상기 Colum 추출 법 은 우선 , 상기 대장균 O 157 : H 7 을 8 시간 배양 한 진탕 배양액 1 ml 을 취하 여 1 . 5 ml 튜브 에 옮겨 12 , 000 rpm 에서 5 분 간 원심 분리 한 후 에 , 상층 액 을 버리 고 , 펠 렛 ( pellet ) 에 300 ul 의 lysis A buffer ( Food & Feed DNA Extraction kit , KoGeneBioTech , 대한민국 ) , 30 ul 의 lysis B buffer ( Food & Feed DNA Extraction kit , KoGeneBioTech , 대한민국 ) 를 첨가 하 여 펠 렛 을 녹였 다 . 상기 펠 렛 을 녹인 후 에 , 65 ℃ 항온 수조 ( water bath ) 에서 1 시간 동안 반응 을 시키 고 , 상기 lysis buffer 와 동량 ( 330 ul ) 의 클로로포름 ( chloroform ) 을 첨가 하 고 볼 텍 싱 ( vortex ) 을 수행 한 후 에 , 상기 혼합액 을 12 , 000 rpm 에서 10 분 간 원심 분리 하 였 다 . 상기 원심 분리 를 수행 한 후 에 200 ul 의 상층 액 을 취하 여 새로운 1 . 5 ml 튜브 에 담 고 , 200 ul 의 binding buffer 와 200 ul 의 isopropyl alcohol 를 첨가 하 고 혼합 한 후 에 , 상기 혼합액 600 ul 를 컬 럼 튜브 ( column tube , 코스 모진 텍 , 대한민국 ) 에 넣 고 , 12 , 000 rpm 에서 2 분 간 원심 분리 한 후 에 , collection tube 를 비운 후 600 ul 의 Wash buffer 를 첨가 하 고 12 , 000 rpm 에서 2 분 간 원심 분리 하 고 다시 collection tube 를 비운 후 500 ul 의 Wash buffer 를 첨가 하 고 , 2 , 000 rpm 에서 2 분 간 원심 분리 한 후 에 , collection tube 를 비운 후 12 , 000 rpm 에서 3 분 간 원심 분리 하 였 다 . 상기 원심 분리 를 수행 한 후 에 , 150 ul 의 TE buffer 를 첨가 하 고 8 , 000 rpm 에서 3 분 간 원심 분리 하 여 , DNA 용출 액 을 수집 하 였 다 .