예 를 들 어 , 부위 특이 적 말 레 이미드 화학 컨 쥬게 이 션 을 위해 관심 대상 단백질 내 로 유리 시스테인 을 도입 함 으로써 , 단백질 생물학 을 더 잘 보존 하 는 것 이 바람직 할 수 있 다 . 관심 대상 단백질 ( 예 를 들 어 , 마우스 41 BBL ) 은 , 커플링 시약 을 사용 한 표지 화 에 의해 적혈구 세포 로 의 커플링 을 위해 준비 되 었 다 . 단백질 작용 기성 을 더 잘 보존 하 기 위해 , " 부위 특이 적 말 레 이미드 화학 컨 쥬게 이 션 을 위해 "" π 클램프 "" 로 알려진 4 개 의 아미노산 서열 ( FCPF ", SEQ ID NO : 64 ) 로 재조합 41 BBL 단백질 내 로 유리 시스테인 을 도입 하 였 다 . 본 실시 예 에서 는 π 클램프 가 사용 되 지만 , 임의 의 유리 시스테인 잔기 가 , 예 를 들 어 , 본원 에 기재 된 바 와 같 은 , 부위 특이 적 컨 쥬게 이 션 을 위해 사용 될 수 있 다는 것 이 고려 된다 . 단백질 을 탈염 시키 고 , 완충액 을 PBS 로 교환 하 고 , 표지 화 전 에 1 mg / mL 이상 으로 농축 시켰 다 . 단백질 을 1 mM DTT 로 환원 시키 고 , 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 고 , NAP 5 컬럼 상 에서 탈염 시켰 다 .