중합효소 연쇄 반응 으로 cDNA 를 합성 하 기 위하 여 , 5 × 역전사 효소 완충 용액 , 2 . 5 mM dNTP , 500 ng 프라이머 / ㎕, 200 U / ㎕ MMLV 역전사 효소 ( reverse trancriptase ; 일본 Takara 사 제품 ) , 전체 RNA , 0 . 1 % DEPC - 처리 된 이 차 증류수 ( DDW ) 를 첨가 하 여 반응 혼합액 을 준비 하 였 다 . 이 때 사용 한 프라이머 는 역방향 프라이머 였 다 . 그러 고 나 서 42 ℃ 에서 30 분 동안 배양 , 75 ℃ 에서 30 분 동안 배양 을 실시 하 여 cDNA 를 얻 었 다 . 그 다음 상기 역전사 반응 과정 에서 얻 은 cDNA 가 포함 된 RT 혼합액 , 10 × Taq 폴리머 라 제 완충 용액 , 2 . 5 mM dNTP , 정 방향 프라이머 ( 25 pmol / ㎕), 역방향 프라이머 ( 25 pmol / ㎕), Taq 폴리머 라 제 ( 2 . 5 units / ㎕; 일본 Takara 사 제품 ) , 이 차 증류수 를 잘 혼합 하 여 반응 조건 95 ℃ 에서 30 초 , 55 ℃ 에서 1 분 , 72 ℃ 에서 30 초 를 30 회 로 반복 하 여 cDNA 를 증폭 한 다음 상기 cDNA 를 전기영동 하 고 TNF - α 유전자 의 mRNA 발현 상 의 차이 를 확인 하 였 다 .