상행 대동맥 을 가진 심장 을 채취 하 여 3 . 7 % 포름 알데히드 로 고정 시키 고 , 조직 - 테크 ( Tissue - Tek ) optimal cutting temperature ( OCT ) 화합물 ( Sakura Finetek ) 에 넣 고 , 액체 질소 에서 동결 시킨 후 , 10 ㎛ 두께 의 절편 으로 절단 한 다음 , 사용 할 때 까지 - 80 ℃ 에서 보관 하 였 다 . 대동맥 판막 의 3 개 의 첨 판 이 비 절연 구간 으로 인식 되 었 을 때 냉동 절편 을 연속 적 으로 채취 하 였 다 . Oil - Red - O 염색 을 위해 절편 을 증류수 로 세척 하 고 60 % 이소프로판올 ( Sigma Aldrich ) 로 헹군 뒤 , 절편 을 0 . 3 % Oil - Red - O 용액 으로 15 분 동안 염색 하 였 다 . 이후 , 이소프로판올 ( 60 %) 로 헹구 고 헤마톡실린 ( hematoxylin , Sigma Aldrich ) 으로 2 분 간 대조 염색 하 였 다 . 증류수 로 최종 세척 한 후 , 절편 을 수용성 봉입 제 로 봉입 하 였 다 . 대동맥 기부 는 4 배 대물 렌즈 를 사용 하 여 광학 현미경 ( Nikon ) 에서 촬영 하 였 다 . 콜라겐 염색 을 위해 피크 로 시리우스 레드 염색 키트 ( picrosirius red stain kit , 카탈로그 번호 ab 150681 ; Abcam ) 를 제조 업체 가 제공 한 프로토콜 에 따라 사용 하 고 , 샘플 을 광학 현미경 ( Nikon ) 에서 20 배 대물렌즈 로 이미지 화 했 다 . 염색 된 표본 의 사진 을 Image J 를 사용 하 여 데이터 분석 을 위해 디지털 화 하 였 다 .