비장 을 C 57 Bl / 6 마우스 로부터 입수 하 였 고 , 70 ㎛ 세포 스 트레이너 를 통해 분쇄 하 여 , 단일 세포 현탁액 을 수득 하 였 다 . 세포 를 펠 렛 화 하 고 , ACK 용해 완충제 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 ( Thermo Fisher Scientific ) 으로부터 구입 함 , # A 1049201 ; 155 mM 염화암모늄 , 10 mM 중탄산칼륨 , 0 . 01 mM EDTA ) 중 에 재현 탁 시켜 , 적혈구 를 제거 하 였 다 . NK 세포 단리 를 위해 수확 하 고 준비 하 기 전 에 남 아 있 는 세포 를 100 ng / mL hIL - 2 와 함께 72 시간 동안 배양 하 였 다 . 이어서 , 자성 비드 를 사용 하 는 음성 고갈 기술 을 이용 하 여 비장 세포 로부터 NK 세포 ( CD 3 - NK 1 . 1 +) 를 전형 적 으로 > 90 % 순도 로 단리 하 였 다 . 정제 된 NK 세포 를 NKG 2 D - 결합 도메인 이 흡착 되 어 있 는 마이크 로 플레이트 의 웰 로 옮기 기 전 에 , 이 들 을 100 ng / mL mIL - 15 를 함유 하 는 배지 에서 48 시간 동안 배양 하 고 , 형광단 - 접합 된 항 - CD 107 a 항체 , 브레 펠 딘 - A , 및 모 넨 신 을 함유 하 는 배지 에서 배양 하 였 다 . NKG 2 D - 결합 도메인 - 코팅 된 웰 에서 배양 한 후 에 , NK 세포 를 CD 3 , NK 1 . 1 및 IFN - γ 에 대한 형광단 - 접합 된 항체 를 사용 하 여 유동 세포 분석법 에 의해 검정 하 였 다 . CD 107 a 및 IFN - γ 염색 을 CD 3 - NK 1 . 1 + 세포 에서 분석 하 여 NK 세포 활성 화 를 평가 하 였 다 . CD 107 a / IFN - γ 이중 - 양성 세포 에서 의 증가 는 1 개 의 수용체 보다 는 2 개 의 활성 화 수용체 의 결속 을 통한 보다 양호 한 NK 세포 활성 화 를 나타낸다 . NKG 2 D - 결합 도메인 및 양성 대 조군 ( 이바이 오 사이언스 에서 입수 가능 한 항 - 마우스 NKG 2 D 클론 MI - 6 및 CX - 5 로부터 선택 됨 ) 은 이소 타입 대 조군 에 비해 CD 107 a + 및 IFN - γ + 가 되 는 NK 세포 의 높 은 백분율 을 나타내 었 다 ( 도 15 & 도 16 은 NK 세포 준비 를 위해 상이 한 마우스 를 각각 사용 하 는 2 회 의 독립 적 인 실험 으로부터 의 데이터 를 나타냄 ) .