LNCaP 와 PWR - 1 E 세포 를 5 μ M LY 255283 으로 48 시간 동안 처리 하 고 , DNA 분절 분석 ( fragmentation assay ) 을 수행 하 였 다 . DNA 분절 은 모든 DNA 세포 를 획득 하 여 확인 하 였 다 . 세포 는 10 % FBS 가 보충 된 배지 를 70 % 합류 시킨 10 cm 플레이트 에서 배양 하 였 다 . 이후 , 배지 를 혈청 이 무 첨가 된 RPMI 1640 으로 교체 한 후 , 세포 를 48 시간 동안 5 μ M LY 255283 으로 처리 하 였 다 . 용해 버퍼 ( 1 mM EDTA , 10 mM Tris , 120 mM NaCI , 1 % SDS 및 100 μ g / ml proteinase K , pH 8 . 0 ) 로 50 ℃ 에서 12 시간 동안 세포 를 배양 하 여 세포질 DNA 를 추출 하 였 다 . DNA 단편 을 분리 하 기 위해 , 용해 물 을 13 , 000 ×g 으로 10 분 동안 원심 분리 하 였 다 . 상층 액 을 페놀 ( phenol ) / 플로 로 포름 ( chloroform ) / 아 이소아 밀 알코올 ( isoamyl alcohol ) 로 두 번 씩 추출 하 고 , 무수 에탄올 ( absolute ethanol ) 로 침점 시켰 다 . 펠 렛 ( pellet ) 을 Tris - EDTA 와 10 mg / ml RNase A 에 다시 분산 시키 고 , DNA 를 1 . 8 % 아가 로즈 겔 상 에서 분리 시켰 다 . 전기영동 후 , 겔 을 에티듐 브로마이드 ( ethidium bromide ) 로 염색 한 후 , DNA 를 UV 광선 으로 관찰 하 였 다 . 서로 다른 사이즈 들 의 DNA 단편 들 의 번짐 ( smear ) 이 LY 255283 을 처리 한 LNCaP 세포 들 에서 관찰 되 었 다 .