Falcon 96 - 웰 가요 성 플레이트 를 5 O ㎕ 의 항 - 인간 IgG , Fc 특이 적 항체 ( Sigma 12136 ) 또는 항 - 인간 카파 경쇄 항체 ( Dako A 0191 ) 로 PBS 중 10 ㎍/ ml 의 농도 로 4 ℃ 에서 밤새 코팅 하 였 다 . 플레이트 를 Skan Washer 400 ( Molecular Devices ) 를 사용 하 여 200 ㎕/ 웰 PBS - Tween 20 ( 0 . 05 %) 로 3 회 세척 하 였 고 , 웰 을 PBS 중 1 % 어피 젤라틴 ( Sigma , 1 % FSG / PBS ) 으로 블로킹 하 였 다 . 플레이트 를 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 한 다음 1 % FSG / PBS 로 세척 하 였 다 . 발현 된 면 역체 또는 정제 된 면 역체 단백질 ( 50 ㎕) 을 포함 하 는 조직 배양 상등 액 을 웰 에 트리 플리 케이트 ( triplicate ) 로 가하 고 , 플레이트 를 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 상기 플레이트 를 1 % FSG / PBS 로 세척 하 고 , 50 ㎕/ 웰 의 퍼 옥시 다제 - 접합 항 - 인간 IgG , Fc 특이 적 항체 ( Sigma A 0170 ) 또는 항 - 인간 카파 경쇄 항체 ( Sigma A 7164 ) 를 첨가 하 여 결합 된 면 역체 를 검출 하 였 고 , 1 % FSG / PBS 에 1 / 2000 으로 희석 한 다음 , 실온 에서 1 시간 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 플레이트 를 1 % FSG / PBS 로 세척 하 고 , TMB 기질 ( R & D Systems ) 을 50 ㎕/ 웰 의 농도 로 첨가 하 여 전개 시켰 다 . VERSA max 마이크 로 플레이트 리더 ( Molecular Devices ) 를 사용 하 여 650 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 .