구체 적 으로 , 펩타이드 항원 과 같 은 아미노산 서열 을 가졌으나 인산화 되 지 않 은 펩타이드 항원 과 인산화 된 펩타이드 항원 을 각각 PVDF membrane ( Atto ) 에 흡착 시키 고 PBS 에 녹인 5 % ( w / v ) skim milk 로 상온 에서 1 시간 동안 배양 하 여 블로킹 ( blocking ) 하 였 다 . 그 후 에 , 상기 제작 및 정제 한 항체 를 상온 에서 1 시간 동안 배양 하 고 , 상온 에서 5 분 동안 3 회 에 걸쳐 TBS 에 녹인 0 . 2 % ( v / v ) Triton X - 100 으로 세척 했 다 . 그 후 에 ECL kit ( Thermo Fisher Scientific ) 를 사용 하 여 PVDF membrane 에 결합 한 항원 을 특이 적 으로 인지 하 는 항체 를 검출 했 다 .