실시 예 1 에서 와 동일 한 방법 으로 분리 , 정제 한 총 RNA 10 ng , dT 20 프라이머 ( ( 주 ) 바이오 니아 ; 100 pmoles / 20 ㎕ 반응 액 ) , MMLV 역전사 효소 ( ( 주 ) 바이오 니아 ; 200 U / 20 ㎕ 반응 액 ) , 10 × 반응 완충 용액 2 ㎕, RNasin ( 프로 메가 ( Promega ) ; 15 U / 20 ㎕ 반응 액 ) 및 베타 인 ( 시그마 ( Sigma ) ; 500 mM / 20 ㎕ 반응 액 ) 을 혼합 하 여 역전사 반응 액 을 제조 하 였 다 . 제조 된 역전사 반응 액 을 이용 하 여 기존 의 단일 온도 조건 인 42 ℃ 10 분 , 20 분 , 40 분 , 60 분 반응 과 37 ℃ 30 초 , 42 ℃ 4 분 , 47 ℃ 5 분 , 55 ℃ 30 초 를 한 주기 로 1 회 , 2 회 , 4 회 , 6 회 순환 역전사 반응 한 후 , 반응물 2 ㎕ 를 취하 여 인간 GAPDH 프라이머 세트 로 PCR 반응 하 였 다 . PCR 반응 은 94 ℃ 5 분 후 , 94 ℃ 40 초 , 57 ℃ 40 초 , 72 ℃ 1 분 을 25 사이클 로 한 후 , 72 ℃ 5 분 반응 하 였 다 . 이때 사용 한 GAPDH 프라이머 의 서열 은 실시 예 2 에서 와 같 다 .