상기 실시 예 ＜ 1 - 2 ＞ 에서 선별 된 내산성 유산균 을 만니톨 생성량 이 우수 한 균주 로 개량 하 기 위해 , 상기 유산균 을 MRS 브로스 5 ㎖ 에 2 차 에 걸쳐 계대 배양 하 였 다 . 이후 , 상기 유산균 을 과당 이 1 - 9 ％( w / v ) 까지 각각 첨가 된 영양 배지 ( Nutrient broth ; peptone 5 g , yeast extract 2 . 5 g , fructose 10 g ∼ 90 g / D . W . 1 L ) 5 ㎖ 에 1 . 0 ％( v / v ) 로 접종 하 여 25 ℃ 에서 24 시간 동안 배양 하 였 다 . 이후 , 생성 된 만니톨 의 양 을 측정 하 여 만니톨 이 많이 생성 된 순서 로 1 - 5 위 까지 의 균주 를 선별 하 였 다 . 선별 된 5 종 의 균주 를 다시 1 - 9 ％( w / v ) 의 과당 이 첨가 된 배지 에 각각 재 접종 하 여 다시 만 니 톨 생성량 을 측정 하 였 다 . 만니톨 생성량 의 측정 은 다음 과 같 은 방법 으로 수행 하 였 다 : 각 배양액 을 13 , 000 rpm , 3 분 간 원심 분리 한 후 0 . 22 μ m 시린지 필터 ( syringe filter ) 로 여과 하 였 다 . 80 ℃ 에서 초 순수 H 2 O ( 0 . 5 ml / min ) 용매 를 사용 하 여 여과 된 시료 20 ㎕ 를 HPLC ( High performance liquid chromatography ) 로 분석 하 였 다 .