친화 도 성숙 화 된 항 - LAG - 3 항체 가 세포 - 유래 된 인간 LAG 3 에 결합 할 수 있 는지 를 추가 로 확인 하 기 위해서 는 ， 두 개 의 유도 성 hLAG 3 발현 된 Jurkat 세포 및 활성 화 된 PBMC 를 사용 하 여 B 3807 및 B 3810 의 결합 능력 을 테스트 하 였 다 . 간략히 말 하 면 , Jurkat 세포 를 FACS 버퍼 에 재현 탁하 였 다 . 항 - LAG 3 항체 및 아이 소 타입 대 조군 을 FACS 버퍼 에서 4 배 단계 희석 하 였으며 용량 은 20 nM 내지 30 pM 의 범위 에 있 다 . 단계 희석 된 항체 를 세포 현탁액 에 추가 하 였 고 얼음 위 에서 30 분 동안 인 큐 베이 션 하 였 다 . 그 다음 에 미 결합 항체 의 제거 후 , 세포 를 Alexa Fluor 633 ( Thermo , A 21091 ) 과 컨 쥬게 이 션 된 항 - 인간 IgG 로 염색 하 였 다 . 형광 발광 측정값 을 FACSCelesta 유동 세포 분석기 에서 획득 하 였 고 Flowjo 에서 분석 하 여 평균 형광 강도 ( MFI ) 를 결정 하 였 다 . 천연 인간 LAG 3 에 결합 하 는 항 - LAG 3 항체 의 능력 을 테스트 하 기 위해 , 건강 한 공 여체 의 PBMC 를 항 - CD 3 ( BD , 555336 ) 및 항 - CD 28 ( BD , 555725 ) 로 둘 다 1 ug / ml 의 농도 로 자극 하 였 다 . 3 일 자극 후 , 세포 를 수확 하 였 고 얼음 위 에서 30 분 동안 항 - LAG 3 항체 와 함께 인 큐 베이 션 하 였 다 . 세포 를 항 - 인간 CD 4 및 항 - 인간 IgG 로 염색 하 였 다 . CD 4 + 세포 에 결합 하 는 항체 의 분석 을 FACSCelesta 유동 세포 분석기 에서 수행 하 였 다 . 세포 분석법 의 결과 는 하 기 표 에 요약 되 어 있 으며 이것 은 세포 - 유래 된 인간 LAG 3 에 결합 하 는 항체 의 EC 50 을 나타냈 다 . 도 13 은 항 - LAG 3 항체 의 결합 곡선 을 나타내 는 그래프 이 다 . 테스트 된 항체 의 EC 50 은 하 기 나타난다 .