비장 을 C 57 Bl / 6 마우스 로부터 입수 하 였 고 , 70 ㎛ 세포 스 트레이너 를 통해 분쇄 하 여 , 단일 세포 현탁액 을 수득 하 였 다 . 세포 를 펠 렛 화 하 고 , ACK 용해 완충제 ( 써 모 피셔 사이언 티 픽 으로부터 구입 함 , # A 1049201 ; 155 mM 염화암모늄 , 10 mM 중탄산칼륨 , 0 . 01 mM EDTA ) 중 에 재현 탁 시켜 , 적혈구 를 제거 하 였 다 . NK 세포 단리 를 위해 수확 하 고 준비 하 기 전 에 남 아 있 는 세포 를 100 ng / mL hIL - 2 와 함께 72 시간 동안 배양 하 였 다 . 이어서 , 자성 비드 에 의한 음성 고갈 기술 을 이용 하 여 비장 세포 로부터 NK 세포 ( CD 3 - NK 1 . 1 +) 를 전형 적 으로 > 90 % 순도 로 단리 하 였 다 . 정제 된 NK 세포 를 세포독성 검정 을 위해 106 / mL 에서 배양 배지 에 재현 탁 시키 기 전 에 100 ng / mL mIL - 15 를 함유 하 는 배지 에서 48 시간 동안 배양 하 였 다 . RMA - HER 2 - dTomato , HER 2 및 dTomato 를 발현 하 도록 조작 된 마우스 종양 세포주 , 및 그 의 대 조군 대응 물 , RMA zsGreen 을 발현 하 는 세포 를 표적 으로서 사용 하 였 다 . 이 들 을 배양 배지 중 에서 2 x 105 / mL 로 재현 탁 시키 고 , 마이크 로 플레이트 의 웰 에 1 : 1 비 로 시 팅 하 였 다 . 다중 - 특이 적 단백질 의 희석 액 을 배양 배지 로 만들 고 , NK 세포 와 함께 RMA 세포 에 첨가 하 였 다 . 밤새 37 ℃ 에서 5 % CO 2 하 에 인 큐 베이 션 한 후 에 , RMA - HER 2 - dTomato 및 RMA - zsGreen 세포 의 백분율 을 형광 리포터 를 이용 하 여 유동 세포 분석법 에 의해 결정 하 여 , 2 가지 세포 유형 을 확인 하 였 다 . 특이 적 표적 세포 사멸 = ( 1 - ( ( 처리 그룹 에서 % RMA - Ca 2 T - dTomato 세포 * 대 조군 그룹 에서 % RMA - zsGreen 세포 ) / ( 대 조군 그룹 에서 % RMA - Ca 2 T - dTomato 세포 * 처리 그룹 에서 % RMA - zsGreen 세포 ) ) ) * 100 %.