히스타민 H 1 수용체 ( Euroscreen - ES - 390 - C , NCBI 참조 서열 NM _ 000861 ) 를 안정 하 게 발현 하 는 CHO - K 1 세포 를 25 mM HEPES , 10 % 소 태아 혈청 및 1 - 2 mM 글루타민 으로 보충 된 RPMI 1640 배지 에서 배양 하 였 다 . 섹션 1 에서 기재 한 바 와 같이 막 제 조 를 수행 하 였 다 . 이 들 막 의 경우 , 포화 결합 실험 에 의해 [ 3 H ] - 피 릴 아민 ( PerkinElmer Life Sciences , NET 594 ) 에 대한 KD 가 0 . 83 nM 로 결정 되 었 다 . 분석 당일 에 , 막 들 을 해동 하 고 , 분석 완충액 ( 50 mM Na 2 HPO 4 , 50 mM KH 2 PO 4 , pH 7 . 4 ) 에서 6 μ g 단백질 / 분석 완충액 의 농도 로 희석 하 고 , 온화 한 소용돌이 에 의해 균질 화 하 였 다 . 억제 연구 를 위하 여 , 1 nM 의 [ 3 H ] - 피 릴 아민 ( PerkinElmer Life Sciences , NET 594 ) 를 다양 한 농도 의 시험 화합물 의 존재 하 에서 분석 완충액 에서 항온 처리 하 였 다 . 비 - 특이 적 결합 을 1 μ M 의 피 릴 아민 을 사용 하 여 한정 하 였 다 . 이 결합 반응 은 실온 에서 50 분 동안 수행 하 고 , Packard Unifilter GF / C ( 0 . 3 % PEI ) 플레이트 상 에서 의 여과 에 의해 종료 하 고 , 이어서 얼음 처럼 차가운 분석 완충액 을 사용 하 여 2 회 의 세정 사이클 을 수행 하 였 다 .