상기 실시 예 2 - 1 에서 제작 된 벡터 를 기반 으로 purA 프로모터 변이 라이브러리 를 제작 하 였 다 . 라이브러리 는 error - prone PCR kit ( clontech Diversify ® PCR Random Mutagenesis Kit ) 를 이용 하 여 제작 하 였 다 . 변이 가 발생 할 수 있 는 조건 에서 , 서열 번호 15 및 서열 번호 17 을 프라이머 로 하 여 PCR 반응 을 수행 하 였 다 . 구체 적 으로 는 , 1000 bp 당 2 에서 4 개 의 변이 가 발생 하 는 조건 으로 94 ℃ 에서 30 초 pre - heating 후 , 94 ℃ 에서 30 초 , 68 ℃ 에서 1 분 30 초 의 과정 을 25 회 반복 수행 하 였 다 . 이 때 얻 어 진 PCR 산물 을 megaprimer ( 500 ~ 125 ng ) 로 하 여 95 ℃ 에서 50 초 , 60 ℃ 에서 50 초 , 68 ℃ 에서 12 분 의 과정 을 25 회 반복 수행 한 후 DpnI 처리 하 여 , 대장균 DH 5 α 에 형질 전환 하 여 카나마이신 ( 25 mg / L ) 이 포함 된 LB 고체 배지 에 도말 하 였 다 . 형질전환 된 콜로니 20 종 을 선별 한 후 플라스미드 를 획득 하 여 폴리뉴클레오티드 서열 을 분석 한 결과 3 . 5 mutations / kb 빈도 로 서로 다른 위치 에 변이 가 도입 된 것 을 확인 하 였 다 . 약 10 , 000 개 의 형질전환 된 대장균 콜로니 를 취하 여 플라스미드 를 추출 하 였 고 , 이 를 p 117 - PpurA - gfp - library 로 명명 하 였 다 .