단계 2 : 탈 가스 처리 된 ( S ) - tert - 부틸 3 -( 아세트 아미도 메틸 ) 모르 폴린 - 4 - 카 복실 레이트 ( 중간체 86 A , 단계 1 , 0 . 69 g , 2 . 68 mmol ) 및 DMF ( 20 ml ) 용액 에 요오 도 에탄 ( 1 . 297 ml , 16 . 05 mmol ) 및 광유 중 60 % 수소화나트륨 ( 0 . 118 g , 2 . 94 mmol ) 1 분량 을 순차 적 으로 첨가 하 였 다 . 15 min 후 , 반응물 을 에틸 아세테이트 로 희석 시키 고 , 물 ( x 2 ) 로 세척 하 였 다 . 수층 을 에틸 아세테이트 로 추출 한 후 , 혼합 된 유기 층 을 포화 수성 염화나트륨 으로 세척 하 였 다 . 유기 층 을 황산나트륨 상 에서 건조 시키 고 , 여과 하 고 , 감압 하 에서 농축 시켰 다 . 생성 된 옅 은 황색 오일 을 플 래쉬 칼럼 크로마토그래피 ( SiO 2 , ISCO , 10 min 동안 에 걸쳐 헥산 중 의 0 - 100 % 에틸 아세테이트 , 이어서 , 5 min 동안 에틸 아세테이트 중 의 10 % 메탄올 ) 에 의해 정제 하 여 ( S ) - tert - 부틸 3 -(( N - 에틸 아세트 아미도 ) 메틸 ) 모르 폴린 - 4 - 카 복실 레이트 ( 0 . 586 g , 수율 : 76 %, 중간체 86 A , 단계 2 ) 를 수득 하 였 다