실시 예 2 및 실시 예 3 에서 취득 된 개량 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 에 의해 합성 된 ( R ) - CHBN 의 광학 순도 를 조사 하 기 위해 , 우선 각 개량 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 를 발현 하 는 형질전환 체로 부터 조효 소액 을 조제 했 다 . 개량 형 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 를 발현 하 는 15 주 의 형질전환 체 주 ( JM 109 / pSTT 002 - T 133 A , JM 109 / pSTT 002 - T 136 C , JM 109 / pSTT 002 - T 133 S , JM 109 / pSTT 002 - F 136 A , JM 109 / pSTT 002 - F 136 S , JM 109 / pSTT 002 - F 136 W , JM 109 / pSTT 002 - D 199 Q , JM 109 / pSTT 002 - D 199 E , JM 109 / pSTT 002 - D 199 H , JM 109 / pSTT 002 - D 199 S , JM 109 / pSTT 002 - D 199 T , JM 109 / pSTT 002 - D 199 M , JM 109 / pSTT 002 - D 199 L , JM 109 / pSTT 002 - D 199 I , JM 109 / pSTT 002 - D 199 Y ) 및 대조 로 하 는 JM 109 / pSTT 002 의 합계 16 주 에 대하 여 , 다음 과 같이 3 차 평가 를 했 다 . LB Amp 배지 를 바서 만 시험관 에 1 ㎖ 씩 분주 하 고 , 각 시험관 에 2 차 평가 선발 주 15 주 및 JM 109 / pSTT 002 의 콜로니 를 각각 식균 했 다 . 37 ℃, 210 rpm 으로 약 8 시간 배양 한 후 , 얻 어 진 각 배양액 100 ㎕ 를 IPTG 를 최종 농도 로서 1 mM 포함 하 는 LB Amp 배지 ( 500 ㎖ 용 삼각 플라스크 중 의 100 ㎖) 에 식균 하 여 , 37 ℃, 210 rpm 으로 16 시간 배양 했 다 . 얻 어 진 각 배양액 100 ㎖ 로부터 원심 분리 ( 3 , 700 ×g , 10 분 간 , 4 ℃) 에 의해 각 균체 를 회수 하 고 , 20 mM Tris - 황산 완충액 ( pH 8 . 0 ) 으로 세정 한 후 , 균 농도 가 12 . 5 gDC / L 이 되 도록 동 완충액 에 현 탁 했 다 . 얻 어 진 균체 현탁액 의 3 ㎖ 를 , 초음파 파쇄기 VP - 15 S ( 다이 테크 , 일본 ) 를 사용 하 여 , 출력 컨트롤 4 , DUTY CYCLE 40 %, PULS , TIMER = B 모드 10 s 의 조건 으로 빙 냉하 면서 10 분 간 파쇄 했 다 . 파쇄 된 균체 현탁액 을 원심 분리 ( 23 , 000 ×g , 5 분 간 , 4 ℃) 하 여 , 상청 을 조효 소액 으로서 채취 했 다 . 얻 어 진 각 조효 소액 에 대하 여 , 실시 예 1 ( 3 ) 에 기재 된 방법 에 있 어서 반응 액 의 DCP 농도 를 400 mM 로 한 반응 액 을 사용 한 방법 에 의해 , 할로 하 이 드린 에폭시 데이즈 활성 ( 탈염소 활성 ) 을 각각 측정 했 다 . 1 U 를 상기 각 조건 하 에서 DCP 로부터 1 분 간당 μ mol 염화물 이온 의 탈리 하 는 효소 량 에 상당 하 는 것 으로 정의 하 고 , 활성 측정 에 사용 한 각 균체 현탁액 의 활성 을 , 상기 활성 을 활성 측정 에 사용 한 각 균체 현탁액 의 액량 으로 나눔 으로써 각 균체 현탁액 의 액 활성 을 산출 했 다 .