62 . 5 , 125 , 250 , 500 , 1000 μ g / mL 농도 로 희석 한 시료 100 μ L 와 4 mM 의 CaCl 2 를 첨가 한 0 . 1 M 의 트리스 완충 용액 ( Tris - HCl buffer , pH 7 . 5 ) 에 4 - 페닐 아조 벤질 옥시 카보닐 - Pro - Leu - Gly - Pro - D - Arg ( 0 . 3 mg / mL ) 를 녹인 기질 액 250 μ L 를 혼합 한 후 , 콜라 게나 제 ( 0 . 2 mg / mL ) 150 μ L 를 가하 여 실온 에서 20 분 간 반응 시켰 다 . 여기 에 6 % 시트르산 ( citric acid ) 1 mL 를 혼합 하 고 반응 을 정지 시키 기 위하 여 에틸 아세테이트 ( ethyl acetate ) 1 . 5 mL 를 혼합 하 였 다 . 그 후 상층 액 을 취해 320 nm 에서 흡광도 를 측정 하 였 다 . 양성 대 조군 으로 아스코르브산 ( AA ) 을 사용 하 였 다 . GraphPrism 소프트웨어 를 사용 하 여 IC 50 ( 50 % inhibitory concentration , 콜라 게나 제 활성 을 50 % 저해 하 는 농도 ) 을 산출 하 였 다 .