따라서 , 본 발명 측정 방법 의 제 2 공정 에 있 어서 복수 의 메틸화 감수 성 제 한 효소 에 의한 처리 를 실시 하 는 경우 에 는 , 구체 적 으로 는 예 를 들 면 , 이하 와 같이 행하 면 된다 . 제 1 공정 에 있 어서 선택 된 단일 가닥 DNA 에 , 최적 완충액 ( 330 mM Tris － Acetate pH 7 . 9 , 660 mM KOAc , 100 mM MgOAc 2 , 5 mM Dithiothreitol ) 를 3 μ L , 메틸화 감수 성 제 한 효소 Hpa Ⅱ 및 HhaI ( 10 U / μ L ) 등 을 각각 1 . 5 μ L 첨가 하 고 , 여러 종 의 상기 메틸화 감수 성 제 한 효소 의 인식 배열 에 대한 마스킹 용 올리 고 뉴클레오티드 를 각각 약 10 pmol 첨가 하 고 , 그 외 , 필요 에 따라서 BSA 등 을 적당량 첨가 하 고 , 이어서 당해 혼합물 에 멸균 초 순수 를 첨가 하 여 액량 을 30 μ L 로 하 고 , 37 ℃ 에서 1 시간 ∼ 하룻밤 인 큐 베이 션 한다 . 목적 으로 하 는 DNA 영역 내 의 마스킹 용 올리 고 뉴클레오티드 로 보호 된 당해 메틸화 감수 성 제 한 효소 의 인식 부위 ( 개소 ) 가 메틸 화 되 어 있 지 않 은 경우 , 당해 개소 는 소화 되 게 된다 . 그 후 , 상기 와 동일 한 조작 에 준하 여 , 피펫 팅 또는 디 켄 테이 션 에 의해 , 잔여 용액 의 제거 및 세정 ( DNA 정제 ) 을 행한다 . 보다 구체 적 으로 는 예 를 들 면 , 스 트 렙 트 아 비딘 으로 피복 한 PCR 튜브 를 사용 하 는 경우 에 는 , 우선 용액 을 피펫 팅 또는 디 켄 테이 션 에 의해 제거 한 후 , 이 에 생물 유래 검체 의 용량 과 대략 등량 의 세정 버퍼 를 첨가 한 후 , 당해 버퍼 를 피펫 팅 또는 디 켄 테이 션 에 의해 제거 하 면 된다 . 또한 스 트 렙 트 아 비딘 으로 피복 한 자기 비즈 를 사용 하 는 경우 는 , 자석 에 의해 비즈 를 고정 한 후 , 우선 용액 을 피 페팅 또는 디 켄 테이 션 에 의해 제거 한 후 , 생물 유래 검체 의 용량 과 대략 등량 의 세정 버퍼 를 첨가 한 후 , 당해 버퍼 를 피펫 팅 또는 디 켄 테이 션 에 의해 제거 하 면 된다 .