레바 우디 오시드 I 에 대한 조작 된 라운드 11 . 04 변이체 의 활성 을 특성 화 하 기 위해 진탕 플라스크 분말 로딩 용량 반응 실험 을 수행 하 였 다 . 0 . 16 - 5 g / L 수준 의 진탕 플라스크 분말 ( SFP ) 을 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 6 , 1 mM 레바 우디 오시드 I , 및 1 mM ADP - 글루코스 를 함유 하 는 100 μ L 의 총 반응 부피 에 첨가 하 였 다 . 반응 은 4 시간 동안 300 RPM 에서 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 ℃ 에서 수행 하 였 다 . 반응 은 상기 한 바 와 같이 희석 하 고 , 켄 칭 하 고 , 분석 하 였 다 . 0 . 3 g / L SFP 로딩 시 에 라운드 11 . 04 변이체 에 의한 레바 우디 오시드 M 의 생산 수준 을 표 50 . 4 에 제시 한다 . 표 50 . 4 에 열거 된 5 개 의 모든 변이체 는 서열 번호 3082 보다 RebI 에 대한 더 높 은 활성 을 보였 다 . 돌연변이 L 126 Q , P 128 A , F 155 R , K 160 S , R 161 T , 및 N 199 A ( 서열 번호 3346 ) 및 그 의 코딩 폴리뉴클레오티드 ( 서열 번호 3345 ) 를 갖 는 변이체 가 가장 개선 되 었 고 , 레바 우디 오시드 I 의 글 루 코 실화 를 위한 추가 의 유도 진화 를 위해 선택 되 었 다 .