murine melanoma ( B 16 F 1 ) 세포 를 적량 의 FBS ( fetal bovine serum ) 가 함유 된 DMEM 배지 로 24 well plate 에 well 당 적 정량 의 세포 를 접종 한 후 5 % CO 2 , 37 ℃ 에서 24 시간 배양 하 였 다 . 상기 배양액 의 배지 를 제거 하 고 시료 를 적당 한 농도 로 희석 된 배지 로 교체 한 후 5 % CO 2 , 37 ℃ 에서 72 시간 다시 배양 하 였 다 . 배양 후 배양액 의 배지 를 제거 하 고 상기 에서 얻 은 세포 pelle 는 60 ℃ 에서 건조 한 후 10 % DMSO 가 함유 된 1 M 수산화 나트륨 액 을 넣 어 60 ℃ 항온조 에서 세포내 멜라닌 을 얻 었 다 . 상기 에서 얻 은 멜라닌 을 함유 한 반응 액 을 microplate reader 로 405 nm 에서 흡광도 를 측정 하 여 세포 수 당 멜라닌 양 또는 일정 단백질 당 멜라닌 양 을 측정 하 였 다 .