대조 표준 으로서 사용 하 였 다 . 그런 다음 세포 를 24 시간 동안 가습 된 조직 배양 인큐베이터 에서 37 ℃ 및 5 % CO 2 에서 인 큐 베이 션 하 였 다 . 24 시간 후 에 세포 를 1 μ Ci / 웰 의 [ 3 H ] - 티미 딘 ( Amersham Biosciences , Piscataway , NJ ) 으로 펄스 하 였 다 . 16 시간 후 에 , 세포 를 유리 - 섬유 필터 상 에서 수득 하 고 , [ 3 H ] - 통합 의 양 을 베타 카운터 ( Topcount NXT , Packard ) 를 사용 하 여 정량 하 였 다 .