농도 측정 이 끝난 DNA 시료 를 500 ng / ㎕ 로 희석 하 고 EcoR Ⅰ 제한 효소 ( 퍼 멘 타스 , 미국 하노버 ) 15 유 니트 를 첨가 하 여 총 25 ㎕ 가 되 도록 한 후 , T - 그래 디언 트 써 모 싸이클 러 를 이용 하 여 37 ℃ 에서 1 시간 30 분 동안 일차 절단 ( 1 st digestion ) 을 하 였 다 . EcoR Ⅰ 으로 절단 된 DNA 시료 에 다시 Pst Ⅰ 제한 효소 ( 퍼 멘 타스 , 미국 하노버 ) 15 유 니트 를 첨가 하 여 총 50 ㎕ 가 되 도록 한 후 앞 에서 와 같이 T - 그래 디언 트 써 모 싸이클 러 를 이용 하 여 37 ℃ 에서 1 시간 30 분 동안 이 차 절단 ( 2 nd digestion ) 을 실시 하 였 다 .