실시 예 6 에서 생성 된 동일 한 958 bp Myceliophthora thermophila gh 61 a PCR 단편 을 pSMai 185 ( 도 5 ) 를 초래 하 는 Infusion Cloning Kit ( BD Biosciences , Palo Alto , CA , USA ) 를 사용 하 여 Nco I 및 Pac I 분해 된 pAlLo 2 ( WO 2004 / 099228 ) 로 클로닝 하 였 고 , 이때 Myceliophthora thermophila gh 61 a 유전자 의 전사 는 Aspergillus niger 중성 알파 - 아밀라아제 및 Aspergillus oryzae 트리오스 포스 페이트 이소 머 라 아제 ( NA 2 - tpi 프로모터 ) 에 대한 유전자 로부터 의 프로모터 의 혼성 화 의 조 절하 에 있 다 . 연결 반응 ( 50 μ l ) 은 1 X InFusion Buffer ( BD Biosciences . Palo Alto , CA , USA ) 1 X BSA ( BD Biosciences , Palo Alto , CA , USA ) , 1 μ l 의 인 퓨전 효소 ( 1 : 10 으로 희석 ) ( BD Biosciences . Palo Allo , CA , USA ) , Nco I 및 Pac I 로 분해 된 100 ng 의 pAlLo 2 , 및 50 ng 의 Myceliophthora thermophila gh 61 a 정제 된 PCR 생성물 로 구성 된다 . 반응 을 30 분 동안 실온 에서 배양 하 였 다 . 1 μ l 의 반응 을 E . coli XL 10 SOLOPACK ® Gold Supercompetent 세포 ( Stratagene . La Jolla , CA , USA ) 로 형질 전환 하 는 데 사용 하 였 다 . pSMai 185 를 함유 하 는 E . coli 형질 전환주 를 제한 효소 에 의해 검출 하 였 고 , 플라스미드 DNA 를 BIOROBOT ® 9600 ( QIAGEN Inc . , Valencia , CA . USA ) 을 사용 하 여 제조 하 였 다 . pSMai 185 에서 Myceliophthora thermophiia gh 61 a 삽입 을 DNA 시퀀싱 에 의해 확인 하 였 다 .