재조합 인간 NKG 2 D - Fc 단백질 을 마이크 로 플레이트 의 웰 에 흡착 시켰 고 , 비 - 특이 적 결합 을 감소 시키 기 위해 상기 웰 을 소 혈청 알부민 으로 차단 하 였 다 . 포화 농도 의 ULBP - 6 - His - 비오틴 을 웰 에 첨가 한 다음 , NKG 2 D - 결합 도메인 클론 을 첨가 하 였 다 . 2 - 시간 인 큐 베이 션 이후 , 웰 을 세 척하 고 , NKG 2 D - Fc 코팅 된 웰 에 결합 된 채 로 남 아 있 는 ULBP - 6 - His - 비오틴 을 서양 고추냉이 퍼 옥시 다제 및 TMB 기질 에 접합 된 스 트 렙 타 비딘 에 의해 검출 하 였 다 . 흡광도 를 450 nM 에서 측정 하 고 , 540 nM 에서 보정 하 였 다 . 백그라운드 를 차감 한 후 에 , NKG 2 D - 결합 도메인 과 NKG 2 D - Fc 단백질 의 특이 적 결합 을 웰 에서 NKG 2 D - Fc 단백질 과 의 결합 이 차단 된 ULBP - 6 - His - 비오틴 의 백분율 로부터 계산 하 였 다 . 양성 대 조군 항체 ( SEQ ID NO : 47 - 50 로부터 선택 됨 ) 및 다양 한 NKG 2 D - 결합 도메인 은 ULBP - 6 이 NKG 2 D 에 결합 하 는 것 을 차단 한 반면 에 , 이소 타입 대 조군 은 ULBP - 6 과 거의 경쟁 하 지 않 는 것 으로 보였 다 ( 도 8 ) .