B 16 F 10 세포 를 2 × 105 / well 의 농도 로 35 mm 접시 에 분주 하 여 24 시간 배양 한 후 , PBS 로 세척 하 고 PBS 1 ㎖ 을 넣 어 준 후 UVB 30 mJ / ㎠ 를 쬐 어 주 었 다 . 그 다음 , 10 % FBS 가 포함 된 배지 에 시료 를 적당 농도 가 되 도록 희석 하 여 처리 한 후 48 시간 배양 하 였 다 . 세포 를 PBS 로 세척 하 고 trypsin - EDTA 0 . 5 ㎖ 을 처리 하 여 세포 를 떼 어 내 고 PBS 0 . 5 ㎖ 을 첨가 하 여 세포 를 회수 한 다음 , 10 , 000 rpm 으로 10 분 간 원심 분리 하 여 상등 액 을 제거 하 고 침전물 을 65 ℃ 에서 1 시간 정도 건조 시킨 다음 , 1 M NaOH 수용액 100 ㎕ 를 첨가 하 여 65 ℃ 에서 1 시간 정도 반응 시켜서 세포내 의 멜라닌 을 얻 었 다 . 96 well plate 에 상기 용해 물 을 100 ㎕ 씩 넣 어 준 후 , ELISA reader 로 490 nm 에서 흡광도 를 측정 하 여 멜라닌 함량 을 측정 하 고 , 상기 용해 물 은 BCA 법 으로 단백질 정량 을 하 여 멜라닌 양 을 단백질 양 으로 보정 하 였 다 ( 참고 문헌 : 대한민국 특허 출원 제 10 - 2002 - 0029401 호 ) .