서열 번호 4549 변이체 를 발현 하 는 맑 아 진 이 . 콜라 이 배양 용 해물 의 96 웰 플레이트 에서 검정 을 수행 하 였 다 . 용해 완충제 부피 는 400 μ L 이 었 고 , 용해 물 은 20 g / L 레바 우디 오시드 A 60 % 내 에 50 또는 100 배 희석 하 고 , 75 ℃ 에서 2 시간 동안 예비 인 큐 베이 팅 하 였 다 . 이어서 , 검정 은 100 μ L 반응 부피 에서 10 μ L 의 희석 된 용해 물 , 0 . 1 g / L SUS SFP 서열 번호 2510 을 사용 하 고 20 g / L 레바 우디 오시드 A 60 %( RebA 60 ) 의 기질 로딩 및 0 . 1 g / L ADP ( Amresco , 초 순수 등급 ) 및 40 g / L 수크로스 의 보조 기질 로딩 을 사용 하 여 수행 하 였 다 . 하 기 반응 조건 을 사용 하 였 다 : 16 - 18 시간 동안 300 RPM 진탕 하 에 써 모 트론 ® 적정 플레이트 진탕기 에서 50 mM 인산칼륨 완충제 , pH 6 , 60 ℃. 반응물 은 물 에 40 배 희석 함 으로써 가용화 하 고 , 0 . 2 % 포름산 을 갖 는 아 세토 니트릴 에 5 배 희석 하 여 켄 칭 하 고 , 원심 분리 에 의해 침전 시키 고 , 상기 한 바 와 같이 분석 을 위해 물 에 10 배 희석 하 였 다 . 레바 우디 오시드 A 에 대한 SuS 와 연결 된 글 루 코 실트 랜스 퍼라 제 활성 을 갖 는 생성 된 조작 된 변이체 가 표 57 . 1 에 열거 되 어 있 다 . 표 57 . 2 에 열거 된 변이체 에 대해 진탕 플라스크 규모 배 양물 을 성장 시키 고 , 용해 시키 고 , 분말 로 동결 건조 시켰 다 .