HT 22 세포 의 배양 및 분화 에 사용 된 방법 은 이전 에 상세히 기재 되 어 있 다 ( Liu J , Li L , 및 Suo WZ . HT 22 hippocampal neuronal cell line possesses functional cholinergic properties . Life Sci 2009 ; 84 : 267 - 271 . , 및 Zhao ZY , Luan P , Huang SX 등 . Edaravone protects HT 22 neurons from H 2 O 2 - induced Apoptosis by Inhibiting the MAPK Signaling Pathway . CNS Neurosci Ther 2013 ; 19 : 163 - 169 . 참조 ) . 간략 하 게 , HT 22 세포 는 10 % FBS , 100 U / ㎕ 페니실린 및 100 ㎍/㎕ 스트렙토마이신 이 보충 된 DMEM 배지 에서 배양 하 고 , 처리 전 에 24 시간 동안 N 2 보충 제 를 갖 는 뉴 로베이 살 배지 에서 분화 시켰 다 . A β 25 - 35 는 멸균 생리식염수 에서 0 . 5 mM 농도 로 희석 되 고 , 37 ℃ 에서 7 일 간 유지 하 여 펩타이드 를 예비 숙성 시켰 다 . 본 발명자 들 의 이전 연구 에 따르 면 ( Fan S , Zhang B , Luan P 등 . PI 3 K / AKT / mTOR / p 70 S 6 K Pathway is involved in A β 25 - 35 - induced autophagy . Biomed Res Int 2015 ; 2015 : 1 - 9 . 참조 ) , HT 22 세포 의 생존 율 은 세포 가 40 μ M A β 25 - 35 에 24 시간 동안 노출 되 었 을 때 에 현저 하 게 감소 할 수 있 었 다 . 따라서 , 본 발명자 들 은 후속 연구 를 위해 A β 25 - 35 의 최적 농도 로서 40 μ M 을 선택 하 였 다 . HT 22 세포 는 16 시간 동안 특정 용량 의 NTP 로 전처리 되 고 , 이어서 24 시간 동안 40 μ M A β 25 - 35 의 존재 또는 부재 하 에 처리 되 었 다 .