본 검정 에 사용 된 모든 시약 은 인디고 바이오 사이언 시스 ( Indigo Biosciences ) # IB 00401 에 의해 인간 ER α 리포터 검정 에 공급 하 였 다 . 선택 적 에스트로겐 수용체 분 해제 ( SERD ) 를 스크리닝 하 기 위해 , 인디고 바이오 사이언 시스 에 의해 공급 된 인간 ER α 리포터 검정 을 인간 에스트로겐 수용체 에 대한 길항제 기능 적 활성 을 정량 화 하 는 데 사용 하 였 다 . 리포터 세포 를 37 ℃ 에서 해동 시키 고 , 37 ℃ 사전 - 가온 된 세포 회복 배지 ( CRM ) 로 첨가 하 였 다 . 17 β - 에스트라디올 의 원액 농도 를 연속 적 으로 CRM 중 에 희석 하 였 다 . 희석 된 17 β - 에스트라디올 을 1 . 6 nM ( 2 X ) 의 작업 농도 가 되 도록 리포터 세포 를 함유 하 는 CRM 에 첨가 하 였 다 . 세포 플러스 17 β - 에스트라디올 을 키트 - 공급 백색 벽 96 - 웰 플레이트 내 에 분배 하 였 다 . 시험 화합물 의 농축 된 스톡 을 세포 스크리닝 배지 ( CSM ) 중 에 2 X 작업 농도 로 희석 하 였 다 . 2 X 농축 된 화합물 을 1 E - 11 내지 1 E - 5 M 의 최종 농도 범위 및 8 E - 10 M 의 최종 17 β - 에스트라디올 농도 를 생성 하 도록 용량 - 의존 성 방식 으로 플 레이팅 된 세포 에 첨가 하 였 다 . 검정 플레이트 를 가습 된 37 ℃ 인큐베이터 에서 24 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 배양 배지 를 뒤집 어서 검정 플레이트 로부터 제거 하 였 다 . 검출 기질 및 완충제 를 실온 으로 가온 하 고 , 완전히 혼합 하 고 , 즉시 검정 플레이트 에 첨가 하 였 다 . 검정 플레이트 를 광 으로부터 보호 된 실온 에서 15 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 발광 을 시너지 HTX 발광 플레이트 판독기 로 측정 하 였 다 . 데이터 를 그래프 패드 프리즘 7 을 사용 하 여 각각 의 화합물 농도 에서 측정 한 상대 광 단위 를 그래프 로 나타냄 으로써 가공 하 였 다 . 이 절차 를 사용 하 여 도 1 , 도 9 , 도 10 , 도 11 , 도 12 , 도 13 및 도 14 에서 의 그래프 를 작성 하 였 다 .