1 차 PCR 은 절단 과 라 이게 이 션 을 거친 후 희석 시킨 DNA 시료 5 ㎕ 와 10 pmol EcoR Ⅰ 프라이머 , 10 pmol Pst Ⅰ 프라이머 , 0 . 2 mM dNTP , 1 . 5 mM MgCl 2 , 1 × 완충 용액 , 1 유 니트 Taq 폴리머 라 아제 를 혼합 하 여 총 20 ㎕ 가 되 도록 멸균 증류수 를 첨가 하 였 다 . 반응 은 94 ℃ 에서 1 분 ( denaturation ) , 56 ℃ 에서 1 분 ( annealing ) , 72 ℃ 에서 1 분 ( extention ) 의 순서 대로 30 사이클 을 T - 그래 디언 트 써 모 싸이클 러 에서 수행 한 뒤 마지막 으로 72 ℃ 에서 5 분 간 익스텐션 을 수행 하 였 다 .