파 아지 분액 ( 0 . 5 mL ) 을 해동 시키 고 , PBS 내 10 % BSA 0 . 5 mL 과 혼합 시켜 , 차단 시켰 다 . 상기 파 아지 파지 를 200 μ L 의 M 280 - 스 트 렙 타비 딘 ( M 280 SA ) 비드 의 분취 액 에 첨가 하 고 , 1 시간 동안 완만 하 게 회전 시키 면서 실온 에서 항온 처리 하 였 다 . 한편 , 바 이오티 닐 화 된 r - Tau ( r - Tau - 바이오틴 , 100 pmol ) 는 200 μ L 의 M 280 SA 비드 제 2 분취 액 에 추가 하 였 고 , 실온 에서 완만 하 게 회전 시키 면서 30 분 동안 항온 처리 하 였 고 , 그 다음 상기 비드 는 1 % BSA ( PBSA ) 와 함께 PBS 로 3 회 세척 하 였 고 , 각 세척 간 에 비드 를 분리 하 기 위하 여 자석 이 이용 되 었 다 . 이어서 , 파 아지 용액 을 자석 을 사용 하 여 네거티브 M 280 SA 비드로 부터 분리 시키 고 , r - Tau - 로딩 된 비드 에 첨가 하 였 다 . 부드럽 게 회전 하 면서 1 시간 동안 항온 처리 한 후 , 비드 를 0 . 1 % BSA 및 0 . 05 % Tween ® 20 을 함유 하 는 PBS 로 4 회 세척 하 고 , 이때 각 세 척 은 5 분 동안 지속 되 었 다 . 결합 된 파 아지 를 0 . 1 M 글리신 ( pH 2 . 7 ) 을 사용 하 여 30 분 동안 비드로 부터 용리 시키 고 ; 이어서 , 용리 된 파지 용액 을 1 M Tris ( pH 7 . 5 ) 로 중화 시켰 다 . 용리 된 파 아지 를 사용 하 여 , 교반 없이 37 ℃ 에서 30 분 동안 , 그 다음 교반 과 함께 30 분 동안 중간 - 로 그 상 ( OD 600 는 대략 0 . 5 임 ) 으로 성장 한 10 mL TG 1 대장균 을 감염 시켰 다 . 선택 배지 ( 2 YTC ) 가 추가 되 었 고 ( 40 mL 용적 ) , 배 양물 은 1 - 2 시간 동안 37 ℃ 에서 교반 과 함께 성장 되 었 다 . 이 시점 에서 배 양물 은 OD 600 에서 0 . 5 이하 였 고 , 대략 10 의 MOI 에서 M 13 K 07 헬퍼 파지 에 감염 되 었 다 . 감염 후 , 50 μ g / mL 카나마이신 이 추가 되 었 고 , 배 양물 은 하룻밤 동안 30 ℃ 에서 교반 과 함께 , 성장 되 었 다 . 두 번 째 패닝 라운드 의 경우 , 파 아지 를 PEG / NaCl 로 1 회 침전 시키 고 , 20 - 배 농축 한 후 , 더 엄격 한 세척 이 수행 되 었 다는 점 을 제외 하 고 ( 6 x PBST 세 척 , 10 분 동안 2 회 ) , 상기 와 동일 한 프로토콜 을 따랐 다 . 두 번 째 패닝 라운드 후 , 감염 된 TG 1 세포 를 스크리닝 을 위한 단일 콜로니 의 채취 를 위해 2 YTCG 플레이트 ( Teknova 로부터 입수 ) 에 도말 하 였 다 .