작업 에 필요 한 유체 스트림 은 2 개 의 별도 의 HPLC 펌프 에 의해 제공 되 었 다 . 제 1 HPLC ( 서베이어 ( Surveyor ) MS 펌프 , 써 모 사이언 티 픽 ) 는 완충제 A 를 125 μ L / 분 의 일정 한 유량 으로 전달 하 였 고 , 샘플 을 고정 화 된 펩신 카트리지 를 통해 10 - 포트 밸브 에 걸쳐 올려진 역상 트랩 카트리지 로 전달 하 는 데 사용 하 였 다 . 로딩 및 탈염 기간 후 에 , 샘플 이 구배 펌프 ( 액 퀴티 UPLC ( AQUITY UPLC ) , 워터스 ( Waters ) ) 의 도움 을 받 아 역상 트랩 카트리지 로부터 분석 칼럼 을 통해 질량 분광 측정 계 의 이온 공급원 으로 용리 되 도록 10 - 포트 밸브 를 스위칭 하 였 다 . 고정 화 된 효소 카트리지 를 단리 하 여 구배 용리 동안 폐기 하 였 다 . 구배 펌프 는 35 분 에 걸쳐 5 μ L / 분 에서 0 내지 40 % 이동상 B 및 10 분 에 걸쳐 5 μ L / 분 에서 40 내지 95 % 이동상 B 의 선형 구배 절편 을 전달 하 였 다 . 펌프 로부터 의 구배 흐름 을 수동 분배 기 를 이용 하 여 10 - 포트 밸 트 에서 분배 함 으로써 구배 용리 동안 트랩 카트리지 및 분석 칼럼 을 통한 실제 흐름 이 약 1 μ L / 분 이 되 도록 하 였 다 . 전체 크로마토그래피 실행 은 세 척 및 평형 화 단계 를 포함 하 여 70 분 이 었 다 .