NK - 3 수용체 발현 CHO 세포 를 성장 배지 ( 햄스 ( Ham ' s ) F 12 배지 , 10 ％ 의 FBS , 2 mM 의 L - 글루타민 및 50 ㎎/㎖ 의 히 그로 마이신 B ) 내 에 유지 시켰 다 . 분석 하루 전 에 , 세포 를 2 mM 의 L - 글루타민 을 갖 는 울트라 컬쳐 ( Ultraculture ) 배지 ( 캠 브렉스 바이오 사이언스 ( Cambrex Bio Science ) ) 중 384 - 웰 플레이트 에 분배 하 여 70 - 90 ％ 의 포화도 ( confluency ) 를 달성 하 였 다 . NK - 3 수용체 유도 의 칼슘 동원 을 정량 하 기 위하 여 , 세포 를 먼저 행크 평 형 염 용액 , 15 mM 의 HEPES , 및 2 . 5 mM 의 프로베네시드 , pH 7 . 4 로 이루어진 분석 완충액 으로 세척 하 였 다 . 그 후 , 세포 를 분석 완충액 중 Fluo 4 / AM 염료 ( 4 . 4 μ M ) 로 로딩 하 였 다 . 세포 를 1 시간 동안 인 큐 베이 션 한 후 분석 완충액 으로 세척 하 고 , 0 . 02 - 300 nM 의 센 크 타이드 ( senktide ) 에 노출 시키 며 FLIPR 장치 ( 몰레 큘라 디바 이시즈 코퍼레이션 ) 를 이용 하 여 형광 반응 을 기록 하 였 다 . 효능 제 반응 의 길항 작용 을 정량 하 기 위하 여 , 세포 를 다양 한 농도 의 시험 화합물 과 함께 2 - 20 분 동안 예비 인 큐 베이 션 한 후 , 단독 으로 약 70 ％ 의 최대 칼슘 반응 을 유도 하 는 농도 인 2 nM 의 센 크 타이드 에 노출 시켰 다 . 생성 되 는 데 이타 를 XLfit 소프트웨어 ( IDBS 제조 업체 ) 를 이용 해서 분석 함 으로써 EC 50 및 IC 50 값 을 측정 하 였 다 .