보존 된 Ring - 핑거 모티프 를 함유 하 는 다양 한 세포 기능 을 갖 는 여러 TRIM - 패밀리 단백질 은 E 3 - 리가아제 활성 을 나타내 는 것 으로 밝혀졌 다 . MG 53 이 시험 관내 에서 유비퀴틴 화 를 촉매 할 수 있 는지 의 여부 를 시험 하 기 위해 , 본 발명자 는 MG 53 에 대한 재조합 말토오스 - 결합 단백질 ( MBP ) 융합 단백질 을 제조 하 였 다 . MBP - MG 53 을 ATP , 유비퀴틴 , E 1 및 E 2 효소 와 함께 인 큐 베이 션 시키 고 , 항 - MBP 항체 를 이용 한 면역 블 로 팅 에 적용 시켰 다 . MBP - MG 53 이 E 2 로서 UbcH 5 또는 Ubc 4 와 인 큐 베이 션 되 는 경우 에 유비퀴틴 화 로부터 유래 된 고 분자량 래더 가 관찰 되 었 다 ( 도 18 a , 및 데이터 는 나타내 지 않 음 ) . 상기 검정 으로부터 의 유비퀴틴 , E 1 또는 E 2 ( UbcH 5 ) 의 배재 는 상기 래더 의 출현 을 폐지 시켰 고 , 이 는 MBP - MG 53 에 의해 획득 된 변형 이 확실히 자가 - 유비퀴틴 화 였음을 입증 한다 . MG 53 의 Ring - 핑거 모티프 에서 의 보존 된 시스테인 잔기 ( Cys - 29 ) 가 류신 으로 대체 ( C 29 L ) 된 경우 , MG 53 의 내인성 E 3 - 리가아제 활성 이 현저히 감소 하 였 다 ( 도 18 b ) . 따라서 , MG 53 은 E 2 효소 의 Ubc 4 / 5 서브 패밀리 와 커플링 된 Ring - 핑거 유형 의 유비퀴틴 리가아제 이 다 .