넉 아웃 ( Knock - out ) 용 벡터 를 제작 하 기 위해 5 ‘ 쪽 프라이머 ( 서열 번호 10 ) 에 KpnI 제한 효소 인식 부위 를 첨가 하 고 3 ’ 쪽 프라이머 ( 서열 번호 11 ) 에 BamHI 제한 효소 인식 부위 를 첨가 시켜 IbExpansin ( NCBI accession number : DQ 515800 ) 전장 cDNA 를 PCR 로 증폭 하 였 다 . 이후 PCR 산물 을 pGEM - T Easy 벡터 에 삽입 시킨 후 KpnI 과 BamHI 으로 절단 하 였으며 , 절단 된 DNA 조각 을 pMBP 1 벡터 의 CaMV 35 S 프로모터 와 NOS 터미네이터 사이 에 있 는 KpnI 과 BamHI 인식 부위 위치 에 앤 티 - 센스 ( anti - sense ) 방향 으로 삽입 하 였 다 . Colony PCR 과 제한 효소 처리 에 의해 삽입 을 확인 ( 도 7 ) 하 여 형질 전환 용 벡터 pIbExpansin - anti 를 제작 하 였 다 ( 도 8 ) .