비 천연 발생 Fc 영역 을 생성 하 는 방법 은 당 분야 에 공지 되 어 있 다 . 예 를 들 어 , 아미노산 치환 및 / 또는 결실 은 이 에 제한 되 지 않 지만 , 부위 지정 돌연변이 유발 법 ( Kunkel , Proc . Natl . Acad . Sci . USA 82 : 488 - 492 , 1985 ) , PCR 돌연변이 유발 법 ( Higuchi , " in "" PCR Protocols : A Guide ∼ Methods and Applications """, Academic Press , San Diego , pp . 177 - 183 , 1990 ) , 및 카세트 돌연변이 유발 법 ( Wells et al . , Gene 34 : 315 - 323 , 1985 ) 을 포함 하 는 , 돌연변이 유발 방법 을 통해 생성 될 수 있 다 . 바람직 하 게 , 부위 지정 돌연변이 유발 법 은 중첩 - 확장 PCR 방법 ( Higuchi , " in "" PCR Technology : Principles and Applications for DNA Amplification """, Stockton Press , New York , pp . 61 - 70 , 1989 ) 에 의해 수행 된다 . 중첩 - 확장 PCR 방법 ( Higuchi , ibid . ) 은 또한 임의 의 목적 하 는 돌연변이 ( 들 ) 를 표적 서열 ( 출발 DNA ) 에 도입 시키 는 데 사용 될 수 있 다 . 예 를 들 어 , 중첩 - 확장 방법 에서 PCR 의 제 1 라운드 는 외부 프라이머 ( 프라이머 1 ) 및 내부 돌연변이 유발 ( 프라이머 3 ) , 및 개별 적 으로 제 2 외부 프라이머 ( 프라이머 4 ) 및 내부 프라이머 ( 프라이머 2 ) 를 사용 하 여 표적 서열 을 증폭 시켜서 , 2 개 의 PCR 절편 ( 절편 A 및 B ) 를 생성 시키 는 것 을 포함 한다 . 내부 돌연변이 유발 프라이머 ( 프라이머 3 ) 는 목적 하 는 돌연변이 ( 들 ) 을 특정 하 는 표적 서열 에 대한 미스 매치 를 포함 하 도록 설계 된다 . PCR 의 제 2 라운드 에서 , PCR 의 제 1 라운드 에서 얻 은 생성물 ( 절편 A 및 B ) 은 2 외부 프라이머 ( 프라이머 1 및 4 ) 를 사용 하 여 PCR 로 증폭 시킨다 . 얻 어 진 전체 길 이 PCR 절편 ( 절편 C ) 을 제한 효소 로 분해 하 고 얻 어 진 제한 효소 단편 을 적절 한 벡터 에 클로닝 한다 . 돌연변이 유발 의 제 1 단계 로서 , 출발 DNA ( 예 를 들 어 , Fc 융합 단백질 , 항체 또는 단순히 Fc 영역 을 코딩 함 ) 는 돌연변이 유발 벡터 에 작동 적 으로 클로닝 된다 . 프라이머 는 목적 하 는 아미노산 치환 을 반영 하 도록 설계 된다 . 변이체 Fc 영역 을 생성 하 기 위해 유용 한 다른 방법 도 당 분야 에 공지 되 어 있 다 ( U . S . 특허 5 , 624 , 821 ; 5 , 885 , 573 ; 5 , 677 , 425 ; 6 , 165 , 745 ; 6 , 277 , 375 ; 5 , 869 , 046 ; 6 , 121 , 022 ; 5 , 624 , 821 ; 5 , 648 , 260 ; 6 , 528 , 624 ; 6 , 194 , 551 ; 6 , 737 , 056 ; 6 , 821 , 505 ; 6 , 277 , 375 ; U . S . 공개 특허 출원 2004 / 0002587 및 PCT 공개 특허 출원 WO 94 / 29351 ; WO 99 / 58572 ; WO 00 / 42072 ; WO 02 / 060919 ; WO 04 / 029207 ; WO 04 / 099249 ; WO 04 / 063351 ; WO 06 / 23403 를 참조 한다 ) .